朱砂染色現(xiàn)狀分析

邢　瀟，劉治民，徐彤彤，谷　妲，梁玉冰，張　鑫，楊建龍（.長春市食品藥品檢驗中心，長春　300；.長春職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物技術(shù)分院，長春　30033）

朱砂染色現(xiàn)狀分析

邢瀟1＊，劉治民1，徐彤彤1，谷妲2，梁玉冰1，張鑫1，楊建龍1（1.長春市食品藥品檢驗中心，長春130012；2.長春職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物技術(shù)分院，長春130033）

目的：分析朱砂藥材及飲片染色現(xiàn)狀，為朱砂藥材及飲片的品質(zhì)和臨床安全應(yīng)用提供參考依據(jù)。方法：采用薄層色譜法（TLC）對藥材和飲片中莧菜紅、胭脂紅、赤蘚紅、酸性紅73、808猩紅、靛玉紅進行定性鑒別。采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（HPLC-MS）檢測藥材及飲片中的808猩紅。HPLC條件：色譜柱為Acquity UPLC BEH C18，流動相為乙腈-0.1%甲酸（70∶30，V/V），流速為0.3 ml/min，檢測波長為520 nm；MS條件：離子源為電噴霧離子源，掃描方式為正離子掃描，檢測方式為全掃描二級質(zhì)譜，霧化器壓力為30 psi，干燥氣為氮氣，離子噴霧電壓為4 000 V，碰撞能為30 V，進樣量為5 μl。采用容量法測定藥材及飲片中硫化汞（HgS）的含量。結(jié)果：莧菜紅、胭脂紅、赤蘚紅、酸性紅73、808猩紅、靛玉紅的TLC斑點清晰，分離良好。18批樣品中有4批808猩紅染色，有6批HgS含量不達標(biāo)（其中3批同時為808猩紅染色）。結(jié)論：目前市場中流通的朱砂藥材及飲片存在染色摻雜和HgS含量不達標(biāo)等質(zhì)量問題，應(yīng)引起重視。

朱砂；染色；硫化汞；質(zhì)量

朱砂Cinnabar為2015年版《中國藥典》（一部）收載的品種，其來源為硫化物類礦物辰砂族辰砂，主含硫化汞（HgS），其飲片為水飛朱砂［1］。朱砂性甘微寒，有毒，歸心經(jīng)，具有清心鎮(zhèn)驚、安神、明目、解毒的功效，常用于治療心悸易驚、失眠多夢、癲癇發(fā)狂、小兒驚風(fēng)、視物昏花、口瘡、喉痹、瘡瘍腫毒［2］。目前，國家標(biāo)準中收載的含有朱砂的中成藥約400種，其中2015年版《中國藥典》（一部）中收載含朱砂的中藥制劑共有64種，兒科專用品種為14種［3］。基于利益的驅(qū)動，目前市場中出現(xiàn)了不良經(jīng)銷者將其他礦石進行染色冒充的朱砂，嚴重影響了藥材質(zhì)量和臨床用藥的安全［4］。為了有效地對朱砂質(zhì)量進行監(jiān)管，國家食品藥品監(jiān)督管理局于2008年發(fā)布了《藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項批件2008003》，對水飛朱砂進行808猩紅染色補充檢查［5］。筆者在此基礎(chǔ)上分析了不同地區(qū)的18批次朱砂染色情況，以期為朱砂藥材及飲片的品質(zhì)和臨床的安全應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1　材料

1.1儀器

6430型高效液相色譜-質(zhì)譜（HPLC-MS）聯(lián)用儀（美國Agilent公司）；GR202型電子分析天平（日本AND公司）；KQ-2500E型數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）。

1.2試劑

808猩紅（批號：111940-201201）、胭脂紅（批號：111771-200701）、赤蘚紅（批號：111772-200701）、酸性紅73（批號：111773-200701）、靛玉紅（批號：0717-200003）對照品均購自中國食品藥品檢定研究院；莧菜紅對照品（美國Amaranth公司，批號：E10148500）；硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）；乙腈為色譜純，無水乙醇、環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲酸均為分析純，水為純化水。

