半夏瀉心湯對(duì)脾虛便秘型小鼠血常規(guī)影響的實(shí)驗(yàn)研究

劉珍，鄧天好，王紅梅，譚周進(jìn)，尹抗抗

1.湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南 長(zhǎng)沙 410006 2.湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410006 3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208

◆實(shí)驗(yàn)研究◆

半夏瀉心湯對(duì)脾虛便秘型小鼠血常規(guī)影響的實(shí)驗(yàn)研究

劉珍1，鄧天好2，王紅梅1，譚周進(jìn)3，尹抗抗3

1.湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南 長(zhǎng)沙 410006 2.湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410006 3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208

目的：探討半夏瀉心湯對(duì)脾虛便秘小鼠血常規(guī)的影響。方法：將24只實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分成正常組、模型組、枳術(shù)湯組和半夏瀉心湯組，除正常組外，其余各組灌胃番瀉葉水煎液，7天后控制飲食，饑飽失常8天，構(gòu)建小鼠脾虛便秘模型。造模結(jié)束后，半夏瀉心湯組、枳術(shù)湯組分別采用半夏瀉心湯和枳術(shù)湯灌胃，模型組和正常組均灌胃蒸餾水，共6天，治療結(jié)束后進(jìn)行血常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)。結(jié)果：與正常組比較，模型組白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)（NEUT）顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。與模型組比較，半夏瀉心湯組血小板計(jì)數(shù)（BPC）、血小板平均壓積（PCT）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量（MCH）、WBC、NEUT、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（LYM）顯著升高，紅細(xì)胞分布寬度（RDW）降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與枳術(shù)湯組比較，半夏瀉心湯組BPC、PCT、WBC、NEUT、LYM升高更明顯，差異均統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：半夏瀉心湯能促進(jìn)脾虛便秘小鼠血小板計(jì)數(shù)、血小板平均壓積、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的恢復(fù)，有利于血液功能的調(diào)節(jié)。

半夏瀉心湯；脾虛便秘；血常規(guī)；小鼠；實(shí)驗(yàn)

血液在機(jī)體循環(huán)系統(tǒng)中不停的流動(dòng)，在維持機(jī)體新陳代謝和機(jī)體內(nèi)環(huán)境平衡及人體功能調(diào)節(jié)中起到至關(guān)重要的作用。其中紅細(xì)胞能輸送氧氣，白細(xì)胞負(fù)責(zé)機(jī)體防御，血小板主要在止血方面發(fā)揮作用，如平均血紅蛋白含量上升，則提示可能存在高色素性貧血、真性紅細(xì)胞增多癥以及心功能衰竭等疾病[1]。便秘作為一種常見的疾病，既是一種獨(dú)立疾病，又是其他病證的常見并發(fā)癥，臨床中部分便秘患者特別是兼有并發(fā)癥的患者在某種程度上存在血常規(guī)檢查異常的情況，如白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)等指標(biāo)水平改變。半夏瀉心湯為調(diào)和寒熱、辛開苦降治法的代表方劑，具有消痞散結(jié)、和胃降逆的作用。本研究利用脾虛便秘小鼠模型，用枳術(shù)湯作為陽性對(duì)照藥物，以探明半夏瀉心湯對(duì)脾虛便秘小鼠血常規(guī)的影響，現(xiàn)總結(jié)如下。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠24只，雌、雄各半，體量(20± 2)g，購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物編號(hào)：SCXK(湘)2011-0003。飼料由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物①半夏瀉心湯[2]。處方：半夏12 g，黃芩、干姜、人參、炙甘草各9 g，黃連3 g，大棗4枚。②枳術(shù)湯[2]。處方：枳實(shí)12 g，白術(shù)6 g。半夏瀉心湯和枳術(shù)湯的藥物分別先浸泡30 min，加10倍蒸餾水，電爐文火煎煮40min，紗布過濾，濾渣加6倍量蒸餾水，文火煎煮40 min，紗布過濾，合并兩次煎液，將濾液在75℃水浴中蒸發(fā)濃縮成1 g/mL生藥濃度的水煎液，4℃冰箱保存?zhèn)溆?。③番瀉葉。取番瀉葉500 g，加10倍量沸水浸泡10 min，過濾，將濾液在75℃水浴中蒸發(fā)濃縮成100%(1 g/mL生藥)的水煎液，4℃冰箱保存?zhèn)溆?。所有藥物均?gòu)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，并請(qǐng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物教研室人員進(jìn)行鑒定。

1.3主要儀器CA-500血液自動(dòng)分析儀(山東蘭橋醫(yī)學(xué)科技有限公司)；超凈工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備凈化公司)；2 mL EDTA-K2真空采血管(北京美科美生物技術(shù)開發(fā)有限公司)。

