硫酸銅對斑石鯛幼魚的急性毒性及對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的殺滅效果

范　超，史成銀

（1. 農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東青島　266071；2. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，山東青島　266071；3. 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上?！?01306）

硫酸銅對斑石鯛幼魚的急性毒性及對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的殺滅效果

范超1，2，3，史成銀1

（1. 農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東青島266071；2. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，山東青島266071；3. 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海201306）

斑石鯛是海水養(yǎng)殖魚類新品種，對其病害的研究較少。2014年7月和2015年5月國內(nèi)某斑石鯛育苗場暴發(fā)卵鞭蟲病，導(dǎo)致幼魚大量死亡，造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。為了安全、有效地防治該病，開展了硫酸銅對斑石鯛幼魚的急性毒性實(shí)驗(yàn)以及對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的殺滅實(shí)驗(yàn)。在水溫23～25 ℃、鹽度30、體積20 L的養(yǎng)殖海水中，采用靜水試驗(yàn)法，對平均全長4 cm的健康斑石鯛幼魚進(jìn)行硫酸銅急性毒性實(shí)驗(yàn)，得出CuSO4·5H2O對斑石鯛幼魚的安全濃度為2.22 mg/L；用濃度為0.10～0.70 mg/L的CuSO4·5H2O無菌海水溶液，在25 ℃恒溫條件下處理眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲渦孢子和包囊體，結(jié)果發(fā)現(xiàn)0.40 mg/L的CuSO4·5H2O可完全殺滅渦孢子，0.70 mg/L的CuSO4·5H2O可完全抑制包囊體的分裂。因此，在防治斑石鯛幼魚卵鞭蟲病時，CuSO4·5H2O的安全有效使用濃度為0.70～2.22 mg/L。該研究為育苗生產(chǎn)中有效防治斑石鯛卵鞭蟲病提供了參考依據(jù)。

斑石鯛；眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲；硫酸銅；急性毒性；安全濃度

斑石鯛（Oplegnathus puncatus）屬鱸形目（Perciformes），石鯛科（Oplegnathidae）石鯛屬（Oplegnathus），俗稱黑金鼓。屬于溫?zé)釒Ыｔ~類，經(jīng)濟(jì)價值高，但自然資源很少。20世紀(jì)70年代，日本學(xué)者對斑石鯛的育苗技術(shù)進(jìn)行了研究，成功馴化了親魚并獲得了苗種。但受苗期病害的影響，日本在斑石鯛育苗和養(yǎng)殖方面一直沒有形成規(guī)?；?。2014年，斑石鯛在我國規(guī)?；斯し庇晒?，成為海水養(yǎng)殖魚類新品種。斑石鯛生長速度快、抗逆性強(qiáng)、適鹽、適溫范圍廣，可食用也可觀賞，能在較多區(qū)域養(yǎng)殖，有很高的經(jīng)濟(jì)價值。由于大規(guī)模養(yǎng)殖時間尚短，國內(nèi)外關(guān)于斑石鯛的病害報道也很少。國內(nèi)僅有幾篇虹彩病毒感染斑石鯛的報道［1］。國外（主要是日本）曾報道過斑石鯛上皮囊腫?。?］、病毒性神經(jīng)壞死?。?-4］和粘孢子蟲?。?-6］。到目前為止，國內(nèi)外還未見有斑石鯛卵鞭蟲病的報道。