1.3藥材

筆者收集的吉林省市場中流通的18批朱砂樣品分別來源于河北、安徽、湖南、吉林、山東、河南、黑龍江、湖北、北京9省市17家生產(chǎn)企業(yè)，其中12批為朱砂藥材、6批為朱砂飲片。18批朱砂樣品經(jīng)長春市食品藥品檢驗所謝鵬飛主任藥師鑒定。

2　方法與結(jié)果

2.1薄層色譜

取樣品粉末（過2號篩）0.2 g，精密稱定，加乙醇10 ml，超聲（功率：100 W，頻率：40 kHz）處理10 min，濾過，續(xù)濾作為供試品溶液。另取808猩紅、胭脂紅、赤蘚紅、酸性紅73、靛玉紅、莧菜紅對照品適量，分別加乙醇制成質(zhì)量濃度為0.1 mg/ml的單一對照品溶液。按薄層色譜法（TLC）［2015年版《中國藥典》（四部）］［6］試驗，吸取上述7種溶液各10 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（9∶1，V/V）為展開劑，置于氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，日光下檢視。結(jié)果，18批供試品色譜中，有4批（編號：1410、1414、1417、1441）供試品在與808猩紅對照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點，疑似有808猩紅染色現(xiàn)象，需用高效液相色譜法（HPLC）作進一步確認。所有供試品色譜中，在與莧菜紅、胭脂紅、赤蘚紅、酸性紅73、靛玉紅對照品色譜相應(yīng)位置上未顯相同顏色斑點，因此不需要作進一步確認，詳見圖1。

2.2808猩紅檢測

2.2.1試驗條件 （1）HPLC條件。色譜柱：Acquity UPLC BEH C18；流動相：乙腈-0.1%甲酸（70∶30，V/V）；流速：0.3 ml/min；檢測波長：520 nm。（2）MS條件。離子源：電噴霧離子源；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：全掃描二級質(zhì)譜；霧化器壓力：30 psi；干燥氣：氮氣；離子噴霧電壓：4 000 V；碰撞能：30 V；進樣量：5 μl。

2.2.2對照品溶液的制備取“2.1”項下808猩紅對照品溶液，微孔濾膜（0.22 μm）濾過，取續(xù)濾液，作為對照品溶液。

2.2.3供試品溶液取“2.1”項下供試品溶液，微孔濾膜（0.22 μm）濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.4專屬性考察取“2.2.2”“2.2.3”項下對照品溶液、供試品溶液適量，按“2.2.1”項下試驗條件進樣測定，記錄離子信號相對強度。結(jié)果，808猩紅MS存在特征峰（m/z 77.2，m/z 219.2和m/z 275.2），詳見圖2。

2.2.5穩(wěn)定性試驗取“2.2.3”項下供試品溶液（編號：1417）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時按“2.2.1”項下試驗條件進樣測定，記錄離子信號相對強度。結(jié)果，808猩紅MS特征峰均能被檢出（n=6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

圖1　薄層色譜圖S1.莧菜紅；S2.胭脂紅；S3.赤蘚紅；S4.酸性紅73；S5.808猩紅；S6.靛玉紅Fig 1　TLC chromatogramsS1.amaranth；S2.carmine；S3.erythrosine；S4.acid red 73；S5.808 udan；S6.indirubin

圖2　高效液相色譜-質(zhì)譜圖A.對照品；B.供試品Fig 2　HPLC-MS chromatograms of cinnabar samplesA.reference substance；B.test samples

2.2.6重復(fù)性試驗精密稱取同一批樣品（編號：1417）適量，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.2.1”項下試驗條件進樣測定，記錄離子信號相對強度。結(jié)果，808猩紅特征峰均能被檢出（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.2.7樣品中808猩紅的檢測樣品按“2.2.1”項下試驗條件進行檢測，發(fā)現(xiàn)在HPLC-MS圖譜中，疑似染色樣品（編號：1410、1414、1417、1441）與808猩紅對照品的主要碎片離子質(zhì)荷比相同，確定此4批樣品中存在808猩紅染色現(xiàn)象，詳見表1。

2.3HgS含量測定

2.3.1容量法［5］取樣品藥材粉末約0.3 g或樣品飲片粉末0.2 g，精密稱定，置于錐形瓶中，加硫酸10 ml和硝酸鉀1.5 g，加熱使溶解，放冷，加水50 ml，滴加1%高錳酸鉀至顯粉紅色，再滴加2%硫酸亞鐵至紅色消失后，加硫酸鐵銨指示液2 ml，用硫氰酸銨滴定液（0.1 mol/L）滴定至溶液顯持久棕色，作為滴定終點。每1 ml硫氰酸銨滴定液（0.1 mol/L）相當(dāng)于11.63 mgHgS。

