• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    空心蓮子草多糖的體外抗氧化活性

    2011-10-27 07:32:06蔡凌云周江菊黃國(guó)雪賀順美付發(fā)瓊
    食品科學(xué) 2011年17期
    關(guān)鍵詞:抗氧化劑蓮子空心

    蔡凌云,周江菊,樂(lè) 利,黃國(guó)雪,王 艷,賀順美,付發(fā)瓊

    (1.凱里學(xué)院環(huán)境與生命科學(xué)學(xué)院,貴州 凱里 556011;2.西華師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,西南野生動(dòng)植物資源保護(hù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川 南充 637002 )

    空心蓮子草多糖的體外抗氧化活性

    蔡凌云1,2,周江菊1,樂(lè) 利2,黃國(guó)雪1,王 艷1,賀順美2,付發(fā)瓊2

    (1.凱里學(xué)院環(huán)境與生命科學(xué)學(xué)院,貴州 凱里 556011;2.西華師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,西南野生動(dòng)植物資源保護(hù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川 南充 637002 )

    目的:研究空心蓮子草多糖抗氧化能力。方法:用對(duì)DPPH自由基清除率、DMPD自由基清除率和還原能力來(lái)考察不同質(zhì)量濃度的空心蓮子草多糖的體外抗氧化活性。結(jié)果:不同質(zhì)量濃度的空心蓮子草多糖的抗氧化能力不同;對(duì)DPPH自由基的EC50值為26.93mg/L(VC 47.22mg/L) ,對(duì)DMPD自由基的EC50值為73.42mg/L(VC 71.25mg/L)。結(jié)論:空心蓮子草多糖是良好的天然抗氧化劑。

    空心蓮子草;多糖;抗氧化

    空心蓮子草[Alternanthera philoxeroides( Mart.)Griseb]又名螃蜞菊、空心莧、水花生,革命草。為莧科(Amaranthaceae)蓮子草屬(AlternantheraForsk)植物空心蓮子草的干燥全草,該植物原產(chǎn)巴西,20世紀(jì)30年代由國(guó)外引種至我國(guó),由于繁殖能力強(qiáng),現(xiàn)以遍及北京、吉林、四川、湖北、湖南、廣東、福建、貴州等20多個(gè)省、自治區(qū)和直轄市,生長(zhǎng)于江、湖、河、塘、田野、水溝、荒濕地等處,自然資源極其豐富??招纳徸硬菪晕陡屎疅o(wú)毒,具有清熱、涼血、解毒的功效,臨床上用于治療麻疹、流行性感冒、乙型腦炎、流行性出血熱等病毒性疾患?,F(xiàn)代藥理研究表明,空心蓮子草提取物具有抗流行性出血熱病毒、流感病毒、乙肝病毒、狂犬病毒、皰疹病毒等多種病毒的作用[1-2]。迄今已從蓮子草屬植物中分離鑒定的化合物類(lèi)型包括皂苷、萜、蒽醌、有機(jī)酸、甾醇、生物堿、內(nèi)酰胺、氨基酸和無(wú)機(jī)鹽等,它們的生物活性廣泛,如抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、止瀉、抗病原微生物、鎮(zhèn)痛、抗肝損傷等[3-11]。在研究空心蓮子草活性成分中發(fā)現(xiàn):空心蓮子草多糖含量豐富,而多糖具有多種生物活性,如抗氧化活性[12-16]。開(kāi)發(fā)空心蓮子草的多糖類(lèi)物質(zhì)具有實(shí)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。但空心蓮子草多糖抗氧化研究未見(jiàn)報(bào)道,因此對(duì)其多糖的抗氧化作用進(jìn)行研究,旨在為空心蓮子草的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    空心蓮子草2011年6月采集于凱里學(xué)院實(shí)驗(yàn)田邊,經(jīng)生命科學(xué)學(xué)院周江菊教授鑒定為莧科蓮子草屬植物空心蓮子草(Alternanthera philoxeroides( Mart.)Griseb)。

    1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH) 日本和光純藥;N,N-二甲基對(duì)苯撐二胺(DMPD)、VC、葡聚糖 德國(guó)Ruibio公司;水為蒸餾水;其他試劑均為分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 瑞士Buchi公司;Eppendorf Research移液器 德國(guó)Eppendorf AG公司;TU-1900雙光束紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限公司;KQ3200DE數(shù)控超聲清洗器 昆山市超聲儀器有限公司;LD4-2低速離心機(jī) 北京醫(yī)用離心機(jī)廠(chǎng);BT124S電子天平 北京賽多利斯天平有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 樣品處理和提取液制備