2014年7月和2015年5月，在國內(nèi)某斑石鯛育苗場人工育苗過程中分別監(jiān)測到卵鞭蟲病。該病導(dǎo)致了斑石鯛幼魚大量死亡，造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。卵鞭蟲病是海水魚類中常見的寄生蟲病，呈世界范圍性分布，主要暴發(fā)于夏秋高溫季節(jié)。其病原眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲（Amyloodinium ocellatum）是一種常見的魚類體表寄生蟲，主要寄生在宿主的鰓和皮膚上［7］。該寄生蟲生活史簡單，只分為三個階段：營養(yǎng)體、包囊體、渦孢子。寄生在魚鰓上的營養(yǎng)體攫取魚體營養(yǎng)，阻礙魚的正常呼吸。當(dāng)包囊體進(jìn)行二分裂增殖，最后產(chǎn)生大量具有感染性渦孢子。環(huán)境條件適宜時，3 d內(nèi)即可完成一個生活史周期，病原數(shù)量的呈幾何級增長［4-5］。因此，如沒有有效的防治措施，該病會給斑石鯛的人工育苗造成嚴(yán)重影響。

硫酸銅是常用的殺滅寄生蟲的漁藥，廣泛應(yīng)用于隱鞭蟲病、車輪蟲病、瓣體蟲病、小瓜蟲病等疾病的防治［7-8］。硫酸銅對寄生蟲的殺滅效果與其濃度呈正相關(guān)。然而，過高濃度的硫酸銅會對魚體健康造成損害，甚至導(dǎo)致魚的死亡。魚體對硫酸銅的耐受度與魚的種類、年齡、水溫等因素密切相關(guān)，使得硫酸銅的安全使用濃度有較大差異［9-14］。對于斑石鯛幼魚，目前還沒有硫酸銅安全使用濃度的報道。另一方面，過低濃度的硫酸銅無法殺滅寄生蟲，對硫酸銅對斑石鯛眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲有效殺滅濃度尚缺乏研究。本研究開展了硫酸銅對健康斑石鯛幼魚的急性毒性實(shí)驗(yàn)和對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲殺滅效果實(shí)驗(yàn)，確定了安全、有效的硫酸銅使用濃度，為斑石鯛育苗生產(chǎn)中有效防治卵鞭蟲病提供了參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)魚

全長3～4 cm的健康斑石鯛幼魚取自山東某斑石鯛育苗場。將實(shí)驗(yàn)魚置于20 L的實(shí)驗(yàn)池中，馴養(yǎng)3 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)前1 d停止喂食。實(shí)驗(yàn)期間，養(yǎng)殖海水溫度23～25 ℃、鹽度30、pH 7.5～8.2、溶氧6.8～7.1 mg/L。實(shí)驗(yàn)期間持續(xù)曝氣，不投喂餌料，以排除餌料和排泄物對實(shí)驗(yàn)的影響。每24 h更換一次實(shí)驗(yàn)海水。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

硫酸銅晶體（CuSO4·5H2O）：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)，批號20150210。在實(shí)驗(yàn)前，先用雙蒸水配制成母液，再根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要稀釋成相應(yīng)的濃度。

1.3 硫酸銅對斑石鯛幼魚的急性毒性實(shí)驗(yàn)

采用靜水式試驗(yàn)法［11，15］，先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定適合的給藥濃度。設(shè)置4個預(yù)實(shí)驗(yàn)組，分別給予質(zhì)量濃度為1.56、15.64、78.22、391.08 mg/L的CuSO4·5H2O（相當(dāng)于1、10、50、250 mg/L的CuSO4），另設(shè)1個不加硫酸銅的對照組，每組5尾斑石鯛幼魚。觀察24～96 h，求出100%死亡濃度（絕對致死濃度，即LC100）和無死亡濃度（最大耐受濃度，即LC0）。

