洪湖碘泡蟲的再描述及其近緣種的鑒別性研究

劉曉聰 楊承忠 趙元莙

（重慶師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院， 動(dòng)物生物學(xué)重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 重慶 401331）

洪湖碘泡蟲的再描述及其近緣種的鑒別性研究

劉曉聰 楊承忠 趙元莙

（重慶師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院， 動(dòng)物生物學(xué)重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 重慶 401331）

研究基于形態(tài)特征和18S rDNA序列相似度、遺傳距離、變異位點(diǎn)、GC含量和系統(tǒng)發(fā)育比較分析， 對(duì)采自河南龍湖的寄生于異育銀鯽鰓部的一種黏孢子蟲以及相似性極高且易混淆的黏孢子蟲種類（洪湖碘泡Myxobolus honghuensis Liu， et al. 2012、瓶囊碘泡蟲Myxobolus ampullicapsulatus Zhao， et al. 2008、咽碘泡蟲Myxobolus pharynae Lu， et al. 2012和吳李碘泡蟲Myxobolus wulii （Wu & Li， 1986） 進(jìn)行了系統(tǒng)的鑒別研究。研究結(jié)果顯示: 河南龍湖異育銀鯽鰓部所檢獲的黏孢子蟲為洪湖碘泡蟲， 該種群對(duì)所寄生的異育銀鯽未造成疾病癥狀； 咽碘泡蟲與洪湖碘泡蟲各種群在形態(tài)上極相似， 兩者間18S rDNA序列相似度為99%—100%， 遺傳距離為0—0.0013， GC含量均為44.31%， 變異位點(diǎn)為2個(gè)， 表明咽碘泡蟲與洪湖碘泡蟲應(yīng)為同一物種。

洪湖碘泡蟲； 咽碘泡蟲； 形態(tài)學(xué)； 18S rDNA

黏孢子蟲（Myxosporidia）是一類種類繁多、分布廣泛的后生動(dòng)物寄生蟲， 其主要寄主為魚類， 也有少數(shù)寄生于環(huán)節(jié)動(dòng)物、昆蟲、兩棲動(dòng)物、爬行動(dòng)物和哺乳動(dòng)物等［1—6］。迄今， 已鑒定的黏孢子蟲約2200種［3，6］， 其中絕大多數(shù)種類的鑒定是基于其形態(tài)學(xué)特征［7—9］。然而， 形態(tài)學(xué)描述易受主觀因素的影響， 不同學(xué)者對(duì)同一形態(tài)可能做出不同的判斷。因此， Lom和Arthur［10］對(duì)黏孢子蟲的形態(tài)學(xué)研究標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了規(guī)范， Abdel-Ghaffar等［11］和Molnár等［12］提出對(duì)黏孢子蟲形態(tài)學(xué)的描述應(yīng)從宿主、發(fā)育、孢子形態(tài)3個(gè)方面開展， 這一標(biāo)準(zhǔn)普遍被人們接受， 并對(duì)黏孢子蟲分類學(xué)的發(fā)展產(chǎn)生了巨大的促進(jìn)作用。

碘泡蟲屬（Myxobolus）的形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)已得到了大量的補(bǔ)充和完善［13，14］， 但僅僅依據(jù)形態(tài)學(xué)特征依然無(wú)法進(jìn)行所有類群的準(zhǔn)確鑒定， 特別是對(duì)那些形態(tài)、宿主和生境相似性高的類群之間的鑒別更為困難。近年來(lái)， 分子生物學(xué)迅猛發(fā)展， 使得黏孢子蟲的分類學(xué)研究取得了很大的進(jìn)步［15］。如吳李碘泡蟲Myxobolus wulii （Wu & Li， 1986）、關(guān)橋碘泡蟲Myxobolus guanqiaoensis （Wu & Wang， 1997）以及寄生于日本金魚鰓絲的碘泡蟲未定種Myxobolus sp. 過(guò)去一直被認(rèn)為是三個(gè)不同的物種， 但Zhang等［16］綜合形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)及分子數(shù)據(jù)的研究結(jié)果表明，這三者不僅形態(tài)十分相似， 且三者的18S rDNA 序列高度一致， 指出三者實(shí)為同一物種， 即吳李碘泡蟲。近年來(lái)， 學(xué)者們通過(guò)形態(tài)結(jié)合分子數(shù)據(jù)對(duì)黏孢子蟲的分類鑒定做了大量工作， 厘清了一些過(guò)去存疑的種類和類群［17，18］。