    80℃干燥的空心蓮子草全草粉末過(guò)60目篩,置于干燥器中備用。精確稱(chēng)取上述空心蓮子草粉末10.00g,置500mL錐形瓶中,加水,料液比為1:15,超聲間歇提取2次,每次20min,功率100%,合并提取液,用Savag法反復(fù)除去蛋白,共5次。加入無(wú)水乙醇沉淀,放置在4℃冰箱冷藏過(guò)夜,于4000r/min離心10min,棄去上清液,離心后沉淀用水溶解后定容于50mL容量瓶,加入100g/L氫氧化鈉溶液100.0mL,100g/L銅試劑溶液100.0mL,沸水浴中煮沸2min,冷卻,4000r/min離心5min,棄去上清液。殘?jiān)孟礈煲合礈欤x心后棄去上清液,反復(fù)操作3次,殘?jiān)皿w積分?jǐn)?shù)10%硫酸溶液100.0mL溶解并轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,加水稀釋至刻度,混勻。此溶液為樣品測(cè)定液。

    1.3.2 多糖含量測(cè)定

    含量測(cè)定采用蒽酮-硫酸法,以葡聚糖為對(duì)照品。在波長(zhǎng)626nm處測(cè)定,以葡聚糖質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標(biāo),吸光度(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),其回歸方程為:A=10.425ρ+ 0.0045(r= 0.9992)。

    1.3.3 還原能力測(cè)定

    參照Oyaizu[17]的方法測(cè)定。取pH6.6的緩沖液和1g/100mL鐵氰化鉀溶液各2.5mL,加入不同質(zhì)量濃度的多糖溶液1mL,混勻后50℃水浴20min。加入10g/100mL三氯乙酸溶液2.5mL,混勻,4000r/min離心10min。取上清液2.5mL,加入蒸餾水和0.1g/100mLFeCl3各2.5mL,混勻,靜置10min后于700nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。用不同質(zhì)量濃度的VC代替樣品重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)。

    1.3.4 DPPH自由基清除率的測(cè)定

    定量準(zhǔn)確量取不同質(zhì)量濃度空心蓮子草多糖溶液,依次加入2.0mL 2mmol/L DPPH溶液,搖勻,在25℃水浴加熱反應(yīng)30min,取出,測(cè)定在517nm波長(zhǎng)處的吸光度。用不同質(zhì)量濃度的VC代替樣品重復(fù)上述實(shí)驗(yàn),測(cè)定吸光度。用蒸餾水代替DPPH溶液測(cè)定吸光度。用蒸餾水代替樣品和VC,測(cè)定吸光度。

    1.3.5 DMPD自由基清除率的測(cè)定

    10mL 100mmol/L DMPD溶液與2mL 0.1mol/L pH5.25醋酸鹽緩沖溶液混勻,加入0.2mL 0.05mol/L FeCl3,振蕩混勻,取上述溶液2mL,分別加入不同質(zhì)量濃度的多糖液和VC溶液,25℃水浴 10min。于波長(zhǎng)505nm處測(cè)定吸光度。用蒸餾水代替樣品和VC,在505nm波長(zhǎng)處的吸光度,用蒸餾水代替DMPD溶液,測(cè)定樣品和VC本底吸光度。

    1.3.6 抑制質(zhì)量濃度EC50的計(jì)算

    用SPSS 11.5 軟件以樣品質(zhì)量濃度與抑制率作回歸分析,根據(jù)擬合方程求出抑制率為50%時(shí)所需樣品的質(zhì)量濃度,即半抑制質(zhì)量濃度EC50。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 空心蓮子草多糖含量的測(cè)定結(jié)果

    取空心蓮子草多糖樣品測(cè)定液,在波長(zhǎng)626nm處測(cè)定吸光度,代入回歸方程計(jì)算其多糖含量為6.78mg/g。

    2.2 空心蓮子草多糖、VC對(duì)DPPH自由基的清除率

    圖1 空心蓮子草多糖、VC對(duì)DPPH自由基的清除率Fig.1 Scavenging rates of polysaccharides from APG and vitamin C at different concentrations against DPPH free radicals

    經(jīng)相關(guān)性分析,空心蓮子草多糖質(zhì)量濃度與DPPH自由基清除率的相關(guān)系數(shù)達(dá)0.984,VC質(zhì)量濃度與DPPH自由基清除率的相關(guān)系數(shù)達(dá)0.988。由圖1可知,隨空心蓮子草多糖質(zhì)量濃度、VC質(zhì)量濃度的增大對(duì)DPPH自由基的清除率增強(qiáng),但空心蓮子草多糖對(duì)DPPH自由基的清除率強(qiáng)于VC。在所選質(zhì)量濃度范圍內(nèi),空心蓮子草多糖質(zhì)量濃度、VC質(zhì)量濃度為50mg/L時(shí),對(duì)DPPH自由基的清除率最高。差異性分析表明,空心蓮子草多糖質(zhì)量濃度、VC質(zhì)量濃度對(duì)DPPH自由基清除率的影響極顯著(P<0.01),各質(zhì)量濃度間均具有極顯著差異(P<0.01)。