2　實(shí)驗(yàn)方法

2.1動(dòng)物分組將所有小鼠在23～25℃室溫、50%～70%相對(duì)濕度、清潔安靜的環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)2天，然后隨機(jī)分為4組，分別是正常組、模型組、半夏瀉心湯組和枳術(shù)湯組。每組6只，雌、雄各半，分籠飼養(yǎng)。

2.2造模方法參照文獻(xiàn)[3]中有關(guān)脾虛便秘的造模方法進(jìn)行。除正常組外，其他3組小鼠灌胃番瀉葉水煎劑，0.4 mL/次，每天2次，連續(xù)7天，常規(guī)飼養(yǎng)，造成脾虛模型。隨后停用番瀉葉，采用饑飽失常法，隔天喂飼生大米4～8 g，自由飲水1次，每次0.5 h，連續(xù)7天，即在延續(xù)脾虛狀態(tài)的基礎(chǔ)上采用控制飲食和限制飲水法造成便秘模型。造模時(shí)間共14天。正常組給予蒸餾水灌胃，0.4 mL/次，每天2次，灌胃7天后給予正常飲水喂食飼養(yǎng)7天。根據(jù)參考文獻(xiàn)[3]，所有小鼠造模成功。模型成功標(biāo)志：小鼠外觀干癟、瘦小、豎毛、拱背、活動(dòng)減少；體重減輕，大便干結(jié)、數(shù)量減少、顆粒細(xì)小；解剖見大便集結(jié)在結(jié)腸，呈球狀或串珠狀，空腸、回腸無明顯糞便殘留；腸道推進(jìn)率和血清D-木糖水平降低。

2.3給藥方法造模成功后，根據(jù)臨床等效劑量，半夏瀉心湯組灌胃半夏瀉心湯0.05 g/kg，枳術(shù)湯組灌胃枳術(shù)湯0.27g/kg，每次灌胃0.4 mL，具體根據(jù)小鼠體重進(jìn)行增減。正常組和模型組均灌胃等量的蒸餾水，每天2次，白天給藥間隔時(shí)間為8 h，連續(xù)6天。

2.4檢測(cè)指標(biāo)與方法采用阻抗法以CA-500血液自動(dòng)分析儀進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè)。所有小鼠檢測(cè)前禁食12 h，禁水1 h，于內(nèi)眥靜脈采血0.5～1.0 mL，注入EDTA-K2抗凝管中，上下顛倒混勻后于2 h內(nèi)送檢，4 h內(nèi)完成檢測(cè)。觀察比較用藥后小鼠血常規(guī)水平，包括血小板計(jì)數(shù)(BPC)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、血紅蛋白(Hb)、血小板平均壓積(PCT)、血細(xì)胞比容(HCT)、平均血小板體積(MPV)、紅細(xì)胞平均體積(MCV)、血小板分布寬度(PDW)、紅細(xì)胞分布寬度(RDW)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量(MCH)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(NEUT)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)(LYM)。

2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料以(±s)表示，方差齊時(shí)采用t檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)采用非參數(shù)檢驗(yàn)。

3　結(jié)果

3.1各組小鼠血小板水平比較見表1。與模型組比較，半夏瀉心湯組BPC、PCT顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與枳術(shù)湯組比較，半夏瀉心湯組BPC、PCT水平升高更明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表1　各組小鼠血小板水平比較(±s)

表1　各組小鼠血小板水平比較(±s)

與模型組比較，①P＜0.05；與枳術(shù)湯組比較，②P＜0.05

組別正常組模型組半夏瀉心湯組枳術(shù)湯組BPC(×109/L) 770.83±124.24 935.50±122.17 1052.33±328.23①②837.33±95.21 PCT(%) 0.50±0.08 0.61±0.07 0.70±0.23①②0.54±0.08 M PV(fL) 6.98±0.40 7.07±0.39 6.93±0.40 6.68±0.34 PDW(%) 6.78±0.50 6.56±0.31 6.63±0.21 6.45±0.24

3.2各組小鼠紅細(xì)胞水平比較見表2。與模型組比較，半夏瀉心湯組RDW水平有所降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表2　各組小鼠紅細(xì)胞水平比較(±s)

表2　各組小鼠紅細(xì)胞水平比較(±s)

與模型組比較，①P＜0.05

組別正常組模型組半夏瀉心湯組枳術(shù)湯組RBC(×1012/L) 8.99±0.36 9.26±0.94 9.22±0.19 8.59±0.60 HCT(%) 47.97±2.68 46.28±3.11 45.77±3.84 44.98±3.44 M CV(fL) 53.97±2.69 50.23±3.59 54.60±8.44 52.40±2.47 RD W(%) 20.87±1.06 22.43±2.83 20.00±1.38①20.45±0.41

