HER-2蛋白、VEGF在胃癌組織中的表達(dá)及相互關(guān)系

周強(qiáng),張華勇

(南京鼓樓醫(yī)院，1. 病理科；2.風(fēng)濕免疫科,江蘇 南京　210008)

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HER-2蛋白、VEGF在胃癌組織中的表達(dá)及相互關(guān)系

周強(qiáng)1,張華勇2

(南京鼓樓醫(yī)院，1. 病理科；2.風(fēng)濕免疫科,江蘇 南京210008)

目的：探討表皮生長因子受體(HER)-2蛋白、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在胃癌組織中的表達(dá)及相互關(guān)系。方法：收集行胃癌根治術(shù)的胃癌患者的石蠟標(biāo)本共125例為觀察組，選取距腫瘤組織>5 cm的癌旁正常組織的石蠟標(biāo)本50例作為對照組。各組標(biāo)本分別行HER-2、VEGF免疫組織化學(xué)染色，觀察染色結(jié)果并計(jì)算陽性染色率。分析觀察組胃癌組織中HER-2與VEGF表達(dá)間的關(guān)系。結(jié)果：觀察組HER-2、VEGF的陽性染色率明顯高于對照組，經(jīng)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對125例觀察組胃癌組織中HER-2和VEGF的表達(dá)率進(jìn)行Spearman等級相關(guān)分析，結(jié)果顯示兩者表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.231，P<0.05)。結(jié)論：HER-2、VEGF可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮一定的作用，HER-2可能通過上調(diào)VEGF的表達(dá)促進(jìn)腫瘤新生血管生成。

胃癌;血管內(nèi)皮生長因子;表皮生長因子受體-2

胃癌為常見的惡性腫瘤之一，一般確診時(shí)多處于晚期，姑息治療并不能顯著延長患者的生存期。近年來，愈來愈多的學(xué)者開始從分子靶向水平來研究腫瘤治療，探索腫瘤治療的新手段[1]。正常情況下，人表皮生長因子受體(HER)-2基因僅在胎兒上皮組織表達(dá)，當(dāng)人體受到某些致癌因素刺激后成為激活狀態(tài)，加速細(xì)胞向惡性方向轉(zhuǎn)化，促使癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[2-3]。血管生成在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用，腫瘤局部生長浸潤及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均依賴于血管的生成。血管表皮生長因子(VEGF)是目前發(fā)現(xiàn)最重要的血管生成刺激因子，在正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)，但在大部分惡性腫瘤中均為過表達(dá)狀態(tài)，并能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[4]。本研究通過研究胃腺癌組織中HER-2、VEGF的表達(dá)及相互關(guān)系，以期為胃癌的臨床診斷、多靶點(diǎn)治療提供檢測指標(biāo)和分子生物學(xué)依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集2012年5月至2014年12月期間于南京鼓樓醫(yī)院接受過胃癌根治術(shù)的胃癌患者的石蠟標(biāo)本共125例(觀察組)。入組患者均經(jīng)組織學(xué)證實(shí)為胃腺癌，術(shù)前均未行放化療，且資料標(biāo)本完整(有完整原癌病灶、淋巴組織及癌旁組織)。其中男70例，女55例；年齡30～75歲，平均(56.6±5.3)歲。根據(jù)Lauren組織學(xué)分型：腸型81例，彌漫型38例，混合型6例；根據(jù)細(xì)胞分化程度，低分化79例，中分化28例，高分化18例；根據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期36例，Ⅱ期37例，Ⅲ期44例，Ⅳ期8例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移59例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移66例。另選取距腫瘤組織>5 cm的癌旁組織50例的石蠟標(biāo)本作為對照組。