正式實(shí)驗(yàn)時，依據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置5個實(shí)驗(yàn)組，即CuSO4·5H2O質(zhì)量濃度分別為1.56、3.13、4.69、6.26、9.39 mg/L（相當(dāng)于 1.00、2.00、3.00、4.00、6.00 mg/L的CuSO4），另設(shè)1個空白對照組（0.00 mg/L CuSO4）。每組3個平行，共18個實(shí)驗(yàn)池，每實(shí)驗(yàn)池10尾魚。先配制好不同濃度的藥物，充分混勻后再放魚至實(shí)驗(yàn)池中。在實(shí)驗(yàn)開始后的15、30、60 min和2、4、6、8、（14 ± 2）、24、48、72、96 h，詳細(xì)觀察并記錄實(shí)驗(yàn)魚的反應(yīng)情況，發(fā)現(xiàn)死魚及時撈出，填入記錄表格，同時剖檢記錄病變情況。觀察并記錄的內(nèi)容包括：魚的存活狀況、行為是否異常、體色變化、體表粘液分泌情況、平衡性。96 h后，停止藥浴，更換為普通養(yǎng)殖海水繼續(xù)飼養(yǎng)未死亡的實(shí)驗(yàn)魚，每天1次觀察其存活狀態(tài)。

根據(jù)記錄的死亡數(shù)據(jù)，計算出各組的累積死亡率，用“死亡百分?jǐn)?shù)-幾率單位換算表”將累積死亡率轉(zhuǎn)化成幾率單位。采用幾率單位法，分別計算出CuSO4·5H2O對斑石鯛幼魚24、48、72、96 h的半致死濃度（LC50）。然后用公式SC = 0.3 × 48 h -LC50/（24 h-LC50/ 48 h-LC50）2計算出得出安全濃度［17］。

1.4 硫酸銅對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的殺滅實(shí)驗(yàn)

用海水沖洗發(fā)病的瀕死幼魚，收集沉淀于培養(yǎng)皿底部的寄生蟲白色包囊體顆粒。然后用無菌海水反復(fù)沖洗沉淀，清除從魚體沖洗下來的雜質(zhì)。將清洗后的寄生蟲包囊體，平均分配到24孔培養(yǎng)板各孔中，共24個孔。設(shè)置7個實(shí)驗(yàn)組，即CuSO4·5H2O質(zhì)量濃度分別為0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70 mg/L，另設(shè)1個空白對照組（0 mg/L），每組3個平行。將布好包囊體的培養(yǎng)板置于25 ℃恒溫培養(yǎng)，每4 h用顯微鏡觀察并記錄各組寄生蟲渦孢子的活力和包囊體的分裂情況。

2　結(jié)果與分析

2.1 硫酸銅對斑石鯛幼魚的急性毒性

預(yù)實(shí)驗(yàn)測得CuSO4·5H2O對斑石鯛幼魚的LC100是15.64 mg/L，LC0是1.56 mg/L。因此，正式實(shí)驗(yàn)時，設(shè)置5個實(shí)驗(yàn)組，即CuSO4·5H2O質(zhì)量濃度分別為1.56、3.13、4.69、6.26、9.39 mg/L。觀察發(fā)現(xiàn)：CuSO4·5H2O質(zhì)量濃度為9.39 mg/L和6.26 mg/L的實(shí)驗(yàn)組，池水呈微藍(lán)色。實(shí)驗(yàn)開始后30 min內(nèi)，斑石鯛幼魚均無明顯異常；60 min后，9.39 mg/L和6.26 mg/L實(shí)驗(yàn)組中的斑石鯛只在池底處游動，不活躍，反應(yīng)遲鈍，其它實(shí)驗(yàn)組活力正常；2 h時，9.39 mg/L和6.26 mg/L組實(shí)驗(yàn)池中有少量藍(lán)色絮狀沉淀；4 h后，9.39 mg/L和6.26 mg/ L實(shí)驗(yàn)組中的斑石鯛活力弱，個別魚在水中亂游，大部分魚貼底，活動范圍小，其它組無明顯變化；6 h后，9.39 mg/L實(shí)驗(yàn)組活力很差，有2尾側(cè)偏于池底，呼吸急促，6.26 mg/L實(shí)驗(yàn)組無側(cè)偏，魚群活力差，其它組無明顯異常；8 h后，9.39 mg/L實(shí)驗(yàn)組共有3尾幼魚死亡，其它實(shí)驗(yàn)組和對照組無死亡，剛死亡魚體表和鰓絲上附著有藍(lán)色絮狀物，鰓絲無血色，解剖觀察內(nèi)臟無明顯異常。

