新疆北疆部分地區(qū)雞球蟲病病原調(diào)查及分類鑒定

王開勝，劉繼榮

(1.石河子大學(xué)，新疆石河子 832003；2.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子 832003)

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新疆北疆部分地區(qū)雞球蟲病病原調(diào)查及分類鑒定

王開勝1,2，劉繼榮2

(1.石河子大學(xué)，新疆石河子 832003；2.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子 832003)

【目的】調(diào)查新疆北疆部分地區(qū)雞球蟲病病原分布情況，明確近年來新疆北疆地區(qū)雞球蟲病的致病種類情況。【方法】采用定點采樣法，從沙灣、石河子、瑪納斯和昌吉等地采集病死禽的腸道直接進行糞便處理和病原學(xué)檢查，收集新鮮糞樣進行雞球蟲卵卵囊分離，進行孢子化卵囊培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)觀察，對雞球蟲進行蟲種鑒定?！窘Y(jié)果】雞球蟲的感染率為100%，共檢出6種艾美耳球蟲，分別為柔嫩艾美耳球蟲(E.tenella)、巨型艾美耳球蟲(E.maxima)、堆型艾美耳球蟲(E.acervulina)、和緩艾美耳球蟲(E.mitis)、哈氏艾美耳球蟲(E.hagani)、布氏艾美耳球蟲(E.Brunetti)。其中柔嫩艾美爾球蟲、巨型艾美耳球蟲和堆型艾美耳球蟲為新疆北疆地區(qū)雞球蟲病病原的優(yōu)勢蟲種?！窘Y(jié)論】研究對新疆部分北疆地區(qū)的雞球蟲原分布及其構(gòu)成進行了初步確定，了解其病原水平，從而為該病防治中抗球蟲藥物的選擇及代化用藥方案提供必要數(shù)據(jù)，今后北疆地區(qū)預(yù)防和控制該病提供依據(jù)。

雞球蟲；形態(tài)學(xué)觀察；分類鑒定；優(yōu)勢蟲種

0 引 言

【研究意義】雞球蟲病是嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)的重要寄生蟲病之一，其主要由艾美耳屬的一種或幾種雞球蟲寄生于雞的腸道而引起的寄生性原蟲病。該病分布很廣, 世界各地均有發(fā)生, 在我國發(fā)生也很普遍，對家禽養(yǎng)殖業(yè)危害嚴重，造成了重大的經(jīng)濟損失[1]。目前，在藥物防治和免疫預(yù)防方面取得了重要突破和研究進展，但由于各種流行因素的存在而致使該病仍然頻頻爆發(fā)[2]。新疆北疆地區(qū)雞球蟲病每年均有不同程度的發(fā)生，且感染該病原的家禽發(fā)病率和死亡率均較高，然而不同雞球蟲種類的致病性存在較大差異。同時，其病原種類常以混合感染致病為主要形式，因此，在治療和免疫預(yù)防方面均要根據(jù)當?shù)仉u球蟲流行特點制定相應(yīng)方案，采取相應(yīng)措施?！厩叭搜芯窟M展】目前，國內(nèi)的研究主要集中于雞球蟲的分子生物學(xué)、免疫學(xué)和藥物治療[3-5]，而關(guān)于其病原調(diào)查的報道較少。關(guān)于新疆地區(qū)雞球蟲病病原調(diào)查的鮮有報道[6-7]，北疆地區(qū)僅見段曉琴[6](2003)對昌吉地區(qū)雞球蟲流行病學(xué)調(diào)查的報道?！颈狙芯壳腥朦c】近年來，隨著新疆北疆地區(qū)養(yǎng)雞業(yè)的快速發(fā)展，有必要對該地區(qū)雞球蟲種類和感染情況進行摸底調(diào)查?！緮M解決的關(guān)鍵問題】研究通對采集不同地區(qū)表現(xiàn)雞球蟲病臨床癥狀的雞病料，收集、培養(yǎng)卵囊，對其進行卵囊和孢子化卵囊的形態(tài)學(xué)觀察，鑒定該病的病原種類，明確新疆北疆部分地區(qū)雞球蟲病病原分布情況，旨在為今后北疆地區(qū)預(yù)防和控制該病提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

