張偉麗, 陳 超
(信陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院, 河南 信陽 464000)
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HOXB7基因沉默對(duì)人胃癌細(xì)胞活力、遷移和侵襲的影響
張偉麗△, 陳 超
(信陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院, 河南 信陽 464000)
目的: 探討靶向沉默HOXB7基因?qū)θ宋赴㏒GC-7901細(xì)胞活力、遷移和侵襲作用的影響及潛在機(jī)制。方法: 設(shè)計(jì)靶向HOXB7的siRNA,然后瞬時(shí)轉(zhuǎn)染胃癌SGC-7901細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot法檢測(cè)siRNA靶向沉默的效果。MTT法檢測(cè)細(xì)胞的活力,Western blot法檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CDK4和cyclin D1蛋白的表達(dá)水平,Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SGC-7901細(xì)胞的侵襲能力,實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot法檢測(cè)胃癌SGC-7901細(xì)胞PTEN和VEGF的表達(dá)水平以及p-AKT的蛋白水平。結(jié)果: 胃癌組織中HOXB7基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá)均顯著高于對(duì)照組織。siRNA可有效靶向沉默SGC-7901細(xì)胞中HOXB7的表達(dá),且沉默HOXB7表達(dá)后SGC-7901細(xì)胞活力明顯下降,同時(shí)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CDK4和cyclin D1的表達(dá)亦下調(diào)。靶向沉默HOXB7可明顯抑制SGC-7901細(xì)胞中AKT的磷酸化水平,抑制胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移,同時(shí)下調(diào)VEGF的表達(dá)水平,抑制胃癌組織中的腫瘤血管生成。結(jié)論:HOXB7作為一個(gè)癌基因,可上調(diào)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CDK4、cyclin D1和侵襲相關(guān)分子VEGF的表達(dá),上調(diào)AKT的磷酸化水平,進(jìn)而抑制PTEN的功能,促進(jìn)胃癌細(xì)胞SGC-7901的生長(zhǎng)、遷移和侵襲能力。
HOXB7基因; 胃癌; 細(xì)胞活力; 細(xì)胞侵襲; 細(xì)胞遷移
胃癌是最常見的惡性腫瘤之一,流行病學(xué)調(diào)查顯示在我國(guó)胃癌仍舊是第4位的惡性腫瘤,在癌癥死亡譜中胃癌居于第3位,僅次于肺癌和肝癌,嚴(yán)重危害人民的生命健康[1]。胃癌周圍的淋巴組織較為豐富,極易發(fā)生局部的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[2-3],因此盡管藥物治療在不斷改進(jìn),胃癌的5年生存率顯著低于30%[4],因此研究胃癌增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制對(duì)于胃癌的治療具有重要意義。
HOX為一類編碼轉(zhuǎn)錄因子參與調(diào)控組織器官分化發(fā)育的基因家族[5],HOX基因通常分為I類和II類,其中I類HOX基因即為我們通常所說的HOX基因,其又分為幾個(gè)亞系包括HOXA、HOXB、HOXC和HOXD。HOX基因直接編碼轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子或通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)間接調(diào)控許多基因的表達(dá)[6]。HOX的表達(dá)具有器官特異性,在食管癌中HOXA9基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化程度升高而表達(dá)下調(diào)[7],然而在急性淋巴細(xì)胞性白血病中HOXA9基因的表達(dá)上調(diào)[8]。HOXB13基因在前列腺中表達(dá)下調(diào)而在侵襲性乳腺導(dǎo)管癌中的表達(dá)顯著升高[9],因此HOX基因在癌癥中的具體作用要視器官特異性而定。HOXB7作為HOX家族的一員,不僅參與調(diào)節(jié)正常組織器官的生長(zhǎng)發(fā)育[10],而且在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[5]。在胃癌組織的一項(xiàng)基因芯片分析結(jié)果顯示HOXB7基因在胃癌組織中表達(dá)較癌旁組織中明顯升高[11],表明HOXB7基因表達(dá)水平可能和癌癥的侵襲以及不良預(yù)后有關(guān)[12-13]。HOXB7對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移的影響,目前尚不可知。因此,本研究通過構(gòu)建HOXB7 siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染胃癌SGC-7901細(xì)胞,觀察SGC-7901細(xì)胞的活力、侵襲以及遷移能力,探究HOXB7調(diào)控胃癌腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移的潛在機(jī)制,尋找胃癌治療的潛在靶位點(diǎn),為胃癌的防治提供理論依據(jù)。
1 細(xì)胞和試劑
