復(fù)方小兒止咳口服溶液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高研究Δ

張敏新，黃愛(ài)文，宋洪濤（南京軍區(qū)福州總醫(yī)院藥學(xué)科，福州　350025）

復(fù)方小兒止咳口服溶液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高研究Δ

張敏新＊，黃愛(ài)文，宋洪濤#（南京軍區(qū)福州總醫(yī)院藥學(xué)科，福州350025）

目的：優(yōu)化和提高復(fù)方小兒止咳口服溶液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法（TLC）對(duì)制劑中的甘草進(jìn)行定性鑒別；采用化學(xué)反應(yīng)法對(duì)制劑中吐根酊、氯化銨進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定制劑中甘草酸銨的含量：色譜柱為Agilent Zorbax XDB C18，流動(dòng)相為乙腈-0.2 mol/L乙酸銨溶液（20∶80，V/V），流速為1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10 μl。結(jié)果：甘草的TLC斑點(diǎn)清晰，分離良好，陰性對(duì)照無(wú)干擾。吐根酊、氯化銨的鑒別反應(yīng)陽(yáng)性特征顯著。甘草酸銨檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為6.08～72.96μg/ml（r=0.999 9）；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜1.0%；加樣回收率為99.69%～100.28%（RSD=0.20%，n=6）。結(jié)論：經(jīng)優(yōu)化和提高的標(biāo)準(zhǔn)可有效控制復(fù)方小兒止咳口服溶液的質(zhì)量。

復(fù)方小兒止咳口服溶液；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；高效液相色譜法

復(fù)方小兒止咳口服溶液為本院小兒科驗(yàn)方制劑，臨床主要用于小兒咳嗽、痰多。該藥原標(biāo)準(zhǔn)鑒別項(xiàng)只有甘草流浸膏、單糖漿、吐根酊和氯化銨的化學(xué)法鑒別，無(wú)相應(yīng)的薄層色譜法（TLC）鑒別，且含量測(cè)定是以滴定法測(cè)定處方中的氯化銨，由于滴定結(jié)果顏色干擾大，難以判斷滴定終點(diǎn)，因此誤差較大。為有效控制本制劑的質(zhì)量，筆者制定了本復(fù)方制劑中甘草（TLC法）、吐根、氯化銨（化學(xué)反應(yīng)法）的鑒別方法，并采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定有效成分甘草酸銨的含量。

1　材料

1.1儀器

1200型HPLC儀，包括G1316A型二極管陣列檢測(cè)器、Chemstation色譜工作站（美國(guó)Agilent公司）；AL204型分析天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；KQ-800KDE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2藥品與試劑

復(fù)方小兒止咳口服溶液（本院制劑室自制，批號(hào)：20153161、20153162、20153163，規(guī)格：100 ml/瓶）；甘草流浸膏（寶雞金森制藥有限公司，批號(hào)：20150203）；甘草苷對(duì)照品（批號(hào)：111610-201106，純度＞98%）、甘草對(duì)照藥材（批號(hào)：120904-201318）、甘草酸銨對(duì)照品（批號(hào)：110731-201116，純度＞98%）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2　方法與結(jié)果[1-2]

2.1甘草的TLC鑒別

取樣品20 ml，以水飽和的正丁醇提取2次，每次20 ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌3次，棄去水層，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為供試品溶液；取甘草苷對(duì)照品適量，加甲醇制成甘草苷質(zhì)量濃度為1 mg/ml的對(duì)照品溶液；再取甘草對(duì)照藥材粉末1 g，加甲醇30 ml，超聲（功率：250 W，頻率：40 kHz，下同）處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取3次，每次20 ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌3次，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；另取缺甘草流浸膏的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液。按TLC法［2015年版《中國(guó)藥典》（一部）］［3］試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2，V/V/V/V）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾，詳見(jiàn)圖1。

