普洱茶對(duì)高脂血癥大鼠血脂、血漿中血栓B2、6-酮前列腺素F1α水平影響

江新鳳，邵宛芳*

(1.江西省蠶桑茶葉研究所，江西 南昌 330202；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)龍潤普洱茶學(xué)院，云南 昆明 650201)

普洱茶對(duì)高脂血癥大鼠血脂、血漿中血栓B2、6-酮前列腺素F1α水平影響

江新鳳1，邵宛芳2,*

(1.江西省蠶桑茶葉研究所，江西 南昌 330202；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)龍潤普洱茶學(xué)院，云南 昆明 650201)

采用高脂飼料飼喂法建立高脂血癥大鼠模型，同時(shí)以0.5、1.0、2.0g/(kg·d) 3種普洱茶的劑量飼喂昆明種SPF級(jí)雌性大鼠35d后，檢測大鼠血液總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的含量，采用ELISA法定量測定大鼠血漿血栓素B2(thromboxaneB2，TXB2)、6-酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)的含量。結(jié)果表明，普洱茶能明顯降低模型大鼠血液TG、TC、LDL-C、TXB2含量，提高HDL-C、6-keto-PGF1α含量。

普洱茶；高脂血癥；血栓素B2；6-酮前列腺素F1α

歷史記載，普洱茶具有消食除毒、理氣去脹、清熱化痰、驅(qū)風(fēng)醒酒、解除油膩、明目清心、治痢抑菌等顯著的藥理功效[1-3]。高血脂表現(xiàn)為血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)2項(xiàng)或l項(xiàng)增高，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)升高，而高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)降低。其發(fā)生往往導(dǎo)致冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化(AS)等疾病的發(fā)生。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，人們物質(zhì)生活水平的不斷提高，這類疾病是當(dāng)今社會(huì)常見和多發(fā)性疾病，也是世界衛(wèi)生組織確定的疑難性疾病之一?，F(xiàn)代研究結(jié)果證明茶葉有很好的降脂、減肥功效[4-5]，且未發(fā)現(xiàn)有任何毒副作用，近年來隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，國內(nèi)外專家從不同角度研究了普洱茶的生物活性作用，對(duì)普洱茶的抗氧化、減肥、降血脂、防治心腦血管疾病、健齒護(hù)牙及抗癌等效應(yīng)進(jìn)行了探討。而且茶學(xué)界和醫(yī)學(xué)界的科學(xué)工作者都在此領(lǐng)域作了細(xì)致的研究，但是普洱茶預(yù)防高血脂的相關(guān)研究與報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察普洱茶水提物對(duì)大鼠血脂水平調(diào)節(jié)及對(duì)血栓素B2(TXB2)、6-酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)水平調(diào)節(jié)作用，為普洱茶保健功效的開發(fā)應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

普洱茶(生、熟)由云縣天龍生態(tài)茶葉有限責(zé)任公司生產(chǎn)；生產(chǎn)日期：2007年6月；衛(wèi)生許可證號(hào)：[2006]第530922-000132。

普洱茶生茶：是以符合普洱茶產(chǎn)地環(huán)境條件下生長的云南大葉種茶樹鮮葉為原料，經(jīng)殺青、揉捻、日光干燥、蒸壓成型等工藝制成的緊壓茶。其品質(zhì)特征為：外形色澤墨綠、香氣清純持久、滋味濃厚回甘、湯色綠黃清亮、葉底肥厚黃綠。

普洱茶熟茶：是以符合普洱茶產(chǎn)地環(huán)境條件的云南大葉種曬青毛茶為原料，采用特定工藝、經(jīng)后發(fā)酵(快速后發(fā)酵或緩慢后發(fā)酵)加工形成的散茶和緊壓茶。其品質(zhì)特征為：外形色澤紅褐、內(nèi)質(zhì)湯色紅濃明亮、香氣獨(dú)特陳香、滋味醇厚回甘、葉底紅褐。

基礎(chǔ)飼料由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；高脂飼料：基礎(chǔ)飼料78.8%、豬油10%、蛋黃粉10%、膽固醇1%、膽鹽0.2%[6]，自制。

