訶子及其炮制品對小鼠小腸5-羥色胺分泌的影響

趙思琦，何 敏，*，梁曉霞，李 雪，廖 禮

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院，四川 成都 611130； 2.動物疫病與人類健康四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 611130)

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訶子及其炮制品對小鼠小腸5-羥色胺分泌的影響

趙思琦1，2，何 敏1，2，*，梁曉霞1，2，李 雪1，2，廖 禮1，2

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院，四川 成都 611130； 2.動物疫病與人類健康四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 611130)

為探究訶子的2種藏醫(yī)特殊炮制品(茜草制訶子和白狼毒制訶子)對小鼠小腸5-羥色胺(5-hydrox-ytryptamine，5-HT)免疫反應(yīng)(immunoreactive，IR)細(xì)胞分泌活動的影響，采用免疫組織化學(xué)方法對小腸內(nèi)5-HT的細(xì)胞定位及蛋白表達(dá)進(jìn)行研究。結(jié)果表明，5-HT在小腸各段均有分布，其蛋白表達(dá)量從十二指腸到回腸逐漸降低。給藥28 d后，茜草制訶子(1.0、4.0 g·kg-1)、白狼毒制訶子(1.0、4.0 g·kg-1)和原藥訶子(4.0 g·kg-1)處理組小鼠小腸各段5-HT蛋白表達(dá)量均顯著減少。藥效表現(xiàn)為茜草制訶子>白狼毒制訶子>原藥訶子，且4.0 g·kg-1劑量的效果優(yōu)于1.0 g·kg-1。5-HT-IR細(xì)胞形態(tài)多樣，主要呈錐體形、橢圓形、梭形等。對照組5-HT-IR細(xì)胞主要分布在腸腺上皮和腸固有膜，而試驗(yàn)組在腸黏膜上皮細(xì)胞之間和腸腺上皮分布多一些。由此可知，訶子及其白狼毒制、茜草制炮制品能不同程度地抑制小腸5-HT的分泌，其中以4.0 g·kg-1的茜草制訶子效果最好。

訶子；小腸；5-羥色胺；免疫組織化學(xué)

藏藥材訶子(TerminaliachebulaRetz，TC)為使君子科植物或絨毛訶子的干燥成熟果實(shí)，具有澀腸止瀉、收斂養(yǎng)血、調(diào)和諸藥等功效[1]。訶子以抑菌、抑制自由基、抗腫瘤、解毒、解痙等多樣化的藥效，在藏醫(yī)、蒙醫(yī)中頗受青睞，被稱作“藏藥之王”[2]。近年來，許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)訶子提取物對胃潰瘍和腹瀉的防治具有較好功效，從而推測訶子對消化道具有一定的調(diào)節(jié)作用，但總體上，人們就訶子對消化道生理功能影響的了解還不夠深入[1，3]。訶子直接入藥利用率低，不能完全發(fā)揮其功效，采用藏藥用藥中的炮制手段能有效增強(qiáng)其藥效。莊玉堅(jiān)[4]研究表明炮制后的訶子在某些疾病的防治上比生訶子療效更好。本研究所選用的訶子的兩種藏醫(yī)特殊炮制品(茜草制訶子和白狼毒制訶子)從炮制方法上分別屬于灰制和煮制。茜草制訶子(RubiacordifoliaL. perTerminaliachebula，RTC)屬于常配入平息方劑的訶子炮制品，藥性較生藥訶子更為溫和，多用于治療緩癥疾病；白狼毒制訶子(EuphorbiafischerianaSteudperTerminaliachebula，ETC)屬于常配伍清利方劑的訶子炮制品，藥性較生藥訶子更為劇烈，多用于治療重癥疾病[5]。