圖1　甘草的薄層色譜圖1.對(duì)照品；2.對(duì)照藥材；3～5.供試品；6.陰性對(duì)照Fig 1　TLC chromatograms of G.uralensis1.reference substance；2.control medicines；3-5.test samples；6.negative control

2.2吐根酊的鑒別

取樣品10 ml，加水5 ml，加氨試液2 ml使成堿性；加二氯甲烷20 ml振搖，分取二氯甲烷層，揮干，殘?jiān)酉×蛩?～2滴，混勻，加硫酸2滴及鉬酸少許，靜置30 min，觀察樣品顏色。結(jié)果，樣品顯綠色，為陽(yáng)性反應(yīng)。

2.3氯化銨的鑒別

取樣品2份，每份10 ml，置于50 ml納氏比色管中。一份加硝酸銀試液1.0 ml，搖勻，放置10 min，反復(fù)濾過(guò)，至濾液完全澄清，加規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液，再加水稀釋至50 ml，搖勻，暗處放置5 min，作為對(duì)照溶液；另一份加硝酸銀試液1.0 ml，再加水稀釋至50 ml，搖勻，暗處放置5 min，與對(duì)照溶液比較。結(jié)果，樣品呈陽(yáng)性反應(yīng)。

2.4含量測(cè)定

2.4.1色譜條件色譜柱：Agilent Zorbax XDB C18（150 mm× 4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.2mol/L乙酸銨（20∶80，V/V）；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μl。

2.4.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取甘草酸銨對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成甘草酸銨質(zhì)量濃度為300μg/ml的對(duì)照品貯備液。精密量取上述對(duì)照品貯備液適量，加流動(dòng)相制成甘草酸銨質(zhì)量濃度為20μg/ml的對(duì)照品溶液。

2.4.3供試品溶液的制備 （1）復(fù)方小兒止咳口服溶液供試品精密量取樣品1 ml，置于50 ml量瓶中，加甲醇30 ml，超聲處理30 min，取出，放冷，用甲醇定容，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 ml，置于25 ml量瓶中，加流動(dòng)相定容，搖勻，即得。（2）甘草流浸膏供試品溶液 精密量取甘草流浸膏2 ml，置于100 ml量瓶中，加甲醇40 ml，超聲處理30 min，取出，放冷，用甲醇定容，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 ml，置于50 ml量瓶中，加流動(dòng)相定容，搖勻，即得。

2.4.4陰性對(duì)照溶液的制備按復(fù)方小兒止咳口服溶液處方和制備工藝制備缺甘草流浸膏的陰性樣品，并按“2.4.3”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.4.5專屬性試驗(yàn)取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液適量，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見(jiàn)圖2。結(jié)果，在陰性對(duì)照溶液色譜圖上甘草酸銨出峰相應(yīng)位置未見(jiàn)色譜峰，表明本方法專屬性良好。

2.4.6線性關(guān)系考察分別精密量取“2.4.2”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液適量，置于10 ml量瓶中，用流動(dòng)相定容，搖勻，得質(zhì)量濃度為6.08～72.96μg/ml的系列對(duì)照品溶液。精密量取上述系列對(duì)照品溶液各10 μl，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以甘草酸銨質(zhì)量濃度（x，μg/ml）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為y=5 188.40x－2.67（r= 0.999 9）。結(jié)果表明，甘草酸銨檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為6.08～72.96μg/ml。

圖2　高效液相色譜圖A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照；1.甘草酸銨Fig 2　HPLC chromatogramsA.reference substance；B.test sample；C.negative control；1.ammonium glycyrrhizinate