人胃癌組織取自我科2015年3月~2015年12月間的行胃大部切除術(shù)的胃癌患者癌癥組織,共48例。所有樣本都經(jīng)通過組織病理學(xué)診斷判斷癌癥分級(jí),選擇胃癌分級(jí)在ⅠB期的隆起型癌癥組織作為實(shí)驗(yàn)組研究對(duì)象,將癌旁3 cm的正常組織作為對(duì)照組研究對(duì)象。在術(shù)前告知患者取胃癌標(biāo)本的目的,并簽署知情同意書,且該研究方案已經(jīng)通過醫(yī)院倫理委員會(huì)審批。
人胃癌SGC-7901細(xì)胞購于ATCC。胎牛血清(Gibco);DMEM培養(yǎng)基(Thermo);四甲基偶氮唑鹽(MTT)和二甲基亞砜(DMSO)購自Sigma??笻OXB7、CDK4和cyclin D1多克隆抗體,抗tubulin、AKT、p-AKT、PTEN和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)單克隆抗體均購自Cell Signaling Technology;HOXB7、VEGF、cyclin D1、CDK4和PTEN引物用Premier primer 5.0設(shè)計(jì),由上海杰李生物技術(shù)有限公司合成;HOXB7 siRNA(上海吉?jiǎng)P基因有限公司);增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑盒(Pierce);PVDF 膜、Transwell小室(Milliproe);轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 2000(Invitrogen);熒光染料Prime Script?反轉(zhuǎn)錄試劑盒和SYBR Green(TaKaRa)。
2 方法
2.1 檢測(cè)胃癌組織中HOXB7基因的表達(dá)水平 首先運(yùn)用real-time PCR法在mRNA水平檢測(cè)胃癌組織以及癌旁組織中HOXB7的表達(dá),同時(shí)在蛋白水平運(yùn)用Western blot法檢測(cè)胃癌組織以及癌旁組織中HOXB7的蛋白表達(dá)(具體方法見2.5和2.6)。
2.2 細(xì)胞培養(yǎng)和siRNA轉(zhuǎn)染 SGC-7901細(xì)胞用含有10%胎牛血清、1×105U/L青霉素和100 mg/L鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基,于37 ℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),待細(xì)胞生長(zhǎng)密度約為80%后,將細(xì)胞均勻地鋪板于12孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,待細(xì)胞貼壁密度達(dá)70%時(shí),按Lipofectamine2000的說明書進(jìn)行轉(zhuǎn)染。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分為未轉(zhuǎn)染對(duì)照組、轉(zhuǎn)染siRNA control的陰性對(duì)照組及轉(zhuǎn)染HOXB7 siRNA的基因沉默組。
2.3 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SGC-7901細(xì)胞均勻接種于 96 孔板,每孔200 μL,每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。轉(zhuǎn)染6 h后換含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液,于培養(yǎng)24 h、48 h和72 h后棄培養(yǎng)基,在避光條件下每孔加入100 μL MTT溶液(1 g/L)繼續(xù)培養(yǎng)4 h,然后避光條件下每孔加入DMSO 200 μL,室溫下放置30 min,振蕩 5 min后于酶標(biāo)儀上以空白孔調(diào)零,測(cè)定570 nm波長(zhǎng)處各孔的吸光度(A)值。以時(shí)間為橫坐標(biāo),各孔的A值為縱坐標(biāo),繪制細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。
2.4 Transwell小室侵襲試驗(yàn)檢測(cè)癌細(xì)胞的侵襲能力 在Transwell上層小室中加入DMEM培養(yǎng)基和Matrigel 1∶1混合的稀釋膠100 μL,37 ℃孵育6 h。收集轉(zhuǎn)染后的各組細(xì)胞消化制作成6×104/L的單細(xì)胞懸液,每孔500 μL接種于Transwell上層小室。將含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基加入Transwell下層小室,在 37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 h。輕輕地擦去小室上層貼壁生長(zhǎng)但未能穿過膜的細(xì)胞,在95%乙醇中固定15 min后吸掉乙醇,加1 g/L的結(jié)晶紫染色40 min后洗去多余染料,晾干加蓋玻片明膠封片,200倍放大鏡下觀察透膜細(xì)胞數(shù)。
2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)mRNA的表達(dá)水平 接種SGC-7901細(xì)胞于10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中,轉(zhuǎn)染siRNA后繼續(xù)培養(yǎng)48 h后收集細(xì)胞,按照TRIzol試劑盒的指示步驟提取SGC-7901細(xì)胞中的RNA,依照Invitrogen的M-MLV逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到cDNA,參照SYBR Green PCR系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)相關(guān)基因的表達(dá),相關(guān)引物序列見表1。
表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的引物序列
F: forward; R: reverse.