3.3各組小鼠血紅蛋白水平比較見表3。與模型組比較，半夏瀉心湯組MCH水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表3　各組小鼠血紅蛋白水平比較(±s)

表3　各組小鼠血紅蛋白水平比較(±s)

與模型組比較，①P＜0.05

組別正常組模型組半夏瀉心湯組枳術(shù)湯組H b(g/L) 146.50±3.99 141.17±10.17 138.83±22.21 137.67±8.26 M CH(pg) 16.05±0.35 15.28±1.02 16.28±0.69①16.05±0.52 M CH C(g/L) 300.00±13.40 305.00±8.58 301.67±28.77 306.33±10.01

3.4各組小鼠白細(xì)胞水平比較見表4。與正常組比較，模型組WBC、NEUT顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，P＜0.05)。與模型組比較，半夏瀉心湯組WBC、NEUT、LYM均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。半夏瀉心湯組WBC、NEUT、LYM水平較枳術(shù)湯組升高更明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表4　各組小鼠白細(xì)胞水平比較(±s，×109/L)

表4　各組小鼠白細(xì)胞水平比較(±s，×109/L)

與正常組比較，①P＜0.01，②P＜0.05；與模型組比較，③P＜0.01，④P＜0.05；與枳術(shù)湯組比較，⑤P＜0.05

組別正常組模型組半夏瀉心湯組枳術(shù)湯組W BC 4.42±0.65 3.14±1.49①5.56±0.78③⑤4.18±1.40 N EU T 0.78±0.31 0.43±0.20②0.87±0.25③⑤0.46±0.16 LY M 3.60±0.66 3.14±1.16 4.66±0.74④⑤2.91±1.00

4　討論

《靈樞·五味》記載：“谷始入于胃，其精微者，先出于胃之兩焦，以溉五臟，別出兩行，營(yíng)衛(wèi)之道?！睜I(yíng)衛(wèi)之氣為機(jī)體的正氣根本，脾胃為氣血生化之源。便秘的病位主要在于脾、胃、腸。脾主運(yùn)化，輸布精微，胃主受納腐熟水谷，小腸分清泌濁，大腸傳導(dǎo)糟粕，共同承擔(dān)飲食物的消化、吸收、排泄。脾胃虧虛，功能異常，飲食輸布傳導(dǎo)失常，則氣血乏源，腸道失于濡潤(rùn)而形成便秘及貧血、倦怠乏力、面色蒼白、食欲不振等并發(fā)癥。若脾氣虧虛，固攝無權(quán)，血液無法在體內(nèi)正常運(yùn)行，則可產(chǎn)生出血等癥狀。氣的運(yùn)動(dòng)是人體生命活動(dòng)的根本，是人體重要的生理功能之一。脾胃居于中焦，互為表里，通連上下，為氣機(jī)升降出入之樞紐。脾升清陽，胃降濁陰，清陽上升，濁陰下降，營(yíng)衛(wèi)協(xié)調(diào)，脾胃運(yùn)化受納正常，則飲食水谷腐熟有度，排便有時(shí)。反之，脾胃虧虛，則氣機(jī)升降失常，當(dāng)升不升，當(dāng)降不降，或升多降少，降多升少，均影響脾胃生理功能的生態(tài)平衡而產(chǎn)生各種病癥。如胃失通降，積滯內(nèi)停，在上發(fā)生口臭、脘腹脹悶或疼痛，在下造成大便秘結(jié)等癥狀；脾失升清，不升反降則致糟粕壅阻腸道而導(dǎo)致便秘。正如《濟(jì)生方·脹滿門》所載：“如陰氣當(dāng)升而不升，陽氣當(dāng)降而不降，中焦痞結(jié)，必成脹滿。脹滿不已變證多端……，大小便為之不利?！笨傊?，脾氣虧虛以及脾胃清陽不升、濁陰不降是便秘發(fā)生的關(guān)鍵。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，血液循環(huán)、免疫系統(tǒng)均與脾的功能關(guān)系密切[4～5]。血液在人體許多疾病中有著至關(guān)重要的作用，如出血性疾病中血小板減少，貧血與紅細(xì)胞數(shù)量、紅細(xì)胞平均體積和體積分布寬度有關(guān)，感染性疾病與白細(xì)胞數(shù)量有關(guān)[6～9]。血常規(guī)是臨床中疾病診斷、治療的輔助檢查手段之一，因此，本研究對(duì)脾虛便秘小鼠進(jìn)行用藥前后的血常規(guī)檢查意義重大。肖新云等研究發(fā)現(xiàn)七味白術(shù)散能促進(jìn)菌群失調(diào)腹瀉小鼠血小板、白細(xì)胞的生成，對(duì)紅細(xì)胞平均體積有所改善[10]。趙興兵等研究發(fā)現(xiàn)，鐵皮石斛能調(diào)節(jié)脾虛便秘模型小鼠的免疫功能[11]。

本研究發(fā)現(xiàn)，脾虛便秘造模降低了小鼠白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量，小鼠的免疫功能降低。半夏瀉心湯能促進(jìn)脾虛便秘小鼠血小板計(jì)數(shù)、血小板平均壓積、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的恢復(fù)，有利于血液功能的調(diào)節(jié)。

[1]周冰.血常規(guī)檢查對(duì)篩查貧血及白細(xì)胞減少癥的臨床意義[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2014，8(3)：35-36.