總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C) 北京北化康泰臨床試劑有限公司；血栓素B2、6-酮前列腺素F1α試劑盒 南京建成生物工程研究所。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)環(huán)境

SPF級(jí)SD雄性大鼠96只，體質(zhì)量(225±19)g，由昆明醫(yī)學(xué)院試驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(滇) 2005-0008。

溫度(21.91±0.82)℃、濕度(62.16±4.27)%、SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(滇) 2005-0004。發(fā)證單位：云南省科學(xué)技術(shù)廳。

1.3 儀器與設(shè)備

TMS-1024全自動(dòng)生化分析儀 濟(jì)南漢方醫(yī)療器械有限公司；DFM-96型多管放射免疫記數(shù)器 北京市永光明醫(yī)療儀器廠；Nikon 50i顯微鏡、Mivnt顯微圖像分析系統(tǒng) 北京唯恩視信科技發(fā)展有限公司；Bio-Rad Model 550 Microplate Reader酶標(biāo)儀 眾成機(jī)電技術(shù)公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分成8組，分別是：陰性對(duì)照組(C G)、模型組(M G)、普洱茶生茶低劑量組(UPLG)、普洱茶生茶中劑量組(UPMG)、普洱茶生茶高劑量組(UPHG)、普洱茶熟茶低劑量組(APLG)、普洱茶熟茶中劑量組(APMG)、普洱茶熟茶高劑量組(APHG)。具體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

根據(jù)日本東京桑也研究推薦成人每日平均用茶量6g[6-7]，我國男女總平均體質(zhì)量為60kg，則成人每日用茶量為0.1g/kg，根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》[6]的要求，各種動(dòng)物至少應(yīng)設(shè)3個(gè)劑量組，其中一個(gè)劑量應(yīng)相當(dāng)于人體推薦攝入量(折算為每千克質(zhì)量劑量)的5倍(大鼠)，且最高劑量不超過人體推薦量的30倍，在此基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)采用SD大鼠按人體推薦量的5倍作為最低劑量，中、高劑量分別為人體推薦量的10、20倍，即0.5、1.0、2.0g/(kg·d)。

表1 實(shí)驗(yàn)大鼠分組及劑量設(shè)計(jì)(n=12)Table 1 Grouping and dosage design of experimental mice (n=12)

以基礎(chǔ)飼料喂飼大鼠1周后，對(duì)各組實(shí)驗(yàn)大鼠喂飼高脂飼料，根據(jù)大鼠的體質(zhì)量，按各組劑量設(shè)計(jì)進(jìn)行灌胃，每天灌胃1次，高脂對(duì)照組灌以相同體積的蒸餾水，連續(xù)35d后，禁食12h，心臟取血測定各項(xiàng)血脂指標(biāo)及TXB2、6-keto-PGF1α水平。測定步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，多個(gè)樣本實(shí)驗(yàn)的相關(guān)指標(biāo)比較借助Microsoft Excel和SPSS17.0 for windows軟件包進(jìn)行單因素方差分析，并以LDS法進(jìn)行各組間的兩兩比較，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 大鼠體質(zhì)量變化

由表2可知，給藥前，各組體質(zhì)量間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，表明開始實(shí)驗(yàn)驗(yàn)時(shí)根據(jù)TC隨機(jī)分組，體質(zhì)量間無明顯差異，給藥前的分組科學(xué)。

給藥結(jié)束前的第5周，普洱茶各個(gè)給藥組均能明顯抑制體質(zhì)量，普洱茶生茶、熟茶組的體質(zhì)量明顯低于模型組(P＜0.01)，普洱茶生茶3個(gè)劑量組、普洱茶熟茶3個(gè)劑量組組間體質(zhì)量無明顯差異(P＞0.05)。第5周，模型組與其他各組有極顯著性差異。普洱茶生茶中劑量組、普洱茶生茶高劑量組，普洱茶熟茶高劑量組與陰性對(duì)照組相比有極顯著性差異(P＜0.01)。結(jié)果表明普洱茶熟茶、生茶均能明顯預(yù)防高脂飲食引起的SD大鼠體質(zhì)量增長的作用，可達(dá)到正常水平。