1.2方法

將石蠟標(biāo)本連續(xù)切片(片厚4 μm)，分別行HER-2、VEGF免疫組織化學(xué)染色：65℃烤片2～4 h，石蠟切片脫蠟，蒸餾水沖洗，枸櫞酸鹽緩沖液浸泡修復(fù)抗原，蒸餾水沖洗，3%H2O2蒸餾水沖洗3次，PBS沖洗3次，滴加一抗，37℃孵育，PBS沖洗，滴加試劑1，37℃孵育，滴加試劑2，37℃孵育，PBS沖洗，DAB顯色5 min，自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，脫水封片。標(biāo)記抗體購自瑞士Roche公司，由兩位病理科醫(yī)生進(jìn)行閱片。HER-2陽性染色定位于細(xì)胞膜，呈棕黃色顆粒，以已知陽性組織切片為陽性對照，以PBS替代一抗作為陰性對照。以Hercep Test評分系統(tǒng)進(jìn)行評價(jià)[5]：>10%有不完整胞膜染色記為(+)，>10%的腫瘤細(xì)胞有較弱至中度完整的膜染色(++)，>10%的細(xì)胞有較強(qiáng)的完整膜染色(+++)，≤10%的細(xì)胞膜染色記為(一)，(-)和(+)為陰性表達(dá)，(++)和(+++)為陽性表達(dá)。VEGF陽性物質(zhì)定位于細(xì)胞質(zhì)，根據(jù)染色強(qiáng)度及染色細(xì)胞百分比進(jìn)行聯(lián)合評分：染色強(qiáng)度無記為0分；染色強(qiáng)度弱記為1分；染色強(qiáng)度中等記為2分；染色強(qiáng)度強(qiáng)記為3分；未見染色，0分；<25%染色，1分；26%～50%染色，2分；>50%染色，3分。兩者加和得分0～2分記為陰性，3～6分均記為陽性。

1.3觀察指標(biāo)

觀察HER-2、VEGF在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)，比較各組陽性染色率；分析觀察組胃癌組織中HER-2與VEGF表達(dá)間的關(guān)系。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SAS 9.0 軟件錄入和分析數(shù)據(jù)，定性資料采用百分比表示，采用卡方檢驗(yàn)，四格表資料采用卡方分析，相關(guān)性分析采用Spearman等級分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1HER-2蛋白在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)

觀察組有13例HER-2表達(dá)陽性，陽性率為10.4%(13/125)；對照組無HER-2陽性表達(dá)病例，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。染色切片見圖1。

2.2VEGF蛋白在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)

VEGF陽性染色主要分布于細(xì)胞質(zhì)，陽性染色為棕黃色顆粒。觀察組有78例VEGF表達(dá)陽性，47例表達(dá)陰性，陽性表達(dá)率為62.4%(78/125)；對照組有12例VEGF表達(dá)陽性，38例表達(dá)陰性，陽性表達(dá)率為24.0%(12/50)，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。染色切片見圖2。

2.3觀察組HER-2與VEGF表達(dá)間的關(guān)系

對125例觀察組胃癌組織中HER-2和VEGF的表達(dá)率進(jìn)行Spearman等級相關(guān)分析，結(jié)果顯示兩者表達(dá)呈顯著性正相關(guān)(r=0.231，P<0.05)。見表1。

表1　胃癌組織中HER-2和VEGF表達(dá)間的關(guān)系

3　討論

人HER-2原癌基因定位于染色體17q21，HER-2蛋白具有酪氨酸蛋白激酶活性，正常成人體內(nèi)只有極少數(shù)組織有少量表達(dá)，而在人類惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)為不同程度的擴(kuò)增和過表達(dá)。HER-2的基因擴(kuò)增、過量表達(dá)貫穿于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程中，過表達(dá)的HER-2以聚合在細(xì)胞表面的方式激活自身，參與腫瘤細(xì)胞的增殖分化、浸潤轉(zhuǎn)移以及抗凋亡過程[6]。一般情況下，HER-2基因處于沉默狀態(tài)，當(dāng)受到某些致癌因素作用后，其表達(dá)成為激活狀態(tài)，基因擴(kuò)增失控[7]。研究[8]表明，HER-2基因的異常擴(kuò)增及過表達(dá)與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，在結(jié)腸癌、胃癌、膀胱癌等一些腫瘤中均發(fā)現(xiàn)有HER-2蛋白的過表達(dá)。免疫組化法或熒光原位雜交技術(shù)(FISH)均可用于評估HER-2表達(dá)。本研究通過免疫組織化學(xué)染色的方法檢測到HER-2蛋白在125例胃癌組織中的陽性表達(dá)率為10.4%，而癌旁組織中未見表達(dá)，提示HER-2主要參與腫瘤細(xì)胞的增殖、生長浸潤等過程，而非腫瘤的形成機(jī)制。馬德等[9]報(bào)道，胃癌患者HER-2蛋白表達(dá)率為10%～30%，本研究表達(dá)率為10.4%，與研究結(jié)果一致。目前針對乳腺癌HER-2高表達(dá)的單克隆抗體Herceptin已在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，且效果良好，有研究[10]發(fā)現(xiàn)Herceptin在體外實(shí)驗(yàn)中能夠抑制胃癌細(xì)胞生長，《2016年版中國胃癌HER-2檢測指南更新》中指出HER-2是胃癌Herceptin治療的預(yù)測因子，經(jīng)病理確診的胃癌患者均應(yīng)接受HER-2檢測。因此，可以肯定HER-2檢測對胃癌的預(yù)后判斷及治療有一定的臨床意義。