2.4.7精密度試驗(yàn)取“2.4.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，甘草酸銨峰面積的RSD=0.74%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.4.8穩(wěn)定性試驗(yàn)取“2.4.3”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：20153161）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、12 h時(shí)按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，甘草酸銨峰面積的RSD=0.76%（n=6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.4.9重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批樣品（批號(hào)：20153161）適量，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算樣品含量。結(jié)果，甘草酸銨含量為3.55 mg/ml，RSD=0.78%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.4.10加樣回收率試驗(yàn)取已知含量樣品（批號(hào)：20153161）適量，共9份，每份1 ml，分別加入低、中、高質(zhì)量的甘草酸銨對(duì)照品，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4.11樣品含量測(cè)定取3批樣品各適量，分別按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算樣品含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

3　討論

2015年版《中國(guó)藥典》中甘草流浸膏鑒別用的薄層板為1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板，經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，上述薄層板與本試驗(yàn)所用薄層板的展開(kāi)效果比較，除了比移值不同外，分離效果基本相同。故最終選擇了硅膠G薄層板。

由于吐根對(duì)照藥材、吐根堿、吐根次堿等為毒性對(duì)照品，皆無(wú)法購(gòu)得，故其只能以化學(xué)反應(yīng)法進(jìn)行鑒別。同時(shí)，陰性溶液不顯綠色反應(yīng)，而受試品顯綠色，表明本方法可用于本制劑中吐根的鑒別。

表1　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）Tab 1　Results of recovery test（n=9）

2015年版《中國(guó)藥典》（二部）中氯化銨原料、氯化銨片皆是以硝酸銀滴定法對(duì)其含量測(cè)定，但經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本制劑中的甘草流浸膏中的某成分可與銀離子結(jié)合，使含量測(cè)定值偏高（約為120%）。故最終不將其列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。

表2　樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）Tab 2　Results of content determination of samples（n=3）

綜上所述，經(jīng)優(yōu)化和提高的標(biāo)準(zhǔn)可有效控制復(fù)方小兒止咳口服溶液的質(zhì)量。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［S］.2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：399.

［2］鞏偉，趙豫，趙慶華，等.十一味參龍口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中國(guó)藥房，2014，25（35）：3 323.

［3］衛(wèi)生部藥政局.中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范：西藥制劑［S］.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1995：55.

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（編輯：張靜）

Study on the Improving the Quality Standard for Compound PediatricAnticough Oral Solution

ZHANG Minxin，HUANG Aiwen，SONG Hongtao（Dept.of Pharmacy，F(xiàn)uzhou General Hospital of Nanjing Military Command，PLA，F(xiàn)uzhou 350025，China）

OBJECTIVE：To optimize and improve the quality standard for Compound pediatric anticough oral solution.METHODS：TLC was adopted for the qualitative identification of Glycyrrhiza uralensis；chemical reaction was adopted for the qualitative identification of ipecac tincture，ammonium chloride；and HPLC was adopted for the content determination of ammonium glycyrrhizinate：the column was Agilent Zorbax XDB C18with mobile phase of acetonitrile-0.2 mol/L ammonium acetate（20∶80，V/V）at a flow rate of 1.0 ml/min，the detection wavelength was 250 nm，column temperature was 30℃，and the injection volume was 10 μl.RESULTS：TLC spots of G.uralensis were clear and well-separated，negative control without interference.Differential response of ipecac tincture and ammonium chloride showed significant positive characteristics.The linear range of ammonium glycyrrhizinate was 6.08-72.96μg/ml（r=0.999 9）；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 1.0%；recovery was 99.69%-100.28%（RSD=0.20%，n=6）.CONCLUSIONS：Optimizing and improving the standard are helpful for the quality control of Compound pediatric anticough oral solution.

Compound pediatric anticough oral solution；Quality standard；TLC；HPLC

R917；R927

A

1001-0408（2016）27-3855-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.27.37

軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題（No.14ZJZ17）

＊藥師。研究方向：藥物分析。電話：0591-22859169。E-mail：280361089@qq.com

主任藥師，教授，博士生導(dǎo)師，博士。研究方向：藥物新劑型與制劑新技術(shù)。電話：0591-22859459。E-mail：sohoto@vip.163.com

2015-09-14

2015-11-08）