    以空心蓮子草多糖質(zhì)量濃度、VC質(zhì)量濃度與抑制率作回歸分析。空心蓮子草多糖對(duì)DPPH自由基清除率的回歸方程為:Y=1.02X+22.53(r=0.970)。VC對(duì)DPPH自由基清除率的回歸方程為:Y=1.09X-1.47(r=0.977)??招纳徸硬荻嗵菍?duì)DPPH自由基的EC50為26.93mg/L,VC對(duì)DPPH自由基的EC50為47.22mg/L,說(shuō)明空心蓮子草多糖的抗氧化能力強(qiáng),并遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于VC,是良好的天然抗氧化劑。

    2.3 空心蓮子草多糖、VC的還原能力

    圖2 空心蓮子草多糖、VC的還原能力Fig.2 Reducing power of polysaccharides from APG and vitamin C at different concentrations

    經(jīng)相關(guān)性分析,空心蓮子草多糖質(zhì)量濃度與還原能力的相關(guān)系數(shù)達(dá)0.999,VC質(zhì)量濃度與還原能力的相關(guān)系數(shù)達(dá)0.994。由圖2可知,隨空心蓮子草多糖、VC質(zhì)量濃度的增大還原能力逐漸增強(qiáng),空心蓮子草多糖的還原能力強(qiáng)于VC。在所選質(zhì)量濃度范圍內(nèi),空心蓮子草多糖、VC質(zhì)量濃度為50mg/L時(shí),還原能力最高。差異性分析表明,質(zhì)量濃度對(duì)空心蓮子草多糖、VC的還原能力影響極其顯著,各質(zhì)量濃度間均具有極顯著差異(P<0.01)。

    2.4 空心蓮子草多糖、VC對(duì)DMPD自由基的清除率

    圖3 空心蓮子草多糖、VC對(duì)DMPD自由基的清除率Fig.3 Scavenging rates of polysaccharides from APG and vitamin C at different concentrations against DMPD free radicals

    經(jīng)相關(guān)性分析,空心蓮子草多糖質(zhì)量濃度與DMPD自由基清除率的相關(guān)系數(shù)達(dá)0.975,VC質(zhì)量濃度與DMPD自由基清除率的相關(guān)系數(shù)達(dá)0.950。由圖3可知,隨空心蓮子草多糖、VC質(zhì)量濃度的增大對(duì)DMPD自由基的清除率逐漸增強(qiáng)。對(duì)DMPD自由基的清除作用空心蓮子草多糖與VC差異不大,略低于VC。在所選質(zhì)量濃度范圍內(nèi),空心蓮子草多糖質(zhì)量濃度、VC質(zhì)量濃度為50mg/L時(shí),對(duì)DMPD自由基的清除率最高。差異性分析表明,空心蓮子草多糖質(zhì)量濃度為20mg/L和30mg/L時(shí)差異不顯著(P<0.01),其他各質(zhì)量濃度均具有極顯著差異(P<0.01),VC各質(zhì)量濃度均具有極顯著差異(P<0.01)。

    以空心蓮子草多糖質(zhì)量濃度、VC質(zhì)量濃度與抑制率作回歸分析。空心蓮子草多糖對(duì)DMPD自由基清除率的回歸方程為:Y=0.5531X+9.3894(r=0.983)。VC 對(duì)DMPD自由基清除率的回歸方程為:Y=0.5009X+14.3127(r=0.989)??招纳徸硬荻嗵呛蚔C對(duì)DMPD自由基的EC50接近,分別為73.42mg/L和71.25mg/L,說(shuō)明空心蓮子草多糖的抗氧化能力強(qiáng),是良好的天然抗氧化劑。

    3 結(jié)論與討論

    3.1 自由基過(guò)多或清除自由基過(guò)慢會(huì)使生物大分子受到攻擊,會(huì)加速機(jī)體的衰老進(jìn)程,并誘發(fā)炎癥、惡性腫瘤、免疫失調(diào)等多種疾病[18]。為了抑制自由基損傷,人工合成的抗氧化劑被大量應(yīng)用于食品、化妝品和醫(yī)藥等領(lǐng)域,化學(xué)合成制品大多有毒副作用,長(zhǎng)期攝入合成抗氧化劑可導(dǎo)致肝損傷并誘發(fā)惡性腫瘤[19],因此從天然產(chǎn)物中尋找低毒或無(wú)毒的抗氧化有效成分具有十分重要的意義。天然多糖類(lèi)化合物對(duì)物理、化學(xué)以及生物等因素產(chǎn)生的自由基具有清除作用,有望作為天然抗氧化劑使用。