腫瘤的生長與轉(zhuǎn)移有賴于腫瘤血管新生，腫瘤干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為內(nèi)皮細(xì)胞，調(diào)控新生血管向腫瘤方向生長，為腫瘤提供氧氣及營養(yǎng)物質(zhì)，并及時(shí)運(yùn)走代謝產(chǎn)物，促使腫瘤快速生長?，F(xiàn)一致認(rèn)為，血管生成對腫瘤的生長尤為重要，其中VEGF是迄今研究證實(shí)作用最強(qiáng)的促血管生成因子[11]，其作為一個(gè)重要的促血管生成因子，在原位誘導(dǎo)血管生成的作用十分強(qiáng)大，能夠特異性引起血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖。本研究結(jié)果顯示，125例觀察組有78例VEGF表達(dá)陽性，陽性表達(dá)率達(dá)62.4%，明顯高于癌旁組織的24.0%，表明VEGF在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。

關(guān)于腫瘤中HER-2與VEGF的關(guān)系，在某些乳腺癌、鼻咽癌、結(jié)腸癌等的研究中有所報(bào)道，認(rèn)為HER-2的表達(dá)增加會(huì)引起VEGF水平的顯著升高[12-13]。在Honma[14]的一項(xiàng)關(guān)于胃癌的報(bào)道中指出，癌細(xì)胞組織中VEGF的血管生成機(jī)制可能與HER-2的活性有關(guān)，HER-2過量表達(dá)能夠誘導(dǎo)VEGF的表達(dá)，并促進(jìn)腫瘤微血管的生成，可能存在的機(jī)制是：HER-2配體經(jīng)由P38-MAPK信號通路刺激細(xì)胞核因子κB(NF-κB)，引起VEGF上調(diào)。沈琳等[15]研究指出，VEGF的表達(dá)水平受HER-2信號通路的正性調(diào)節(jié)影響，抑制HER-2的信號傳導(dǎo)通路則能夠降低VEGF的表達(dá)水平。本研究對125例觀察組胃癌組織中HER-2和VEGF的表達(dá)率進(jìn)行Spearman等級相關(guān)分析，結(jié)果顯示兩者表達(dá)呈顯著性正相關(guān)，提示HER-2和VEGF可能共同參與胃癌新生血管的調(diào)控，過量表達(dá)的HER-2可能通過正向調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)以促進(jìn)腫瘤新生血管的生成，為分子靶向治療藥物在胃癌的應(yīng)用提供了一定的理論基礎(chǔ)。

[1]戴飛飛,池苗苗,王亞坤,等.Her-2陽性進(jìn)展期胃癌靶向治療現(xiàn)狀[J].中國腫瘤,2015,24(5):408-412.

[2]Rivera F,Carrato A,Grávalos C,etal.Recommendations on current approach to gastric cancer[J].Clin Transl Oncol,2009,11(8):518-525.

[3]王哲近, 麻忠武, 陳峰, 等. 癌組織中Her-2、VEGF-C的表達(dá)及意義[J]. 醫(yī)學(xué)研究雜志, 2015, 44(6): 130-133.

[4]Kang YK,Rha SY,Tassone P,etal.A phase IIa dose-finding and safety study of first-line pertuzumab in combination with trastuzumab,capecitabine and cisplatin in patients with HER2-positive advanced gastric cancer[J].Br J Cancer,2014,111(4):660-666.

[5]Hofmann M,Stoss O,Shi D,etal.Assessment of a HER2 scoringsystem for gastric cancer:results from a validation study[J].Histopathology,2008,52(7):797-805.

