不同碳源對番茄早疫病菌絲生長的影響

邊亞麗

內(nèi)蒙古赤峰市林西縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心

不同碳源對番茄早疫病菌絲生長的影響

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本研究通過對番茄早疫病病害組織的分生孢子的鑒定，可知該病由半知菌亞門真菌茄鏈格孢菌侵染所致形成的番茄早疫病。在病菌的碳源試驗中，番茄早疫病菌對不同碳源的選擇性比較敏感，如果采用液體培養(yǎng)選用的碳源以葡萄糖，乳糖和甘油為好，對其它形態(tài)的碳源的利用效率則較低。

番茄早疫病 病原鑒定 碳源試驗

一、材料與方法

1．材料

（1）材料的來源。大棚采集的番茄的受害的枝葉、果實。

（2）培養(yǎng)基。馬鈴薯的固體和液體培養(yǎng)基。

（3）供試碳源。單糖類∶葡萄糖；雙糖類∶蔗糖、乳糖；多糖類∶可溶性淀粉；醇類∶甘油。

（4）儀器設(shè)備。LRHS-250B恒溫恒濕培養(yǎng)箱HZS-H水浴振蕩器；101-2型電熱鼓風干燥箱；280—輕便手提式壓力蒸汽消毒器。

2．試驗方法

（1）病原的鑒定及分離純化。從新鮮、具典型癥狀病斑上挑取病組織壓片鏡檢，觀察其分生孢子、分生孢子梗形狀、色澤并測量其大小。同時將病斑在25℃下保濕48h后作同樣檢查.參照邵力平、沈瑞祥、張素軒的《真菌分類學》有關(guān)專著，進行描述和鑒定。在番茄早疫病的新鮮病葉上，選擇典型的單個病斑，用剪刀從病斑邊緣（病健交界處）剪取邊長4～5毫米病組織。將病組織進行常規(guī)組織分離純化。待菌落直徑長至5～6厘米時，方可用。

（2）不同碳源對菌絲的影響。

固體培養(yǎng)：以PA做基本培養(yǎng)基CK，各種碳源均以20克/升量分別加入，配成各種碳源培養(yǎng)基。病菌在PDA平板上（直徑9厘米）培養(yǎng)，3天后待菌落直徑長至5～6厘米，從邊緣打?。ㄖ睆?.6厘米）的菌片，分別移植于各種碳源培養(yǎng)基平板中央。每處理重復3次。每個過程都要在無菌實驗室操作，恒溫24℃培養(yǎng)。每天記錄菌落擴展情況，每隔1天測量菌落徑，調(diào)查菌落顏色。7天繪制菌絲生長速度曲線，進行比較。

液體培養(yǎng)：以馬鈴薯液作為基本培養(yǎng)基，分別加入20克/升的上述各種碳源，配制成不同碳源培養(yǎng)液。應用試管盛裝培養(yǎng)液培養(yǎng)，各培養(yǎng)基均加10毫升，滅菌待冷卻后在無菌超凈工作臺上分別移植1個已培養(yǎng)好的菌片（直徑0.6厘米）放入試管中，24℃下恒溫震蕩培養(yǎng)，每處理重復3次。80轉(zhuǎn)/分鐘震蕩培養(yǎng)7天后，過濾烘干測量菌絲干重。

二、結(jié)果與分析

1．病原的鑒定及分離純化

通過對番茄病害組織的分生孢子的鑒定，參照《真菌分類學》等著作，可知該病由半知菌亞門真菌茄鏈格孢菌侵染所致形成的番茄早疫病。

在馬鈴薯培養(yǎng)基上培養(yǎng)的番茄早疫病病菌，觀察其菌落形態(tài)和特征，從菌落顏色，菌落的生長速度等經(jīng)過7天的培養(yǎng)均表現(xiàn)出明顯的差異性。

圖1 不同碳源培養(yǎng)基固體培養(yǎng)8天后所形成的病菌形態(tài)特征圖

圖2 不同碳源對病菌生長影響

2.不同碳源對菌絲的影響

（1）固體培養(yǎng)。由表1可以看出，病菌經(jīng)過在不同碳源培養(yǎng)基7天的培養(yǎng)，可知對單糖中的葡萄糖利用較好。對二糖中的蔗糖也都能很好的利用，而對二糖中的乳糖利用相對較差。在醇類中，對甘油的利用也較好。但對多糖中的可溶性淀粉利用較為不好。從圖1可以看出，菌落的顏色在病菌較易擴展、菌落直徑較大時，菌落顏色較深；反之，則菌落顏色較淺。

表1 不同固體碳源培養(yǎng)基對菌絲生長的影響

從圖2生長趨勢曲線來看，在蔗糖、乳糖和可溶性淀粉的培養(yǎng)基上病菌前6天基本為勻速生長，而從第6天到第8天生長速度明顯下降，尤其是可溶性淀粉的培養(yǎng)基幾乎不在生長。在葡萄糖的培養(yǎng)基上前4天生長速度較快，第4天到第6天相對緩慢，后來較為平緩。在甘油上的培養(yǎng)基前6天呈加速上升趨勢，但第6天到第8天生長速度相對減慢。從整體來看，病菌對葡萄糖和蔗糖的利用最好，對可溶性淀粉的利用最差，菌落擴展最慢。

（2）液體培養(yǎng)。由表2可以看出，病菌對碳源的利用，以乳糖和葡萄糖為好，其次為甘油，對蔗糖的利用也較好；病菌對其它可溶性淀粉的利用則很差，菌絲體生長較慢，干重很低。在馬鈴薯汁中加入醇類碳源，病菌不但不能利用該碳源，而且限制了病菌的生長，其機理還有待于進一步研究。

表2 病菌在不同碳源培養(yǎng)液中的菌絲生長量

三、結(jié)論與討論

在病菌的碳源試驗中，番茄早疫病菌對各種碳源營養(yǎng)具有明顯的選擇作用。在固體培養(yǎng)中，病菌對碳源的利用以葡萄糖和蔗糖的培養(yǎng)基長勢為最好，其次為乳糖和甘油，可溶性淀粉的培養(yǎng)基長勢不如對照。在液體培養(yǎng)中，病菌對碳源的利用以乳糖為最好，其次為葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)的病菌，而病菌對蔗糖和甘油的利用比其它碳源則利差，菌絲體長勢較慢，干重較低。

在試驗中，有一個值得注意的現(xiàn)象是病菌的直線生長速度同菌絲體干重生長速度并無正相關(guān)。Harry. Hudson1986指出，用線性生長測定菌落生長速度具有很大的局限性，在低營養(yǎng)的基質(zhì)中，菌落直線生長可能很快，但由于菌落稀疏而實際生長量卻很小，相反在高營養(yǎng)基質(zhì)中生長的菌落，其直線生長速率可能不快，但實際生長量卻較大。在這種情況下，我們認為應采用液體培養(yǎng)為主。本研究表明番茄早疫病菌對不同碳源的選擇性比較敏感，如果采用液體培養(yǎng)選用的碳源以葡萄糖，乳糖和甘油為好，對其它形態(tài)的碳源的利用效率則較低。本研究中病菌菌絲直線生長速度和干重生長速度所表現(xiàn)出的顯著差異，以及在固態(tài)培養(yǎng)中加入可溶性淀粉，菌絲生長速度還不及對照的現(xiàn)象，值得進一步研究探討。