消化道黏膜中散布著多種內(nèi)分泌細(xì)胞，其分泌的多種胃腸激素具有調(diào)節(jié)消化吸收、保護(hù)胃腸黏膜和控制動物攝食行為等多項(xiàng)生理功能[6-7]。5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)免疫反應(yīng)(immunoreactive，IR)細(xì)胞是胃腸道中分布較廣、數(shù)量較多的內(nèi)分泌細(xì)胞之一，其分泌的5-HT對消化道功能起重要調(diào)節(jié)作用。小腸作為營養(yǎng)物質(zhì)消化、吸收的主要場所，其多項(xiàng)生理功能均受5-HT的調(diào)節(jié)[8]。已有學(xué)者對5-HT在小鼠消化道中的分布特點(diǎn)進(jìn)行了初步研究，發(fā)現(xiàn)其在小腸段有較多分布，并肯定了其內(nèi)分泌功能[9]。本試驗(yàn)以訶子為研究對象，探究訶子的不同炮制方法對5-HT內(nèi)分泌細(xì)胞形態(tài)、分布及分泌數(shù)量的影響。對訶子的藏醫(yī)特殊炮制品(茜草制訶子和白狼毒制訶子)進(jìn)行較為深入的研究，探明訶子及其不同炮制品對小鼠消化功能的調(diào)節(jié)作用，旨在拓寬訶子的臨床應(yīng)用范圍，優(yōu)化訶子的特殊炮制工藝，從而推進(jìn)民藥的開發(fā)和應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試動物

21日齡昆明種SPF級小鼠168只，雌雄各半，購自成都達(dá)碩科技有限公司，合格證號：SCXK(川)2008-24。

1.1.2 藥物

訶子購自四川成都荷花池中藥材市場(產(chǎn)地云南省臨滄市)；茜草購自四川成都荷花池中藥材市場(產(chǎn)地四川省阿壩藏羌族自治州)；白狼毒購自四川成都茗居茶園(產(chǎn)地山東省煙臺市)。上述藥材均由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)生藥學(xué)教師范巧佳副教授鑒定為正品藥材，分別為君子科植物訶子、茜草科植物茜草和大戟科植物白狼毒。

1.1.3 主要試劑和儀器

兔抗5-HT多克隆抗體、SABC免疫組織化學(xué)試劑盒、DAB顯色劑均購自武漢博士德生物工程有限公司。Leica RM 2135型石蠟切片機(jī)，Olympus BH-2型顯微鏡，江蘇捷達(dá)801系統(tǒng)形態(tài)學(xué)圖像分析系統(tǒng)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 炮制品的制備

本研究根據(jù)毛繼祖[5]所著《基礎(chǔ)藏醫(yī)炮制學(xué)》，對兩種炮制品的炮制方法進(jìn)行了工藝優(yōu)化，篩選出了最佳炮制條件，具體方法如下。茜草制訶子的制備：茜草燒成白灰，將訶子和茜草灰按照1∶3的比例注入麥酒攪拌，以稀稠如同酪漿為宜，在鍋中加熱至75 ℃，然后放入訶子肉(被淹沒為度)，接著快速滅火，在室溫25 ℃條件下，于鍋中浸泡1 d；第二天撈出訶子，在木臼中揉破，將訶子肉用蒸餾水刷洗3次，于70 ℃干燥30 h[10]。白狼毒制訶子的制備：取與訶子等質(zhì)量的白狼毒，按1∶15的比例加水煮沸后再煎煮30 min，榨取汁液，保存。將訶子放入此液中(淹沒)，在室溫25 ℃條件下，浸泡2 d，浸泡期間不攪動，2 d后取出訶子，剝開并取出核，將訶子肉放入上述白狼毒液中，文火燒煮，煮至汁液全部滲入訶子而干涸，于60 ℃干燥35 h[11]。

1.2.2 試驗(yàn)分組與給藥

取昆明種SPF級小鼠168只，雌雄各半，隨機(jī)分為7組，每組24只，分別為空白對照組、高低2個(gè)劑量(4.0、1.0 g·kg-1)的原藥訶子、白狼毒制訶子和茜草制訶子。各組按劑量灌胃給藥，空白對照組給予等體積的生理鹽水，每天1次，試驗(yàn)周期為28 d。

1.2.3 光鏡標(biāo)本制片

試驗(yàn)第7、14、21、28 天末次給藥1 h后，每組分別采取6只小鼠的小腸組織，4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片。

1.2.4 免疫組化染色

5-HT免疫組化染色方法按試劑盒說明書進(jìn)行，用PBS代替一抗作為陰性對照，具體操作步驟參照文獻(xiàn)[12]。5-HT陽性反應(yīng)物呈棕黃色，背景為淡藍(lán)色。