[6]馬瑩,宋印利,包穎.EGFR、HER-2、VEGF及IGF-1R在胃癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)相關(guān)性分析[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2014,48(3):191-194.

[7]Satoh T,Xu RH,Chung HC,etal.Lapatinib plus paclitaxel versus paclitaxel alone in the second-line treatment of HER2-amplified advanced gastric cancer in Asian populations:TyTAN-a randomized,phase III study[J].J Clin Oncol,2014,32(19):2039-2049.

[8]高丹丹,劉磊,白玉賢.晚期胃癌化療及分子靶向治療研究進(jìn)展[J].中國腫瘤臨床,2012,20(23):1978-1981.

[9]馬德,陳靜,陸網(wǎng)坤,等.Her-2蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床病理意義[J].腫瘤藥學(xué),2015,5(5):368-371.

[10]Ma L,Zhang G,Miao XB,etal.Cancer stem-like cell properties are regulated by EGFR/AKT/β-catenin signaling and preferentially inhibited by gefitinib in nasopharyngeal carcinoma[J].FEBS J,2013,280(9):2027-2041.

[11]Won E,Janjigian YJ,Ilson DH.HER2 directed therapy for gastric/esophageal cancers[J].Curr Treat Options Oncol,2014,15(3):395-404.

[12]王進(jìn),曾祥,胡偉民.IGF-1R、EGFR、VEGF、HER2在胃癌組織中的表達(dá)及與其預(yù)后的關(guān)系[J].實(shí)用癌癥雜志,2012,27(5):468-471,485.

[13]Palacio S,Loaiza-Bonilla A,Kittaneh M,etal.Successful use of Trastuzumab with anthracycline-based chemotherapy followed by trastuzumab maintenance in patients with advanced HER2-positive gastric cancer[J].Anticancer Res,2014,34(1):301-306.

[14]Honma Y,Shimada Y,Takashima A,etal.Efficacy of S-1 plus cisplatin combination chemotherapy in patients with HER2-positive advanced gastric cancer[J].Int J Clin Oncol,2014,19(5):863-870.

[15]沈琳,徐建明,馮奉儀,等.曲妥珠單抗聯(lián)合化療一線治療人表皮生長因子受體2陽性無法手術(shù)的局部進(jìn)展期或轉(zhuǎn)移性胃或胃食管結(jié)合部腺癌的多中心隨機(jī)對照Ⅲ期臨床試驗(yàn)中國亞組報(bào)告[J].中華腫瘤雜志,2013,35(4):295-300.

(學(xué)術(shù)編輯：龍瓊先)

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Expressions of HER-2 protein and VEGF in gastric cancer tissues and their mutual relationships

ZHOU Qiang1,ZHANG Hua-yong2

(1.DepartmentofPathology;2.DepartmentofRheumatology,NanjingDrumTowerHospital,Nanjing210008,Jiangsu,China)

Objective：To explore the expressions of human epidermal growth factor receptor 2(HER)-2 protein and vascular endothelial growth factor (VEGF) in gastric cancer tissues and their mutual relationships.Methods：Paraffin samples from 125 patients with gastric cancer who received radical operation for gastric cancer served as observation group,while those from normal tissues >5 cm away from cancerous tissues in 50 patients as control group.Immunohistochemical staining of HER-2 and VEGF were conducted to the samples in both groups to observe the staining results and calculate positive staining rate.And the relationship between HER-2 and VEGF in gastric tissues in observation group was analyzed.Results：Observation group was markedly higher in the positive staining rates of HER-2 and VEGF than control group,and the differences were significant (P<0.05).Spearman rank correlation analysis was performed to analyze the expression rates of HER-2 and VEGF in the gastric tissues in observation group,and the results indicated that HER-2 expression was in positive association with VEGF (r=0.231,P<0.05).Conclusion：HER-2 and VEGF may play certain function in the development and progression of gastric cancer,and HER-2 may increase the tumor angiogenesis by up-regulating VEGF.

Gastric cancer;Human epidermal growth factor receptor;Vascular endothelial growth factor

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.05.019

2016-05-10

周強(qiáng)(1974-)，男，主管技師。E-mail：7591042@qq.com

張華勇，E-mail：13770560567@163.com

時(shí)間：2016-10-2511∶31

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20161014.1716.038.html

1005-3697(2016)05-0690-03

R735.2

A