2.2 攝食量

由表3可知，給藥的第1～5周，普洱茶6個(gè)劑量組平均攝食量與高脂模型組基本相當(dāng)。普洱茶(生茶、熟茶)連續(xù)灌胃5周，未影響到SD大鼠高脂飲食的攝食量。

表2 普洱茶高脂血癥大鼠體質(zhì)量變化Table 2 Effect of Pu-erh tea on body weight of hyperlipidemic mice g

表3 普洱茶對(duì)高脂血癥大鼠攝食量的影響Table 3 Effect of Pu-erh tea on food intake of hyperlipidemic mice g/(kg·d)

2.3 大鼠血脂指標(biāo)

表4 普洱茶對(duì)大鼠血脂水平的影響Table 4 Effect of Pu-erh tea on blood lipid level of hyperlipidemic mice

由表4可知，模型組大鼠血脂TC、TG和LDL-C含量明顯升高，而HDL-C含量卻明顯降低，與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。給予大鼠灌胃普洱茶(包括生茶和熟茶)35d后，各組血脂水平TC、TG、LDL-C明顯下降，HDL-C上升。結(jié)果表明：通過35d給大鼠喂飼高脂飼料，大鼠均形成了高脂血癥，普洱茶有調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)大鼠血脂的效果。

2.4 普洱茶對(duì)大鼠血漿中TXB2、6-酮前列腺素F1α水平的影響

表5 實(shí)驗(yàn)大鼠血漿中TBX2，6-keto-PGF1α含量Table 5 Plasma TXB2 and 6-keto-PGF1α levels in hyperlipidemic mice

由表5可見，普洱茶生茶、熟茶6個(gè)劑量組，除生茶中劑量組外，血漿中TXB2質(zhì)量濃度均顯著低于模型組(P＜0.05，P＜0.01)，與陰性對(duì)照組無顯著性差異(P＞0.05)，表明普洱茶生、熟茶均能明顯降低高脂飲食引起的高脂血癥大鼠血漿中TXB2含量水平，使其接近陰性對(duì)照組大鼠血漿內(nèi)TXB2含量水平。

普洱茶6個(gè)劑量組血漿中6-keto-PGF1α的質(zhì)量濃度均顯著高于模型組(P＜0.05，P＜0.01)，與陰性對(duì)照組無顯著性差異(P＞0.05)，普洱生茶3個(gè)劑量組、熟茶3個(gè)劑量組隨劑量增加，血漿中6-keto-PGF1α有質(zhì)量濃度增加的趨勢(P＞0.05)，表明普洱茶(生茶、熟茶)均有明顯預(yù)防高脂飲食引起的SD大鼠血漿6-keto-PGF1α濃度下降的作用。

3 討 論

3.1 普洱茶防治SD大鼠高脂血癥

血清中TC、TG含量增加是高脂血癥的主要指標(biāo)。HDL能夠?qū)⑼庵芙M織和細(xì)胞的膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟代謝，生成膽酸，以降低血中的膽固醇，是有效的抗AS因子。LDL的功能之一就是將膽固醇帶到外圍組織，充當(dāng)膽固醇的載體。所以LDL攜帶的膽固醇可能沉積在血管壁上，故血漿中LDL濃度過高對(duì)機(jī)體不利，且其氧化后可能損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，極可能形成AS早期病變[8-12]。

該實(shí)驗(yàn)對(duì)造模成功的大鼠血脂水平、攝食量等相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)中，普洱茶各劑量的給藥組攝食量與模型組相比，無明顯差異，也未發(fā)現(xiàn)各組大鼠出現(xiàn)腹瀉的癥狀，可見普洱茶并沒有通過抑制SD大鼠的食欲、減少攝食量而減少高脂的攝入，也沒有通過導(dǎo)瀉的消極方法增加排泄，影響正常營養(yǎng)物質(zhì)的攝入。普洱茶能通過減少小腸對(duì)TC的吸收，提高機(jī)體抗氧化酶活性，降低體內(nèi)自由基水平，防治脂質(zhì)代謝紊亂，是普洱茶降血脂的機(jī)制之一，在血脂升高過程中脂質(zhì)過氧化作用增強(qiáng)，抗脂質(zhì)過氧化物酶活性降低；普洱茶生茶和普洱茶熟茶能夠分解脂質(zhì)過氧化物，具有重要的防御自由基損傷作用，從而起到抗脂質(zhì)過氧化作用。結(jié)果表明：普洱茶具有較好的預(yù)防高脂血癥作用，能有效的調(diào)節(jié)因膳食引起的高脂血癥大鼠的血脂水平。

