金絲桃苷抗小鼠腦缺血再灌注損傷的硫化氫機(jī)制

高珊珊，陳 碩，陳志武

金絲桃苷抗小鼠腦缺血再灌注損傷的硫化氫機(jī)制

高珊珊1，陳 碩2，陳志武1

目的 研究硫化氫（H2S）在金絲桃苷（Hyp）抗小鼠腦缺血再灌注損傷中的作用。方法 建立胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）基因敲除（CSE-/-）小鼠及其同窩野生對照（CSE+/+）小鼠腦缺血再灌注模型，CSE為內(nèi)源性H2S合成酶；用小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)和水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測小鼠學(xué)習(xí)記憶功能；檢測小鼠腦組織乳酸脫氫酶（LDH）活性和丙二醛（MDA）含量。結(jié)果 腦缺血再灌注后，CSE-/-小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的下降、腦組織LDH活性的下降、MDA含量的升高均較CSE+/+小鼠更明顯，Hyp（50、100 mg/kg）能改善由于腦缺血再灌注導(dǎo)致的CSE+/+小鼠以上指標(biāo)的變化，但對CSE-/-小鼠無改善作用。結(jié)論 內(nèi)源性H2S的缺失會(huì)加重小鼠腦缺血再灌注損傷；Hyp對小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用與CSE-H2S通路有關(guān)。

金絲桃苷；硫化氫；基因敲除；腦缺血再灌注損傷

缺血性腦血管疾病是臨床上的常見病多發(fā)病，嚴(yán)重危害人類健康和影響社會(huì)發(fā)展，其發(fā)生發(fā)展的病理生理機(jī)制尚不十分清楚，臨床治療效果較差，因此，研究腦缺血性損傷的病理機(jī)制是目前研究的熱點(diǎn)之一。金絲桃苷（hyperin，Hyp）屬黃酮醇苷化合物，結(jié)構(gòu)為槲皮素-3-半乳糖苷，廣泛存在于杜鵑花科、藤黃科、豆科等多種植物中，研究［1］顯示Hyp對心肌缺血損傷、缺血性腦損傷等具有保護(hù)作用，但其保護(hù)機(jī)制尚不明確。前期研究［2］顯示Hyp具有腦血管舒張作用，且其舒張機(jī)制與內(nèi)源性硫化氫（hydrogen sulfide，H2S）有關(guān)，與此同時(shí)，外源性H2S供體NaHS也能夠舒張大鼠腦血管，且具有明顯的抗腦缺血損傷作用［3-4］。該實(shí)驗(yàn)通過建立內(nèi)源性H2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine γ-lyase，CSE）基因敲除（CSE knockout，CSE-/-）小鼠及同窩野生對照（CSE+/+）小鼠腦缺血再灌注模型研究Hyp抗腦缺血再灌注損傷的作用與H2S的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 Hyp（安徽醫(yī)學(xué)研究所）；乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）；丙二醛（malondialdehyde，MDA）檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 FAl004型電子天平（上海天平儀器廠）；液氮罐（四川西亞機(jī)械有限公司）；全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國BIO-RAD公司）；超速冷凍離心機(jī)（珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司）；小鼠跳臺(tái)儀（成都泰盟科技有限公司）；Morris水迷宮系統(tǒng)（上海吉量軟件科技有限公司）。

1.1.3 動(dòng)物 C57BL/6J小鼠：CSE-/-和 CSE+/+小鼠，10～16周，（22±3.0）g，基因型鑒定由上海南方模式生物科技發(fā)展有限公司完成，飼養(yǎng)于安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)溫度：（22±3）℃。

1.2 方法

1.2.1 分組及給藥 CSE-/-和 CSE+/+小鼠雌雄各半，分別隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組（Sham組）、腦缺血再灌注模型組（Model組）、Hyp（25、50、100 mg/kg組）組。灌胃給藥，Model組和Sham組灌胃給以等量生理鹽水。連續(xù)灌胃3 d，第3天灌胃1 h后開始造模。