2.6 Western blot法檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平 為了檢測(cè)胃癌中HOXB7的表達(dá)及其在胃癌增殖、侵襲中的作用,我們利用Western blot法檢測(cè)了HOXB7以及VEGF-AKT信號(hào)通路相關(guān)分子的變化。首先利用組織裂解液RIPA提取胃癌組織或者siRNA轉(zhuǎn)染后的SGC-7901細(xì)胞總蛋白,BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。取等量蛋白樣品于十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳分離,電泳結(jié)束后將其轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上,分別用相應(yīng)的抗體孵育,顯影,用CCD成像系統(tǒng)收集條帶信號(hào)。使用 ImageJ軟件進(jìn)行條帶灰度分析, 以目的蛋白條帶灰度與內(nèi)參照蛋白條帶灰度的比值表示目的蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。
3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
使用SPSS 16.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。多因素的組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA),多組間的兩兩比較采用Bonferroni法。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
1 胃癌組織中HOXB7 mRNA和蛋白的表達(dá)水平
根據(jù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR的檢測(cè)結(jié)果,HOXB7 mRNA在胃癌組織中的表達(dá)量較癌旁組織明顯升高,將對(duì)照組(癌旁組織)歸一化處理后,癌組織中HOXB7的表達(dá)水平較對(duì)照組升高約5倍(P<0.01)。Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果同樣顯示HOXB7的蛋白水平在胃癌組織中的表達(dá)較癌旁組織顯著升高,見圖1。
Figure 1. The mRNA (A) and protein (B) expression levels of HOXB7 in the gastric carcinoma tissue. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group.
圖1 人胃癌腫瘤組織中HOXB7基因的表達(dá)水平
2 siRNA靶向沉默HOXB7基因表達(dá)的效果
用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)HOXB7 mRNA的相對(duì)表達(dá)量,可見轉(zhuǎn)染siRNA的基因沉默組與各對(duì)照組(未轉(zhuǎn)染的空白對(duì)照組和轉(zhuǎn)染siRNA control的陰性對(duì)照組)相比明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05),而未轉(zhuǎn)染的空白對(duì)照組和轉(zhuǎn)染siRNA control的陰性對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性;Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果同樣顯示siRNA干擾后HOXB7蛋白的表達(dá)量明顯降低,這表明HOXB7 siRNA的沉默效果有效,沉默效率約為75%,見圖2。
Figure 2.Silencing effect of siRNA onHOXB7 expression at mRNA (A) and protein (B) levels in the SGC-7901 cells. Mean±SD.n=3.**P<0.01vssh-HOXB7 group.
圖2 siRNA轉(zhuǎn)染SGC-7901細(xì)胞的沉默效果
3HOXB7基因靶向沉默對(duì)SGC-7901細(xì)胞活力的影響
如圖3所示,HOXB7基因沉默組24 h、48 h和72 h后細(xì)胞活力明顯低于未轉(zhuǎn)染的空白對(duì)照組和轉(zhuǎn)染siRNA control的陰性對(duì)照組,說明HOXB7基因靶向沉默可以抑制SGC-7901細(xì)胞的存活率。
4HOXB7基因靶向沉默對(duì)SGC-7901細(xì)胞中周期相關(guān)蛋白 CDK4和cyclin D1表達(dá)的影響
圖4所示,HOXB7基因沉默組CDK4和cyclin D1的mRNA水平均明顯低于空白對(duì)照組和siRNA control陰性對(duì)照組。同時(shí)HOXB7基因沉默組CDK4和cyclin D1的蛋白表達(dá)強(qiáng)度均較其他2組明顯降低,灰度計(jì)算結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05),表明HOXB7基因靶向沉默后SGC-7901細(xì)胞活力的下降可能與周期相關(guān)蛋白CDK4和cyclin D1表達(dá)下調(diào)有關(guān),見圖4。
Figure 3. The effect of HOXB7 on the viability of the SGC-7901 cells. Mean±SD.n=3.*P<0.05vssh-HOXB7 group.
