UPLC-MS/MS法測定注射用埃索美拉唑鈉的含量Δ

張雪寧，張利敏，張　靜，周春華，張　乾，候志飛（.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院藥學(xué)部，石家莊　050000；.河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥工程系，石家莊　05006）

UPLC-MS/MS法測定注射用埃索美拉唑鈉的含量Δ

張雪寧1＊，張利敏2#，張靜2，周春華1，張乾1，候志飛2（1.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院藥學(xué)部，石家莊050000；2.河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥工程系，石家莊050026）

目的：采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）測定注射用埃索美拉唑鈉的含量。方法：UPLC色譜柱為ZORBAX Eclipse Plus C18，流動相為0.1%甲酸-甲醇（73∶27，V/V），流速為0.3 ml/min，柱溫為35℃，分析時間為5 min，進(jìn)樣量為2 μl；離子化模式為正離子模式，離子源溫度為150℃，毛細(xì)管電壓為3.0 kV，錐孔電壓為50 V，錐孔氣流量為150 L/Hr，脫溶劑氣溫度為450℃，脫溶劑氣流量為900 L/Hr，霧化氣壓力為7.0 Bar，母離子掃描范圍為100～800 mz/mz，工作模式為多反應(yīng)監(jiān)測模式。結(jié)果：埃索美拉唑的檢測質(zhì)量濃度線性范圍為0.2～20.0 ng/ml（r=0.999 7）；定量限為50 pg/ml；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗的RSD＜2%；回收率為99.93%～100.05%（RSD=0.1%，n=9）。結(jié)論：該方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于測定注射用埃索美拉唑鈉的含量。

注射用埃索美拉唑鈉；含量測定；超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

埃索美拉唑為新一代的質(zhì)子泵抑制劑，是奧美拉唑的左旋異構(gòu)體，對胃食管反流和已愈合的腐蝕性食管炎的維持治療均有顯著療效［1-2］。該藥于2001年在美國和歐洲國家獲準(zhǔn)上市，2003年在我國獲準(zhǔn)上市。該藥是通過特異性抑制胃壁細(xì)胞質(zhì)子泵減少胃酸分泌來發(fā)揮作用［3-5］，由于其具有強(qiáng)烈而持久的酸抑制作用，同時對胃黏膜也有一定的保護(hù)作用，因此該藥是目前治療酸相關(guān)性疾病的首選藥物［6-11］。目前對埃索美拉唑鈉的含量測定有滴定法和高效液相色譜法［12］，但尚未見采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）測定該藥含量的報道，因此本課題組參考相關(guān)文獻(xiàn)［13］，采用UPLC-MS/MS法測定注射用埃索美拉唑鈉的含量，以建立專屬性強(qiáng)、靈敏度高，操作簡單、快速測定含量的方法。

1　材料

1.1儀器

ACQUITY UPLC I-Class型UPLC儀（美國Waters公司）；Xevo TQ-S型三重四極桿質(zhì)譜儀（美國Waters公司）；PL203型萬分之一電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；SD1500型超聲波清洗儀（北京中晟銘科技有限公司，功率：200 W，頻率：30 kHz）。

1.2藥品與試劑

注射用埃索美拉唑鈉（阿斯利康制藥有限公司，批號：1511145、1512192、1601016，規(guī)格：40 mg/支）；埃索美拉唑鈉對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：510060-201401，純度：100.0%）；甲醇、甲酸、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2　方法與結(jié)果

2.1試驗條件

2.1.1UPLC色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動相：0.1%甲酸-甲醇（73∶27，V/V）；柱溫：35℃；流速：0.3 ml/min；分析時間：5 min；進(jìn)樣量：2 μl。

2.1.2MS/MS離子化模式：正離子（ESI+）模式；離子源溫度：150℃；毛細(xì)管電壓：3.0 kV；錐孔電壓：50 V；錐孔氣流量：150 L/Hr；脫溶劑氣溫度：450℃；脫溶劑氣流量：900 L/Hr；霧化氣壓力：7.0 Bar；監(jiān)測模式：多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）；碰撞能量（CE）：10/15 eV；母離子掃描范圍：100～800 mz/mz；二級主要裂解碎片：198.2和168.2。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液精密稱取埃索美拉唑鈉對照品10 mg，置于100 ml量瓶中，加甲醇-水（80∶20，V/V）溶解并定容，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液適量，加甲醇-水（80∶20，V/V）稀釋制成質(zhì)量濃度為0.5 ng/ml的對照品溶液。