1.2.2 腦缺血再灌注模型 術(shù)前12 h禁食、4 h禁水，3.5%水合氯醛（0.1 ml/10 g）麻醉后，仰臥固定，剔除頸正中部毛發(fā)，碘酒涂抹消毒，頸部正中切口，鈍性分離暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈，小心分離兩側(cè)迷走神經(jīng)并穿線，小鼠清醒后結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈造成腦部缺血，20 min后松開拉線恢復(fù)腦血液灌流，Sham組僅分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈但不結(jié)扎，仔細(xì)縫合，術(shù)后注意保溫，常規(guī)飼養(yǎng)，術(shù)后12 h進(jìn)行跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 跳臺(tái)實(shí)驗(yàn) 按文獻(xiàn)［5］方法將小鼠放入跳臺(tái)儀中，適應(yīng)5 min后，給鐵柵上通以36 V交流電刺激小鼠，記錄小鼠受電刺激后跳上平臺(tái)的時(shí)間作為學(xué)習(xí)的潛伏期，并記錄通電5 min內(nèi)小鼠受到的電擊次數(shù)作為學(xué)習(xí)錯(cuò)誤次數(shù)，以這兩項(xiàng)指標(biāo)評價(jià)小鼠學(xué)習(xí)功能。24 h后，將小鼠置于平臺(tái)上，底部鐵柵通以36 V交流電，記錄小鼠跳至鐵柵受到電刺激的時(shí)間作為記憶潛伏期，若5 min內(nèi)小鼠未跳下平臺(tái)，潛伏期按300 s計(jì)算，并以5 min內(nèi)受到電擊次數(shù)作為記憶錯(cuò)誤次數(shù)，以這二項(xiàng)指標(biāo)來評價(jià)小鼠記憶功能。小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，斷頭取腦，腦組織保存于液氮中用于檢測腦組織LDH活性和MDA含量。

1.2.4 水迷宮實(shí)驗(yàn)［6-7］圓形恒溫水池，水溫保持在（22±1）℃，按東南西北4個(gè)方向?qū)⑺仄骄鶆澐譃?個(gè)象限（NE、SE、SW、NW），因水池內(nèi)壁均為黑色，而本實(shí)驗(yàn)所用C57BL/6J小鼠也為黑色，為使水迷宮視頻采集系統(tǒng)能準(zhǔn)確跟蹤小鼠位置，實(shí)驗(yàn)前在池中加入適量食用色素二氧化鈦粉末，將池水染為乳白色，平臺(tái)位于水面下1 cm，使肉眼無法看到平臺(tái)位置。正式實(shí)驗(yàn)時(shí)將平臺(tái)固定在SW象限。按1.2.2所述方法造模，實(shí)驗(yàn)分組同小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)，造模后第3天（即正式實(shí)驗(yàn)前1 d）讓小鼠自由游泳1 min（不放置平臺(tái)）。

1.2.4.1 定位航行實(shí)驗(yàn) 歷時(shí)4 d，每日每只小鼠測試4次，第1次和第4次從目標(biāo)象限（SW）和其對側(cè)的象限（NE）入水，第2次和第3次采用隨機(jī)法確定入水象限（SE和NW象限），為避免小鼠按向左或向右的方向去定位，同一次測試中所有動(dòng)物的入水點(diǎn)相同且入水方向均為面朝水池壁。監(jiān)測時(shí)間為60 s，將小鼠入水至尋臺(tái)成功的時(shí)間記作逃避潛伏期，若小鼠在平臺(tái)上停留超過2 s則判斷為尋臺(tái)成功，實(shí)驗(yàn)終止；若小鼠60 s內(nèi)未找到平臺(tái)則潛伏期記為60 s，并將小鼠引導(dǎo)至平臺(tái)停留15 s。

1.2.4.2 空間搜索實(shí)驗(yàn) 定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)束后開始空間探索實(shí)驗(yàn)，即實(shí)驗(yàn)第5天，撤去SW象限的平臺(tái)，將小鼠由NE象限入水，記錄小鼠在60 s內(nèi)穿過原平臺(tái)所在位置的次數(shù)、原平臺(tái)所在象限的游程比率以及時(shí)間比率（即動(dòng)物在原平臺(tái)所在象限的游程和時(shí)間占總游程和總時(shí)間的比率），評價(jià)空間記憶能力。

