活血化瘀利水方對(duì)大鼠急性軟組織損傷模型血清IL-6、組胺影響的實(shí)驗(yàn)研究

李黎，孫燕*，廖懷章，劉緒銀，肖黎

（正大邵陽骨傷科醫(yī)院，湖南邵陽422900）

活血化瘀利水方對(duì)大鼠急性軟組織損傷模型血清IL-6、組胺影響的實(shí)驗(yàn)研究

李黎，孫燕*，廖懷章，劉緒銀，肖黎

（正大邵陽骨傷科醫(yī)院，湖南邵陽422900）

目的通過利用活血化瘀利水方對(duì)急性軟組織損傷大鼠血清IL-6、組胺影響的實(shí)驗(yàn)研究，探討活血化瘀利水方對(duì)急性軟組織損傷修復(fù)的機(jī)制。方法將60只大鼠隨機(jī)分為6組，即正常組、模型組、傷科跌打片組、活血化瘀利水低、中、高劑量組，除正常組外，余5組通過打擊法造成急性軟組織損傷模型，連續(xù)給藥7 d后測(cè)定大鼠血清IL-6、組胺含量。結(jié)果活血化瘀利水方組能夠明顯抑制急性軟組織損傷大鼠血清IL-6、組胺的表達(dá)，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且其抑制作用與藥物劑量相關(guān)，高劑量組抑制效果優(yōu)于陽性藥物組。結(jié)論活血化瘀利水方對(duì)損傷局部炎癥反應(yīng)具有抑制作用，從而發(fā)揮對(duì)急性軟組織損傷動(dòng)物模型的治療作用。

急性軟組織損傷；活血化瘀利水方；IL-6；組胺；當(dāng)歸；白茅根；茯苓

活血化瘀利水方是全國老中醫(yī)藥專家、湖南省名中醫(yī)孫廣生主任醫(yī)師四十余年臨床經(jīng)驗(yàn)名方，由廖懷章教授對(duì)其進(jìn)行研究總結(jié)后提出的，具有活血化瘀止痛、利水消腫之功效，臨床上對(duì)于治療急性軟組織損傷具有良好的療效，在急性軟組織損傷早期就能發(fā)揮明顯的作用。為探討活血化瘀利水方治療急性軟組織損傷的作用機(jī)制，課題組進(jìn)行了其對(duì)急性軟組織損傷大鼠血清IL-6、組胺影響的實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物健康SD大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量（200±20）g（合格證號(hào)：43004700000032，湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心購買）。

1.2 藥物

觀察藥：活血化瘀利水方（藥物組成：當(dāng)歸尾、

白茅根、川芎、赤芍、紅花、牡丹皮、茯苓、三七、澤蘭、木通、土鱉蟲、甘草、水蛭、地龍、生地黃，購自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院；活血化瘀利水高、中、低劑量煎液分別濃縮成4.14、2.07、1.035 g/mL）。

對(duì)照藥：傷科跌打片，購自湖南安邦制藥有限公司，藥品生產(chǎn)批號(hào)：121104。

1.3 儀器與試劑

自制軟組織打擊器C3118+型酶標(biāo)儀（上海沛歐），5418R型離心機(jī)（德國eppendorf），DNP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），大鼠IL-6 ELISA試劑盒（上海巧伊生物科技有限公司），大鼠組胺ELISA試劑盒（上海巧伊生物科技有限公司）。

1.4 動(dòng)物分組與造模[4]

實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將60只大鼠按體質(zhì)量編號(hào)，編號(hào)完成后按隨機(jī)數(shù)字表法分為6組，分別為正常組，模型組，傷科跌打片組，活血化瘀利水方低、中、高劑量組，每組10只。在造模前24 h使用8%硫化鈉脫毛劑脫去右后大腿部鼠毛。除正常組外對(duì)其余大鼠進(jìn)行造模，方法參考何朝勇法［1］稍加改造。將大鼠臥位固定于動(dòng)物固定臺(tái)，將200 g重的砝碼通過與砝碼直徑相當(dāng)?shù)乃芰瞎苤凶?5 cm高處垂直自由落體沖擊大鼠右大腿外側(cè)肌肉豐厚處，連續(xù)打擊3次，打擊面積約l.5 cm×2 cm，造成打擊局部出現(xiàn)散在出血點(diǎn)，打擊處腫脹，皮下瘀斑但無皮膚破損；用手觸摸右下肢無骨折及脫位征；無其他異常情況發(fā)生者確定為造模成功。打擊后如有骨折、皮膚破裂者予以剔除，此造模方法在預(yù)實(shí)驗(yàn)中經(jīng)解剖及組織學(xué)驗(yàn)證成功率為100%。

1.5 飼養(yǎng)及給藥[4]