1.2.5 定量分析與統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

每個(gè)部位取10張切片，每張切片隨機(jī)取10個(gè)400倍視野，用江蘇捷達(dá)801系統(tǒng)形態(tài)學(xué)圖像分析系統(tǒng)統(tǒng)計(jì)5-HT陽性產(chǎn)物積分光密度值(IOD)的總和，其中IOD值=平均光密度值×陽性表達(dá)面積，同時(shí)測定每張切片的平均灰度值。 IOD值越大，平均灰度值越小，說明免疫組化著色越深，即陽性表達(dá)越高，數(shù)據(jù)均用平均數(shù)(mean)±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)表示，數(shù)據(jù)處理采用SPSS 20.0軟件，并用單因素方差分析進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 給藥后5-HT-IR細(xì)胞的形態(tài)特征及組織學(xué)分布變化

試驗(yàn)片中，5-HT蛋白免疫陽性反應(yīng)呈棕褐色顆粒，陽性物質(zhì)定位于胞質(zhì)；在陰性對照片中，均為單一藍(lán)色蘇木素染色。

十二指腸：十二指腸中5-HT-IR細(xì)胞主要分布在腸黏膜上皮細(xì)胞之間、腸固有膜及結(jié)締組織內(nèi)，少量分布在十二指腸腺上皮。形態(tài)上大多為錐形和圓形，錐形細(xì)胞突起指向腸腔或固有膜，圓形細(xì)胞多分布于固有膜及十二指腸腺上皮中。對照組5-HT-IR細(xì)胞較多，分布在十二指腸腺上皮和固有膜中多一些(圖1-a)，而給藥組5-HT-IR細(xì)胞較少，分布在腸黏膜上皮細(xì)胞基部多一些(圖1-b)，各組5-HT-IR細(xì)胞在形態(tài)上無顯著差異。

空腸：空腸中5-HT-IR細(xì)胞主要分布在腸黏膜上皮細(xì)胞之間和腸腺上皮，在腸固有膜分布較少。形態(tài)上以橢圓形和柱狀為主，少數(shù)為錐形，其突起指向腸固有膜。對照組5-HT-IR細(xì)胞數(shù)量較多，主要分布在腸黏膜上皮細(xì)胞之間和腸腺上皮(圖1-c)，而給藥組5-HT-IR細(xì)胞數(shù)量較少，主要分布在腸腺上皮(圖1-d)，各組5-HT-IR細(xì)胞在形態(tài)上無顯著差異。

回腸：回腸中5-HT-IR細(xì)胞主要分布在腸腺上皮和腸固有膜，少量分布在腸黏膜上皮細(xì)胞之間。形態(tài)上多為梭形和橢圓形，梭形細(xì)胞突起分別指向固有膜和腸腺腔。對照組5-HT-IR細(xì)胞數(shù)量較多，主要分布在腸腺上皮及腸固有膜(圖1-e)，而給藥組5-HT-IR細(xì)胞數(shù)量較少，主要分布在腸腺上皮(圖1-f)。在形態(tài)上，對照組以梭形為主，給藥組以橢圓形為主。

2.2 給藥后5-HT-IR細(xì)胞在十二指腸、空腸和回腸的分布密度及比較

小腸各段5-HT-IR細(xì)胞IOD值見表1—3，平均灰度值見圖2。

各試驗(yàn)組與對照組IOD值的顯著性比較：給藥7 d后，RTC(茜草制訶子)高劑量組小腸各段5-HT蛋白表達(dá)量極顯著降低(P<0.01)。給藥14 d后，RTC低劑量組小腸各段5-HT蛋白表達(dá)量同列無相同小寫字母的數(shù)據(jù)間差異顯著(P<0.05)，無相同大寫字母的數(shù)據(jù)間差異極顯著(P<0.01)。下同。

a，十二指腸28 d對照組；b，十二指腸28 d茜草制訶子高劑量組；c，空腸21 d對照組；d，空腸21 d白狼毒制訶子低劑量組；e，回腸14d對照組；f，回腸14 d原藥訶子高劑量組a， In duodenum at 28 d in control group; b， In duodenum at 28 d in the dosage of 4.0 g·kg-1 of RTC group; c， In jejunum at 21 d in control group; d， In jejunum at 21 d in the dosage of 1.0 g·kg-1 of ETC group; e， In ileum at 14 d in control group; f， In ileum at 14 d in the dosage of 4.0 g·kg-1 of TC group圖1 小腸5-HT-IR細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色Fig.1 Immunohistochemistry for 5-HT-IR cells in the small intestine

