HER2 ECD和CA15-3聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值

朱娟娟，胡志軍，沈國(guó)棟，周東升，汪亞勤，唐吉斌

HER2 ECD和CA15-3聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值

朱娟娟1，胡志軍1，沈國(guó)棟2，周東升1，汪亞勤1，唐吉斌1

選取86例乳腺癌術(shù)后病例（復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移34例，未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移52例），ELISA法檢測(cè)血清HER2胞外段（HER2 ECD）濃度，化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)糖類(lèi)抗原15-3（CA15-3）濃度。復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組患者血清中HER2 ECD與CA15-3濃度顯著高于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，二者聯(lián)合檢測(cè)可提高對(duì)乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移診斷的靈敏度和特異度，血中HER2 ECD的陽(yáng)性率與患者組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及組織HER2狀態(tài)相關(guān)，CA15-3陽(yáng)性率與組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

HER2 ECD；乳腺癌；復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移；CA15-3；聯(lián)合檢測(cè)

HER2屬于受體酪氨酸激酶中的生長(zhǎng)因子受體家族，其過(guò)表達(dá)對(duì)乳腺癌是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因子，提示預(yù)后差，容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，目前主要通過(guò)免疫組織化學(xué)法（immunohistochemistry，IHC）和熒光原位雜交法（fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）對(duì)組織進(jìn)行檢測(cè)。近年來(lái)研究［1］表明，HER2胞外段即HER2 ECD可以從細(xì)胞表面切割進(jìn)入血中循環(huán)，可導(dǎo)致與細(xì)胞膜關(guān)聯(lián)的胞內(nèi)區(qū)（p95蛋白）持續(xù)活化和下游MAPK及PI3K通路的增強(qiáng)，使細(xì)胞增殖失控更具侵襲性。加上其采集方便、可進(jìn)行準(zhǔn)確的定量檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)，外周血中HER2 ECD檢測(cè)越來(lái)越得到人們的重視，有望成為IHC和FISH等檢測(cè)的有效補(bǔ)充手段［2］。糖類(lèi)抗原15-3（carbohydrate antigen 15-3，CA15-3）是目前最常用的判斷乳腺癌預(yù)后及復(fù)發(fā)的獨(dú)立性因子。該研究通過(guò)檢測(cè)外周血血清中HER2 ECD與CA15-3在乳腺癌不同發(fā)展階段的濃度水平來(lái)探討其診斷價(jià)值，以期為臨床工作提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病例資料 研究對(duì)象為2013年1月～2014年7月在銅陵市人民醫(yī)院術(shù)后進(jìn)行放化療治療的病歷資料完整的86例乳腺癌患者，女85例，男1例；年齡31～67歲，中位年齡51歲；浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌82例，大汗腺樣癌、導(dǎo)管原位癌、浸潤(rùn)性小葉癌、黏液癌各1例。86例患者中34例發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，52例未發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。

1.2 標(biāo)本采集 住院患者早晨空腹采集靜脈血3 ml，靜置20 min，3 000 r/min離心10 min，取血清至于潔凈EP管中，于-80℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測(cè)方法 HER2 ECD采用 ELISA法檢測(cè)，試劑盒由美國(guó)eBioscience公司提供，所有操作按說(shuō)明書(shū)和實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后于450 nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（optical density，OD）值，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度和OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)即可計(jì)算樣本的濃度。CA15-3檢測(cè)采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（ARCHITECT i2000）和配套試劑進(jìn)行檢測(cè)，HER2 ECD以2003年美國(guó)FDA規(guī)定的15 g/L為臨界值，CA15-3以銅陵市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科采用的31.3 U/L為臨界值，高于臨界值即為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示，組間資料比較采用 χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料比較用非參數(shù)Mann-Whitney檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Spearman檢驗(yàn)，采用受試者工作特征曲線(xiàn)（ROC曲線(xiàn)）對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析與評(píng)價(jià)。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組和未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組HER2 ECD及CA15-3濃度的比較 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組中的HER2 ECD及CA15-3的濃度均顯著高于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.2 相關(guān)性分析 乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組中HER2 ECD與CA15-3的濃度呈正相關(guān)性（rs=0.681，P＜0.05）。