2013年，選取新疆北疆地區(qū)的沙灣、石河子、瑪納斯和昌吉的15家養(yǎng)雞場和獸醫(yī)站，其中沙灣縣2家種雞場、2家個體養(yǎng)雞場，石河子地區(qū)3個獸醫(yī)站、3家個體養(yǎng)雞場，瑪納斯縣3家個體養(yǎng)雞場，昌吉市2家個體養(yǎng)雞場。收集確診為雞球蟲病或疑似球蟲病的病雞，從盲腸或小腸中采集病料，收集其糞樣，帶回實驗室進行蟲卵分離和培養(yǎng)。

主要儀器設(shè)備：恒溫箱、低溫冰箱、微量可調(diào)加樣器、顯微鏡、多媒體顯微攝像儀 、燒杯、紗網(wǎng)等。主要試劑：飽和食鹽水、2.5%重鉻酸鉀溶液等。

1.2 方 法

1.2.1 樣品的采集

對調(diào)查點發(fā)生雞球蟲病后進行檢樣采集，每個點采集30份新鮮腸內(nèi)容物和糞便，將每份病料進行分裝、標號，共計450份樣品，送實驗室進行病原學(xué)檢查和蟲種鑒定。表1

表1 各地采集的樣品信息
Table 1 The information of samples collected form different areas

地區(qū)Area場址Site發(fā)病日齡(d)Ageofonset品種Breed雞群規(guī)模Thecrowdsize沙灣Shawan金溝河鎮(zhèn)40海藍褐蛋雞2100安集海鎮(zhèn)30黃羽肉雞1900石河子Shihezi北泉鎮(zhèn)32黃羽肉雞1300烏蘭烏蘇鎮(zhèn)28蘆花雞800石河子總場32黃羽肉雞2000148團獸醫(yī)站17清遠麻雞養(yǎng)殖戶零星送檢第八師獸醫(yī)站19白羽肉雞(科寶)養(yǎng)殖戶零星送檢瑪納斯Manas瑪納斯縣22黃羽肉雞1000涼州戶鎮(zhèn)29黃羽肉雞800包家店鎮(zhèn)26清遠麻雞500昌吉Changji園藝場22白羽肉雞(羅斯308)1500濱湖鄉(xiāng)25白羽肉雞(科寶)1000三工鄉(xiāng)62海藍褐蛋雞800

1.2.2 卵囊檢測、計數(shù)、純化與收集

(1)檢測：取各檢樣腸內(nèi)容物適量，放于容器內(nèi)，加適量飽和鹽水加水攪勻，過濾后倒入青霉素小瓶，蓋上蓋玻片，靜置0.5 h后，鏡檢是否有雞球蟲卵囊存在。

(2)計數(shù)：取2 g糞便搗碎，放入裝有玻璃珠的小瓶內(nèi)，加入飽和鹽水58 mL充分震蕩混合，通過糞便篩過濾后。將濾液邊搖晃邊用吸管吸取少量，加入計數(shù)室內(nèi)，放于顯微鏡載物臺上，靜置3 min后，用顯微鏡將2個計數(shù)室內(nèi)見到的卵囊全部計數(shù)，取平均值乘以200，即為每克糞便中的卵囊數(shù)(EPG)。

(3)純化與收集：取濾液分裝至離心管中，置于離心機中離心(2 500 h/min，10 min)。棄去上清液，向沉淀物中加飽和鹽水至離心管1/2處進行離心漂浮(2 500 h/min，10 min)。吸取上層液，加2倍蒸餾水混勻，離心。連續(xù)2～3次洗去飽和鹽水，收集卵囊。

1.2.3 初步鑒定

用吸管吸取卵囊進行鏡檢，觀察卵囊的形狀、顏色，測量卵囊的大小，并進行顯微照相。根據(jù)卵囊的形態(tài)、大小、顏色，參照圖譜和有關(guān)文獻資料進行初步的蟲種鑒定。

1.2.4 卵囊的培養(yǎng)與鑒定[8-9]