96 h內(nèi)各實(shí)驗(yàn)組魚的累積死亡率見表1。經(jīng)計算，CuSO4·5H2O對斑石鯛幼魚24、48、72、96 h的LC50分別為9.26、8.59、5.61、4.56 mg/L。由此計算出CuSO4·5H2O對斑石鯛幼魚的安全濃度為2.22 mg/L，相當(dāng)于硫酸銅對斑石鯛幼魚的安全濃度為1.42 mg/L。

96 h之后，用養(yǎng)殖海水繼續(xù)正常飼養(yǎng)各組斑石鯛幼魚。9.39 mg/L和6.26 mg/L實(shí)驗(yàn)組中的魚相繼死亡，4.69 mg/L實(shí)驗(yàn)組中的魚有少數(shù)身體偏側(cè)，其余濃度組中的魚存活良好，攝食正常。

表1　硫酸銅晶體對斑石鯛幼魚的急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 硫酸銅對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的殺滅效果

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，硫酸銅對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲包囊體的分裂具有抑制作用，且對分裂產(chǎn)生的渦孢子具有殺滅作用。隨著硫酸銅濃度的升高，眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲包囊體進(jìn)行二分裂所需的時間逐漸延長，直至不能分裂。0.10 mg/L組，實(shí)驗(yàn)開始48 h后，包囊體陸續(xù)分裂完畢，產(chǎn)生渦孢子，大部分渦孢子有活性，少部分渦孢子沉淀到培養(yǎng)板底部，無活性；72 h后，所有包囊都完成了分裂，進(jìn)入到渦孢子階段。0.20 mg/L組，包囊體分裂速度較0.10 mg/L組慢，但72 h后也基本分裂完畢，大部分渦孢子沉淀于底部，少數(shù)有活性。0.30 mg/L組，72 h后大部分包囊體分裂完畢，有少數(shù)包囊體未能釋放出渦孢子，已釋放出的渦孢子幾乎全部沉淀，無活性。0.40 mg/L組，96 h后有少數(shù)包囊體分裂完畢，但渦孢子剛沖出包囊即被硫酸銅殺滅，沉淀聚集于包囊周圍。0.50 mg/L組，6 d內(nèi)很難有渦孢子沖破包囊，分裂出的少數(shù)渦孢子也被殺滅于包囊附近。0.60 mg/L組，雖然包囊還能進(jìn)行分裂，但幾乎不能產(chǎn)生渦孢子。0.70 mg/L組，7 d后仍以包囊體的形式沉淀于培養(yǎng)皿底部，無法完成正常的分裂。對照組（0 mg/L組），在48 h內(nèi)即全部完成分裂，產(chǎn)生大量游動的、活力很強(qiáng)的渦孢子，在顯微鏡下僅能抓拍到少數(shù)渦孢子（圖1）。

圖1　硫酸銅對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲包囊體分裂的抑制作用及對渦孢子的殺滅效果（80×）

3　討論

硫酸銅是目前為數(shù)不多的可用于殺滅原生動物病原的水產(chǎn)藥物，其作用機(jī)理是：游離的銅離子可破壞寄生蟲體內(nèi)氧化還原酶的活性，阻礙蟲體的物質(zhì)代謝，使蟲體蛋白質(zhì)變性，從而殺滅寄生蟲。然而，硫酸銅對水產(chǎn)動物也具有較強(qiáng)的毒性。已有的研究表明，與鎘、鋅、鉻等重金屬相比，銅對水產(chǎn)動物的毒性最高［8、16-20］。此外，有文獻(xiàn)報道，硫酸銅對各水產(chǎn)動物的安全濃度差異很大，如鯽魚幼魚0.009 mg/L［8，20］、胭脂魚幼魚0.57 mg/L［12，17］、斑馬魚1.03 mg/L［10，12］、黃鱔魚種2.1 mg/L［13，18］、七帶石斑魚初孵仔魚0.009 mg/L［18］、黑鯛幼魚0.02 mg/L、真鯛幼魚0.031 mg/L［11，16］。硫酸銅和硫酸亞鐵合劑對水產(chǎn)動物的安全濃度為斜帶石斑魚幼魚1.485 mg/L［10，15］、星斑川鰈1.09 mg/L［11，15］。因此，魚體對硫酸銅的耐受性與魚種類、魚齡密切相關(guān)，也與養(yǎng)殖水溫、pH值、水中有機(jī)物濃度等相關(guān)。在使用硫酸銅治療水產(chǎn)動物原生動物病時，必須通過實(shí)驗(yàn)研究確定硫酸銅對具體魚種的安全濃度。