3.2 普洱茶對(duì)SD大鼠血漿血栓素B2和6-酮前列腺素F1α的影響

血栓素A2(TXA2)是血管收縮劑和血小板集促進(jìn)劑，是保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞免受損傷的重要環(huán)節(jié)。而前列腺素I2(PGI2)是血管內(nèi)皮細(xì)胞及某些細(xì)胞、組織代謝產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)，是一種血管擴(kuò)張劑和血小板解聚劑，并抑制血小板合成TXA2[13-15]，其合成減少與AS的發(fā)生密切相關(guān)，提高大鼠血漿PGI2的含量，改善血管內(nèi)皮功能，能有助于預(yù)防AS的發(fā)生。而TXA2與PGI2是相拮抗的，其平衡是維持正常血小板功能的基礎(chǔ)。TXB2、6-keto-PGF1α分別是TXA2、PGI2的代謝產(chǎn)物，兩者性質(zhì)穩(wěn)定，而TX A2、PG I2性質(zhì)不穩(wěn)定，故測定血漿中TXB2、6-keto-PGF1α能直接反映TXA2、PGI2的水平。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：SD大鼠喂飼高脂飼料后，高脂模型組血漿TXB2含量較對(duì)照組明顯升高，而6-keto-PGF1α比對(duì)照組含量明顯下降，從而導(dǎo)致血管功能異常，可能導(dǎo)致AS病變，經(jīng)灌胃35d普洱茶后，發(fā)現(xiàn)普洱茶能有效調(diào)節(jié)高脂血癥引起的TXA2和PGI2之間的不平衡，血漿中TXB2含量與模型組相比明顯下降，而6-keto-PGF1α相比于模型組明顯升高，表明普洱茶能有效的調(diào)節(jié)TXA2和PGI2之間的平衡，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞及減輕內(nèi)皮功能障礙，減少血栓形成和維護(hù)正常的血管舒縮功能，起到預(yù)防A S作用。

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Effect of Pu-erh Tea on Blood Lipid and Plasma TXB2and 6-Keto-PGF1αLevels in Hyperlipidemic Mice

JIANG Xin-feng1，SHAO Wan-fang2,*
(1. Jiangxi Sericulture and Tea Research Institute, Nanchang 330202, China；
2. College of Longrun Pu-erh Tea,Yunnan Agricultural University, Kunming 650201,China)

In order to establish a hyperlipidemic mouse model by feeding high-fat diet, SD mice fed Pu-erh tea at the dosages of 0.5, 1.0 g/(kg·d) and 2.0 g/(kg·d) for 35 consecutive days. The total cholesterol (TCHO), triglyceride (TG), high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) and low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C) in the blood of SD mice were determined. Meanwhile, plasma thromboxane-B2 (TXB2) and 6-keto-prostaglandin F1 α (6-keto-PGF1 α) were also analyzed by ELISA. The results showed that the levels of TCHO, TC, LDL-C and TXB2 in SD mouse blood exhibited a significant reduction in treatment groups while HDL-C and 6-keto-PGF1α revealed a significant increase (P＜0.05;P＜0.01) when compared with the control group. Key words：Pu-erh tea；hyperlipidemia；thromboxane B2 (TXB2)；6-keto-PGF1α

Q518.3

A

1002-6630(2011)17-0317-04

2010-12-15

國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(茶葉)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-23)；云南省生物資源創(chuàng)新辦科技項(xiàng)目(2007YNCXB-01-01)；“十一五”國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2007BAD58B04)

江新鳳(1985—)，男，碩士研究生，研究方向?yàn)椴枞~生化和功效。 E-mail：jiangxinyue003@163.com

*通信作者：邵宛芳(19 57—)，女，教授，學(xué)士，研究方向?yàn)椴枞~生物化學(xué)、茶葉品質(zhì)鑒評(píng)、普洱茶保健功效。E-mail：shaowf38@vip. sina.com