表1 十二指腸5-HT-IR細(xì)胞積分光密度值

Table 1 Integral of light density of 5-HT-IR cells in duodenum

組別Groups5-HT-IR細(xì)胞積分光密度值Integratedopticaldensityof5-HT-IRcells7d14d21d28d空白對照組Controlgroup22.78±1.985Aa26.33±3.592Aa29.07±2.893Aa32.02±3.797Aa原藥訶子高劑量組4.0g·kg-1TCgroup20.27±2.397ABab22.10±2.594ABCabc24.98±3.343ABCbc27.85±3.453Aabc原藥訶子低劑量組1.0g·kg-1TCgroup22.41±4.164Aa23.95±2.834ABab26.87±2.821ABab30.43±3.000Aab白狼毒制訶子高劑量組4.0g·kg-1ETCgroup18.23±2.750ABb20.13±2.849BCbcd21.48±2.060BCDcd24.30±2.884BCcd白狼毒制訶子低劑量組1.0g·kg-1ETCgroup20.18±3.101ABab20.98±2.505ABCbc24.19±2.864ABCbcd26.93±2.113ABbc茜草制訶子高劑量組4.0g·kg-1RTCgroup16.42±2.470Bb16.55±3.445Cd18.20±2.683De20.51±1.861Cd茜草制訶子低劑量組1.0g·kg-1RTCgroup17.35±2.499ABb18.87±2.760BCcd20.27±2.512CDde21.85±2.617BCd

Data within a column followed by no same lowercase or uppercase letter indicated significant difference atP<0.05 orP<0.01， respectively. The same as below.

極顯著低于對照組(P<0.01)。給藥21 d后，ETC(白狼毒制訶子)高劑量組小腸各段5-HT蛋白表達(dá)量也極顯著降低(P<0.01)。給藥28 d后，ETC低劑量組在小腸各段5-HT蛋白表達(dá)量顯著降低(P<0.05)。

各試驗(yàn)組間IOD值的顯著性比較：給藥7 d后，RTC高劑量組小腸各段5-HT蛋白表達(dá)量極顯著低于TC(原藥訶子)低劑量組(P<0.01)，且空腸、回腸段5-HT蛋白表達(dá)量顯著低于TC高劑量組(P<0.05)。給藥14 d后，RTC低劑量組小腸各段5-HT蛋白表達(dá)量顯著低于TC低劑量組(P<0.05)。給藥21 d后，RTC高劑量組十二指腸、空腸段5-HT蛋白表達(dá)量極顯著低于TC高、低劑量組(P<0.01)，顯著低于ETC低劑量組(P<0.05)，回腸段5-HT蛋白表達(dá)量極顯著低于TC低劑量組和ETC低劑量組(P<0.01)，同時(shí)顯著低于TC高劑量組(P<0.05)； RTC低劑量組5-HT蛋白表達(dá)量與TC高劑量組相比顯著降低(P<0.05)；ETC高劑量組空腸、回腸段5-HT蛋白表達(dá)量與TC高劑量組相比顯著降低(P<0.05)。給藥28 d后，RTC高劑量組5-HT蛋白表達(dá)量最少，極顯著低于TC高、低劑量組(P<0.01)，同時(shí)顯著低于ETC低劑量組(P<0.05)；與TC低劑量組相比，RTC低劑量組小腸各段5-HT蛋白表達(dá)量極顯著降低(P<0.01)，ETC高劑量組也顯著降低(P<0.05)。

