阿薩伊對虛熱及虛寒證候模型的生物學表達特征影響

王林元+張建軍+王淳+朱映黎+王子晨+賀成+瞿研+王莎

[摘要]研究阿薩伊對虛熱證、虛寒證大鼠生物學表達特征的影響。SD大鼠分為空白組；虛熱模型組，虛熱模型加黃柏組、加阿薩伊高、低劑量組；虛寒模型組，虛寒模型加肉桂組、加阿薩伊高、低劑量組；采用每日肌肉注射地塞米松磷酸鈉、氫化可的松琥珀酸鈉1次、連續(xù)21 d的方法制備大鼠虛熱模型、虛寒模型；通過放免法檢測環(huán)核苷酸（cAMP，cGMP），內(nèi)分泌激素（T3，T4，rT3）指標變化；通過比色法檢測代謝（TP，UA，TC，TG，ALB）指標變化。虛熱阿薩伊高劑量組能降低血清中cAMP，cAMP/cGMP值（分別P<0.05，P<0.001）；虛熱阿薩伊高劑量組均能顯著降低T3，T4，rT3值（分別P<0.01，P<0.001，P<0.05）；虛熱阿薩伊高劑量組均能顯著降低TP，UA，TC，TG，ALB值（分別P<0.001，P<0.05，P<0.05，P<0.05，P<0.01）；阿薩伊對虛寒模型作用不明顯。阿薩伊同黃柏一致，表現(xiàn)出對虛熱模型大鼠的調(diào)整作用；與肉桂相反，對虛寒模型大鼠的指標糾正不明顯。該文從同類比較、異類反證角度驗證了理論推導的阿薩伊中藥寒涼藥性。

[關鍵詞]阿薩伊； 虛熱證； 虛寒證； 中藥藥性； 生物學表達特征；

[Abstract]To study the effects of Acaí on biological expression characteristics in rats with deficiency-heat and deficiency-cold syndromes， SD rats were divided into blank group， deficiency-heat model group， deficiency-heat+Phellodendri Chinensis Cortex group， deficiency-heat+Acaí high dose and low dose groups， deficiency-cold model group， deficiency-cold+Cinnamomi Cortex group， deficiency-cold+Acaí high dose and low dose groups. The rats were treated with intramuscular injection of hydrocortisone （20 mg·kg^-1） or dexamethasone sodium phosphate （0.35 mg·kg^-1） for 21 days to set up deficiency-heat model and deficiency-cold models. The levels of cAMP， cGMP， T3， T4 and rT3 were detected by radioimmunoassay. The levels of TP， UA， TC， TG and ALB were detected by colorimetry. The level of cAMP， cAMP/cGMP in serum were reduced in Acaí high dose group （P<0.05， P<0.001）. The levels of T3， T4 and rT3 were significantly reduced in the Acaí high dose group （P<0.01， P<0.001， P<0.05）. The levels of TP， UA， TC， TG and ALB were significantly reduced in the Acaí high dose group （P<0.001， P<0.05， P<0.05， P<0.05， P<0.01）. However， Acaí had no obvious effects on deficiency-cold models. Acaí showed the same effect with Phellodendri Chinensis Cortex in adjusting the levels of deficiency-heat rats； but unlike Cinnamomi Cortex， Acaí showed no obvious effects in adjusting the levels of deficiency-cold rats.

[Key words]Acaí； Yin-Deficiency syndrome； Yang-Deficiency syndrome； Chinese herbal properties； biological expression characteristics

doi：10.4268/cjcmm20162020

阿薩伊（英文名Aaí）又名巴西莓，來源于棕櫚科植物阿薩伊棕櫚樹Euterpe oleraceae Mart.的新鮮果實^[1]，作為南美洲地區(qū)一種常用草藥，在巴西、秘魯、哥倫比亞、蘇里南等地使用廣泛^[2]，2013年由衛(wèi)生部引入我國^[3]。自古以來中醫(yī)藥就有吸收外來醫(yī)藥文化引進新資源品種的傳統(tǒng)，如《本草綱目》收錄外來藥物96種^[4]，《經(jīng)史證類備急本草》收載的外來藥物達200多種^[5]，豐富了本草學品種。然而阿薩伊能否引入中藥從而與我國已有的中藥進行配伍使用發(fā)揮醫(yī)療保健作用，尚需要進行理論及實驗多方面的研究。