    3.2 Gil等[20]用DPPH法測(cè)石榴汁、VC、和葡萄酒的總的抗氧化能力,將清除DPPH 50%所用量定義為EC50,用來(lái)作為抗氧化能力的指標(biāo)。郝曉麗等[21]用DPPH自由基清除法測(cè)定了多種植物(馬齒兌,扁蓄,車(chē)前等)的清除自由基的能力。在測(cè)定樣品對(duì)DPPH自由基的清除能力時(shí)可通過(guò)計(jì)算EC50、TEC50和AE等參數(shù)來(lái)反映抗氧化劑清除自由基反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)行為。另外在酸性條件下,DMPD可被FeCl3、CuCl2、H2O2等氧化生成穩(wěn)定有顏色的DMPD自由基,它在505nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰。當(dāng)加入抗氧化劑時(shí),抗氧化劑能轉(zhuǎn)移1個(gè)氫原子給DMPD自由基,使其溶液脫色。脫色程度越強(qiáng),說(shuō)明抗氧化劑的抗氧化能力越強(qiáng)。此反應(yīng)迅速、穩(wěn)定。所以此方法也可用來(lái)有效的篩選抗氧化劑[22]。

    3.3 目前,多糖的提取分離大多采用水提醇沉的工藝。醇沉是依據(jù)分子質(zhì)量大小進(jìn)行分離純化的,所以醇沉?xí)r乙醇體積分?jǐn)?shù)不同,多糖的組成和得率不同。本實(shí)驗(yàn)采用100%乙醇沉降空心蓮子草多糖。通過(guò)與公認(rèn)的抗氧化劑VC比較還原能力、對(duì)DPPH自由基、DMPD自由基的清除作用,證實(shí)了空心蓮子草多糖具有清除自由基、抗氧化的功效,是一種良好的自由基清除劑。

    [1] 江蘇新醫(yī)學(xué)院. 中藥大辭典(上冊(cè))[M]. 上海: 上海科學(xué)技術(shù)出版社,1986: 1470.

    [2] 中國(guó)科學(xué)院北京植物所. 中國(guó)高等植物圖鑒(第4冊(cè))[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 1975: 610.

    [3] 林清華. 空心蓮子草的免疫藥理研究[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)臨床免疫學(xué)雜志,1991, 3(3): 39-42.

    [4] 遲霽菲, 張國(guó)強(qiáng), 張紅霞. 蓮子草屬植物的化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展[J]. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)學(xué)學(xué)報(bào), 2005, 22(2): 149-153.

    [5] 熊衛(wèi)國(guó), 劉雅士, 劉焱文. 空心蓮子草的化學(xué)成分研究[J]. 中草藥,2000, 31(7): 501.

    [6] 武漢市螃蜞菊科研協(xié)作組. 螃蜞菊制劑實(shí)驗(yàn)研究及臨床應(yīng)用[J]. 中草藥通訊, 1973(2): 28-33.

    [7] 曲春楓, 楊占秋, 向近敏, 等. 空心蓮子草有效部位對(duì)流行性出血熱病毒感染乳鼠的保護(hù)作用[J]. 中國(guó)中藥雜志, 1993, 18(5): 304-305.

    [8] 楊占秋, 程麗. 空心蓮子草在體外對(duì)單純皰疹病毒的抑制作用[J]. 華西藥學(xué)志, 1989, 4(4): 217-220.

    [9] 樊一橋, 武謙虎, 王雪梅, 等. 空心蓮子草醇提物抗CCl4肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 藥學(xué)進(jìn)展, 2004, 28(1): 36-38.

    [10] 武謙虎, 樊一橋, 洪敏, 等. 空心蓮子草醇提物對(duì)小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用[J]. 中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2006, 26(4): 373-375.

    [11] 蔣文玲, 羅憲玲, 鄺素娟. 空心蓮子草抗登革病毒作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 2005, 25(4): 454-456.

    [12] 盛偉, 方曉陽(yáng), 吳萍. 白靈菇、杏鮑菇、阿魏菇多糖體外抗氧化活性研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2008, 29(5): 103-109.

    [13] 夏曉凱, 張庭延, 陳傳平. 黃精多糖的體外抗氧化作用研究[J]. 湖南中醫(yī)雜志, 2006, 22(4): 90-96.

    [14] 周永國(guó), 楊越冬, 王樹(shù)元, 等. 天然活性多糖在生物醫(yī)藥領(lǐng)域中的研究進(jìn)展[J]. 高分子通報(bào), 2006(9): 16-22.

    [15] 何新益, 劉仲華. 苦瓜多糖降血糖活性的高通量篩選研究[J]. 食品科學(xué), 2007, 28(2): 313-316.

    [16] 單斌, 張衛(wèi)國(guó), 趙強(qiáng), 等. 苦瓜多糖抗氧化活性研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009, 37(1): 182-183; 229.