瓶囊碘泡蟲Myxobolus ampullicapsulatus Zhao，et al. 2008、洪湖碘泡蟲Myxobolus honghuensis Liu，et al. 2012、吳李碘泡蟲Myxobolus wulii （Wu & Li，1986）和咽碘泡蟲Myxobolus pharynae Lu， et al. 2012是形態(tài)學(xué)特征相似度很高， 也是極易混淆的幾個(gè)近緣物種， 尤其是瓶囊碘泡蟲和洪湖碘泡蟲。如，寄生異育銀鯽咽的洪湖碘泡蟲曾被誤鑒定為瓶囊碘泡蟲［19］； 已有研究發(fā)現(xiàn)瓶囊碘泡蟲對(duì)鯽是不致病的， 而洪湖碘泡蟲寄生在異育銀鯽咽時(shí)， 對(duì)宿主魚是致病的， 二者的形態(tài)差異性小， 僅在極囊瓶頸大小和極絲圈數(shù)上略有差異［20，21］。另外， 洪湖碘泡蟲與吳李碘泡蟲的形態(tài)也很相似， 但分子證據(jù)明確支持兩者為獨(dú)立有效種［21］。本研究從異育銀鯽鰓重新檢獲洪湖碘泡蟲， 在其研究過(guò)程中， 對(duì)這幾個(gè)易混淆的近緣種（洪湖碘泡蟲、瓶囊碘泡蟲、咽碘泡蟲和吳李碘泡蟲）進(jìn)行了系統(tǒng)比較研究， 并對(duì)這些易混淆的近緣種進(jìn)行了有效的區(qū)分。

1 材料與方法

1.1 樣本采集與蟲種鑒定

寄主魚異育銀鯽Carassius auratus gibelio于2014年4月采自河南龍湖， 檢查19尾魚（長(zhǎng)度為6.7—12.5 cm）， 其中2尾魚的鰓部被黏孢子蟲感染（感染率為10.5%）， 但未見形成孢囊。黏孢子蟲分離、觀察、測(cè)量、鑒定方法以及形態(tài)學(xué)特征描述等參照Lom等［10］、趙元莙等［22］。

1.2 DNA的提取、擴(kuò)增與測(cè)序

DNA的提取: 將寄主魚的鰓用鑷子小心的摘取后在載玻片上涂片觀察， 將有孢子的玻片用滅菌蒸餾水將孢子分離到1.5 mL離心管中， 離心富集， 懸浮2—3次以去除雜質(zhì)［23，24］， 再于10×40倍倒置顯微鏡下用微吸管逐個(gè)吸取成熟孢子。用DNEASY TISSUE KIT （QIAGEN）試劑盒按照商家提供的使用說(shuō)明進(jìn)行樣本DNA的提取， 將提取的總DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)， DNA樣本保存在-20℃?zhèn)溆?。DNA的擴(kuò)增與測(cè)序: 本研究對(duì)樣本DNA進(jìn)行18S rDNA擴(kuò)增， 擴(kuò)增引物為: ERIB1 （5′-ACCTGGTTGATCCT GCCAG-3′）和ERIB10 （5′-CTTCCGCAGGTTCA CCTACGG-3′）［25］。25 μL的PCR反應(yīng)體系， 包括2.5 μL 10× Ex Taq Bwffer （Mg2+free）， 2.5 μL MgCl2（25 mmol/L）， 2.5 μL dNTP （25 mmol/L）， 引物各0.5 μL （10 μmol/L）， 1.2 ng的模板DNA， 0.2 μL Ex Taq酶（5 U/μL） （TaKaRa）， 用滅菌雙蒸水補(bǔ)足至25 μL。反應(yīng)程序?yàn)? 95℃預(yù)變性5 min， 95℃變性45s， 56℃退火50S， 72℃延伸2 min， 循環(huán)35次， 最后72℃延伸10 min， 反應(yīng)完成后保溫12℃。取3 μL擴(kuò)增產(chǎn)物于1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)， 然后將PCR產(chǎn)物用膠回收試劑盒Gel Extraction Kit （OMEGA）進(jìn)行純化回收。最后將純化產(chǎn)物送公司測(cè)序 （使用測(cè)序儀為ABI， 3730XL）。

1.3 序列選取和系統(tǒng)發(fā)育分析

將本研究獲得洪湖碘泡蟲河南種群的18S rDNA序列， 在GenBank中經(jīng)BLAST進(jìn)行同源性比對(duì)。根據(jù)比對(duì)結(jié)果并結(jié)合Zhao等［22］所選的部分黏孢子蟲序列， 即從GenBank中選取序列相似度最高的前10條序列和形態(tài)特征相似性大的碘泡蟲序列，涉及瓶囊碘泡蟲、洪湖碘泡蟲、吳李碘泡蟲、咽碘泡蟲及本研究所獲得的洪湖碘泡蟲， 多涅茨尾孢蟲Henneguya doneci作為外群， 共16條黏孢子蟲的18S rDNA序列 （序列信息見圖 2）， 序列多重比對(duì)通過(guò)CLUSTAL W程序按照缺省參數(shù)進(jìn)行， ML法構(gòu)建的18S rDNA系統(tǒng)樹采用PAUP（4.0）軟件按照缺省參數(shù)完成， ML樹運(yùn)算100代。系統(tǒng)樹繪制由Treeview［26］和Photoshop軟件完成［27］。