表2 空腸5-HT-IR細(xì)胞積分光密度值

Table 2 Integral of light density of 5-HT-IR cells in jejunum

組別Groups5-HT-IR細(xì)胞積分光密度值Integratedopticaldensityof5-HT-IRcells7d14d21d28d空白對照組Controlgroup15.02±1.68Aa18.29±1.82Aa21.32±1.47Aa23.92±3.70Aa原藥訶子高劑量組4.0g·kg-1TCgroup13.28±1.42ABCabc15.17±1.55ABCbc18.00±2.26ABCb20.84±2.04ABCbc原藥訶子低劑量組1.0g·kg-1TCgroup13.91±1.07ABab17.40±1.52ABab19.27±1.78ABab23.30±1.63ABab白狼毒制訶子高劑量組4.0g·kg-1ETCgroup11.99±1.88ABCbcd14.39±1.67BCDc15.13±1.53CDcd19.18±1.82BCDcd白狼毒制訶子低劑量組1.0g·kg-1ETCgroup13.11±2.28ABCabc15.17±1.59ABCbc16.94±2.230BCDbc20.01±1.32ABCDc茜草制訶子高劑量組4.0g·kg-1RTCgroup10.02±1.37Cd11.24±1.61Dd13.50±1.79Dd16.31±1.67Dd茜草制訶子低劑量組1.0g·kg-1RTCgroup11.34±1.85BCcd13.45±1.70CDcd15.20±1.83CDcd18.14±1.25CDcd

表3 回腸5-HT-IR細(xì)胞積分光密度值

Table 3 Integral of light density of 5-HT-IR cells in ileum

組別Groups5-HT-IR細(xì)胞積分光密度值Integratedopticaldensityof5-HT-IRcells7d14d21d28d空白對照組Controlgroup11.27±1.60Aa14.22±1.69Aa17.01±1.75Aa19.16±2.06Aa原藥訶子高劑量組4.0g·kg-1TCgroup10.16±1.21ABab13.20±1.77ABab14.18±2.12ABCa17.24±1.40ABabc原藥訶子低劑量組1.0g·kg-1TCgroup10.82±1.99Aa13.22±1.66ABab16.28±2.25Aa18.24±1.50ABab白狼毒制訶子高劑量組4.0g·kg-1ETCgroup8.94±1.85ABabc10.83±1.91ABCbcd11.14±1.86BCb15.27±1.80BCDcd白狼毒制訶子低劑量組1.0g·kg-1ETCgroup9.31±1.56ABabc12.81±1.77ABab15.34±1.99Aa16.21±1.87ABCbc茜草制訶子高劑量組4.0g·kg-1RTCgroup7.41±1.37Bc9.23±1.29Cd10.2±1.58Cb12.30±1.47De茜草制訶子低劑量組1.0g·kg-1RTCgroup8.12±1.85ABbc9.94±1.75BCcd10.72±2.20Cb13.20±1.61CDde

A，十二指腸5-HT-IR細(xì)胞平均灰度值；B，空腸5-HT-IR細(xì)胞平均灰度值；C，回腸5-HT-IR細(xì)胞平均灰度值。同一腸段同一給藥時(shí)期柱狀圖上無相同小寫字母的表示處理組間差異顯著(P<0.05)，無相同大寫字母的表示處理組間差異極顯著(P<0.01)A， Mean gray density of 5-HT-IR cells in duodenum; B， Mean gray density of 5-HT-IR cells in jejunum; C， Mean gray density of 5-HT-IR cells in ileum. In the same intestine with same drug delivery of this histogram， bars marked by no same lowercase or uppercase letter indicated significant difference at P<0.05 or P<0.01圖2 不同給藥時(shí)期不同腸段5-HT-IR細(xì)胞的平均灰度值Fig.2 Mean gray density of 5-HT-IR cells of small intestine in different drug delivery