本研究確定了CuSO4·5H2O對斑石鯛幼魚的安全濃度為2.22 mg/L，相當(dāng)于硫酸銅的安全濃度為1.42 mg/L。與其它魚類相比，斑石鯛幼魚對硫酸銅的耐受性較高。然而，本研究用1.56 mg/L的CuSO4·5H2O藥浴斑石鯛幼魚96 h時，3個平行實(shí)驗(yàn)池（10尾魚/池）中，有2個實(shí)驗(yàn)池各有1尾幼魚死亡。經(jīng)檢查發(fā)現(xiàn)，這2尾魚因?qū)嶒?yàn)時4 d不投喂飼料，體質(zhì)變差而死亡。因此，雖然2.22 mg/L的CuSO4·5H2O對大多數(shù)斑石鯛幼魚是安全的，但在實(shí)際生產(chǎn)過程中，要盡量保持幼魚的健康水平，且要慎用高濃度的硫酸銅藥浴。該研究結(jié)果對斑石鯛育苗過程中安全使用硫酸銅控制原生動物病具有重要意義。

眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲是魚類養(yǎng)殖中常見的寄生蟲，其宿主范圍極廣，對環(huán)境的耐受性較強(qiáng)，危害很大。生產(chǎn)上常用硫酸銅、福爾馬林、雙氧水、臭氧等殺滅該寄生蟲［3-4］。本研究用不同濃度的CuSO4·5H2O海水溶液處理眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的包囊體和渦孢子，發(fā)現(xiàn)當(dāng)CuSO4·5H2O的濃度為0.10 mg/L時，包囊體的分裂和渦孢子的活力基本不受影響。隨著CuSO4·5H2O濃度的升高，包囊體進(jìn)行二分裂所需的時間逐漸延長，渦孢子活力也逐漸下降。當(dāng)CuSO4·5H2O的濃度為0.40 mg/L時，渦孢子可以全部被殺滅。當(dāng)CuSO4·5H2O的濃度達(dá)到0.70 mg/L時，包囊體不能再分裂，也不會產(chǎn)生渦孢子，可以認(rèn)為淀粉卵渦鞭蟲的分裂增殖被完全抑制。

綜合以上研究結(jié)果，本研究認(rèn)為，在防治斑石鯛幼魚卵鞭蟲病時，可根據(jù)病情的輕重合理使用CuSO4·5H2O，其安全、有效濃度范圍為0.70～2.22 mg/L。生產(chǎn)實(shí)踐中，應(yīng)根據(jù)發(fā)病程度合理確定用藥濃度和連續(xù)藥浴時間，建議0.70 mg/L的CuSO4·5H2O溶液可持續(xù)藥浴7 d，1.56 mg/L的CuSO4·5H2O溶液持續(xù)藥浴不超過4 d，大于1.56 mg/L小于2.22 mg/L的CuSO4·5H2O溶液持續(xù)藥浴3 d，暫停1 d，然后觀察幼魚活力情況，如無異常，繼續(xù)使用3 d。這樣即可完全清除處于不同生活史階段的淀粉卵渦鞭蟲。同時，使用過程中要密切觀察斑石鯛幼魚的反應(yīng)，及時調(diào)整藥物使用量。