寒熱藥性作為中藥性能的主要元素之一，是中藥性味歸經(jīng)研究的核心和主體內(nèi)容，更重要的是它已成為當前藥性研究的主要著眼點和切入點^[6]。根據(jù)巴西、秘魯?shù)饶厦赖貐^(qū)傳統(tǒng)醫(yī)學記載，阿薩伊可用于治療痢疾，皮膚潰瘍，發(fā)燒以及糖尿病，脫發(fā)，出血，肝炎、黃疸等肝臟疾病，腎臟疾病，瘧疾，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)期疼痛和肌肉酸痛等?，F(xiàn)代藥理、臨床研究表明阿薩伊具有抗氧化、抗癌、抗炎、降脂、降糖、保肝等多方面的作用。筆者在總結(jié)科學文獻和課題組實驗研究結(jié)果^[7]的基礎上，根據(jù)阿薩伊原產(chǎn)地的臨床應用，以中醫(yī)藥理論為指導在理論上探討了阿薩伊的中藥藥性，提出阿薩伊性涼的科學假說^[8]。本實驗以同類比較、異類反證法通過考察阿薩伊對虛熱證、虛寒證大鼠環(huán)核苷酸、內(nèi)分泌激素以及代謝的影響，對阿薩伊的寒涼藥性進行藥理學驗證。

1 材料

1.1 藥品 阿薩伊凍干粉[蒙維（上海）貿(mào)易有限公司]；地塞米松磷酸鈉 （天津金耀集團湖北天藥藥業(yè)股份有限公司，批號H42020020）；氫化可的松琥珀酸鈉 （天津生物化學制藥有限公司，批號H21020493）；黃柏配方顆粒（北京康仁堂藥業(yè)有限公司，批號15015431）；肉桂配方顆粒（北京康仁堂藥業(yè)有限公司，批號15025691）。

1.2 動物 SD大鼠90只，雄性，體重（240±10） g，由斯貝福動物實驗中心提供，合格證號SCXK（京）2014-0006。

1.3 試劑 環(huán)磷酸腺苷（cAMP）放免試劑盒（北京華英生物技術研究所，批號20160115）；環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）放免試劑盒（北京華英生物技術研究所，批號20160115）；三碘甲腺原氨酸（T3）放免試劑盒（北京華英生物技術研究所，批號20160123）；甲狀腺素（T4）放免試劑盒（北京華英生物技術研究所，批號20160130）；反三碘甲腺原氨酸（rT3）放免試劑盒（北京華英生物技術研究所，批號20160130）；總蛋白（TP）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20160203）；尿酸（UA）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20160203）；總膽固醇（TC）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號 20160203）；甘油三酯（TG）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20160203）；白蛋白（ALB）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20160203）。

1.4 儀器 XH-6020全自動放免計數(shù)儀（西安核儀器廠）；STAT FAX 2100全自動酶標儀（Awareness Technology Inc.USA）；日本日立7160全自動生化儀；TGL-16A臺式高速冷凍離心機；JY203電子天平。

2 方法

2.1 分組、造模及給藥 SD大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分成9組，每組10只，即空白組、虛熱模型組、虛熱模型加黃柏配方顆粒組（5 g·kg^-1，相當于60 kg人每日用生藥量37.5 g）、虛熱模型加阿薩伊凍干粉高劑量組（3.2 g·kg^-1，相當于60 kg人每日用生藥量24 g）、虛熱模型加阿薩伊凍干粉低劑量組（1.6 g·kg^-1，相當于60 kg人每日用生藥量12 g）、虛寒模型組、虛寒模型加肉桂配方顆粒組（30 g·kg^-1，相當于60 kg人每日用生藥量225 g）、虛寒模型加阿薩伊凍干粉高劑量組（3.2 g·kg^-1，相當于60 kg人每日用生藥量24 g）、虛寒模型加阿薩伊凍干粉低劑量組（1.6 g·kg^-1，相當于60 kg人每日用生藥量12 g）。動物適應數(shù)天后，肌肉注射地塞米松磷酸鈉（0.35 mg·kg^-1）造成虛熱證模型，肌肉注射氫化可的松琥珀酸鈉（20 mg·kg^-1）造成虛寒證模型，每日上午造模，持續(xù)21 d^[9-10]。除空白組、模型組每天灌胃去離子水外，其余各組灌胃相應藥物。造模7 d后，按大鼠每100 g體重灌胃1 mL給藥，每日下午1次，給藥14 d，根據(jù)體重適當調(diào)整灌胃量。