[2] 李冀.方劑學(xué)[M].北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2012：67，183.

[3]鄒穎，鄭學(xué)寶，戴世學(xué)，等.小鼠脾虛便秘模型的建立[J].北京中醫(yī)藥，2009，28(1)：60-62.

[4]修宗昌，羅云堅(jiān)，余紹源.中醫(yī)脾胃學(xué)說中免疫學(xué)思想探析[J].上海中醫(yī)藥雜志，2003，37(7)：3-6.

[5]葉慶蓮.脾主升清論[J].山東中醫(yī)雜志，2001，20(11)：643.

[6]王貞，劉艷，楊冬，等.血小板計(jì)數(shù)、血小板抗體、骨殖細(xì)胞學(xué)對(duì)血小板減少鑒別診斷的意義[J].國(guó)際醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2011，32(5)：606-608.

[7]鄒漢良，梁漢彰，趙毅，等.紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與平均紅細(xì)胞體積比值在地中海貧血篩查診斷的價(jià)值[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志，2009，23(5)：465-466.

[8]張寶生.平均紅細(xì)胞體積和紅細(xì)胞分布寬度對(duì)缺鐵性貧血與巨幼紅細(xì)胞性貧止的診斷價(jià)值[J].國(guó)際醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2011，32(14)：1640-1641.

[9]楊詩奸.血常規(guī)檢驗(yàn)中數(shù)值變化的臨床意義[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2013，6(11)：390-391.

[10]肖新云，趙先平，唐標(biāo)，等.七味白術(shù)散對(duì)菌群失調(diào)腹瀉小鼠血常規(guī)的影響[J].微生物學(xué)通報(bào)，2015，42(2)：325-328.

[11]趙興兵，肖嫩群，蔡光先，等.超微鐵皮石斛對(duì)脾虛便秘小鼠血常規(guī)的影響[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2014，21(5)：68-70.

（責(zé)任編輯：馮天保，鄭鋒玲）

Experiment Study of Banxia Xiexin Tang on Blood Routine of Rats with Spleen Deficiency Syndrome Type of Constipation

LIU Zhen，DENG Tianhao，WANG Hongmei，TAN Zhoujin，YIN Kangkang

Objective：To discuss the effect of Banxia Xiexin tang on blood routine of rats with spleen deficiency syndrome type of constipation.Methods：Divided 24 cases of experimental rats into the normal group，the model group，Zhizhu tang group and Banxia Xiexin tang group randomly.Except normal group，other rats were given the water decoction of senna orally，carried on diet control after 7 days，being overeating and hungering for 8 days and the model of rats with spleen deficiency syndrome type of constipation was established.After establishment of the model，Banxia Xiexin tang group and Zhishu tang group

Banxia Xiexin tang and Zhishu tang respectively，while the distilled water was given to both the model group and the normal group for six days，and all these rats carried on test of the indexes of blood routine after treatment.Results：Comparing with the normal group，white blood cell(WBC)count and neutrophil(NEUT)count of model group were decreased obviously(P＜0.05，P＜0.01).Comparing with model group，the platelet(PLT)count，plateletocrit(PCT)，mean corpusular hemoglobin(MCH)，WBC and NEUT counts，lymphocyte(LYM)count of Banxia Xiexin tang group were raised significantly，and the red blood cell distribution width(RDW)of rats in this group was reduced，showing significant differences (P＜0.05).The counts of PLT，PCT，WBC，NEUT，LYM of Banxia Xiexin tang group were increased more obviously，comparing those of Zhizhu tang group，difference being significant(P＜0.05).Conclusion：Banxia Xiexin tang can improve the recovery of blood routine indexes of rats with spleen deficiency syndrome type of constipation，which is beneficial to the regulation of blood function.

Banxia Xiexin tang；Constipation；Spleen deficiency；Blood routine；Rats；Animal experiment

R285

A

0256-7415（2016）11-0212-03

10.13457/j.cnki.jncm.2016.11.091

2016-06-09

湖南省中醫(yī)藥科研計(jì)劃項(xiàng)目（2015108）

劉珍（1979-），女，主治醫(yī)師，助理研究員，研究方向：內(nèi)科疾病的臨床研究。

鄧天好，E-mail：601329092@qq.com。