本研究還發(fā)現(xiàn)，硫酸銅可刺激眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲營養(yǎng)體從魚體脫落。營養(yǎng)體和包囊體脫落在水中后，趨向于沉到池底。所以，在治療卵鞭蟲病過程中，要每天吸底，以盡可能清除脫落的營養(yǎng)體和包囊體，降低水體中寄生蟲的密度。由于渦孢子既可以通過水汽進(jìn)行傳播［3，20］，也可能通過生產(chǎn)工具傳播，所以育苗過程中發(fā)生卵鞭蟲病時，要及時隔離發(fā)病育苗池，對生產(chǎn)工具和設(shè)備進(jìn)行殺菌、消毒和滅蟲處理，阻斷病原傳播途徑。日常育苗時要以防為主，嚴(yán)控水質(zhì)和餌料品質(zhì)，以降低卵鞭蟲病的發(fā)生率。

硫酸銅是有效治療卵鞭蟲病的藥物，但是過量或者長期使用，不僅會對魚體造成損傷，也會危及水產(chǎn)品質(zhì)量安全和水環(huán)境安全。本研究確定了防治斑石鯛幼魚卵鞭蟲病時硫酸銅的安全、有效使用濃度，為合理用藥提供了依據(jù)。

［1］ Dong C，Weng S，Luo Y，et al. A new marine megalocytivirus from spotted knifejaw，Oplegnathus punctatus，and its pathogenicity to freshwater mandarinfish，Siniperca chuatsi ［J］. Virus Res，2010，147（1）：98-106.

［2］ Egusa S，Miyazaki T，Shiomitsu T，et al. Epitheliocystislike disease occurred among hatchery-reared fl y of Oplegnathus punctatus ［J］. Fish Pathol，1987，22（1）：33-34.

［3］ Skliris G P，Krondiris J V，Sideris D C，et al. Phylogenetic and antigenic characterization of new fi sh nodavirus isolates from Europe and Asia ［J］. Virus Res，2001，75（1）：59-67.

［4］ Woo P T K. Fish Disease and Disorders，Volume 1：Protozoan and Metazoan Infections ［M］. 2nd ed. Oxfordshire：CABI International，Oxford，2006：16-45.

［5］ Yanagida T，Palenzuela O，Hirae T，et al. Myxosporean emaciation disease of cultured red sea bream Pagrus major and spotted knifejaw Oplegnathus punctatus ［J］. Fish Pathol，2008，43（1）：45-48.

［6］ 黃琪琰. 水產(chǎn)動物疾病學(xué) ［M］. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1993：157-192.

［7］ Roberts R J. Fish pathology ［M］. 4th ed. John Wiley & Sons，2012：307.

［8］ 楊麗華，方展強(qiáng)，鄭文彪. 重金屬對鯽魚的急性毒性及安全濃度評價［J］. 華南師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2003（2）：101-106.

［9］ 呂愛軍，李小芹，等. 硫酸銅和氰戊菊酯對斑馬魚急性毒性試驗(yàn) ［J］. 安全與環(huán)境學(xué)報， 2011，11（2）：8-11.

［10］ 周裕華，周文玉，潘桂平，等. 敵百蟲和硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對星斑川鰈的急性毒性［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2012，40（28）：13809-13810.

［11］ 周永欣，章宗涉. 水生生物毒性試驗(yàn)方法［M］. 北京：農(nóng)業(yè)出版社，1989：29-35.

［12］ 楊?，P，鄭微云，陳明達(dá)，等. 重金屬對真鯛幼魚和黑鯛幼魚的毒性效應(yīng)［J］. 廈門大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），1994，33（S1）：28-31.

［13］ 萬全，王婧. 硫酸銅等4種藥物對黃鱔魚種的急性毒性試驗(yàn)［J］. 水產(chǎn)科學(xué)，2005，24（12）：29-30.