對(duì)所選序列兩兩之間的遺傳距離利用MEGA（4.0）軟件進(jìn)行計(jì)算。所選黏孢子蟲之間的最大相似度用GenBank的BLAST工具計(jì)算獲得。變異位點(diǎn)分析借助Bioedit和MEGA （4.0）完成。

2 結(jié)果

2.1 洪湖碘泡蟲Myxobolus honghuensis Liu， et al. 2012河南種群的形態(tài)學(xué)描述

采自河南龍湖寄生在異育銀鯽鰓的洪湖碘泡蟲， 其成熟孢子殼面觀呈梨形， 縫面觀呈梭形， 前端稍尖后端鈍圓（圖 1、表 1）， 孢子長(zhǎng)（17.6±0.9） μm（16.2—19.2 μm）， 寬（10.3±1.2） μm （8.6—11.9 μm）。兩個(gè)一大一小的梨形極囊并行排列在孢子前端， 約占胞腔1/2， 兩極囊前端緊貼， 極囊縱軸之間的夾角約為30°， 大極囊長(zhǎng)（8.6±0.5） μm （8.1—9.7 μm）， 寬（3.8±0.5） μm （3.2—4.6 μm）， 小極囊長(zhǎng)（7.4±0.5） μm（7.0—8.1 μm）， 寬（3.2±0.2） μm （3.2—3.6 μm）， 極絲7—9圈（圖 1、表 1）。

2.2 基于18S rDNA序列對(duì)洪湖碘泡蟲及其近緣種的分析

洪湖碘泡蟲及其近緣種18S rDNA序列相似度

通過(guò)測(cè)序獲得洪湖碘泡蟲河南種群（M. honghuensis HN）的18S rDNA長(zhǎng)度為1892個(gè)核苷酸 （nt），GenBank登錄號(hào)為KR049222。相似度計(jì)算結(jié)果為:瓶囊碘泡蟲 7個(gè)種群間18S rDNA序列相似度為99%； 吳李碘泡蟲3種群間相似度為99%； 洪湖碘泡蟲 5種群間的相似度為99%—100%； 洪湖碘泡蟲河南種群與咽碘泡蟲的相似度為100%， 洪湖碘泡蟲河南種群、咽碘泡蟲分別與瓶囊碘泡蟲不同種群之間的相似度為98%—99%和98%—99%； 洪湖碘泡蟲河南種群、咽碘泡蟲與兩個(gè)洪湖碘泡蟲湖北種群（M. honghuensis HB， JF340216， KJ725074）的相似度均為100% （表 2）。

洪湖碘泡蟲及其近緣種基于18S rDNA序列的遺傳距離的分析 瓶囊碘泡蟲7種群間遺傳距離為0—0.0033， 吳李碘泡蟲3種群間遺傳距離為0.0013—0.0020， 洪湖碘泡蟲3種群間遺傳距離為0—0.0013， 這3種碘泡蟲種間遺傳距離為0.0127—0.0828。洪湖碘泡蟲河南種群與瓶囊碘泡蟲各種群的遺傳距離為0.0127—0.0148， 與吳李碘泡蟲各種群的遺傳距離為0.0806—0.0813， 與洪湖碘泡蟲其他種群的遺傳距離為0—0.0013； 咽碘泡蟲與瓶囊碘泡蟲各種群的遺傳距離0.0127—0.0148，與吳李碘泡蟲各種群的遺傳距離為0.0806—0.0813，與洪湖碘泡蟲各種群的遺傳距離為0—0.0013； 瓶囊碘泡蟲各種群與吳李碘泡蟲各種群的遺傳距離為0.0792—0.0807， 與洪湖碘泡蟲各種群的遺傳距離為0.0127—0.0161。另外洪湖碘泡蟲湖北種群（JF340216）、洪湖碘泡蟲湖北種群（KJ725074）、洪湖碘泡蟲河南種群（KR049222）、咽碘泡蟲（JQ726700）四個(gè)黏孢子蟲序列彼此間的遺傳距離為零， 這四者與瓶囊碘泡蟲江蘇種群M. ampullicapsulatus JS （HM188545）（實(shí)為洪湖碘泡蟲江蘇種群［18］）的遺傳距離均為0.0013。

圖 1 瓶囊碘泡蟲、洪湖碘泡蟲和咽碘泡蟲的孢子形態(tài)比較Fig. 1 The morphological comparison of spore among M. ampullicapsulatus， M. Honghuensis and M. pharynae