表1　樣品中808猩紅和HgS含量測定結(jié)果Tab 1　Results of contents determination of 808 udan and HgS in samples

2.3.2樣品中HgS含量測定取樣品各適量，按“2.3.1”項下方法檢測，計算樣品中HgS含量，結(jié)果見表1。由表1可知，18批樣品中，有4批藥材含量未達標(biāo)，編號分別為1402、1414、1421、1456；2批飲片含量未達標(biāo)，編號為1417、1441。同時，這6批樣品中有3批樣品同時也存在染色現(xiàn)象。

3　討論

3.1朱砂染色情況

808猩紅為紅色染色劑，市場上常用于礦石染色以冒充朱砂。本研究結(jié)果顯示，通過TLC檢查和HPLC-MS的確認，18批樣品中，有4批樣品被檢出有808猩紅染色現(xiàn)象，不合格率為22.2%，并且其中2批為朱砂藥材，說明在朱砂藥材中也存在染色摻偽現(xiàn)象。目前，在針對朱砂808猩紅染色的補充檢驗標(biāo)準中，只針對水飛朱砂即朱砂飲片進行檢測［5］，而對朱砂藥材未作相關(guān)檢測，存在監(jiān)管漏洞。建議將朱砂藥材也列入808猩紅染色檢查的檢驗標(biāo)準中并進行監(jiān)管。此外，筆者還對其他5種常見染色劑即莧菜紅、胭脂紅、赤蘚紅、酸性紅73、靛玉紅進行了篩查，結(jié)果在朱砂樣品中未發(fā)現(xiàn)有以上染色劑染色現(xiàn)象。

3.2染色樣品性狀

朱砂顏色為朱紅色至黑紅色，有時帶鉛灰色，條痕為紅色。其不溶于水、有機溶劑、鹽酸、硝酸，只能溶于硫化鈉溶液和一定比例的混合酸。將染色樣品與未染色樣品通過肉眼觀察進行比較，很難從性狀區(qū)分真?zhèn)巍Ｓ醒芯堪l(fā)現(xiàn)，若存在染色現(xiàn)象，樣品經(jīng)乙醇浸泡后，染色劑會溶于有機溶劑而使溶液顏色偏紅［7］。筆者分別對乙醇超聲提取朱砂樣品后的溶液進行過濾、離心兩種方式的顏色對比考察，發(fā)現(xiàn)超聲提取朱砂樣品后，再對樣品溶液進行離心，離心后的溶液顏色比對方法可用于朱砂染色情況初篩。

3.3朱砂染色與藥材質(zhì)量

朱砂為硫化物類礦物辰砂族辰砂，主成分為HgS，呈塊片、顆?；蚍勰?。目前，中藥材行業(yè)最突出的問題就是染色、增重、摻假等，涉及的藥材及飲片多達數(shù)十種［7］。結(jié)合相關(guān)調(diào)查結(jié)果［8-9］，筆者發(fā)現(xiàn)市場中確實存在有以其他礦石進行染色冒充朱砂的現(xiàn)象。結(jié)合朱砂藥材及飲片中HgS含量測定結(jié)果，筆者還發(fā)現(xiàn)若朱砂樣品中有染色現(xiàn)象，其HgS含量多為不合格［2015年版《中國藥典》（一部）中對朱砂中所含HgS的要求為藥材中不得少于96.0%，飲片中不得少于98.0%］，并可確定此種樣品存在有人為摻雜或品質(zhì)不好等問題。朱砂中HgS含量的降低將導(dǎo)致藥效受到嚴重影響，且其他礦石雜質(zhì)的存在提示樣品中可能有重金屬元素如鉛、鎘等超標(biāo)的情況。鉛已經(jīng)被證明可以導(dǎo)致神經(jīng)、造血、細胞及心血管等系統(tǒng)的損傷，鎘攝入過量可以引起肝臟和腎臟的損傷［10］。無論是朱砂中主成分含量不達標(biāo)導(dǎo)致的藥效降低，還是存在其他重金屬元素超標(biāo)造成的器官損傷，均會嚴重影響朱砂質(zhì)量并危及臨床用藥安全［11］。朱砂藥材及飲片的染色、摻雜現(xiàn)象有可能出現(xiàn)在源頭即企業(yè)遴選朱砂原藥材或朱砂礦區(qū)采制加工過程中，也有可能是在流通環(huán)節(jié)中不良商販為謀取利益所致。希望各級藥品監(jiān)督管理部門、藥品檢驗部門在日后工作中繼續(xù)加強規(guī)范朱砂藥材及飲片市場的管理，重視朱砂礦區(qū)采制加工、企業(yè)遴選以及經(jīng)營流通等各個環(huán)節(jié)的監(jiān)管，同時加強對不法商販的打擊力度［11］，確保朱砂質(zhì)量，進而保障朱砂的臨床用藥安全。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［S］.2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：137.

