超聲輔助法浸提荷葉中黃酮類化合物研究

劉宗睿 于紅衛(wèi)

摘 要：該文利用超聲輔助法提取荷葉中黃酮類化合物，并用分光光度法測(cè)定所提取的黃酮類化合物的含量，探究了提取溶劑中乙醇的含量、荷葉質(zhì)量與提取溶劑的體積比（料液比）、超聲輔助浸提時(shí)間變化及浸提重復(fù)次數(shù)等因素對(duì)荷葉中黃酮類化合物提取率的影響情況。通過研究確定了超聲輔助浸提荷葉中黃酮類化合物的控制條件為：溶劑中乙醇的含量為60%，荷葉質(zhì)量與提取溶劑的體積比為1∶25（g/mL），浸提次數(shù)為3次，超聲輔助浸提時(shí)間控制25min。在該控制條件下，荷葉中黃酮類化合物的提取率為4.81%。

關(guān)鍵詞：荷葉；黃酮類化合物；超聲提取

中圖分類號(hào) TS255 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2016）19-0035-03

Abstract：To study the optimal conditions of flavones extraction from lotus leaf by ultrasonic.The content of flavones in lotus leaf was determined by spectrophotography.The effects of ethanol concentration，solid-liquid ratio，ultrasonic time and extraction times on the extraction rate of flavonoids in lotus leaf were investigated.The optimum extraction conditions were as follows： ethanol concentration 50%，solid-liquid ratio 1∶20（g/mL），extraction 3 times，ultrasonic extraction time 25min.Under the optimum extraction conditions，the extraction rate of flavonoids from lotus leaf was 4.81%.

Key words：Lotus leaf；Flavonoids；Ultrasonic extraction

荷葉是睡蓮植物蓮的干燥葉片，具有清熱解毒、升發(fā)清陽、涼血止血的功效，以及清心火、平肝火、降肺火、降壓利尿作用，在食用、藥用兩方面均有廣泛的應(yīng)用[1-2]。據(jù)報(bào)道，荷葉中含有多種具有生物活性成分，如多酚、生物堿、黃酮類化合物等，大量研究表明，荷葉中黃酮類化合物具有顯著的調(diào)脂作用、抗病毒作用、潤膚美容作用、抗氧化、抗衰老、清除自由基作用等[3-4]。荷葉資源豐富、材料易得，為了更好地利用和開發(fā)這一植物，筆者選取荷葉為研究對(duì)象，利用超聲輔助浸提法研究了提取溶劑中乙醇的含量、荷葉質(zhì)量與提取溶劑的體積比（料液比）、超聲輔助浸提時(shí)間變化及浸提次數(shù)等因素的影響規(guī)律，獲得了荷葉中黃酮類化合物的最佳提取條件。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備 上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)的722N型可見分光光度計(jì)和電子天平（精度0.1mg），超聲波清洗器（型號(hào)KQ2200B）。盧丁標(biāo)準(zhǔn)品：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，95%乙醇，氯化鋁（無水，分析純）。干荷葉購于當(dāng)?shù)厮幍?，粉碎后保存于冰箱中?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線 用分析天平稱取0.025g的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用乙醇（50%）溶劑溶解，轉(zhuǎn)移至200mL容量瓶中、定容，該溶液為0.125mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確移取該蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL至25mL比色管中，用乙醇（50%）溶劑稀釋到10mL，然后加入3.0mL AlCl3（0.1mol/L）溶液，搖勻，再用乙醇（50%）稀釋至25mL，放置顯色20min，然后用722N型光度計(jì)于415nm波長處測(cè)其吸光度，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo)，測(cè)得的吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）。

1.2.2 超聲輔助浸提及黃酮類化合物含量測(cè)定 將從當(dāng)?shù)厮幍曩I回的荷葉粉碎、稱量，放于錐形瓶中，加入一定體積的的乙醇水溶液超聲浸提，然后用0.22μm濾膜抽濾。濾渣按同樣的步驟進(jìn)行重復(fù)浸提，并將重復(fù)浸提的提取液合并，用制作標(biāo)準(zhǔn)曲線同樣的方法，測(cè)定荷葉樣品中黃酮類化合物的含量。并探究提取溶劑中乙醇的含量、荷葉質(zhì)量與提取溶劑的體積比（料液比）、超聲輔助浸提時(shí)間變化及浸提次數(shù)對(duì)荷葉中黃酮類化合物提取率的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 乙醇濃度對(duì)荷葉中黃酮類化合物提取率的影響 按料液比為1∶25（g/mL），超聲輔助提取30min，溶劑中乙醇的含量對(duì)荷葉黃酮類化合物提取率的影響見圖2。圖2顯示，提取溶劑中乙醇的含量增加，浸提液中黃酮類化合物的得率不斷增加，當(dāng)提取溶劑中乙醇的含量為60%時(shí)黃酮類化合物得率最佳，繼續(xù)增加溶劑中乙醇的含量，提取率反而逐步降低。這是由于所提取的黃酮類化合物其中一部分是水溶性的，如果溶劑中乙醇的含量高、水分含量低時(shí)，就會(huì)影響黃酮類化合物在溶劑中的溶出[5]。因此選用60%的乙醇水溶液。