1.2.5 腦組織LDH活力和MDA含量檢測 各組小鼠腦組織低溫下制成勻漿，離心后取上清液，將上清液分裝，一部分用于LDH活力檢測，另一部分用于MDA含量檢測。考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白濃度，嚴(yán)格按照LDH及MDA測定試劑盒說明書進(jìn)行操作，用酶標(biāo)儀測定吸光度，計(jì)算各組LDH活性及MDA含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用表示，兩組之間比較采用t檢驗(yàn)，多組之間比較時(shí)采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 CSE基因敲除對Hyp促進(jìn)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響（跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)） 在CSE+/+小鼠中，與CSE+/+Sham組比較，CSE+/+Model組學(xué)習(xí)潛伏期延長，記憶潛伏期縮短，學(xué)習(xí)與記憶錯(cuò)誤次數(shù)均增多，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.7、3.4、5.1、3.4，P＜0.01）；與CSE+/+Model組比較，Hyp 50 mg/kg能縮短腦缺血再灌注后CSE+/+小鼠學(xué)習(xí)潛伏期，減少學(xué)習(xí)錯(cuò)誤次數(shù)（F=5.7、5.1，P＜0.05），Hyp 100 mg/kg能縮短CSE+/+小鼠學(xué)習(xí)潛伏期，延長記憶潛伏期，減少學(xué)習(xí)和記憶錯(cuò)誤次數(shù)（F=5.7、3.4、5.1、3.4，P＜0.05，P＜0.01）。在CSE-/-小鼠中，與CSE-/-Sham組比較，CSE-/-Model組學(xué)習(xí)潛伏期延長，記憶潛伏期縮短，學(xué)習(xí)與記憶錯(cuò)誤次數(shù)均增多，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=4.1、23.5、7.5、9.1，P＜0.01）；與CSE+/+Model組比較，CSE-/-Model組小鼠以上指標(biāo)改變更為顯著（t=-3.0、2.4、-2.3、-4.7，P＜0.01）；Hyp對腦缺血再灌注后的CSE-/-小鼠的以上指標(biāo)無明顯改善作用，與CSE-/-Model組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

2.2 CSE基因敲除對Hyp促進(jìn)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響（水迷宮實(shí)驗(yàn)） 在水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)的第3、4天：在CSE+/+小鼠中，CSE+/+Model組的逃避潛伏期與CSE+/+Sham組比較均延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=4.7、19.7，P＜0.01）；在CSE-/-小鼠中，CSE-/-Model組的逃避潛伏期與CSE-/-Sham組相比也均延長（F=8.6、6.0，P＜0.01），且CSE-/-Model組第3、4天逃避潛伏期延長較CSE+/+Model組更顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-2.6、-3.2，P＜0.05，P＜0.01），見圖 1C；Hyp 50、100 mg/kg能夠縮短CSE+/+腦缺血再灌注小鼠第3、4天的逃避潛伏期，與CSE+/+Model組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=4.7、19.7，P＜0.05，P＜0.01），見圖1A；Hyp對腦缺血再灌注后的CSE-/-小鼠逃避潛伏期無縮短作用，與CSE-/-Model組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖1B。

水迷宮空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2，CSE+/+小鼠中，與CSE+/+Sham組比較CSE+/+Model小鼠的穿過原平臺(tái)次數(shù)、原平臺(tái)象限時(shí)間比率及原平臺(tái)象限游程比率均顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.0、10.0、11.78，P＜0.01）；在 CSE-/-小鼠中，CSE-/-Model組與CSE-/-Sham組比較，以上三項(xiàng)指標(biāo)也均減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=14.9、32.5、26.5，P ＜0.01），且與CSE+/+Model組比較，CSE-/-Model組以上三項(xiàng)指標(biāo)減少更為顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t =3.0、4.3、20.5，P＜0.01）；Hyp 50、100 mg/kg能夠抑制CSE+/+小鼠由于腦缺血再灌注導(dǎo)致的以上三項(xiàng)指標(biāo)的減少，與CSE+/+Model組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=14.9、32.5、26.5，P＜0.05，P＜0.01）；Hyp對腦缺血再灌注后的CSE-/-小鼠以上指標(biāo)無改善作用，與CSE-/-Model組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 CSE基因敲除對Hyp促進(jìn)腦缺血再灌注小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)的影響（n=8，）

表1 CSE基因敲除對Hyp促進(jìn)腦缺血再灌注小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)的影響（n=8，）

與CSE+/+Sham組或CSE-/-Sham組比較：＊＊P＜0.01；與CSE+/+Model組比較：#P＜0.05，##P＜0.01

組別 小鼠基因型 劑量（mg/kg）潛伏期（s）學(xué)習(xí) 記憶錯(cuò)誤次數(shù)（次）學(xué)習(xí) 記憶Sham CSE+/+ - 24.4±7.0 182.4±38.2 1.1±0.6 1.2±0.5 CSE-/- - 29.1±8.9 175.2±36.9 1.0±0.5 1.1±0.4 Model CSE+/+ - 40.8±9.5＊＊ 107.6±47.4＊＊ 2.9±0.8＊＊ 2.1±0.6＊＊CSE-/- - 56.6±11.8＊＊## 61.4±28.7＊＊## 4.0±1.1＊＊## 3.5±0.5＊＊##Hyp CSE+/+ 25 40.2±9.9 114.9±57.6 2.8±1.6 1.8±0.9 CSE-/- 25 50.6±20.5 64.9±28.4 3.5±1.2 3.2±1.0 Hyp CSE+/+ 50 31.1±7.1# 126.1±63.7 1.9±0.9# 1.6±0.8 CSE-/- 50 46.6±16.5 68.5±28.7 3.2±1.3 3.0±0.8 Hyp CSE+/+ 100 26.2±12.4## 165.8±51.5# 1.4±0.8## 1.2±0.5#CSE-/- 100 45.5±14.9 72.6±24.0 3.0±1.2 2.9±0.9