洪湖碘泡蟲及其近緣種基于18S rDNA的系統(tǒng)發(fā)育和GC含量分析 基于18S rDNA序列構(gòu)建的黏孢子蟲ML樹的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)見圖 2， 碘泡蟲屬的種類形成了三大支系， 即吳李碘泡蟲枝、洪湖碘泡蟲枝和瓶囊碘泡蟲枝。從洪湖碘泡蟲枝系中可見， 洪湖碘泡蟲河南種群和洪湖碘泡蟲湖北種群（KJ725074）首先聚枝， 然后與江蘇鹽城的咽碘泡蟲（JQ726700）聚枝， 再與洪湖碘泡蟲湖北種群（JF340216）聚枝， 最后與江蘇鹽城的洪湖碘泡蟲江蘇種群（HM188545）形成洪湖碘泡蟲的單系枝。洪湖碘泡蟲枝又與瓶囊碘泡蟲枝構(gòu)成為姐妹枝， 二者有高靴攀值（100）支持的同源性。另外， 吳李碘泡蟲位于系統(tǒng)進(jìn)化樹的基部位置。

16條黏孢子蟲的18S rDNA序列同源性比對(duì)后截取137—1669 bp區(qū)段內(nèi)的GC含量顯示: 吳李碘泡蟲各種群GC含量為45.08%—45.14%， 洪湖碘泡蟲各種群與咽碘泡蟲的GC含量均為44.31%， 瓶囊碘泡蟲的GC含量在44.12%—44.37%。

洪湖碘泡蟲及其近緣種18S rDNA序列變異位點(diǎn)分析 選取瓶囊碘泡蟲7種群和洪湖碘泡蟲4種群及咽碘泡蟲共12條18S rDNA序列， 進(jìn)行變異位點(diǎn)的分析。結(jié)果顯示: 瓶囊碘泡蟲和洪湖碘泡蟲這兩個(gè)物種間共存在23處不同的堿基位點(diǎn)。瓶囊碘泡蟲各種群間有9個(gè)變異位點(diǎn)（圖 3）。洪湖碘泡蟲各種群序列與咽碘泡蟲序列相似度極高， 除洪湖碘泡蟲江蘇種群（HM188545）在571和851處各有1個(gè)變異位點(diǎn)外， 其余4條序列完全相同（圖 3）。

3 討論

成熟孢子形態(tài)學(xué)比較研究結(jié)果表明， 本研究從河南龍湖檢獲的洪湖碘泡蟲M. honghuensis HN（KR049222）的孢子形態(tài)與瓶囊碘泡蟲（DQ339482）、洪湖碘泡蟲（JF340216）、咽碘泡蟲（JQ726700）都很相似［20，21，28］， 除瓶囊碘泡蟲（DQ339482）形態(tài)差異較大外， 其他三者差異極小。瓶囊碘泡蟲（DQ339482）孢子更為細(xì)長(zhǎng)， 兩個(gè)極囊內(nèi)含9—10圈極絲， 呈并行排列且大小相等； 而其余三者（洪湖碘泡蟲河南種群KR049222、洪湖碘泡蟲JF340216、咽碘泡蟲JQ726700）的孢子略寬短， 兩個(gè)極囊一大一小， 且極囊前端靠近而末端分開， 極囊內(nèi)極絲圈數(shù)分別為7—9、7—8和7—8。洪湖碘泡蟲河南種群（KR049222）、洪湖碘泡蟲（JF340216）、咽碘泡蟲（JQ726700）的孢子寬度分別為10.3±1.2 （8.5—12.0） μm、10.4±0.4 （9.0—11.3） μm和10.26±0.43（9.12—10.88） μm， 而瓶囊碘泡蟲（DQ339482） 的孢子寬度則為9.3±0.4 （8.5—10.0） μm， 孢子寬度明顯小于前三者（圖 1、表 1）。同時(shí)， 洪湖碘泡蟲河南種群（KR049222）、咽碘泡蟲（JQ726700）、洪湖碘泡蟲（JF340216） 的寄主均為異育銀鯽， 而瓶囊碘泡蟲（DQ339482）的寄主為鯽?？傊?， 孢子及極囊形態(tài)、極絲纏繞圈數(shù)、寄主的比較分析均表明， 洪湖碘泡蟲河南種群（KR049222）、洪湖碘泡蟲（JF340216）和咽碘泡蟲 （JQ726700）具有高度的相似性， 故河南龍湖檢獲的種群應(yīng)為洪湖碘泡蟲； 咽碘泡蟲和洪湖碘泡蟲應(yīng)為同一物種。

表 1 洪湖碘泡蟲河南種群與相關(guān)碘泡蟲物種的特征比較Tab. 1 Comparison of Henan population for M. honghuensis with the related Myxobolus species （μm）