2.3 HER2 ECD、CA15-3對(duì)乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值 應(yīng)用ROC曲線(xiàn)分析實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)（圖1）。HER2 ECD和CA15-3的曲線(xiàn)下面積（AUC）分別為0.850和0.900，對(duì)乳腺癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移具有中等診斷價(jià)值。以15 g/L為臨界值時(shí)，HER2 ECD對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)診斷的靈敏度為 58.8%，特異度為98.1%，符合率為82.6%。以31.3 U/L為臨界值時(shí)，CA15-3的靈敏度為73.5%，特異度為98.1%，符合率為96.2%。將二者聯(lián)合分析，結(jié)果顯示并聯(lián)檢測(cè)對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的靈敏度為94.1%，特異度為96.2%，符合率為83.7%，串聯(lián)檢測(cè)對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的靈敏度為38.2%，特異度為100.0%，符合率為77.6%。見(jiàn)表2。

2.4 乳腺癌患者血清中HER2 ECD、CA15-3陽(yáng)性率與患者臨床特征關(guān)系 HER2 ECD和CA15-3的陽(yáng)性率在不同年齡人群中分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在不同組織學(xué)分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)患者中HER2 ECD和CA15-3的陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）：Ⅲ級(jí)的陽(yáng)性率要明顯高于Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性率也明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。除此之外，組織HER2陽(yáng)性患者的HER2 ECD陽(yáng)性率明顯高于組織HER2陰性的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而CA15-3的陽(yáng)性率在組織HER2陽(yáng)性組和陰性組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表3。

圖1 HER2 ECD和CA15-3的ROC曲線(xiàn)

表1 乳腺癌患者血清中HER2 ECD和CA15-3水平比較［M（P25，P75）］

表2 HER2 ECD和CA15-3對(duì)乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值（%）

表3 乳腺癌患者HER2 ECD、CA15-3表達(dá)情況與患者臨床特征關(guān)系［n（%）］

3 討論

乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，目前的治療方法主要以手術(shù)為主，而術(shù)后監(jiān)測(cè)有無(wú)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移對(duì)降低死亡率至關(guān)重要。外周血中腫瘤指標(biāo)檢測(cè)憑著取材方便、可進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的優(yōu)點(diǎn)已在臨床上廣泛應(yīng)用。

CA15-3是目前公認(rèn)的用于監(jiān)測(cè)乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的糖類(lèi)抗原［3］，HER2 ECD作為組織HER2蛋白的切割產(chǎn)物不僅反映乳腺癌的腫瘤負(fù)荷，還反映腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)活性，已有研究［4-5］顯示升高的HER2 ECD不僅可提示腫瘤的預(yù)后復(fù)發(fā)，還有助于腫瘤的療效判斷［6-7］，本研究結(jié)果表明HER2 ECD 和CA15-3在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組中的濃度明顯高于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，并且二者的濃度在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組中呈正相關(guān)性，提示這兩種因子聯(lián)合檢測(cè)有利于對(duì)乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷。研究還用了ROC曲線(xiàn)分析兩種因子對(duì)乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值，顯示HER2 ECD和CA15-3的AUC分別為0.850和0.900，具有中等診斷價(jià)值。本研究并未采用尤登指數(shù)（靈敏度+特異度-1）最大時(shí)的臨界值，而是采取在臨床接受程度更為廣泛的15 g/L和31.3 U/L作為HER2 ECD和CA15-3的臨界值，結(jié)果顯示單獨(dú)分析時(shí)HER2 ECD的靈敏度稍高于CA15-3，二者特異度相同，與文獻(xiàn)［5］報(bào)道略有偏差，可能與樣本數(shù)量以及是否限定組織HER2狀態(tài)等因素有關(guān)。但是二者并聯(lián)檢測(cè)時(shí)可提高診斷的靈敏度，串聯(lián)檢測(cè)時(shí)可提高診斷的特異度，符合文獻(xiàn)［8-9］報(bào)道。

本研究還顯示HER2 ECD的陽(yáng)性率與年齡無(wú)關(guān)，與組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與文獻(xiàn)［10-11］報(bào)道一致。HER2 ECD水平與組織HER2表達(dá)之間的相關(guān)性尚存有爭(zhēng)議［12-13］，其原因可能與樣本來(lái)源、數(shù)量以及閾值界定不同有關(guān)［14］，本研究的對(duì)象是乳腺癌術(shù)后患者，排除了腫瘤負(fù)荷的影響，但仍可看出HER2 ECD的陽(yáng)性率在組織HER2陽(yáng)性組中明顯高于HER2陰性組，提示HER2 ECD水平的升高對(duì)判斷組織HER2陽(yáng)性的患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移具有重要的臨床意義［2］，本研究中有2例組織HER2陰性的患者血中HER2 ECD為陽(yáng)性，可能與技術(shù)誤差及腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)轉(zhuǎn)變有關(guān)。CA15-3在臨床已得到廣泛應(yīng)用，其水平變化與其局部淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況之間存在一致性，尤其是有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶者，本研究顯示CA15-3的陽(yáng)性率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)和組織學(xué)分級(jí)相關(guān)，而與年齡、組織HER2狀態(tài)無(wú)關(guān)。