    [17] OYAIZU M. Antioxidative activity of browning products of glucosam inefractionated by organic solvent and thin layer chromatography[J].Nippon Shokuhin Kogyo Gakkaishi, 1986, 35: 771-775.

    [18] BUTTERFILED D A, CASTENGA A, POCERNICH C B. Nutritional approaches to combat oxidative stress in alzheimers disease[J]. The Journal of Nutritional Biochemistry, 2002, 13(8): 444-461.

    [19] GRICE H C. Safety evaluation of butylated hydroxyanisole from the perspective of effects on forestomach and oesophageal squamous epithelium[J]. Food and Chemical Toxicology, 1998, 26(8): 717-723.

    [20] GIL M I, TOMAS-BARBERAN F A, HESS-PIERCE B, et al. Antioxidant activity of pomegranate juice and its relationship with phenolic composition and pressing[J]. J Agric Food Chem, 2000, 48: 4561-4569.

    [21] 郝曉麗, 許申鴻, 杭瑚, 等. 用兩種方法評(píng)價(jià)四種食品抗氧化劑的抗氧化活性[J]. 食品科學(xué), 2003, 24(2): 127-129.

    [22] 劉國(guó)安, 楊玉玲, 張亞楠, 等. 黃連素抗氧化活性的研究[J]. 西北師范大學(xué)學(xué)報(bào), 2009, 45(6): 87-91.

    Antioxidant Activityin vitroof Polysaccharides fromAlternanthera philoxeroides(Mart.) Griseb

    CAI Ling-yun1,2,ZHOU Jiang-ju1,YUE Li2,HUANG Guo-xue1,WANG Yan1,HE Shun-mei2,F(xiàn)U Fa-qiong2
    (1. College of Environmental and Life Science, Kaili University, Kaili 556011, China;2. Key Laboratory for Southwest Wildlife Resouces Conservation, Ministry of Education, College of Life Science, China West Normal University, Nanchong 637002, China)

    Objective: To study the antioxidant activityin vitroof polysaccharides from the whole plant ofAlternanthera philoxeroides(Mart.) Griseb (APG). Methods: The antioxidant activity of polysaccharides from APG was evaluated by reducing power and scavenging capacities against DPPH and DMPD free radicals. Results: The antioxidant activity of polysaccharides from APG at various concentrations displayed an obvious difference. Compared with vitamin C, polysaccharides from APG had higher antioxidant activity. The EC50 values of polysaccharides from APG and vitamin C against DPPH free radicals were 26.93 mg/L and 47.22 mg/L, and against DMPD free radicals were 73.42 mg/L and 71.25 mg/L, respectively. Conclusion: Polysaccharides from APG is an effective and multifunctional natural antioxidant and radical scavenger so that it has potential exploitation and utilization.

    Altemanthera philoxeroides(Mart.) Griseb (APG) ;polysaccharide;antioxidant activity

    R284.2

    A

    1002-6630(2011)17-0186-04

    2010-08-20

    貴州省教育廳自然科學(xué)研究項(xiàng)目(黔教科(2010078));西南野生動(dòng)植物資源保護(hù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放基金項(xiàng)目(XNYB-0903);貴州省凱里學(xué)院自然科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(ZX1034)

    蔡凌云(1972—),女,高級(jí)實(shí)驗(yàn)師,碩士,主要從事天然產(chǎn)物提取、分離和結(jié)構(gòu)鑒定研究。E-mail:cailingyun2005@sina.com