就致病性而言， 本研究從河南龍湖異育銀鯽鰓所獲得的洪湖碘泡蟲未見對(duì)其宿主造成疾病癥狀。先前的研究表明: 洪湖碘泡蟲寄生異育銀鯽咽喉時(shí)， 表現(xiàn)嚴(yán)重的疾?。?9，21，28］。資料還顯示: 洪湖碘泡蟲感染異育銀鯽早期， 受感染魚體無(wú)明顯癥狀，感染后期， 患病魚喉部被孢囊覆蓋， 病魚出現(xiàn)明顯厭食、游動(dòng)遲緩、組織壞死及炎癥病癥［29］； 而在本研究中， 感染的異育銀鯽未表現(xiàn)明顯的疾病癥狀，可能存在兩個(gè)原因: 原因之一可能洪湖碘泡蟲的致病性具有咽部組織趨向性［19，21，28］。從先前的研究來(lái)看， 洪湖碘泡蟲致病主要在于感染宿主咽喉所致［19，21，28］， 而本研究所得到的孢子寄生于宿主鰓部，因此未能引起病癥； 第二個(gè)原因可能是由于宿主處于感染初期， 雖然有孢子出現(xiàn)或尚未形成孢囊， 故未顯著影響異育銀鯽的游泳、呼吸、攝食等生理活動(dòng)， 從而未顯示明顯的疾病癥狀。

表 2 15種黏孢子蟲基于18SrDNA序列的相似度和遺傳距離Tab. 2 Fifteen Myxosporea’s gene similarity and the genetic distance based on 18S rDNA sequence

圖 2 利用ML（最大似然法）基于18S rDNA序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 2 Phylogenetic tree generated by ML （maximum likelihood） based on the 18S rRNA gene sequences

圖 3 瓶囊碘泡蟲和洪湖碘泡蟲各種群的核糖體小亞單位基因序列比對(duì)后截取的變異區(qū)段； （-）表示空位； （.）表示相同堿基Fig. 3 The variable sites of small subunit ribosomal RNA gene sequences for different populations of M. ampullicapsulatus and M. honghuensis； （-） Blank； （.） The same basicgroup

遺傳距離比較和分析結(jié)果表明， 洪湖碘泡蟲、瓶囊碘泡蟲和吳李碘泡蟲三種碘泡蟲的種間遺傳距離為0.0127—0.0828； 而其種內(nèi)遺傳距離分別為0—0.0013、0—0.0033和0.0013—0.0020， 該遺傳距離遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于種間水平［30，31］； 3種碘泡蟲的種間和種內(nèi)的遺傳距離存在10倍的差別（表 2）。洪湖碘泡蟲湖北種群（JF340216）、洪湖碘泡蟲湖北種群（KJ725074）、洪湖碘泡蟲河南種群（KR049222）、咽碘泡蟲（JQ7267000） 四者彼此間的遺傳距離為零， 四者與洪湖碘泡蟲江蘇種群（HM188545）之間的遺傳距離均為0.0013， 由此可見咽碘泡蟲（JQ726700） 與洪湖碘泡蟲各種群應(yīng)為同一物種。

序列相似度分析結(jié)果表明， 種間序列相似度為92%—99%， 種內(nèi)序列相似度為99%—100%。洪湖碘泡蟲湖北種群（JF340216）、洪湖碘泡蟲湖北種群（KJ725074）、洪湖碘泡蟲河南種群（KR049222）和咽碘泡蟲（JQ726700）之間的相似度為100%， 它們與洪湖碘泡蟲江蘇種群（HM188545） 的相似度為99%，此結(jié)果吻合Zhao等［18］的觀點(diǎn)， 這5者應(yīng)為同一物種。這一結(jié)論同樣得到了系統(tǒng)發(fā)育和變異位點(diǎn)分析結(jié)果的支持: 系統(tǒng)發(fā)育分析表明咽碘泡蟲與所有洪湖碘泡蟲聚在一起， 并且位于洪湖碘泡蟲支系的內(nèi)部（圖 2）， 這表明咽碘泡蟲（JQ726700）與洪湖碘泡

［1］Kent M L， Andree K B， Bartholomew J L， et al. Recent advances in our knowledge of the Myxozoa ［J］. Journal of Eukaryotic Microbiology， 2001， 48（4）: 395—413