綜上所述，HER2 ECD、CA15-3與乳腺癌的病程進(jìn)展相關(guān)，其檢測(cè)具有連續(xù)性、實(shí)時(shí)性和方便性的優(yōu)點(diǎn)，可對(duì)腫瘤進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，二者聯(lián)合檢測(cè)可為乳腺癌的臨床診斷和治療提供思路和理論指導(dǎo)。

［1］ Tse C，Gauchez A S，Jacot W，et al.HER2 shedding and serum HER2 extracellular domain：biology and clinical utility in breast cancer［J］.Cancer Treat Rev，2012，38（2）：133-42.

［2］ 杜 萌，王 濤，江澤飛.乳腺癌患者血清人表皮生長(zhǎng)因子受體2胞外域檢測(cè)的臨床研究現(xiàn)狀［J］.中華乳腺病雜志（電子版），2011，5（5）：593-600.

［3］ 羅宏濤，魏世鴻，王小虎，等.聯(lián)合檢測(cè)CA153和CEA在乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移監(jiān)測(cè)中的臨床價(jià)值［J］.甘肅醫(yī)藥，2014，33 （10）：728-30.

［4］ Shao X，Wang X，Xu X，et al.Outcome prediction values of soluble human epidermal growth factor receptor-2 extracellular domain in metastatic breast cancer［J］.Int J Clin Exp Pathol，2014，7 （3）：1108-13.

［5］ Ha J H，Seong M K，Kim E K，et al.Serial serum HER2 measurements for the detection of breast cancer recurrence in HER2-positive patients［J］.J Breast Cancer，2014，17（1）：33-9.

［6］ Kontani K，Kuroda N，Hashimoto S，et al.Clinical usefulness of human epidermal growth factor receptor-2 extracellular domain as a biomarker for monitoring cancer status and predicting the therapeutic efficacy in breast cancer［J］.Cancer Biol Ther，2013，14（1）：20-8.

［7］ Witzel I，Loibl S，von M G，et al.Predictive value of HER2 serum levels in patients treated with lapatinib or trastuzumab-a translational project in the neoadjuvant GeparQuinto trial［J］.Br J Cancer，2012，107（6）：956-60.

［8］ 袁杰清，束 軍，王丹平，等.TXNIP和CEA聯(lián)合檢測(cè)對(duì)良惡性胸腔積液的診斷價(jià)值［J］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，50（3）：341-4.

［9］ 徐昊平，金冶寧，馬 韜，等.血清HER-2單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)在乳腺癌隨訪(fǎng)中的意義［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2010，18（5）：899-903.

［10］Tan L D，Xu Y Y，Yu Y，et al.Serum HER2 level measured by dot blot：a valid and inexpensive assay for monitoring breast cancer progression［J］.PLoS One，2011，6（4）：e18764.

［11］Ma L，Yang H Y，Han X H，et al.Relationship between serum HER2 extracellular domain levels，tissue HER2 expression，and clinico-pathological parameters in early stage breast cancer［J］. Chin Med J（Engl），2012，125（22）：4104-10.

［12］Lam L，McAndrew N，Yee M，et al.Challenges in the clinical utility of the serum test for HER2 ECD［J］.Biochim Biophys Acta，2012，1826（1）：199-208.

［13］馬 麗，石遠(yuǎn)凱，韓曉紅.乳腺癌患者血清中人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體2檢測(cè)的臨床意義［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，35 （2）：190-2.

［14］Badzek S，Kelovic V L，Plestina S，et al.Serum HER2/ECD value in stage I and II early breast cancer：need of a lower cut-off？［J］.Wien Klin Wochenschr，2011，123（23-24）：726-31.

R 466.62

A

1000-1492（2016）09-1378-04

時(shí)間：2016-8-1 14：07

http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160801.1407.068.html

2016-04-14接收

安徽省銅陵市衛(wèi)生局科技計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：衛(wèi)科研［2012］05）；安徽省科技計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：1301042094）

1安徽醫(yī)科大學(xué)銅陵臨床學(xué)院、銅陵市人民醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，銅陵 2440022安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院老年醫(yī)學(xué)科，合肥 230001

朱娟娟，女，主管檢驗(yàn)師；唐吉斌，男，副教授，副主任檢驗(yàn)師，責(zé)任作者，E-mail：13705628207@163.com