2.2.2供試品溶液精密稱取樣品適量，置于100 ml量瓶中，加甲醇-水（80∶20，V/V）溶解并定容，制成質(zhì)量濃度為0.5 ng/ ml的供試品溶液。

2.2.3空白樣品溶液按樣品的處方比例稱取空白輔料適量，按“2.2.2”項下方法制備空白樣品溶液。

2.3系統(tǒng)適用性試驗

取“2.2”項下對照品溶液、供試品溶液和空白樣品溶液各適量，按“2.1”項下試驗條件進(jìn)樣測定，記錄色譜和二級質(zhì)譜，詳見圖1。由圖1可知，理論板數(shù)以埃索美拉唑計≥5 000；峰形良好，分離度＞1.5。結(jié)果表明，輔料不干擾樣品的測定。

2.4線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.1”項下對照品溶液適量，用甲醇-水（80∶20，V/V）稀釋制成質(zhì)量濃度分別為0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、20.0 ng/ml的溶液，搖勻，作為系列線性溶液。取上述溶液適量，按“2.1”項下試驗條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度（x，ng/ml）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為y=169.08x+14.852 0（r=0.999 7）。結(jié)果表明，埃索美拉唑的檢測質(zhì)量濃度線性范圍為0.2～20.0 ng/ml。

2.5定量限考察

取“2.2.1”項下對照品溶液適量，用甲醇-水（80∶20，V/V）逐級稀釋，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時，計算定量限。結(jié)果，埃索美拉唑的定量限為50 pg/ml。

2.6精密度試驗

圖1　提取離子流圖A.對照品總離子流；B.對照品特征離子流（198.2）；C.對照品特征離子流（168.2）；D.供試品總離子流；E.供試品特征離子流（198.2）；F.供試品特征離子流（168.2）；G.空白樣品溶液總離子流；H.空白樣品溶液特征離子流（198.2）；I.空白樣品溶液特征離子流（168.2）；J.對照品二級質(zhì)譜圖；K.供試品二級質(zhì)譜圖Fig 1　Extracted ion flow chromatogramsA.total ion flow of reference substance；B.characteristic ion flow of reference substance（198.2）；C.characteristic ion flow of reference substance（168.2）；D.total ion flow of test sample；E.characteristic ion flow of test sample（198.2）；F.characteristic ion flow of test sample（168.2）；G.total ion flow of blank sample solution；H.characteristic ion flow of blank sample solution（198.2）；I.characteristic ion flow of blank sample solution（168.2）；J.secondary mass chromatogram of reference substance；K.secondary mass chromatogram of test sample

精密量取“2.2.1”項下對照品溶液適量，按“2.1”項下試驗條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，埃索美拉唑峰面積的RSD=0.9%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.7穩(wěn)定性試驗

取“2.2.2”項下供試品溶液適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、12 h時按“2.1”項下試驗條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，埃索美拉唑峰面積的RSD=0.7%（n=5），表明供試品溶液在室溫下12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8重復(fù)性試驗

精密量取樣品（批號：1511145）適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，共6份，密封，搖勻，按“2.1”項下試驗條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，埃索美拉唑峰面積的RSD=0.8%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9回收率試驗

按樣品的處方取空白輔料9份，分別置于100 ml量瓶中，每3份精密加入低、中、高質(zhì)量的對照品各適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下試驗條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計算回收率，結(jié)果詳見表1。

表1　回收率試驗結(jié)果（n=9）Tab 1　Results of recovery test（n=9）

2.10樣品含量測定

取3批樣品各適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下試驗條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計算樣品含量，結(jié)果詳見表2。