將收集到的的卵囊放入盛有重鉻酸鉀的培養(yǎng)皿中，混勻，置溫箱中培養(yǎng)(26～28 ℃)，每1～2 h觀察1次，吸出少許進行鏡檢, 確定卵囊的發(fā)育進程, 數(shù)碼顯微照相, 計量單位為微米(μm)。每次觀察不少于100個卵囊, 觀測的內(nèi)容包括卵囊的形態(tài)、大小、顏色、內(nèi)部構(gòu)造、卵膜孔的寬度、孢子囊的形態(tài)及孢子化時間，每種卵囊測量約30個。至卵囊孢子化后記錄時間，并根據(jù)大小、形態(tài)、顏色、孢子化時間進行進一步的蟲種鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 卵囊計數(shù)

此次調(diào)查發(fā)現(xiàn)各地雞球蟲卵囊數(shù)量為467～3 200個/g糞便，且均為混合感染，感染率為100%。

2.2 蟲種培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)觀察

對采集樣品中雞球蟲進行培養(yǎng)和蟲種鑒定，結(jié)果表明，按寄生部位，柔嫩艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲、哈氏艾美耳球蟲寄生部位單一，分別寄生于盲腸、小腸、小腸前段、小腸前段，而堆型艾美耳球蟲同時寄生于十二指腸、小腸前段，布氏艾美耳球蟲同時寄生于小腸下段、盲腸；卵囊大小，以巨型艾美耳球蟲卵囊最大，為23.90 μm×30.76 μm，和緩艾美耳球蟲卵囊最小，為15.34 μm×14.3 μm；按顏色，以巨型艾美耳球蟲最深，為黃褐色，其它蟲種顏色較淡或無色；形成子孢子的時間，以巨型艾美耳球蟲最長，為48 h，堆型艾美耳球蟲最短，為19.5～24.0 h；孢子囊大小，以布氏艾美耳球蟲最大，為25.09 μm×20.2 μm，和緩艾美耳球蟲最小，為8.72 μm×5.0 μm；卵囊出現(xiàn)所需的時間，以柔嫩艾美耳球蟲最長，為7 d，堆型艾美耳球蟲最短，為4 d。表2

表2 蟲種培養(yǎng)及其形態(tài)學(xué)
Table 2 The results of the species' development and their morphological observation

蟲種Species寄生部位Parasiticsite卵囊大小Oocystsize(μm)卵囊形態(tài)Oocystsfigure形成子孢子時間Theoocystssporulatedtime(h)孢子囊大小Sporangium(μm)卵囊出現(xiàn)所需時間Thetimeneededforoocystappear(d)柔嫩艾美耳球蟲Etenella盲腸(250～200)×(200～150)，平均2262×1805卵圓，囊壁淡綠、原生質(zhì)淡褐195～305(1275～75)×(675～50)，平均623×11477巨型艾美耳球蟲Emaxima小腸(400～2175)×(330～175)，平均2390×3076卵圓，黃褐480(175～1175)×(75～575)，平均156×706堆型艾美耳球蟲Eacervulina十二指腸、小腸前段(225～150)×(1675～125)，平均188×145卵圓，無色195～240(105～75)×(50～45)，平均97×504和緩艾美耳球蟲Emitis小腸前段(195～1275)×(170～125)，平均1534×143近于圓形，無色235～260(100～70)×50，平均872×505哈氏艾美耳球蟲Ehagani小腸前段(200～155)×(185～145)，平均1768×1578寬卵圓，無色195～385105×506布氏艾美耳球蟲EBrunetti小腸下段、盲腸(303～207)×(242～181)，平均268×217卵圓，淡黃210～480(2175～295)×(16～235)，平均2509×2025