［2］Canning E U， Okamura B. Biodiversity and evolution of the Myxozoa ［J］. Advances in Parasitology， 2004， 56: 43—131蟲應(yīng)為同種； 從變異位點(diǎn)的個(gè)數(shù)來(lái)看， 除洪湖碘泡蟲江蘇種群（HM188545）外， 咽碘泡蟲與其他所有洪湖碘泡蟲序列完全相同， Zhao等［18］認(rèn)為當(dāng)兩個(gè)物種的18S rDNA序列變異位點(diǎn)小于10個(gè)時(shí)應(yīng)將其歸于同一物種。分析結(jié)果顯示: 盡管咽碘泡蟲（JQ726700）與洪湖碘泡蟲江蘇種群（HM188545）有2個(gè)堿基的差異， 相比與瓶囊碘泡蟲各種群之間的9個(gè)變異位點(diǎn)而言， 2個(gè)堿基的差別應(yīng)屬于種內(nèi)水平的變異［18，31］。同時(shí)， 咽碘泡蟲（JQ726700）GC含量與所有的洪湖碘泡蟲一致， 這進(jìn)一步說(shuō)明咽碘泡蟲（JQ726700）與洪湖碘泡蟲的同源性。

綜上， 結(jié)合形態(tài)及分子數(shù)據(jù)研究結(jié)果顯示， 本研究從河南龍湖異育銀鯽鰓檢獲的黏孢子蟲為洪湖碘泡蟲（M. honghuensis）； 與寄生于異育銀鯽咽的洪湖碘泡蟲不同的是， 寄生于異育銀鯽鰓的洪湖碘泡蟲未表現(xiàn)明顯的疾病癥狀； 洪湖碘泡蟲（M. honghuensis）和咽碘泡蟲（M. pharynae JS （JQ726700）應(yīng)為同一物種。

［3］Lom J， Dykova I. Myxozoan genera: definition and notes on taxonnmy， life-cycle terminology and pathogenetic species ［J］. Folia Parasitologica， 2006， 53（1）: 1—36

［4］Zhao Y J， Song W B. Systematic revision on the order Bivalvida （Myxosporea） ［A］. In: Song W B， Zhao Y J， Xu K D， et al. Pathogenic protozoa in mariculture ［C］. Beijing: Science Press. 2003， 265—290 ［趙元莙， 宋微波.雙殼目黏孢子蟲屬級(jí)階元修訂.見: 宋微波， 趙元莙， 徐奎棟， 等. 海水養(yǎng)殖中的危害性原生動(dòng)物. 北京: 科學(xué)出版社. 2003， 265—290］

［5］Canning E U， Curry A. Further observations on the ultrastructure of Cystosporogenes operophterae （Canning，1960） （phylum Microsporidia） parasitic in Operophtera brumata L. （Lepidoptera， Geometridae） ［J］. Journal of Invertebrate Pathology， 2004， 87（1）: 1—7

［6］Suo D， Zhao Y J. Morphological rediscription of Thelohanellus nikolskii Achmerov， 1955 （Myxozoa， Bivalvulida） and phylogenic analysis of Thelohanellus nikolskii inferred from 18S rDNA ［J］. Acta Zootaxonomica Sinica，2010， 35（1）: 90—95 ［索棟， 趙元莙. 尼氏單極蟲（黏體門， 雙殼目）的重描述及基于18S rDNA的系統(tǒng)地位分析. 動(dòng)物分類學(xué)報(bào)， 2010， 35（1）: 90—95］

［7］Chen Q L， Ma C L.China Fauna: Myxozoa， Bivalvulida（Freshwater） ［M］. Beijing: Science Press. 1998， 332—528［陳啟鎏， 馬成倫. 中國(guó)動(dòng)物志: 黏體動(dòng)物門， 黏孢子綱（淡水）. 北京: 科學(xué)出版社. 1998， 332—528］

［8］Kaur H， Singh R. Two new species of Myxobolus （Myxozoa: Myxosporea: Bivalvulida） infecting an Indian major carp in Ropar and Kanjali wetlands （Punjab） ［J］. Journal of Parasitic Diseases， 2011a， 35（1）: 23—32

［9］Kaur H， Singh R. Two new species of Myxobolus （Myxozoa: Myxosporea: Bivalvulida） from freshwater fishes of Punjab wetlands （India） ［J］. Journal of Parasitic Diseases， 2011b， 35（1）: 33—41

［10］Lom J， Aathur J R. A guideline for the preparation of species descriptions in Myxosporea ［J］. Journal of Fish Diseases， 1989， 12（2）: 151—156

［11］Abdel-Ghaffar F， Abdel-Baki A A， Bayoumy E M， et al. Light and electron microscopic study on Henneguya suprabranchiae Landsberg， 1987 （Myxozoa: Myxosporea） infecting Oreochromis niloticus， a new host record ［J］. Parasitology Research， 2008， 103（3）: 609—617

［12］Molnár K， Székely C， Sascha L， et al. Some remarks on the occurrence， host-specificity and validity of Myxobolus rotundus Nemeczek， 1911 （Myxozoa: Myxosporea）［J］. Systematic Parasitology， 2009， 72（1）: 71—79

