Gli-1、Smo蛋白在術前化療與未化療肺癌中的表達及其臨床意義

王佳瑞　鄭賢波　李　明　馬　玥　于　洋　聶慧玲

（大連市第五人民醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，遼寧 大連 116021）

Gli-1、Smo蛋白在術前化療與未化療肺癌中的表達及其臨床意義

王佳瑞鄭賢波李明馬玥于洋聶慧玲

（大連市第五人民醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，遼寧 大連 116021）

目的 為了探討Gli-1和Smo蛋白在術前化療和未化療肺癌組織中的表達及其臨床意義。方法 通過Western Blot、RT-PCR法分別檢測40例術前化療，60例術前未化療肺癌患者的組織及50例癌旁組織中Gli-1和Smo的蛋白和核酸水平的表達情況，并分析Gli-1和Smo蛋白在術前化療和未化療肺癌組織中的表達及其臨床意義。結果 未化療和術前化療緩解的肺癌組織中Gli-1和Smo的表達無論在蛋白水平還是核酸水平均明顯高于癌旁正常組織；經(jīng)過化療緩解的肺癌組織標本兩種蛋白的表達明顯下降。結論 Sonic Hedgehog信號傳導通路在肺癌中有異常激活，檢測肺癌組織中Gli-1和Smo的表達水平可能為肺癌的早期診斷提供依據(jù)，此外兩種蛋白可能成為監(jiān)測肺癌患者病情變化和化療反應的生物學指標。

Gli-1；Smo；肺癌

肺癌目前已經(jīng)成為全球病死率最高的惡性腫瘤。近年來研究表明多條通路設為異常激活與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關，最新研究證實Sonic Hedgehog信號傳導通路在乳腺癌，大腸癌，食道癌，胰腺癌中起著重要作用［1-2］。之前我們研究表明Gli-1和Smo在肺癌組織中的陽性表達明顯高于癌旁組織，兩種蛋白在肺癌中的表達與淋巴結轉移、遠處轉移、侵襲范圍及臨床分期顯著相關［3-4］。本研究除了研究兩種蛋白在未化療肺癌組織中的表達外，還進一步研究其在術前化療肺癌組織中的表達，從而探討兩種蛋白在肺癌治療中的意義。

1　材料與方法

1.1一般資料：收集大連市第五人民醫(yī)院2008年～2014年手術切除并經(jīng)病理證實肺癌為手術標本100例，其中術前化療緩解的肺癌標本40例，術前未經(jīng)放化療的肺癌標本60例，同時選取50例癌旁組織作為對照組。

1.2研究方法

1.2.1材料：Gli-1、Smo單抗購自美國Epitomics公司；凱基全蛋白提取試劑盒購自凱基生物科技有限公司；Western blotting BCA蛋白定量試劑盒、配膠試劑盒、ECL發(fā)光試劑盒、PVDF膜均購自江蘇碧云天公司；Trizol、RT-PCR反轉錄試劑盒、Premix Taq酶、DNA Marker購自TaKaRa（大連寶生物）公司。

1.2.2Western blot檢測Gli-1、Smo蛋白表達：按照凱基全蛋白提取試劑盒提取組織總蛋白，BCA法定量。上樣量40 μg，采用10%SDSPAGE凝膠電泳分離，采用濕法轉膜（1 kD/min）至PVDF膜，用含5%脫脂奶粉的TBST封閉液封閉1 h。后加入一抗（1∶200），BST洗膜后加入二抗（1∶5000），室溫孵育1 h，TBST洗膜后ECL發(fā)光。用Quantity-One軟件對條帶的吸光度值進行半定量分析，以目的蛋白條帶的吸光度值/內(nèi)參β-actin度值的比值表示目的蛋白的相對量。

1.2.4RT-PCR檢測Gli-1、Smo mRNA的表達：按照Trizol試劑盒說明書提取組織總RNA，采用TaKaRa公司反轉錄試劑盒合成cDNA。反應條件：94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s，61 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40個循環(huán)；72 ℃4 min。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳分離，采用Bio-Rad凝膠成像儀成像，Quantity-One軟件對條帶吸光度值進行半定量分析，以目的條帶吸光度值/內(nèi)參條帶吸光度值的比值作為目的基因的相對表達量。

1.3統(tǒng)計學處理：所有實驗均重復3次以上，實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示，采用 SPSS17.0軟件處理，單因素方差分析比較多組間均數(shù)的差異，以P＜0.05表示有顯著性差異。

