化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行血HIV檢測(cè)效果評(píng)價(jià)

段美婷　蘭良子

[摘 要] 目的：比較化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫吸附法在血液HIV檢測(cè)中的應(yīng)用效果。方法 ：對(duì)本院2014年 3月至 2015年 9月期間所有術(shù)前檢查病人利用化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行HIV篩查試驗(yàn)檢測(cè)。結(jié)果：35420例病人血清標(biāo)本中，化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法均判定陽性29例，金標(biāo)準(zhǔn)免疫印跡法（WB）確定25例為陽性，4例為陰性。化學(xué)發(fā)光法陽性酶聯(lián)免疫吸附法陰性的10例，WB檢測(cè)結(jié)果陽性8例，陰性2例。化學(xué)發(fā)光法比酶聯(lián)免疫吸附法真陽性率高，但是假陽性率也增加。通過對(duì)比S/CO不同值，發(fā)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光法假陽性率出現(xiàn)在S/CO≤500，并且隨著S/CO值降低，假陽性率升高明顯；S/CO>500，化學(xué)發(fā)光法準(zhǔn)確性明顯升高。結(jié)論與酶聯(lián)免疫吸附法相比，在一定范圍內(nèi)，化學(xué)發(fā)光法更適用血液HIV篩查。

[關(guān)鍵詞] 化學(xué)發(fā)光法；酶聯(lián)免疫吸附法；人類免疫缺陷病毒

中圖分類號(hào)：R446 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：2095-5200（2016）05-078-03

[Abstract] Objective： To compare the application effects of chemical luminescence method method and enzyme-linked immunosorbent assay on the detection of HIV in blood. Methods： All patients in our hospital from March 2014 to September 2015 were examined by using chemiluminescence and enzyme-linked immunosorbent assay for HIV screening test. Results： In 35420 cases of serum samples， 29 cases were both positive through the methods of chemiluminescence and enzyme-linked immunosorbent assay， and the gold standard Western blotting （WB） confirmed that 25 cases were positive and 4 cases were negative. 10 cases were tested for positive through chemical luminescence method method but for negative through enzyme linked immunosorbent assay， and its WB test results were positive in 8 cases， negative in 2 cases. The true positive rate of chemical luminescence method method was higher than that of enzyme-linked immunosorbent assay， but the false positive rate was also increased. Through the comparison of different S/CO values， we found that the false positive rate of using chemical luminescence method method occurred as S/CO≤500， and with the decrease of S/CO value， false positive rate increased significantly； as S/CO>500， the accuracy of chemical luminescence method increased significantly. Conclusions： Compared with the enzyme-linked immunosorbent assay in a certain range， the chemical luminescence method is more suitable for HIV screening in blood.

[Key words] CLIA； Elisa； HIV

獲得性免疫缺乏綜合征簡(jiǎn)稱艾滋病（AIDS），是由人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus， HIV）引起的一種嚴(yán)重傳染性疾病。酶聯(lián)免疫吸附法（Elisa）最早應(yīng)用于艾滋病毒的篩查，1985年研制成功的第一代HIV Elisa試劑[2]敏感性和特異性欠佳，至今已發(fā)展至第四代。Gag基因編碼HIV病毒核心蛋白包括p17、p24、p15[3-7]，P24在血清轉(zhuǎn)換的很短時(shí)期內(nèi)就可以被第四代試劑檢測(cè)出來，因此第四代HIV Elisa試劑將檢測(cè)的“窗口期”從三代的22天左右減少到16天左右[8]。

化學(xué)發(fā)光法（CLIA）的主要原理[9]是將酶免疫發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記在抗原或抗體上，加入氧化劑或酶底物而發(fā)光，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度來確定待測(cè)物的含量。本實(shí)驗(yàn)將化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法兩種檢測(cè)方法進(jìn)行對(duì)比評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源收集

本院2014年 3月至 2015年 9月期間所有術(shù)前檢查病人共計(jì)35420例，年齡10～89歲，其中男性24003例，女性11417例。

1.2 試劑

HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑盒（上海恒遠(yuǎn)科技有限公司），化學(xué)發(fā)光酶免試劑 （北京科美東雅生物技術(shù)有限公司），人類免疫缺陷病毒（HIV1+2型+p24）抗體免疫印跡試劑盒（簡(jiǎn)稱WB，新加坡 Genelabs）。

1.3 方法

1.3.1 Elisa法檢測(cè)HIV病毒 Elisa檢驗(yàn)血清HIV抗體采用雙抗原夾心法。包被：將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/mL，在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1mL，4℃ 過夜。第二天，棄孔內(nèi)溶液，緩沖液洗滌；加樣：加待檢樣品于上述反應(yīng)孔中，置37℃孵育1h（同時(shí)做空白孔、陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）；加酶標(biāo)抗體：在各反應(yīng)孔酶標(biāo)抗體37℃孵育1h，緩沖液洗滌；加底物液顯色：向各反應(yīng)孔中加TMB底物溶液，37℃ 10min；終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入硫酸。