［13］Moln R K. Redescription and histopathology of Myxobolus cyprinicola Reuss， 1906， an intestinal parasite of the common carp （Cyprinus carpio L.） ［J］. Acta Protozoologica， 2002， 41（3）: 297—283

［14］Camus A C， Griffin M J. Molecular characterization and histopathology of Myxobolus koi infecting the gills of a koi， Cyprinus carpio， with an amended morphological description of the agent ［J］. Journal of Parasitology， 2010，96（1）: 116—124

［15］Lu Y S， Nie P. Phylogeetic analyses of the myxosporeans parasitic in freshwater fish of China based on 18S ribosomal DNA ［J］. Acta Hydrobiologica Sinica， 2004，28（6）: 587—591 ［魯義善， 聶品. 淡水魚類黏孢子蟲的18S rDNA分子系統(tǒng)學(xué)研究. 水生生物學(xué)報(bào)， 2004， 28（6）: 587—591］

［16］Zhang J Y， Yokoyama H， Wang J G， et al. Utilization of tissue habitats by Myxobolus wulii Landsberg & Lom，1991 in different carp hosts and disease resistance in allogynogenetic gibel carp: redescription of M. wulii from China and Japan ［J］. Journal of Fish Diseases， 2010，33（1）: 57—68

［17］Székely C， Hallett S L， Atkinson S D， et al. Complete life cycle of Myxobolus rotundus （Myxosporea: Myxobolidae）， a gill myxozoan of common bream Abramis brama［J］. Diseases of Aquatic Organisms， 2009， 85（2）: 147—155

［18］Zhao Y J， Li N N， Tang F H， et al. Remarks on the validity of Myxobolus ampullicapsulatus and Myxobolus honghuensis （Myxozoa: Myxosporea） based on SSU rDNA sequences ［J］. Parasitology Research， 2013，112（11）: 3817—3823

［19］Xi B W， Xie J， Zhou Q L， et al. Mass mortality of pondreared Carassius gibelio caused by Myxobolus ampullicapsulatus in China ［J］. Diseases of Aquatic Organisms，2011， 93（3）: 257—260

［20］Zhao Y J， Sun C Y， Kent M L， et al. Description of a new species of Myxobolus （Myozoa: Myxobolidae） based on morphological and molecular data ［J］. The Journal of Parasitology， 2008， 94（3）: 737—742

［21］Liu Y， Whipps C M， Gu Z M， et al. Myxobolus honghuensis n. sp. （Myxosporea: Bivalvulida） parasitizing the pharynx of allogynogenetic gibel carp Carassius auratus gibelio （Bloch） from Honghu Lake， China ［J］. Parasitology Research， 2012， 110（4）: 1331—1336

［22］Zhao Y J， Ma C L， Song W B. Illustrated guide to the identification of pathogenetic Protozoa in mariculture—II. Diagnostic methods for the Myxosporea ［J］. Ocean University Qingdao， 2001， 31（6）: 681—688 ［趙元莙， 馬成倫， 宋微波. 海水養(yǎng)殖中原生動(dòng)物病原蟲的鑒定: II.黏孢子蟲原生動(dòng)物的研究及鑒定方法. 青島海洋大學(xué)學(xué)報(bào)， 2001， 31（6）: 681—688］

［23］Dong J L， Zhao Y J， Tang F H， et al. Redescription of Unicauda pelteobagrus Ma， 1998 （Myxozoa，Bivalvulida）， with phylogenic analysis inferred from 28S rDNA and ITS-5.8 sequence data ［J］. Acta Zootaxonomica Sinica， 2011， 36（1）: 84—92 ［董江麗， 趙元莙， 唐發(fā)輝， 等. 黃顙單尾蟲（黏體門.雙殼目）的重描述及基于28S rDNA和ITS-5.8S序列的系統(tǒng)地位分析. 動(dòng)物分類學(xué)報(bào)， 2011， 36（1）: 84—92］

［24］Sun C Y， Zhao Y J， Chen Z G. Genetic diversity of four populations of Henneguya doneci （Schulman） revealed by RAPD ［J］. Chinese High Technology Letters， 2006，16（10）: 1097—1100 ［孫春燕， 趙元莙， 陳子桂. 多涅茨尾孢蟲Henneguya doneci 4個(gè)種群遺傳多樣性的RAPD分析. 高技術(shù)通訊， 2006， 16（10）: 1097—1100］

［25］Barta J R， Martin D S， Libertor P A， et al. Phylogenetic relationships among eight Eimeria species infecting domestic fowl inferred using complete small subunit ribosomal DNA sequences ［J］. The Journal of Parasitology， 1997， 83（2）: 262—271

［26］Page R D M. TREEVIEW: an application to display phylogenetic trees on personal computers ［J］. Computer Applications in the Biosciences， 1996， 12: 357—358