圖3 SGC-7901細(xì)胞中的HOXB7對(duì)細(xì)胞存活率的影響
Figure 4.The effect of HOXB7 on the expression of cell cycle-related proteins. Mean±SD.n=3.*P<0.05vssh-HOXB7 group.
圖4 SGC-7901細(xì)胞中HOXB7對(duì)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的影響
5HOXB7基因靶向沉默對(duì)SGC-7901細(xì)胞侵襲能力的影響
通過Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的侵襲能力,與未轉(zhuǎn)染空白對(duì)照組和轉(zhuǎn)染siRNA control的陰性對(duì)照組比較,轉(zhuǎn)染HOXB7 siRNA的基因沉默組中染色陽性的細(xì)胞數(shù)量即穿膜細(xì)胞數(shù)量減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05),見圖5。
Figure 5. The effect of HOXB7 on cell invasion ability (×200). Mean±SD.n=3.*P<0.05vssh-HOXB7 group.
圖5 SGC-7901細(xì)胞中HOXB7對(duì)細(xì)胞侵襲能力的影響
6HOXB7基因靶向沉默對(duì)SGC-7901細(xì)胞中侵襲相關(guān)分子表達(dá)的影響
如圖6所示,HOXB7基因沉默組VEGF的mRNA表達(dá)水平明顯低于空白對(duì)照組和siRNA control陰性對(duì)照組,而PTEN的mRNA表達(dá)水平則升高。同時(shí)HOXB7基因沉默組VEGF蛋白的表達(dá)水平和AKT的磷酸化水平均較其它2個(gè)對(duì)照組降低,同時(shí)HOXB7基因沉默后PTEN的表達(dá)水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。
Figure 6.The effect of HOXB7 on the expression of the cell invasion-related proteins. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vssh-HOXB7 group.
圖6 SGC-7901細(xì)胞中的HOXB7對(duì)細(xì)胞中細(xì)胞侵襲相關(guān)蛋白的影響
胃癌是全球最常見的消化道惡性腫瘤之一[14],通常在胃癌出現(xiàn)明顯癥狀時(shí)多已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移[15],而且胃癌術(shù)后病人多發(fā)生轉(zhuǎn)移通常導(dǎo)致胃癌病人的術(shù)后五年生存率很低[16]。目前對(duì)于HOXB7在胃癌中的作用目前尚不明確,基因芯片檢測(cè)結(jié)果顯示HOXB7基因在胃癌組織中的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織[17],同樣,我們搜集我科術(shù)后胃癌患者手術(shù)標(biāo)本,發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中HOXB7的水平,無論是mRNA還是蛋白水平均顯著高于癌旁組織(相對(duì)正常),因此我們猜測(cè)HOXB7可能在胃癌的增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲中具有一定的作用。
為了研究HOXB7對(duì)胃癌增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲的影響,本研究利用siRNA干擾HOXB7后,SGC-7901細(xì)胞的活力、轉(zhuǎn)移和侵襲能力均明顯下調(diào),提示HOXB7基因可能與胃癌的轉(zhuǎn)移和侵襲有關(guān)。同時(shí)我們進(jìn)一步探討其中的機(jī)制,發(fā)現(xiàn)HOXB7基因沉默后的SGC-7901細(xì)胞CDK4和cyclin D1水平下調(diào),細(xì)胞的活力下降。腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過程,首要的條件就是細(xì)胞間基質(zhì)和基底膜的破壞,突破局部組織的組織學(xué)屏障[18]。其次是在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組織形成新生血管,供應(yīng)高耗能腫瘤組織的能量供應(yīng)。HOXB7干擾后的SGC-7901細(xì)胞中的基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)下游分子VEGF表達(dá)下調(diào)[19-20],表明HOXB7基因在胃癌中可能作為一個(gè)癌基因的角色,促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)降解和腫瘤血管的生成,共同促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力。PI3K/AKT信號(hào)通路參與調(diào)控胃癌細(xì)胞的侵襲力,有研究表明胃癌組織中的AKT磷酸化水平較周圍癌旁組織明顯升高,PI3K/AKT信號(hào)通路下調(diào)腫瘤抑制因子PTEN的表達(dá)導(dǎo)致PTEN功能喪失,PTEN功能下調(diào)可以顯著促進(jìn)胃癌上皮細(xì)胞間質(zhì)化,促進(jìn)細(xì)胞癌變和轉(zhuǎn)移。因此我們進(jìn)一步設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)探索AKT磷酸化水平和PTEN的表達(dá)水平與HOXB7、胃癌組織侵襲轉(zhuǎn)移之間的機(jī)制關(guān)聯(lián)。我們發(fā)現(xiàn)在沉默HOXB7基因的SGC-7901細(xì)胞中,AKT磷酸化水平下降的同時(shí)PTEN的表達(dá)水平上升,這表明HOXB7可能通過上調(diào)AKT的磷酸化,抑制PTEN的表達(dá),促進(jìn)胃癌細(xì)胞的癌變、侵襲和轉(zhuǎn)移。