2.2 檢測指標 從造模第8天下午開始給藥，第22天腹主動脈取血，分離血清，采用放免、比色等方法檢測各組大鼠血清中環(huán)磷酸腺苷（cAMP），環(huán)磷酸鳥苷（cGMP），cAMP/cGMP，三碘甲腺原氨酸（T3），甲狀腺素（T4），反三碘甲腺原氨酸（rT3），總蛋白（TP），尿酸（UA），總膽固醇（TC），甘油三酯（TG），白蛋白（ALB）等指標的變化。

2.3 統(tǒng)計方法 數(shù)據(jù)用±s表示，采用SPSS Statistics 20.0的Independent-Sample T Test或One-way ANOVA過程（兩兩比較采用SNK）進行統(tǒng)計學分析，以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

3.1 阿薩伊凍干粉對大鼠一般狀態(tài)及體重的影響 與空白組相比，虛熱模型組大鼠毛色發(fā)黃、脫毛甚至皮膚潰爛、飲水飲食減少、形體消瘦、大便干硬、小便發(fā)黃、自主活動增加、易被激惹、反應活躍等。實驗第2天開始，虛熱模型組體重較空白組顯著減輕；第7天虛熱模型組老鼠形體消瘦，易被激怒；第14天時與虛熱模型組比較，黃柏組精神狀態(tài)及表現(xiàn)都有一定程度好轉(zhuǎn)；第21天時與虛熱模型組比較，阿薩伊高劑量組、低劑量組精神狀態(tài)及表現(xiàn)與黃柏組相似有很大程度的改善。同時每周對大鼠體重進行檢測記錄，從體重統(tǒng)計結(jié)果上看，與空白組比較，虛熱模型組體重在第7天、第14天、第21天均明顯下降（P<0.001），與模型組比較其余組體重值在第7天、第14天、第21天均無統(tǒng)計學意義。

與空白組相比，虛寒模型組大鼠毛色枯槁、精神狀態(tài)萎靡、自主活動減少、畏寒、便溏等。實驗第4天，虛寒模型組大鼠較空白組體重開始明顯降低，但與虛熱模型組相比減低不明顯，精神萎靡，畏寒；第21天，與虛寒模型組相比，肉桂組大鼠整體癥狀有所改善；而虛寒阿薩伊高劑量、低劑量組大鼠整體狀態(tài)未見明顯改善且與模型組相似。同時每周對大鼠體重進行檢測記錄，從體重統(tǒng)計結(jié)果上看，與空白組比較，虛寒模型組體重在第7天具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），在第14天、第21天均無統(tǒng)計學意義，與模型組比較其余組體重在第7天、第14天、第21天均無統(tǒng)計學意義，結(jié)果見表1。

3.2 阿薩伊凍干粉對陰虛證、陽虛證環(huán)核苷酸水平的影響 與空白組比較，虛熱模型組cAMP，cGMP，cAMP/cGMP值均明顯升高（P<0.001，P<0.05，P<0.001）；與模型組相比較，黃柏組cAMP，cGMP，cAMP/cGMP值均明顯降低（P<0.001，P<0.001，P<0.05）；阿薩伊高劑量組cAMP，cAMP/cGMP值均明顯降低（P<0.05，P<0.05）；阿薩伊低劑量組cAMP，cAMP/cGMP值均明顯降低（P<0.01，P<0.05）。