1.3.2 CLIA法檢測(cè)HIV病毒 CLIA法檢驗(yàn)?zāi)Ｊ綖殡p抗原夾心一步法免疫分析，借助于HIV（1+2）抗原制作出固相抗原，并將HIV（1+2）抗原采用辣根過氧化物酶進(jìn)行標(biāo)記，由此和待測(cè)樣品中的HIV抗體兩者就可以形成雙抗原夾心，洗滌之后，將化學(xué)發(fā)光底物液加入其中 ，測(cè)定其發(fā)光值。

1.3.3 免疫印跡檢測(cè)法（WB）檢測(cè)HIV病毒 HIV進(jìn)行培養(yǎng)、濃縮、純化；HIV抗原在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳按照分子量大小而分離；將分離的抗原轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，將其切割成包含全部病毒蛋白的按照分子量大小排列的條膜；在反應(yīng)槽中加待測(cè)樣品與條膜孵育，洗滌；加辣根酶標(biāo)記的二抗；加顯色試劑。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

化學(xué)發(fā)光法：S/CO≥1.00 為陽性，< 1.00 為陰性；Elisa法按照說明書。

1.5 確認(rèn)實(shí)驗(yàn)

將Elisa法或CLIA法篩選的陽性病例35例進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢仍為陽性病例用免疫印跡法進(jìn)行確認(rèn)。WB試驗(yàn)陽性的判為HIV感染；若為陰性，判為未感染HIV；若WB試驗(yàn)為可疑，4周后隨訪復(fù)查，復(fù)查為陽性判為HIV感染，否則判為未感HIV。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS11.0軟件系統(tǒng)，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)或Fishers確切概率法檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CLIA法與Elisa法檢測(cè)結(jié)果

35420例術(shù)前檢查病人中，用CLIA法篩檢出抗-HIV抗體陽性39例，陽性率為 0.110%；Elisa法篩檢出抗-HIV抗體陽性29例，陽性率為 0.082%。與Elisa法相比，CLIA法陽性率比較高，兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 WB確認(rèn)實(shí)驗(yàn)

從表1中可以看出，WB和CLIA均陽性為33例，CLIA真陽性率為0.093% ；WB和Elisa均陽性為25例，Elisa真陽性率為0.071%。比較CLIA和Elisa兩種方法，CLIA的真陽性率、假陽性率都升高。

2.3 CLIA 檢測(cè)不同S/CO值與W B 對(duì)比結(jié)果

從表2結(jié)果可見，CLIA檢測(cè)S/CO值>500 時(shí)，WB確認(rèn)實(shí)驗(yàn) 均為HIV陽性；CLIA 檢測(cè)結(jié)果S/CO值≤500時(shí)，WB確認(rèn)實(shí)驗(yàn)有可能為陰性；S/CO值越低，W B檢測(cè)結(jié)果為陰性的可能性越大。

3 討論

據(jù)報(bào)道[10]全球約有3億多人攜帶艾滋病毒，而我國在1985年發(fā)現(xiàn)首例艾滋病患者，到2014年二十年時(shí)間，患病人數(shù)已經(jīng)達(dá)到10.4萬例，患者分布也從單一省份擴(kuò)增到全國20多個(gè)省。性傳播、 經(jīng)血傳播和母嬰垂直傳播[11-13]是人類感染HIV病毒的三條途徑，而血液傳播是主要途徑。因此早期篩查血液HIV病毒，對(duì)HIV患者的早診斷具有重要價(jià)值。

1998年Elisa第四代試劑問世，第四代Elisa試劑可以同時(shí)檢測(cè)p24抗原和HIV 1+2抗體，有效縮短了“窗口期”，因此得到廣泛應(yīng)用。但是由于一項(xiàng)檢測(cè)同時(shí)與病毒、抗體結(jié)合，增加了相互干擾的機(jī)會(huì)，從而降低了第四代Elisa試劑的靈敏度和特異性[14-15]。而化學(xué)發(fā)光法[16-17]作為新型的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，因其靈敏度高較高。

從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，化學(xué)發(fā)光法的真陽性率高于Elisa法，說明化學(xué)法試劑能在HIV病毒抗體效價(jià)較低時(shí)發(fā)揮作用，檢測(cè)患者HIV陽性，因此更有效避免臨床漏診現(xiàn)象。但是我們發(fā)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光法的假陽性率也有所增加。通過對(duì)比S/CO不同區(qū)間，化學(xué)發(fā)光法的假陽性率發(fā)生在S/CO≤500并且隨著S/CO值降低，假陽性率升高明顯。因此在用化學(xué)發(fā)光法篩查血液HIV病毒，在S/CO值比較低時(shí)，應(yīng)注意對(duì)此病例的復(fù)檢，同時(shí)加做WB，避免假陽性的情況出現(xiàn)。

綜上所述，化學(xué)發(fā)光試劑靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，非常適合血液HIV病毒的早期篩查。但是應(yīng)注意假陽性率高的問題，通過進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)，提高HIV篩查質(zhì)量。

參 考 文 獻(xiàn)

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