2.3 顯微鏡下雞球蟲的卵囊的形態(tài)學(xué)變化

顯微鏡下雞球蟲卵囊孢子化前后的形態(tài)學(xué)變化為：(1)柔嫩艾美耳球蟲的卵囊呈卵圓形，卵囊淡綠、原生質(zhì)淡褐色。未見卵膜孔和極帽，卵囊內(nèi)有1個折光性強的極粒，無卵囊殘體。孢子囊呈卵圓形，有1個斯氏體，無內(nèi)外殘體(圖1A)；(2)巨型艾美耳球蟲的卵囊呈卵圓形，卵囊黃褐色。無卵膜孔，有極粒。孢子囊呈圓形，無內(nèi)、外殘體，有斯氏體(圖1B)；(3)堆型艾美耳球蟲的卵囊呈長卵圓形，無色。無卵膜孔，有極粒。孢子囊呈卵圓形，無內(nèi)、外殘體，有斯氏體(圖1C)；(4)和緩艾美耳球蟲的卵囊近于圓形，無色。無卵膜孔，無殘體。卵囊內(nèi)有一圓形的極粒，孢子囊內(nèi)有1個斯氏體，無內(nèi)外殘體(圖1D)；(5)哈氏艾美耳球蟲的卵囊呈寬卵圓形，無色。無卵膜孔和卵囊殘體, 囊內(nèi)有1個極粒(圖1E)；(6)布氏艾美耳球蟲的卵囊呈卵圓形，淡黃色，無卵膜孔和卵囊殘體，囊內(nèi)有1～2個極粒(圖1F)。圖1

圖 1 6種雞艾美耳球蟲孢子化前后卵囊的形態(tài)特征
Fig. 1 Representative oocysts sporulated before and after of 6 species of Eimeria from chicken

2.4 新疆北疆地區(qū)雞球蟲種類

實驗共檢出6種艾美耳球蟲，分別為柔嫩艾美耳球蟲(E.tenella)、巨型艾美耳球蟲(E.maxima)、堆型艾美耳球蟲(E.acervulina)、和緩艾美耳球蟲(E.mitis)、哈氏艾美耳球蟲(E.hagani)和布氏艾美耳球蟲(E.Brunetti)。其中在沙灣、石河子、瑪納斯，柔嫩艾美爾球蟲、巨型艾美耳球蟲和堆型艾美耳球蟲所占比例均≥19.1%，因此，這3個蟲種為這3個地方的優(yōu)勢蟲種；在昌吉，柔嫩艾美爾球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲所占比例均≥20%，為昌吉的優(yōu)勢蟲種。因此，柔嫩艾美爾球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲新疆北疆地區(qū)雞球蟲病病原的優(yōu)勢蟲種。表3

表3 新疆北疆地區(qū)雞球蟲種類
Table 3 Investigation results of chicken coccidial species

球蟲種類Coccidialspecies各蟲種所占比例Infectionrate(%)沙灣石河子瑪納斯昌吉柔嫩艾美耳球蟲Etenella236250219342巨型艾美耳球蟲Emaxima215225275200堆型艾美耳球蟲Eacervulina19121420211和緩艾美耳球蟲Emitis17317814236哈氏艾美耳球蟲Ehagani101826611布氏艾美耳球蟲EBrunetti8451100卵囊數(shù)EPG2315257810892440

3 討 論

研究參照了McDougald等[8](1997)的方法，對沙灣、石河子、瑪納和昌吉等新疆北疆部分地區(qū)的15個雞場和獸醫(yī)站進行了球蟲病病原分類與鑒定。根據(jù)卵囊形態(tài)、大小、最短潛在期，寄生部位、卵囊孢子化時間、病變等具有鑒別意義的特征做綜合鑒定。有的種可以根據(jù)卵囊形態(tài)即可鑒定，如巨型艾美爾球蟲，有的種除根據(jù)卵囊形態(tài)外，還要根據(jù)最短潛在期來判斷，例如早熟艾美爾球蟲和和緩艾美爾球蟲。其他的種必須結(jié)合寄生部位，典型的病變特征和內(nèi)生性發(fā)育等特征才能鑒定。若卵囊太少，可以通過感染無球蟲雞增殖，再有針對性地鑒定可疑種類。

目前，全世界公認的雞艾美耳球蟲有9種，在我國均存在[2]。在新疆，除了變位艾美耳球蟲(E.mivati)，其它種均存在，即柔嫩艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲、布氏艾美耳球蟲、哈氏艾美耳球蟲、毒害艾美爾球蟲(E.necatrix)和早熟艾美耳球蟲(E.praecox)。此次共鑒別出6種艾美耳球蟲，未見毒害艾美爾球蟲和早熟艾美耳球蟲，這與段曉琴等[6](2006)的調(diào)查有一定差異，其調(diào)查發(fā)現(xiàn)了5種艾美爾球蟲，其中，未發(fā)現(xiàn)布氏艾美耳球蟲、毒害艾美爾球蟲(E.necatrix)，而發(fā)現(xiàn)了早熟艾美爾球蟲(E.praecox)。造成此差異的原因可能是：(1)該地區(qū)這2種類型雞球蟲病不存在或很少發(fā)生，因而未檢測出；(2)早熟艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲球蟲與和緩艾美耳球蟲、哈氏艾美耳球蟲卵囊大小很接近，測量卵囊大小時存在一定的誤差，因此分類時不夠精確；(3)病料的采集季節(jié)和時間以及被采樣雞群的預(yù)防和球蟲病的治療情況均可能對蟲種的檢出造成一定影響。此次調(diào)查顯示，整體上柔嫩艾美爾球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲為新疆北疆地區(qū)雞球蟲病病原的優(yōu)勢蟲種，但同時表現(xiàn)為不同地區(qū)所占比例最大蟲種也有所不同。