與空白組比較，虛寒模型組cAMP，cAMP/cGMP值明顯降低（P<0.05），cGMP明顯升高（P<0.01）；與模型組相比，肉桂組cAMP，cAMP/cGMP值均明顯升高，差異非常顯著（P<0.001），cGMP值明顯降低，差異顯著（P<0.001）。

在虛熱與虛寒狀態(tài)下大鼠各項指標統(tǒng)計差異多為2級變化，結(jié)果見表2。

3.3 阿薩伊凍干粉對陰虛證、陽虛證大鼠內(nèi)分泌激素水平的影響 與空白組比較，虛熱模型組T3，T4，rT3值均顯著升高（P<0.01，P<0.01， P<0.05）；與虛熱模型組相比，黃柏組T3，T4，rT3值均顯著降低，差異顯著（P<0.01）；阿薩伊高劑量組T3，T4，rT3值均顯著降低（P<0.01，P<0.001，P<0.05）；阿薩伊低劑量組T3，T4，rT3值均降低（P<0.05，P<0.001，P<0.05）。

與空白組比較，虛寒模型組T3，T4，rT3值均顯著降低，差異顯著（P<0.01，P<0.001，P<0.001）。與模型組相比較，肉桂組T3，T4，rT3值均顯著升高，差異非常顯著（P<0.01，P<0.001，P<0.001）。

在虛熱與虛寒狀態(tài)下大鼠各項指標統(tǒng)計差異多為2級變化，結(jié)果見表3。

3.4 阿薩伊凍干粉對陰虛證、陽虛證大鼠代謝水平的影響 與空白組比較，虛熱模型組TP，UA，TC，TG，ALB值均顯著升高，差異顯著（分別P<0.001，P<0.01，P<0.001，P<0.001，P<0.001）；與模型組比較，黃柏組TP，UA，TC，TG，ALB值均顯著降低，差異顯著（分別P<0.001， P<0.01，P<0.05，P<0.05，P<0.01）；阿薩伊高劑量組TP，UA，TC，TG，ALB值均顯著降低，差異顯著（分別P<0.001，P<0.05， P<0.05，P<0.05，P<0.01）；阿薩伊低劑量組TP，UA，TC，TG，ALB值均顯著降低，差異顯著（分別P<0.01，P<0.01，P<0.01，P<0.05，P<0.01）。

與空白組比較，虛寒模型組TP，TC，TG，ALB值顯著降低（分別P<0.001，P<0.001，P<0.05，P<0.001），UA值顯著升高（P<0.001）；與模型組相比肉桂組TP，TC，TG，ALB值均顯著升高（分別P<0.001，P<0.01，P<0.05，P<0.001），UA值顯著降低（P<0.01）；阿薩伊高劑量組與低劑量組未出現(xiàn)統(tǒng)計學差異。

在虛熱與虛寒狀態(tài)下大鼠各項指標統(tǒng)計差異多為2級變化，結(jié)果見表4。

4 討論

藥性即中藥的性能，是藥物與療效有關的性質(zhì)和性能的統(tǒng)稱，也是中醫(yī)臨床用藥的核心依據(jù)?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》序錄云：“藥有寒熱溫涼四氣?！焙疅崴幮苑从沉酥兴帉ψC候寒熱屬性的影響趨向，是中藥性味歸經(jīng)研究的核心和主體內(nèi)容。圍繞著寒熱藥性，借鑒現(xiàn)代科技手段，國內(nèi)學者開展了多角度的藥性研究，如張冰提出“藥性三要素”假說，認為中藥藥性是中藥作用于“不同狀態(tài)機體”的與“化學成分”相關的“生物學效應”的概括和歸納^[11]。傳統(tǒng)中藥寒熱藥性是通過人體對臨床用藥的反應總結(jié)獲得的，與所治療的疾病性質(zhì)是相對而言的^[12]。近年來，發(fā)展了多種寒熱藥性的評價方法^[13]，動物實驗法是用熱證或寒證動物模型評價藥物的寒熱屬性。寒涼藥能抑制機體的神經(jīng)、內(nèi)分泌、代謝等機能活動而溫熱藥則相反^[14]，這是目前最成熟、與臨床病理特征最接近的評價中藥寒熱藥性的方法^[6，15]。