有研究表明HOXB7與上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化有關(guān),HOXB7蛋白參與破壞細(xì)胞連接蛋白和細(xì)胞骨架重調(diào),改變細(xì)胞形態(tài)。因此我們下一步將研究HOXB7基因和胃癌細(xì)胞骨架蛋白重調(diào)的關(guān)系和相關(guān)的分子機(jī)制。
綜上說述,我們發(fā)現(xiàn)HOXB7可能參與胃癌的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移,其機(jī)制可能包括:通過上調(diào)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CDK4和cyclin D1的表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的活力;通過上調(diào)胃癌細(xì)胞中AKT的磷酸化水平和抑制PTEN功能促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移;同時(shí)上調(diào)VEGF的表達(dá)水平,促進(jìn)胃癌組織中的腫瘤血管生成,為胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移提供必要的能量供應(yīng)條件。
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(責(zé)任編輯: 陳妙玲, 羅 森)
Effects of transcription factor HOXB7 silencing on viability, invasion and migration of SGC-7901 cells
ZHANG Wei-li, CHEN Chao
(MedicalSchool,XinyangVocationalandTechnicalCollege,Xinyang464000,China.E-mail:zhangweilis@163.com)
AIM: To explore the effects of transcription factorHOXB7 silencing on the viability, invasion and migration of SGC-7901 cells. METHODS: The siRNA was designed to specifically interfere the expression ofHOXB7. To assess the silence efficiency of the siRNA, the expression of HOXB7 at mRNA and protein levels was detected by real-time PCR and Western blot in the SGC-7901 cells transfected with siRNA. The cell viability was measured by MTT assay. Cell cycle-related proteins such as cyclin D1 and CDK4 were determined by Western blot. Transwell assay was performed to analyze the migration ability of the SGC-7901 cells. The mRNA and protein levels of the tumor invasion- and metastasis-related molecules, such as VEGF, PTEN and p-AKT, were also detected by real-time PCR and Western blot. RESULTS: The expression of HOXB7 at mRNA and protein levels was higher in the gastric carcinoma tissues than that in the normal gastric tissues. The expression of HOXB7 at mRNA and protein levels was knockdown by siRNA. After silencing ofHOXB7 gene expression, the viability of the SGC-7901 cells decreased, the expression of cyclin D1, CDK4 and VEGF was down-regulated, and the phosphorylation level of AKT was also obviously decreased. CONCLUSION: HOXB7 effectively promotes the viability, invasion and migration of gastric carcinoma cells by up-regulating the expression of cyclinD1, CDK4 and VEGF, and increasing the phosphorylation level of AKT to inhibit PTEN function.
HOXB7 gene; Gastric carcinoma; Cell viability; Cell invasion; Cell migration
1000- 4718(2016)10- 1824- 06
2016- 05- 13
2016- 07- 28
△通訊作者 Tel: 0376-6283606; E-mail: zhangweilis@163.com
R730.23
A
10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.10.014
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