    猜你喜歡
    抗氧化劑蓮子空心
    蓮子去心還是不去心?
    中老年保健(2022年7期)2022-09-20 01:16:16
    地球是空心的嗎?
    空心人
    天然抗氧化劑對(duì)冷榨火麻油保質(zhì)期的影響
    蓮子飛上天
    蓮子超市
    清而不俗 妍而不媚 馮彩霞制蓮子壺
    空心
    抗氧化劑2-吲哚啉酮衍生物對(duì)NF-κB信號(hào)通路的抑制作用
    空心針治療脛腓神經(jīng)聯(lián)合損傷1例
    欧美成人精品欧美一级黄| 欧美潮喷喷水| 亚洲欧美精品自产自拍| 免费电影在线观看免费观看| 一区二区三区乱码不卡18| 中文字幕制服av| 日韩视频在线欧美| 国产午夜福利久久久久久| 精品久久久久久电影网| 精品久久久久久久末码| 日日啪夜夜爽| 97超碰精品成人国产| 成人毛片60女人毛片免费| 高清日韩中文字幕在线| 禁无遮挡网站| 可以在线观看毛片的网站| 永久网站在线| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产 一区 欧美 日韩| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲av中文av极速乱| 精品久久久久久久久av| 简卡轻食公司| kizo精华| 亚洲精品,欧美精品| 久久ye,这里只有精品| 国产 精品1| 黄色欧美视频在线观看| 日韩av不卡免费在线播放| 大片电影免费在线观看免费| 国产精品一区www在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 久久久久久九九精品二区国产| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲精品国产av成人精品| 高清在线视频一区二区三区| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久久久久国产a免费观看| 在线免费十八禁| 欧美97在线视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲va在线va天堂va国产| 99久久人妻综合| 久久久久久久久久久免费av| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 一二三四中文在线观看免费高清| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲欧洲国产日韩| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲av在线观看美女高潮| 三级经典国产精品| 一级毛片 在线播放| videossex国产| 伊人久久国产一区二区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 大片电影免费在线观看免费| 人妻系列 视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲天堂av无毛| 午夜免费鲁丝| 直男gayav资源| 久久女婷五月综合色啪小说 | 成人漫画全彩无遮挡| 一级黄片播放器| 看黄色毛片网站| 亚洲真实伦在线观看| 中国国产av一级| 日韩一区二区三区影片| 亚洲性久久影院| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 我要看日韩黄色一级片| 国产精品伦人一区二区| 国产黄片美女视频| 最新中文字幕久久久久| 久久国内精品自在自线图片| 午夜精品一区二区三区免费看| 永久免费av网站大全| 五月玫瑰六月丁香| 三级国产精品片| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲熟女精品中文字幕| 91久久精品国产一区二区成人| 成年av动漫网址| 色综合色国产| xxx大片免费视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产探花在线观看一区二区| 免费高清在线观看视频在线观看| 91久久精品国产一区二区成人| av线在线观看网站| 两个人的视频大全免费| 日韩强制内射视频| 久久久久久久国产电影| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 免费av毛片视频| av卡一久久| 欧美成人午夜免费资源| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 日韩大片免费观看网站| 国产成人aa在线观看| 波多野结衣巨乳人妻| 蜜臀久久99精品久久宅男| 综合色丁香网| 国产大屁股一区二区在线视频| 日本黄大片高清| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 99热全是精品| 大香蕉久久网| 成人国产av品久久久| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲av中文av极速乱| 视频中文字幕在线观看| 久久久久久久国产电影| 两个人的视频大全免费| 69人妻影院| 久久精品国产a三级三级三级| 国产熟女欧美一区二区| 91久久精品国产一区二区三区| 成年免费大片在线观看| 在线a可以看的网站| 精品午夜福利在线看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲综合色惰| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲自偷自拍三级| 免费黄色在线免费观看| 看免费成人av毛片| 777米奇影视久久| 国产中年淑女户外野战色| 久久久久久久久久成人| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 欧美成人a在线观看| tube8黄色片| 22中文网久久字幕| 一二三四中文在线观看免费高清| 欧美潮喷喷水| 看非洲黑人一级黄片| 一级毛片我不卡| 精品视频人人做人人爽| freevideosex欧美| 一区二区三区乱码不卡18| 国产欧美日韩精品一区二区| 在线观看一区二区三区| 亚洲成人久久爱视频| 国产伦理片在线播放av一区| 色吧在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 中文在线观看免费www的网站| 91久久精品电影网| 亚洲色图综合在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 久久影院123| 久久久久久久国产电影| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 久久99热这里只频精品6学生| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲精品,欧美精品| 欧美成人a在线观看| 日韩视频在线欧美| 日韩精品有码人妻一区| 久久久久国产精品人妻一区二区| 欧美最新免费一区二区三区| 国产精品三级大全| 日日啪夜夜爽| 国产一区二区三区av在线| 久久午夜福利片| 国产色婷婷99| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产亚洲精品久久久com| 久久久欧美国产精品| 亚洲欧洲国产日韩| 丝袜脚勾引网站| 一个人看视频在线观看www免费| 精品一区二区免费观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 九九在线视频观看精品| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲欧美精品专区久久| 亚洲最大成人手机在线| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 久久久色成人| 女人久久www免费人成看片| 国产亚洲91精品色在线| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲av欧美aⅴ国产| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产黄色免费在线视频| 春色校园在线视频观看| 精品酒店卫生间| 精品久久久久久久久av| 亚洲天堂国产精品一区在线| av国产免费在线观看| 大香蕉97超碰在线| 