在中醫(yī)理論體系中^[16]，陰虛（虛熱）是指機體精、血、津液等物質(zhì)虧耗，陰氣不足，滋潤、寧靜和制約陽熱功能減退，以及陰不制陽，出現(xiàn)燥熱、升動和化氣太過等陽相對亢盛的虛熱內(nèi)生的病理狀態(tài)。陽虛（虛寒）是指陽氣的推動、氣化、溫煦功能不足，而出現(xiàn)精神不振、面色淡白、少氣乏力、畏寒肢冷等陰相對亢盛的虛寒內(nèi)生的病理狀態(tài)^[17]。筆者根據(jù)文獻的方法^[9-10]，采用地塞米松磷酸鈉誘導大鼠產(chǎn)生毛色發(fā)黃、脫毛、飲水飲食減少、形體消瘦、大便偏干、反應活躍暴躁等類似中醫(yī)陰虛（虛熱）癥狀；氫化可的松琥珀酸鈉誘導大鼠產(chǎn)生毛色枯槁、精神狀態(tài)萎靡、少動、體質(zhì)量增長緩慢，大便溏稀等類似中醫(yī)陽虛（虛寒）癥狀。

從生物學表達特征上看，cAMP，cGMP，cAMP/cGMP是陰虛（虛熱）、陽虛（虛寒）證候重要的客觀指標^[18]，當cAMP/cGMP比值異常時，偏高或偏低，就會發(fā)生功能失調(diào)，出現(xiàn)虛熱、虛寒證候^[19]。同時cAMP，cGMP作為細胞調(diào)控作用的第二信使，是激素、神經(jīng)介質(zhì)、藥物效應的中間環(huán)節(jié)，大多數(shù)激素等都是通過cAMP，cGMP發(fā)揮生理作用進而影響酶的生成或活性以實現(xiàn)對代謝的調(diào)節(jié)^[10]。根據(jù)張冰等實驗研究表明^[20]，在陰虛病理狀態(tài)下，cAMP與cGMP的含量出現(xiàn)相對失調(diào)，cAMP/cGMP值明顯升高，進一步增加T3，T4，rT3等激素的釋放，提高了機體組織耗氧和產(chǎn)熱，與此同時由于大量激素的釋放，加快了TP，UA，TC，TG，ALB物質(zhì)的代謝，使代謝量升高，當給予相關寒涼藥物（六味地黃丸）治療后，抑制了機體環(huán)核苷酸、激素、代謝等指標的水平。在陽虛狀態(tài)下生物學表達特征變化則反之，當給予相關熱性藥物（仙茅）治療后^[21]，促進了機體環(huán)核苷酸、激素、代謝等指標的水平。

在傳統(tǒng)中藥中，黃柏苦、寒，為寒性中藥；肉桂辛、甘、大熱，為熱性中藥。本實驗結(jié)果顯示，虛熱狀態(tài)的大鼠，內(nèi)分泌激素出現(xiàn)紊亂，代謝增強，并伴有環(huán)核苷酸代謝亢進。虛寒狀態(tài)的大鼠，內(nèi)分泌激素出現(xiàn)紊亂，代謝降低，并伴有環(huán)核苷酸代謝障礙。經(jīng)黃柏、肉桂干預后，糾正了血清中內(nèi)分泌激素的紊亂，恢復了環(huán)核苷酸以及代謝水平。經(jīng)阿薩伊干預后，虛熱證候的老鼠血清中內(nèi)分泌激素紊亂明顯改善，代謝下降，恢復了環(huán)核苷酸代謝水平，且與黃柏作用相似，反觀虛寒證候的大鼠狀態(tài)未明顯改善。

本研究以同類比較、異類反證法，通過考察、分析黃柏、肉桂以及阿薩伊對虛熱證、虛寒證大鼠生物學表達特征變化差異，驗證了阿薩伊的中藥寒涼藥性，同時為深入探討阿薩伊并將其引入中藥，發(fā)揮臨床療效奠定了理論基礎。

[致謝]基礎醫(yī)學院科研實驗中心李偉老師在藥物制備及實驗操作中提供了幫助。

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[責任編輯 馬超一]