［2］李萍.傳統(tǒng)中藥朱砂的研究概況［J］.華西藥學(xué)雜志，2010，25（5）：622.

［3］蔣秋桃，丁野，李文莉，等.《中國藥典》2010年版收載的含朱砂的中藥制劑質(zhì)量標(biāo)準探討［J］.中國藥事，2014，28（2）：141.

［4］陸遠富，時京珍，石京山，等.科學(xué)評價含雄黃、朱砂中成藥的安全性［J］.中國中藥雜志，2011，36（24）：3 402.

［5］國家食品藥品監(jiān)督管理局.藥品補充檢驗方法和檢驗項目批準件朱砂（水飛）［S］.2008003.

［6］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部［S］.2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：57.

［7］韓慧琴，宮曉平，曾春萍，等.染色紅花藥材中日落黃的檢測方法［J］.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2015，29（4）：66.

［8］張寧寧，梁國剛，張啟偉.不同產(chǎn)地朱砂中硫化汞的容量法測定［J］.中國中藥雜志，2005，30（22）：1 773.

［9］鄭琪，南鐵貴，袁媛，等.9種市售藥材中重金屬含量調(diào)查［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2015，21（3）：14.

［10］蔡續(xù)明.中藥臨床試驗設(shè)計應(yīng)重點考慮的若干要素［J］.中國新藥與臨床雜志，2009，28（7）：557.

［11］梅全喜.對中藥安全性問題的探討［J］.中國藥房，2007，18（12）：881.

（編輯：張靜）

Quality Study on Cinnabar-analysis of Dyeing Status for Cinnabar

XING Xiao1，LIU Zhimin1，XU Tongtong1，GU Da2，LIANG Yubing1，ZHANG Xin1，YANG Jianlong1（1.Changchun Center for Food and Drug Control，Changchun 130012，China；2.Branch of Food and Biotechnology，Changchun Vocational Institute of Technology，Changchun 130033，China）

OBJECTIVE：To analyze the dyeing status of cinnabar and its pieces，and provide reference for its quality clinical safetey appicaton.METHODS：TLC was used for the qualitative identification of amaranth，carmine，erythrosine，acid red 73，808 udan and indirubin.HPLC-MS was used to detect the 808 udan：HPLC conditions were as follows，column was Acquity UPLC BEH C18with mobile phase of cetonitrile-0.1%formic acid（70∶30，V/V）at a flow rate of 0.3 ml/min，the detection wavelength was 520 nm；MS conditions were as follows，ion source was electrospray ionization source，scanning mode was positive ion scanning with full scanning tandem mass spectrometry，nebulizer pressure was 30 psi，drying gas was nitrogen，ion spray voltage was 4 000 V，collision energy was 30 V，and the injection volume was 5 μl.The volumetric method was used for content determination of HgS.RESULTS：TLC spots of amaranth，carmine，erythrosine，acid red 73，808 udan and indirubin were clear and wellseparated.4 batches of 808 udan dyeing were included in the 18 batches of samples，6 batches had non-compliance contents（including 3 batches of 808 udan dyeing）.CONCLUSIONS：Dyeing-doped and other quality problems exist in the cinnabaris in markets，which should be noticed.

Cinnabar；Dyeing；HgS；Quality

R917

A

1001-0408（2016）27-3864-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.27.40

＊博士。研究方向：中藥質(zhì)量安全評價。E-mail：xxiao83@foxmail.com

（2015-10-10

2016-01-27）