2.2 料液比對(duì)荷葉中黃酮類化合物提取率的影響 取濃度為60%的乙醇水溶液為提取溶劑，超聲提取30min，考察了料液比分別為1∶10，1∶15，1∶20，1∶25，1∶30，1∶35，1∶40時(shí)對(duì)荷葉中黃酮類化合物提取率的影響，結(jié)果如圖3。當(dāng)料液比增加時(shí)，浸提液中黃酮類化合物的溶出量也隨之增加、提取率增大，當(dāng)增加到1∶25（g/mL）時(shí)黃酮類化合物的溶出量最高，提取率最佳。料液比大于1∶25（g/mL）后黃酮類化合物的溶出量減少、提取率下降。這是因?yàn)樵诔暡ǖ淖饔孟禄w的細(xì)胞膜快速膨脹并破裂，樣品中黃酮類化合物快速溶出。當(dāng)浸提液的量不斷增加時(shí)，黃酮類化合物溶出量也逐漸增加直到飽和，此階段提取率隨著溶劑量的增加逐漸升高。但當(dāng)料液比增加到1∶25（g/mL）后，樣品中的黃酮類化合物溶出的同時(shí)，其它成分也會(huì)溶出，影響荷葉中黃酮類化合物的溶出，使黃酮類化合物的提取率下降[6]，故此選用料液比為1∶25。

2.3 超聲時(shí)間對(duì)荷葉中黃酮類化合物提取率的影響 料液比為1∶25，濃度為60%的乙醇水溶液為提取溶劑，選取超聲時(shí)間分別為5，10，15，20，25，30，35min，探究荷葉黃酮類化合物提取率受超聲輔助浸提時(shí)間變化的影響（圖3）。圖3中提取率的變化結(jié)果表明，超聲輔助浸提時(shí)間明顯影響黃酮類化合物的提取率，當(dāng)浸提時(shí)間在5～25min范圍內(nèi)，提取率隨浸提時(shí)間的增加而增大，浸提25min時(shí)，提取率達(dá)到最高點(diǎn)。超聲提取時(shí)間大于25min后，黃酮類化合物的提取率逐漸減少。這是由于隨著時(shí)間的延長，樣品中粘液質(zhì)等物質(zhì)逐漸溶入到溶劑中，使溶劑的粘度增大，分子的擴(kuò)散速度逐漸變慢，使得黃酮類化合物溶出較難。

2.4 提取次數(shù)對(duì)荷葉中黃酮類化合物提取率的影響 料液比為1∶25（g/mL），乙醇濃度為60%的乙醇水溶液為溶劑，超聲輔助提取25min，提取次數(shù)對(duì)荷葉中黃酮類化合物提取率的影響如表1。由表1可知，提取次數(shù)越多黃酮類化合物的提取率越高，提取次數(shù)達(dá)到3次提取率已接近最大值，黃酮類化合物已接近完全溶出；再繼續(xù)提取，黃酮類化合物的提取率也不會(huì)有明顯增加，所以測(cè)定次數(shù)3次為宜。

3 結(jié)論

利用超聲法輔助法提取荷葉中黃酮類化合物，探究了提取溶劑中乙醇的含量、荷葉質(zhì)量與提取溶劑的體積比（料液比）、超聲輔助浸提時(shí)間變化及浸提次數(shù)等因素對(duì)提取荷葉中黃酮類化合物的影響，并且獲得了提取荷葉中黃酮類化合物的適宜條件，即：乙醇濃度為60%、料液比1∶25（g/mL），超聲提取時(shí)間25min，提取次數(shù)為3次，在此條件下荷葉中黃酮類化合物的提取率為4.81%。

參考文獻(xiàn)

[1]陶波，陳慕英，李曉寧，等.荷葉藥用研究概況[J].中醫(yī)藥信息，2001，18（2）：14.

[2]梁佳文，劉艾潔，馬冰馨，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定荷葉中6種黃酮類成分[J].植物科學(xué)學(xué)報(bào)，2015，33（6）：861-866.

[3]唐裕芳，張妙玲，劉忠義，等.荷葉研究現(xiàn)狀與展望[J].食品研究與開發(fā)，2004，25（4）：14-16.

[4]涂宗才，寇玉，王輝，等.荷葉多糖的超聲波輔助提取和抗氧化活性[J].食品科學(xué)，2013，34（16）：108-112.

[5]胡生威.超聲輔助提取芒草中黃酮類物質(zhì)研究[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2015，21（16）：15-17.

[6]韓雅慧，顧賽麒，陶寧萍，等.甘草總黃酮提取工藝及總抗氧化活性研究[J].食品工業(yè)科技，2012，2：239-242.

（責(zé)編：張宏民）