在线播放无遮挡| 亚洲av.av天堂| 少妇人妻精品综合一区二区| 亚洲欧美成人精品一区二区| 日日啪夜夜撸| 国产老妇伦熟女老妇高清| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚州av有码| 亚洲四区av| 亚洲三级黄色毛片| 成人毛片a级毛片在线播放| 在线观看国产h片| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲av福利一区| 韩国av在线不卡| 亚洲最大成人中文| 日韩欧美精品v在线| 国产综合精华液| 18禁动态无遮挡网站| 欧美日韩综合久久久久久| 在线观看三级黄色| 在线免费观看不下载黄p国产| 午夜免费男女啪啪视频观看| 深夜a级毛片| 成人无遮挡网站| 精品视频人人做人人爽| 久久热精品热| 国产黄a三级三级三级人| 少妇 在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 成人毛片a级毛片在线播放| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 久久精品久久久久久久性| 97超碰精品成人国产| 只有这里有精品99| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产精品一二三区在线看| 中文资源天堂在线| 国产一区二区三区av在线| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产久久久一区二区三区| 最近中文字幕2019免费版| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 精品人妻一区二区三区麻豆| av网站免费在线观看视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 99久久人妻综合| 九九在线视频观看精品| 中国三级夫妇交换| 春色校园在线视频观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 免费观看a级毛片全部| 在线观看国产h片| 好男人在线观看高清免费视频| 久久这里有精品视频免费| 日本黄大片高清| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 插逼视频在线观看| 美女国产视频在线观看| 久久影院123| av线在线观看网站| 国产有黄有色有爽视频| 欧美一区二区亚洲| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 成人毛片60女人毛片免费| 午夜激情久久久久久久| 日韩一区二区三区影片| 香蕉精品网在线| 麻豆久久精品国产亚洲av| 欧美日韩在线观看h| 男男h啪啪无遮挡| 国产日韩欧美亚洲二区| 成人毛片a级毛片在线播放| 一二三四中文在线观看免费高清| 高清在线视频一区二区三区| 99视频精品全部免费 在线| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲国产最新在线播放| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲高清免费不卡视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 日韩人妻高清精品专区| 午夜老司机福利剧场| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 2021天堂中文幕一二区在线观| 久久97久久精品| 天堂网av新在线| 视频区图区小说| 好男人在线观看高清免费视频| 少妇的逼水好多| 国产精品无大码| 在线观看国产h片| 中文在线观看免费www的网站| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 大陆偷拍与自拍| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 最新中文字幕久久久久| 激情 狠狠 欧美| 少妇 在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲欧洲国产日韩| 久久99精品国语久久久| 两个人的视频大全免费| 亚洲综合色惰| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产亚洲91精品色在线| 日本av手机在线免费观看| 禁无遮挡网站| 免费黄频网站在线观看国产| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲精品成人久久久久久| 国产男女内射视频| 丝袜脚勾引网站| 亚洲人成网站在线观看播放| 2021天堂中文幕一二区在线观| 黄色怎么调成土黄色| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产伦理片在线播放av一区| 精品人妻偷拍中文字幕| 久久精品国产自在天天线| a级毛片免费高清观看在线播放| 久久久久精品性色| 国产伦精品一区二区三区四那| 成年女人看的毛片在线观看| 有码 亚洲区| 国产黄色视频一区二区在线观看| 久热这里只有精品99| 久久久午夜欧美精品| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 欧美激情在线99| 韩国高清视频一区二区三区| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲成色77777| 黄片wwwwww| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 在线免费观看不下载黄p国产| 午夜免费观看性视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 欧美zozozo另类| 国产日韩欧美在线精品| 国产爱豆传媒在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 久久99热这里只频精品6学生| 午夜激情福利司机影院| 天堂网av新在线| 久久久久久久久久人人人人人人| 97人妻精品一区二区三区麻豆| av一本久久久久| 日韩 亚洲 欧美在线| a级一级毛片免费在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 我要看日韩黄色一级片| 特大巨黑吊av在线直播| 国产高清不卡午夜福利| 大片电影免费在线观看免费| 一级黄片播放器| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 欧美人与善性xxx| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 欧美性感艳星| 观看免费一级毛片| 神马国产精品三级电影在线观看| 一二三四中文在线观看免费高清| 男女那种视频在线观看| 国产精品偷伦视频观看了| 在线观看免费高清a一片| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产精品无大码| 成人漫画全彩无遮挡| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲国产日韩一区二区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 1000部很黄的大片| 日本爱情动作片www.