3 結(jié)論與討論

3.1 訶子及其炮制品對小鼠小腸5-HT-IR細(xì)胞分布數(shù)量的影響

5-HT作為機(jī)體內(nèi)重要的神經(jīng)遞質(zhì)，能通過腸神經(jīng)系統(tǒng)刺激胃腸粘液分泌、平滑肌收縮和血管擴(kuò)張，調(diào)節(jié)胃腸道消化功能[13]。本研究發(fā)現(xiàn)給藥7 d后，5-HT-IR細(xì)胞組間IOD值差異不明顯，而給藥14 d后，各組5-HT- IR細(xì)胞的IOD值隨給藥時(shí)間的增加與對照組之間的差異顯著性逐漸增強(qiáng)，這說明給藥時(shí)間的長短與訶子在體內(nèi)的血藥濃度水平有關(guān)。相同給藥期同一炮制品高、低劑量組相比，低劑量組IOD值雖也有降低，但降低不明顯，說明訶子及其炮制品對5-HT的作用與劑量相關(guān)，呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，劑量過小時(shí)調(diào)節(jié)作用不甚明顯。ETC高劑量組十二指腸和空腸5-HT-IR細(xì)胞數(shù)量在給藥7 d后就極顯著減少，而回腸則在給藥14 d后才出現(xiàn)類似顯著性差異，這種差異可能與小腸各段5-HT細(xì)胞不同的內(nèi)分泌活動相關(guān)聯(lián)，由此推測ETC對小腸前段5-HT-IR細(xì)胞分泌的抑制作用強(qiáng)于小腸后段。RTC高、低劑量組和ETC高劑量組小腸段5-HT-IR細(xì)胞的陽性反應(yīng)物分別在給藥7、14、21 d后極顯著低于同期對照組，說明RTC對小鼠腸道5-HT的分泌抑制作用強(qiáng)于ETC。筆者猜測，經(jīng)茜草、白狼毒炮制后訶子藥效提升，從而對5-HT細(xì)胞的分泌起不同程度的抑制作用，可能與炮制過程中茜草、白狼毒與訶子相互作用生成了某種新成分，或是茜草和白狼毒改變了訶子中多酚或鞣質(zhì)等有效成分的含量有關(guān)。

3.2 訶子及其炮制品對5-HT-IR細(xì)胞的內(nèi)分泌和腔(外)分泌功能的形態(tài)學(xué)觀察

研究表明，5-HT-IR細(xì)胞除了可以通過釋放化學(xué)物質(zhì)進(jìn)入血液循環(huán)作用于靶細(xì)胞發(fā)揮其內(nèi)分泌調(diào)節(jié)作用外，還能直接向腸腔和腸腺腔內(nèi)分泌5-HT，從而調(diào)節(jié)消化功能[14-15]。另外，有學(xué)者在與鄰近細(xì)胞接觸的5-HT-IR細(xì)胞的突起中觀察到了陽性物質(zhì)，提示其可能通過改善局部環(huán)境來調(diào)節(jié)消化功能，發(fā)揮高效且局部的旁分泌調(diào)節(jié)作用[16]。

筆者觀察5-HT-IR細(xì)胞的形態(tài)位置發(fā)現(xiàn)，相比對照組，給藥組小腸5-HT-IR細(xì)胞都有所減少，給藥組僅有少量的5-HT-IR細(xì)胞分布于固有層內(nèi)呈梭形，其突起指向周圍毛細(xì)血管，還有的分布于腸黏膜上皮間呈橢圓形或錐形，其突起指向固有層，這些均為給藥后有更少的5-HT通過固有膜進(jìn)入血液循環(huán)提供了形態(tài)學(xué)依據(jù)，故認(rèn)為茜草制訶子和白狼毒制訶子對5-HT的內(nèi)分泌途徑起一定的抑制作用。有關(guān)訶子是通過作用于內(nèi)分泌細(xì)胞調(diào)節(jié)胃腸激素的分泌，或是訶子本身對5-HT或其前體直接發(fā)揮作用有待進(jìn)一步研究。筆者在小腸多處均發(fā)現(xiàn)有位于腸黏膜上皮細(xì)胞之間呈錐形或梭形的5-HT-IR細(xì)胞，其突起伸入消化腔或腺泡腔，從形態(tài)學(xué)上證明其可能具有外分泌功能，而給藥組與對照組5-HT-IR細(xì)胞分布密度差異不大，說明給藥對5-HT通過外分泌方式對消化功能起調(diào)節(jié)作用影響較小。