2　結　果

2.1 Gli-1、Smo在未化療及已化療肺癌組織及癌旁組織中Western Blot檢測結果。Gli-1在未化療肺癌組織中，化療后肺癌組織及癌旁組織中的相對表達量分別為（0.86±0.16）、（0.54±0.08）、（0.34± 0.07），三者間有顯著差異（P＜0.05）。Smo在未化療肺癌組織中的表達（0.64±0.12）明顯高于化療后肺癌組織（0.47±0.10）及癌旁組織（0.24±0.05），三者間有顯著差異（P＜0.05）。見表1。

表1　Gli-1、Smo在未化療及已化療肺癌組織及癌旁組織中Western Blot檢測結果

表1　Gli-1、Smo在未化療及已化療肺癌組織及癌旁組織中Western Blot檢測結果

注：與肺癌未化療組相比較，aP＜0.05；與肺癌已化療組相比較，bP＜0.05

組別Gli-1Smo肺癌未化療組0.86±0.160.64±0.12肺癌已化療組0.54±0.08a0.47±0.10a癌旁組織0.34±0.07ab0.24±0.05ab

2.2Gli-1、Smo RT-PCR檢測結果：Gli-1在未化療肺癌組織中，化療后肺癌組織及癌旁組織中的相對表達量分別為（0.92±0.15）、（0.64± 0.11）、（0.24±0.09），三者間有顯著差異（P＜0.05）。Smo在未化療肺癌組織中的表達（0.62±0.09）明顯高于化療后肺癌組織（0.42± 0.06）及癌旁組織（0.21±0.08），三者間有顯著差異（P＜0.05）。見表2。

表2　Gli-1、Smo在未化療及已化療肺癌組織及癌旁組織中RT-PCR檢測結果

表2　Gli-1、Smo在未化療及已化療肺癌組織及癌旁組織中RT-PCR檢測結果

注：與肺癌未化療組相比較，aP＜0.05；與肺癌已化療組相比較，bP＜0.05

組別Gli-1Smo肺癌未化療組0.92±0.150.62±0.09肺癌已化療組0.64±0.11a0.42±0.06a癌旁組織0.24±0.09ab0.21±0.08ab

3　討　論

Sonic Hedgehog信號傳導通路與胚胎的發(fā)生、發(fā)育密切相關，除此研究表明其在肺癌的發(fā)生和發(fā)展中也起著重要的作用。其主要由Hh配體，膜蛋白受體Ptch、Smo和下游轉錄因子Gli組成。楊鐸等研究表明Sonic Hedgehog信號通路可能參與了肺癌的發(fā)生和發(fā)展［5-6］。

本研究對未化療，術前已化療和癌旁組織中Gli-1和Smo兩種蛋白的表達進行了檢測，結果顯示未化療和經(jīng)過化療緩解的肺癌組織中Gli-1和Smo的表達無論在蛋白水平還是核酸水平均明顯高于癌旁正常組織；結果提示：Sonic Hedgehog信號傳導通路在肺癌中有異常激活，檢測肺癌組織中Gli-1和Smo的表達水平可能為肺癌的早期診斷提供依據(jù)。本研究結果還顯示經(jīng)過化療緩解的肺癌組織標本兩種蛋白的表達明顯下降。提示Gli-1和Smo可能成為監(jiān)測肺癌患者病情變化和化療反應的生物學指標。兩種蛋白在肺癌中的高表達為肺癌分子生物治療靶向治療提供了的理論依據(jù)。

［1］ Bray F，Ren J-S，Masuyer E，et al.Global estimates of cancer prevalence for 27 sites in the adult population in 2008［J］.Int J Cancer，2013，132（5）:1133-1145.

［2］ Trimboli AJ，Cantemir-Stone CZ，Li F，et al.Pten in stromal fibroblasts suppresses mammary epithelial tumours［J］.Nature，2009，461（7267）: 1084-1091.

［3］ 黃美歐，姚洪瑩，劉濤，等.Gli-1在肺癌患者的癌組織中的表達及臨床意義［J］.中國民康醫(yī)學，2015，27（9）:83-84.

［4］ 姚洪瑩，黃美歐，劉濤.程謨朝.Smo在肺癌患者的癌組織中的表達及臨床意義［J］.中國民康醫(yī)學，2015，27（10）:70-71.

［5］ 楊鐸，臧東鈺，李曉明.Shh 蛋白及其下游轉錄因子Gli-1在非小細胞肺癌中的表達及意義［J］.解放軍醫(yī)學院學報，2013，34（11）:1182-1184.

［6］ Watkins DN，Berman DM，Burkholder SG，et al.Hedgehog signalling within airway epithelial progenitors and in small-cell lungCancer［J］.Nature，2003，422（6929）:313-317. 400 mg/m2，于首次給藥間隔28 d再給藥1次，周而復始，持續(xù)治療4個

R734.2

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1671-8194（2016）29-0165-02