造模成功后將所有大鼠分籠喂養(yǎng)，造模成功后第2天開始按15 mL/kg灌胃相應(yīng)藥物，其中正常組、模型組給予灌胃蒸餾水；傷科跌打片組給予傷科跌打片溶液0.24 g/kg（相當(dāng)于臨床等效劑量）；活血化瘀利水方低、中、高劑量組分別給予活血化瘀利水方煎液15.5、31、62 g/kg（分別相當(dāng)于臨床等效劑量的1、2、4倍），1次/d，連續(xù)7 d。藥物劑量參照賀石林等[2]的換算法計(jì)算所得。

1.6 取材

連續(xù)給藥7 d后，水合氯醛腹腔注射麻醉（0.1 mL/100 g），腹主動(dòng)脈采血，血液室溫靜置5 min，2 500 r/min離心5 min，收集上清，保存、備用。

1.7 指標(biāo)檢測(cè)與方法

按ELISA試劑盒操作說明測(cè)定血清IL-6、組胺含量。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)采用“±s”表示，組間比較用單因素方差分析法，方差齊性用LSD檢驗(yàn)，方差不齊用Tamhane’s T2檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠血清IL-6的含量

造模各組大鼠血清IL-6含量與空白組比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，各觀察組均明顯減少（P＜0.01或P＜0.05）；活血化瘀利水方低、中劑量組與傷科跌打片組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；高劑量組IL-6含量明顯低于傷科跌打片組（P＜0.01），活血化瘀利水低、中、高劑量組作用依次增強(qiáng)。見表1。

表1 各組大鼠血清IL-6含量比較±s，pg/mL）

表1 各組大鼠血清IL-6含量比較±s，pg/mL）

注：與正常組比較*P＜0.05；與模型組比較△P＜0.05；與傷科跌打片組比較，#P＜0.01；與低劑量組比較▲P＜0.05；與中劑量組比較●P＜0.05。

組別正常組模型組傷科跌打片組活血化瘀利水低劑量組活血化瘀利水中劑量組活血化瘀利水高劑量組n 10 10 10 10 10 10 IL-6 2.277±0.374 39.289±5.498* 28.664±3.176* 29.196±4.652*△27.736±2.772* 22.736±1.166*△#▲●

2.2 大鼠血清組胺的含量

造模各組大鼠血清組胺含量與空白組比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）；與模型組比較，各觀察組均明顯減少（P＜0.01）；活血化瘀利水方低、中劑量組與傷科跌打片組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；高劑量組組胺含量明顯低于傷科跌打片組（P＜0.05），活血化瘀利水低、中、高劑量組作用依次增強(qiáng)。見表2。

表2 各組大鼠血清組胺含量比較±s,ng/mL）

表2 各組大鼠血清組胺含量比較±s,ng/mL）

注：與正常組比較*P＜0.01；與低劑量組比較●P＜0.01；與模型組比較△P＜0.01；與中劑量組比較#P＜0.05；與傷科跌打片組比較▲P＜0.05。

組別正常組模型組傷科跌打片組活血化瘀利水低劑量組活血化瘀利水中劑量組活血化瘀利水高劑量組n 10 10 10 10 10 10組胺10.691±1.588 35.934±2.727*▲31.137±1.566*#31.599±2.268*△30.140±1.954*△27.996±1.780*△▲#●

3 討論

急性軟組織損傷是一種骨傷科臨床中常見病、多發(fā)病[3]，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為急性軟組織損傷主要是由于外來創(chuàng)傷導(dǎo)致的急性無菌性炎癥，外力作用于機(jī)體引起局部毛細(xì)血管破裂出血和細(xì)胞內(nèi)液滲透到組織間隙引起腫脹[4]，數(shù)小時(shí)后隨著IL-6等炎性介質(zhì)的釋放，PGE2、PGD2等代謝產(chǎn)物的堆積，隨即出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，從而刺激神經(jīng)末稍，引起疼痛和功能受限[5]，在治療上經(jīng)常使用非甾體類抗炎鎮(zhèn)痛藥物[6]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為急性軟組織損傷屬于“傷筋”的范疇，發(fā)病主要是由于外來暴力直接或間接作用于人體，筋肉血脈遭到損傷，以致津血溢出脈外而成為血腫，氣血運(yùn)行不暢，氣機(jī)障礙，失于運(yùn)化，水濕內(nèi)停局部組織而成為水腫，故在損傷后機(jī)體局部很快出現(xiàn)腫痛；血瘀氣滯，經(jīng)絡(luò)受阻，不通則痛；瘀血停留肌肉腠理之間則腫脹，停留皮下則見瘀斑青紫。疼痛和腫脹引發(fā)人體自身保護(hù)性反應(yīng)，如肌肉痙攣等而導(dǎo)致功能障礙，故其主要癥狀為疼痛、腫脹、局部瘀斑、肢體功能障礙等。