［27］Li N N， Zhao Y J， Tang F H， et al. Phylogenetic study on genus Unicauda （Myxozoa， Bivalvulida） based on 18S rDNA sequences ［J］. Neijiang Normal University， 2012，27（12）: 38—42 ［李楠楠， 趙元莙， 唐發(fā)輝， 等， 基于18S rDNA序列對(duì)單尾蟲屬（黏體門， 雙殼目）的系統(tǒng)學(xué)研究.內(nèi)江師范學(xué)院學(xué)報(bào)， 2012， 27（12）: 38—42］

［28］Lu H D， Cai S J， Zhu Y T， et al. Morphological and molecular analysis of Myxobolus pharynae n. sp.（Myxosporea） causing high mortality of Carassius auratus gibelio in pond aquaculture， China ［J］. Marine Fisheries， 2012， 34（4）: 406—416 ［陸宏達(dá)， 蔡水局， 竹攸汀， 等， 引起池養(yǎng)異育銀鯽高死亡率的黏孢子蟲新種咽碘泡蟲形態(tài)和分子分析. 海洋漁業(yè)， 2012， 34（4）: 406—416］

［29］Gu W. The Survey and classification of myxosporean parasitic on Carassius auratus auratus from Jiangsu Province ［D］. Thesis for Master of Science. Nanjing Agricultural University， Nanjing. 2012 ［顧偉， 江蘇地區(qū)鯽魚寄生黏孢子蟲種類調(diào)查與分類研究. 碩士學(xué)位論文， 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)， 南京. 2012］

［30］Ran J， Yang C Z， Zhao Y J. Taxonomic research of the Myxosporidia based on genetic distance ［J］. Journal of Chongqing Normal University （Natural Science）， 2014，31（3）: 31—34 ［冉佼， 楊承忠， 趙元莙. 基于遺傳距離的黏孢子蟲分類研究. 重慶師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2013， 31（3）: 31—34］

［31］Zhang J， Mo X， Li N N， et al. Supplementary description of Hennegyya zikawiensis Sikamal， 1938 and its molecular phylogeny ［J］. Journal of Neijiang Normal University，2015， 30（4）: 5—10 ［張婧， 莫西， 李楠楠， 等， 徐家匯尾孢蟲Henneguya zikawiensis Sikamal， 1938補(bǔ)充描述及其分子系統(tǒng)學(xué)研究. 內(nèi)江師范學(xué)院學(xué)報(bào)， 2015， 30（4）: 5—10］

REDESCRIPTION OF MYXOBOLUS HONGHUENSIS LIU ET AL. 2012 AND IDENTIFICATION ON ITS GENETIC RELATED SPECIES

LIU Xiao-Cong， YANG Cheng-Zhong and ZHAO Yuan-Jun
（Chongqing Key Laboratory of Animal Biology， College of Life Sciences， Chongqing Normal University， Chongqing 401331， China）

The present study investigated the relationship of Myxobolus species from gills of Carassius auratus gibelio，Long Lake， Henan with other similar species such as Myxobolus honghuensis， Myxobolus ampullicapsulatus， Myxobolus pharynae， and Myxobolus wulii based on the comparative analysis of morphological characters， sequence similarity，genetic distance， mutation sites， GC content of 18S rDNA， and the phylogenic trees. The results indicated that the gill parasitic Myxobolus species from Carassius auratus gibelio， Long Lake， Henan was Myxobolus honghuensis， and no obvious host symptom was observed by this species. The further investigation showed that Myxobolus pharynae and Myxobolus honghuensis were similar in morphology and in sequence that reached 99%—100%， and that the genetic distance was only 0—0.0013， and that they had the same 44.31%， GC content with only two mutation sites. These results indicated that these two species should the same species.

Myxobolus honghuensis； Myxobolus pharynae； Morphology； 18S rDNA

10.7541/2016.47

S941.51

A

1000-3207（2016）02-0350-08

2015-04-20；

2015-09-16

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No. 31172068， No. 31471980）； 重慶市科委基金項(xiàng)目（No. cstc 2010ca1010； No. cstc 2014jcyja80014）； 重慶市教委科技項(xiàng)目（KJ1400502）資助 ［Supported by the National Natural Science Foundation of China （No. 31172068， No. 31471980）； the Project of Chongqing Science & Technology Commission （No. CSTC， 2010CA1010； No. cstc2014jcyjA80014）； the Science Research Foundation of the Education Committee of Chongqing （No. KJ1400502）］

劉曉聰（1988—）， 女， 河南人； 碩士研究生； 研究方向?yàn)轸~類寄生蟲學(xué)。E-mail: lxcong2015@163.com

趙元莙， E-mail: zhaoyuanjuncqnu@126.com