［14］ 程敏紅，楊小立，龐強(qiáng)，等. 5種常用漁藥對斜帶石斑魚幼魚的急性毒性試驗(yàn)［J］. 水產(chǎn)科學(xué)，2014，33（2）：69-74.

［15］ Francis-Floyd R，F(xiàn)loyd M R. Amyloodinium ocellatum，an important parasite of cultured marine fi sh［R］. Florida：Southern Regional Aquaculture Center，2011，4705：1-12.

［16］ 吳賢漢，江新霽，張寶錄，等. 幾種重金屬對青島文昌魚毒性及生長的影響 ［J］. 海洋與湖沼，1999，30（6）：604-608.

［17］ 陳昕，胡石柳. 5種常用水產(chǎn)藥物對胭脂魚幼魚的急性毒性研究［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2008，36（22）：9569-9571.

［18］ 孔祥迪，陳超，李炎璐，等. Cu2+、Zn2+、Pb2+對七帶石斑魚（Epinephelus septemfasciatus）胚胎和初孵仔魚的毒性效應(yīng)［J］. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展，2014，35（5）：115-121.

［19］ 吳鼎勛，洪萬樹. 四種重金屬對鮸狀黃姑魚胚胎和仔魚的毒性［J］. 臺灣海峽，1999，18（2）：186-190.

［20］ 邱郁春. 水污染魚類毒性試驗(yàn)方法 ［M］. 北京：中國科學(xué)技術(shù)出版社，1992：109-204.

（責(zé)任編輯：朱迪國）

Acute Toxicity towards Juvenile Spotted Knifejaw （Oplegnathus puncatus） and Eradication Effect on Amyloodinium ocellatum of Copper Sulfate

Fan Chao1，2，3，Shi Chengyin1
（1. Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries，Ministry of Agriculture，Qingdao，Shandong 266071；2. Yellow Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Qingdao，Shandong 266071；3. College of Fisheries and Life Science，Shanghai Ocean University，Shanghai 201306）

Spotted knifejaw（Oplegnathus puncatus）is one of the new marine fishes in China，and there are few studies on the diseases of Spotted knifejaw. Outbreaks of Amyloodinium ocellatum were reported in a fish hatchery in July 2014 and May 2015，which resulted in mass mortality of hatchery-reared Spotted knifejaw juveniles and large fi nancial loss. In order to prevent and control Amyloodinium ocellatum safely and effi ciently，acute toxicity test of copper sulfate（CuSO4） towards Juvenile Spotted knifeja w was conducted and the eradication effect of CuSO4on Amyloodinium ocellatum was also identified. In this study，healthy Spotted knifejaw juveniles（about 4 cm in average total length）were used to investigate the acute toxicity of CuSO4. Through hydrostatic test，results showed safe concentration of CuSO4·5H2O towards Spotted knifejaw juveniles was 2.22 mg/L，under conditions of 20 L seawater，water temperature of 23～25 ℃ and salinity of 30. Treated by sterile sea water containing copper sulfate（water temperature of 25℃，CuSO4·5H2O concentration of 0.10～0.70 mg/L），dinospores of Amyloodinium ocellatum could be completely killed by 0.40 mg/L of CuSO4·5H2O and the division of tomonts could be entirely inhibited by 0.70 mg/L of CuSO4·5H2O. Hence，the safe and effective concentration of CuSO4·5H2O used to cure Amyloodiniosis of Spotted knifejaw juveniles was 0.70～2.22 mg/L. This study provided important basis for the treatment of Amyloodiniosis of Spotted knifejaw juveniles.

Spotted knifejaw；Amyloodinium ocellatum；copper sulfate；acute toxicity；safe concentration

S942.2

A

1005-944X（2016）11-0098-05

10.3969/j.issn.1005-944X.2016.11.026

國家科技支撐計劃課題（2012BAD17B01）

史成銀