在线观看| 日日啪夜夜爽| 欧美精品一区二区大全| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 老女人水多毛片| 亚洲成人av在线免费| 日日撸夜夜添| 五月天丁香电影| 高清视频免费观看一区二区| 精品一区二区免费观看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲精品乱久久久久久| 日韩免费高清中文字幕av| 日韩电影二区| av在线蜜桃| 观看美女的网站| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲人成网站在线观看播放| 99热国产这里只有精品6| 少妇熟女欧美另类| 九草在线视频观看| 久久99热这里只有精品18| 成年人午夜在线观看视频| 内射极品少妇av片p| xxx大片免费视频| 少妇 在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 黄片wwwwww| 久久人人爽人人片av| 99视频精品全部免费 在线| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产爽快片一区二区三区| 中文字幕av成人在线电影| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产成人午夜福利电影在线观看| 免费看a级黄色片| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 少妇的逼好多水| 亚洲精品一区蜜桃| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲色图av天堂| 国国产精品蜜臀av免费| 午夜精品国产一区二区电影 | 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 尤物成人国产欧美一区二区三区| 日本黄大片高清| 91久久精品国产一区二区三区| 超碰97精品在线观看| 大陆偷拍与自拍| 国产精品三级大全| 91精品国产九色| 成人亚洲欧美一区二区av| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 久久久久精品久久久久真实原创| 久久精品夜色国产| 人体艺术视频欧美日本| 91在线精品国自产拍蜜月| 日韩国内少妇激情av| 国产精品爽爽va在线观看网站| tube8黄色片| 久久99蜜桃精品久久| videossex国产| 午夜精品一区二区三区免费看| 男人舔奶头视频| 久久97久久精品| 乱码一卡2卡4卡精品| 久久热精品热| 黄色怎么调成土黄色| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 在线观看免费高清a一片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产精品偷伦视频观看了| av国产久精品久网站免费入址| 免费人成在线观看视频色| 免费观看性生交大片5| 精品午夜福利在线看| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲精品,欧美精品| 国产片特级美女逼逼视频| 岛国毛片在线播放| 18禁在线播放成人免费| 成人一区二区视频在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 婷婷色av中文字幕| 中文天堂在线官网| 禁无遮挡网站| 亚洲成人av在线免费| 国产av国产精品国产| 内射极品少妇av片p| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产精品国产av在线观看| 日韩大片免费观看网站| 高清在线视频一区二区三区| 日韩中字成人| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲av中文av极速乱| 久久精品夜色国产| 欧美精品一区二区大全| 2021少妇久久久久久久久久久| 九草在线视频观看| 久久综合国产亚洲精品| 另类亚洲欧美激情| 亚洲内射少妇av| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲伊人久久精品综合| 中文字幕免费在线视频6| 黄片无遮挡物在线观看| 99热全是精品| 日韩一本色道免费dvd| 国产在视频线精品| 伦理电影大哥的女人| 色播亚洲综合网| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲自偷自拍三级| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲熟女精品中文字幕| 精品人妻熟女av久视频| 在线天堂最新版资源| 国产黄片视频在线免费观看| 可以在线观看毛片的网站| 99久久精品热视频| 热re99久久精品国产66热6| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产免费视频播放在线视频| av在线亚洲专区| 一级a做视频免费观看| 亚洲精品一区蜜桃| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 大香蕉97超碰在线| 精品熟女少妇av免费看| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲在久久综合| 超碰av人人做人人爽久久| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 一边亲一边摸免费视频| 国产久久久一区二区三区| 国产精品无大码| 一级黄片播放器| 成人毛片60女人毛片免费| 久久韩国三级中文字幕| 高清视频免费观看一区二区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产一区有黄有色的免费视频| eeuss影院久久| 亚洲精品第二区| 永久免费av网站大全| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲无线观看免费| 亚洲国产欧美人成| 亚洲在线观看片| 亚洲av男天堂| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 亚洲在线观看片| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 男人舔奶头视频| 成年人午夜在线观看视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 亚洲成色77777| 一本久久精品| av.在线天堂| 丝袜脚勾引网站| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲精品影视一区二区三区av| 99久久九九国产精品国产免费| 午夜免费鲁丝| 在线播放无遮挡| 久久久精品94久久精品| 免费人成在线观看视频色| 国产 一区精品| 久久国内精品自在自线图片| 免费观看av网站的网址| 午夜福利视频1000在线观看| 国产精品一区二区性色av| 少妇熟女欧美另类| 黄片无遮挡物在线观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 日韩中字成人| 亚洲国产精品国产精品| 97超视频在线观看视频| 日韩视频在线欧美| 激情五月婷婷亚洲| kizo精华| 久久综合国产亚洲精品| 尾随美女入室| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲,欧美,日韩| 国产免费视频播放在线视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 大片免费播放器 马上看| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 午夜福利视频1000在线观看| av.在线天堂| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产精品久久久久久久电影| 天天躁日日操中文字幕| 女人久久www免费人成看片| 国产高清有码在线观看视频| 九草在线视频观看| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 亚洲成人av在线免费| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 日韩一区二区三区影片| 日韩伦理黄色片| 直男gayav资源| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 人妻 亚洲 视频| 在线观看国产h片| 看免费成人av毛片| 一级毛片我不卡| 成人毛片60女人毛片免费| 久久精品久久久久久久性| 又大又黄又爽视频免费| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 精品一区在线观看国产| 伦理电影大哥的女人| 亚洲国产最新在线播放| 国产免费福利视频在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 成人黄色视频免费在线看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产精品秋霞免费鲁丝片|