經(jīng)過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，影響雞球蟲感染的因素很多，包括養(yǎng)雞規(guī)模、飼養(yǎng)密度、飼養(yǎng)方式及衛(wèi)生條件等。雞球蟲病的發(fā)病主要受溫度、濕度的影響，如新疆北疆地區(qū)雞球蟲病主要集中在3～7月，在此期間氣溫逐漸升高，多雨濕潤，有利于雞球蟲的生長發(fā)育。建議各養(yǎng)殖場在此期間應(yīng)加強衛(wèi)生管理措施，做好雞球蟲病的預(yù)防工作。

4 結(jié) 論

北疆地區(qū)雞球蟲的感染率為100%，采用傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)分類方法，共檢出6種艾美耳球蟲，并確定了柔嫩艾美爾球蟲、巨型艾美耳球蟲和堆型艾美耳球蟲為該地區(qū)雞球蟲病病原的優(yōu)勢蟲種。傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)分類方法仍然是目前雞球蟲病病原分類與鑒定的重要手段。

研究的調(diào)查和鑒定結(jié)果可為今后新疆北疆地區(qū)預(yù)防和控制該病提供依據(jù)。根據(jù)該地區(qū)雞球蟲病原構(gòu)成及其病原水平，進行選擇使用抗球蟲藥；同時及時了解和評價抗球蟲藥對不同種類的雞球蟲病的防治效果，進而優(yōu)化用抗球蟲藥方案。

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Fund project:Supported by NSFC (31060339)

Investigation, Classification and Identification of Coccidial Species in Chickens in Northern Xinjiang

WANG Kai-sheng1,2, LIU Ji-rong2

(1. Shihezi University, Shihezi Xinjiang 832003, China; 2. College of Animal and Science Technology, Shihezi University, Shihezi Xinjiang 832000, China)

【Objective】 The situation of chicken coccidiosis pathogen distribution in Northern Xinjiang was investigated in order to clarify the types of chicken coccidiosis in recent years.【Method】The fixed-point sampling method was adopted to collect the deaths of chickens from Shihezi, Manasi, Shawan and Changji, and the pathology examination of the chicken intestines was done in this experiment. To separate oocysts from the freshly collected fecal samples, sporulated oocysts were cultured and morphological observation was carried out to identify species of chicken coccidiosis.【Result】Chicken coccidia infection rate was 100%, and altogether, there were 6 species of Eimeria,E.tenella,E.maxima,E.acervulina,E.mitis,E.hagani,E.brunetti. TheE.tenella,E.maximaandE.acervulinawere the dominant species in Nortern Xinjiang chicken coccidiosis pathogen. 【Conclusion】The study preliminarily determined the distribution and costitution of the coccidiosis pathogen,and the pathogen level were made clear in morth of Xinjiang .Yhe choice of the anticoccidia drugs and the optimal medication plans shouid offered the necessary data of the study to cure the disease.And the credible identifiable ground was provided to prevent and control the disease in the area.

chicken coccidian; morphological observation; classification and identification; dominant species

10.6048/j.issn.1001-4330.2016.05.023

2015-05-11

國家自然科學(xué)基金項目(31060339)

王開勝(1974-)，男，安徽人，博士研究生，研究方向為動物寄生蟲學(xué)，(E-mail)wkskjc@shzu.edu.cn

劉繼榮(1952-)，男，教授，研究方向為動物寄生蟲學(xué)

S858.31

A

1001-4330(2016)05-0955-06