本研究探討了訶子特殊藏醫(yī)炮制品的制備及其對小腸5-HT胃腸激素蛋白表達(dá)量與分布情況的影響，這在國內(nèi)為首次報(bào)道。茜草制訶子和白狼毒制訶子對小腸5-HT的分泌和釋放起不同程度的抑制作用，進(jìn)而調(diào)節(jié)腸道功能乃至全身的機(jī)能狀態(tài)，并可能通過這種機(jī)制達(dá)到一定治療目的。已有研究表明，訶子具有較好的防治腹瀉的藥用價(jià)值，5-HT含量的增加與腹瀉的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)，而本研究發(fā)現(xiàn)訶子能夠誘導(dǎo)腸道5-HT分泌的減少，因此推測訶子通過影響5-HT來調(diào)節(jié)胃腸機(jī)能可能是訶子改善腹瀉的主要機(jī)理之一[17]。訶子的茜草制、白狼毒制炮制品均能在不同程度上增強(qiáng)其藥效，極具開發(fā)潛力和應(yīng)用前景。因此，今后需加強(qiáng)對訶子及其炮制品的藥效機(jī)理研究，為訶子及其炮制品的進(jìn)一步開發(fā)提供更多的依據(jù)。

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(責(zé)任編輯 盧福莊)

Effects of different processed products ofTerminaliachebulaRetz. on 5-HT of small intestine in mice

ZHAO Si-qi1，2， HE Min1，2，*， LIANG Xiao-xia1，2， LI Xue1，2， LIAO Li1，2

(1.CollegeofVeterinaryMedicine，SichuanAgriculturalUniversity，Chengdu611130，China; 2.KeyLaboratoryofAnimalDiseasesandHumanHealthofSichuanProvince，Chengdu611130，China)

This study investigated the effects ofTerminaliachebulaRetz. and its 2 processed products of Tibetan medicine，RubiacordifoliaL. perTerminaliachebulaandEuphorbiafischerianaSteud perTerminaliachebulaon the secretory activity of 5-hydroxytryptamine immunoreactive (5-HT-IR) cells in small intestine of mice. Cellular localization and protein expression of 5-HT-IR cells in small intestine were revealed by immunohistochemistry. It was shown that 5-HT cells were widely distributed in small intestine， and the protein expression gradually reduced from duodenum to ileum. After drug delivery for 28 d， the protein expression of 5-HT of small intestine in mice was significantly lower inRubiacordifoliaL. perTerminaliachebulagroups (in the dosage of 1.0 and 4.0 g·kg-1)，EuphorbiafischerianaSteud perTerminaliachebulagroups (in the dosage of 1.0 and 4.0 g·kg-1) andTerminaliachebulagroup (in the dosage of 4.0 g·kg-1). The efficacy decreased asRubiacordifoliaL. perTerminaliachebula>EuphorbiafischerianaSteud perTerminaliachebula>Terminaliachebula. The efficacies ofTerminaliachebulaand its processed products in dosage of 4.0 g·kg-1were better than those in dosage of 1.0 g·kg-1. The shape of 5-HT cells varied as cone， ellipse， and spindle. A large number of 5-HT-IR cells were found in the epithelial of intestinal gland and intestinal lamina propria in control group， while these cells were widely distributed in the epithelial cells of intestinal mucosal and epithelial of intestinal gland in experimental groups. This study indicated thatTerminaliachebulaand its processed products played an important role in adjusting physiological function of small intestine by inhibiting the secretion of 5-HT， and the effect ofRubiacordifoliaL. perTerminaliachebulain the dosage of 4.0 g·kg-1was the best.

TerminaliachebulaRetz.; small intestine; 5-hydroxytryptamine(5-HT); immunohistochemistry

http://www.zjnyxb.cn

10.3969/j.issn.1004-1524.2016.10.06

2016-03-07

四川省教育廳科研項(xiàng)目(12SZA0249，10ZB035)；四川省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)計(jì)劃項(xiàng)目(2014JY0113)

趙思琦(1992—)，女，四川自貢人，碩士研究生，研究方向?yàn)閯游锝馄逝c組織胚胎學(xué)。E-mail: scheazhao77@126.com

*通信作者，何敏，E-mail: hemin09@163.com

S567.219；S852.165

A

1004-1524(2016)10-1663-08

浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)ActaAgriculturaeZhejiangensis， 2016，28(10): 1663-1670

趙思琦，何敏，梁曉霞，等. 訶子及其炮制品對小鼠小腸5-羥色胺分泌的影響[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2016，28(10): 1663-1670.