《金匱要略·水氣病脈證并治》曰：“血不利則為水?！薄堆C論》強(qiáng)調(diào)了“血病而不離乎水”，“水病而不離乎血”的病理關(guān)系，其中明確指出：“病血者，未不病水；病水者，未嘗不病血也”，“失血家往往水腫，瘀血化水，亦發(fā)生水腫，是血病而兼水也”；“血積既久，亦能化為痰水”，說明瘀與水常同時(shí)存在，彼此是互相影響，互為因果，瘀能生水，水又可釀瘀，血瘀則水停，水停則血瘀[6-7]，瘀水不分家。廖懷章教授認(rèn)為損傷早期由于脈絡(luò)損傷，一則脈中血與津運(yùn)行障礙而血瘀津停；二則血脈內(nèi)之血與津外溢，血外溢留而不去則瘀血，津液留滯軟組織則為水濕。故急性軟組織損傷主要的病理特征為瘀水互結(jié)[8]。

《血證論·汗血》曰“凡調(diào)血，必先治水，治水即以治血，治血即以治水”，醫(yī)圣張仲景“瘀水同源”的思想上明確指出瘀與水常需同治，即瘀水同治法[9]。許鴻照教授也指出創(chuàng)傷早期的肢體腫脹其病理主要是“血水同源，血水同病，互為因果”，當(dāng)然也存在氣行郁滯，但因血水有形氣無形，有形之邪治當(dāng)速去，故倡導(dǎo)“治血重治水”，驅(qū)有形而和無形，行動(dòng)則氣流[10]。郭氏也認(rèn)為在活血逐瘀藥中加入大量利水類藥物，可大大增加其活血逐瘀消腫功效[12]。故廖懷章教授在臨床工作中常以活血化瘀利水法為主，自擬活血化瘀利水方治療急性軟組織損傷，療效十分顯著[9]。

組胺作為一種炎癥介質(zhì)，可通過H1受體起作用，使細(xì)動(dòng)脈擴(kuò)張，細(xì)靜脈通透性增加，從而加速炎癥反應(yīng)[12]。IL-6由淋巴細(xì)胞或非淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，是一種多功能細(xì)胞因子，能促進(jìn)中性粒細(xì)胞的活化、聚集，多在細(xì)胞受到TNF-α、IL-1β刺激后產(chǎn)生，在機(jī)體免疫應(yīng)答、急相反映中起重要作用[13］，此外血清中IL-6水平可反映組織損傷的程度[14]。故本實(shí)驗(yàn)選擇IL-6和組胺作為實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)。

本研究結(jié)果表明活血化瘀利水方能夠明顯降低急性軟組織損傷大鼠血清IL-6和組胺的含量，與模型組比較有明顯差異，且高劑量組的療效優(yōu)于陽性藥物傷科跌打片組?；钛隼綄?duì)損傷局部炎癥反應(yīng)具有顯著的抑制作用，從而對(duì)急性軟組織損傷動(dòng)物模型起到治療作用。本次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了活血化瘀利水方對(duì)急性軟組織損傷早期的顯著作用療效，其作用機(jī)制與減少血清中IL-6和組胺的生成有關(guān)。

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（本文編輯李杰）

Effects of Huoxue Huayu Lishui Prescriptionon on Serum IL-6 and Histamine in the Treatment of Acute Soft Tissue Injury Rat Models

LI Li,SUN Yan*,LIAO Huaizhang，LIU Xuyin，XIAO Li
(Zhengda Shaoyang Orthopedics Hospital,Shaoyang,Hunan 422900,China)

Objective To observe the effect of Huoxue Huayu Lishui prescription on IL-6 and histamine level in blood of acute soft tissue injury rats.Methods 60 rats were randomly divided into 6 groups：the normal group，model group，Shangke Dieda tablet groou，low，medium and high dose of Huoxue Huayu Lishui prescription groups.In addition to the normal group，the rats in other 5 groups were made as acute soft tissue injury models by the method of hitting.After continuous medication for 7 days，serum IL-6 and histamine levels in rats were determinated.Results Huoxue Huayu Lishui prescription showed obvious inhibitory effect on the expression of serum IL-6 and histamine in acute soft tissue injury rats，which have significant differences comparing with the model group.Its inhibition exhibited positive correlation with the dose of prescription，whiletheeffectofhighdosegroupwasbetterthanthatinpositivedruggroup.ConclusionHuoxue Huayu Lishui prescription，which play a role in treatment of acute soft tissue injury animal models，shows inhibitory effect on local inflammatory response to injury，

acute soft tissue injury；Huoxue Huayu Lishui prescription；IL-6；histamine；Angelica sinensis；Rhizoma Imperatae；Poria cocos

R285.5

A

doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2016.03.006

2015-11-28

湖南省中醫(yī)藥科研計(jì)劃項(xiàng)目（2014127）。

李黎，男，碩士研究生，研究方向：創(chuàng)傷及小兒骨傷科。

*孫燕，女，主任醫(yī)師，E-mail：sunyan6555@163.com。