表2　樣品含量測定結(jié)果（n=3，%）Tab 2　Results of content determination of samples（n=3，%）

3　討論

3.1液相條件的優(yōu)化

本試驗采用ZORBAX Eclipse Plus C18（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）作為色譜柱時，分別考察了乙腈-水、甲醇-水、0.1%甲酸-乙腈、0.1%甲酸-甲醇、2 mmol/L乙酸銨-甲醇和2 mmol/L乙酸銨-乙腈等6種流動相體系對色譜行為的影響。結(jié)果，乙腈-水和甲醇-水作為流動相時，色譜峰拖尾、峰形較差。將流動相中的水分別更換為0.1%甲酸和2 mmol/L乙酸銨后，色譜峰拖尾現(xiàn)象和峰型均有很大改善，但采用2 mmol乙酸銨體系靈敏度較差。故選擇0.1%甲酸溶液體系。進(jìn)一步對0.1%甲酸-乙腈和0.1%甲酸-甲醇進(jìn)行比較，結(jié)果采用0.1%甲酸-甲醇作流動相時色譜峰峰形更好，靈敏度更高。因此，選擇0.1%甲酸-甲醇作為本試驗的流動相。

3.2質(zhì)譜條件的優(yōu)化

進(jìn)行質(zhì)譜條件探索時，本試驗首先采用較高濃度的埃索美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，在ESI+模式下進(jìn)行母離子全掃描，確定其準(zhǔn)分子離子，然后以準(zhǔn)分子離子為母離子，對其子離子進(jìn)行全掃描，獲得二級質(zhì)譜響應(yīng)較強(qiáng)的子離子，最后以MRM進(jìn)行采集。在對埃索美拉唑進(jìn)行參數(shù)優(yōu)化時，采用0.1%甲酸-甲醇（73∶27，V/V）為流動相，分別采用ESI+和ESI－離子模式進(jìn)行調(diào)節(jié)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ESI+模式下的靈敏度遠(yuǎn)高于ESI－模式，且在ESI+模式下離子對346.2/198.2的響應(yīng)值比離子對346.2/168.2高。因此，本試驗最終選擇信噪比高的346.2/198.2作為定量離子對，346.2/168.2作為定性離子對。

綜上所述，本方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于測定注射用埃索美拉唑鈉的含量。

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（編輯：劉柳）

Content Determination of Esomeprazole Sodium for Injection by UPLC-MS/MS

ZHANG Xuening1，ZHANG Limin2，ZHANG Jing2，ZHOU Chunhua1，ZHANG Qian1，HOU Zhifei2（1.Dept.of Pharmacy，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China；2.Dept.of Pharmaceutical Engineering，Hebei Chemical and Pharmaceutical College，Shijiazhuang 050026，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of Esomeprazole sodium for injection.METHODS：UPLC-MS/MS was performed.The column of ZORBAX Eclipse Plus C18with 0.1%formic acid-methanol（73∶27，V/V）at a flow rate of 0.3 ml/min，column temperature was 35℃，analysis time was 5 min，injection volume was 2 μl；ionization mode was positive ion mode，ion source temperature was 150℃，capillary voltage was 3.0 kV，cone voltage was 50 V，cone flow was 150 L/Hr，desolvation temperature was 450℃，desolvation gas flow was 900 L/Hr，nebuliser pressure was 7.0 Bar，parent ion scan range was 100-800 mz/mz，working mode was multiple reaction monitoring mode.RESULTS：The linear range of esomeprazole was 0.2-20.0 ng/ml（r=0.999 7）；the limit of quantitation was 50 pg/ml；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 2%；recovery was 99.93%-100.05%（RSD=0.1%，n=9）.CONCLUSIONS：The method is simple and accurate，and can be used for content determination of Esomeprazole sodium for injection.

Esomeprazole sodium for injection；Content determination；UPLC-MS/MS

R917

A

1001-0408（2016）27-3852-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.27.36

河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點課題計劃（No.20150261）

＊主管藥師。研究方向：臨床藥學(xué)和藥物分析。電話：0311-66007385。E-mail：Zxn20160101@sina.com

副教授，碩士。研究方向：藥學(xué)教學(xué)及新藥研發(fā)。電話：0311-85110165。E-mail：Zhanglimin201601@sina.com

（2016-04-20

2016-07-19）