表2 CSE基因敲除對Hyp促進(jìn)腦缺血再灌注小鼠水迷宮空間搜索實(shí)驗(yàn)的影響（n=8，）

表2 CSE基因敲除對Hyp促進(jìn)腦缺血再灌注小鼠水迷宮空間搜索實(shí)驗(yàn)的影響（n=8，）

與CSE+/+Sham組或CSE-/-Sham組比較：＊＊P＜0.01；與CSE+/+Model組比較：#P＜0.05，##P＜0.01

組別 小鼠基因型 劑量（mg/kg） 穿臺(tái)次數(shù)（次） 原平臺(tái)象限時(shí)間比率（%）原平臺(tái)象限游程比率（%）Sham CSE+/+ — 2.88±0.64 38.74±5.62 37.60±4.13 CSE-/- — 2.62±0.52 38.53±5.29 37.26±5.09 Model CSE+/+ — 1.75±0.46＊＊ 25.32±5.14＊＊ 26.50±3.81＊＊CSE-/- — 1.00±0.53＊＊## 15.31±4.16＊＊## 16.12±5.26＊＊##Hyp CSE+/+ 25 1.88±0.64 26.19±4.78 26.48±4.48 CSE-/- 25 1.12±0.35 16.06±3.89 17.73±4.79 Hyp CSE+/+ 50 2.50±0.53# 32.27±5.33# 33.02±4.97##CSE-/- 50 1.25±0.46 17.65±5.46 17.64±4.96 Hyp CSE+/+ 100 2.62±0.52## 35.22±5.65## 36.48±4.43##CSE-/- 100 1.38±0.52 19.22±5.09 18.06±4.33

圖1 CSE基因敲除對Hyp促進(jìn)腦缺血再灌注小鼠水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)的影響（n=8，）

2.3 CSE基因敲除對Hyp抑制腦缺血再灌注小鼠腦組織LDH活性下降的影響 分別與CSE+/+Sham 和CSE-/-Sham組比較，CSE+/+Model和CSE-/-Model組小鼠腦組織LDH活性均顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=23.7、22.2，P＜0.01）；且與CSE+/+Model組小鼠比較，CSE-/-Model組小鼠腦組織中LDH活性下降更為顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.5，P＜0.05）；50、100 mg/kg Hyp對腦缺血再灌注引起的CSE+/+小鼠腦組織LDH活性下降有明顯的抑制作用，與CSE+/+Model組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 23.7，P＜0.05，P＜0.01）；在CSE-/-小鼠中Hyp抑制LDH活性下降的作用消失，與CSE-/-Model組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見圖2。

圖2 CSE基因敲除對Hyp抑制腦缺血再灌注小鼠腦組織LDH活性下降的影響（n=8，）

2.4 CSE基因敲除對Hyp抑制腦缺血再灌注小鼠腦組織 MDA含量升高的影響 分別與 CSE+/+Sham 和 CSE-/-Sham 組比較，CSE+/+Model和CSE-/-Model組小鼠腦組織MDA含量均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=7.6、8.4，P＜0.01）；且與CSE+/+Model組小鼠比較，CSE-/-Model組小鼠腦組織中MDA含量升高更為顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t =-2.3，P＜0.05）；Hyp 50、100 mg/kg對腦缺血再灌注引起的CSE+/+小鼠腦組織MDA含量升高有明顯的抑制作用，與CSE+/+Model組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=7.6，P＜0.05，P＜0.01）；在CSE-/-小鼠中，Hyp抑制 MDA含量升高的作用消失，與 CSE-/-Model組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見圖3。

圖3 CSE基因敲除對Hyp抑制腦缺血再灌注小鼠腦組織MDA含量升高的影響（n=8，）

3 討論

本課題組前期研究［8］顯示H2S、Hyp和映山紅花總黃酮（TFR）均具有抗腦缺血損傷作用，且TFR抗腦缺血損傷作用與CSE-H2S通路有關(guān)，而且Hyp對腦血管的舒張作用與CSE-H2S通路有關(guān)。CSE為內(nèi)源性H2S合成酶，且CSE在腦血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中均有表達(dá)。因此本實(shí)驗(yàn)將研究作為TFR主要成分之一的Hyp對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用與CSE-H2S通路的關(guān)系。學(xué)習(xí)和記憶是至關(guān)重要的腦功能［9］，腦缺血損傷大多會(huì)造成學(xué)習(xí)記憶能力的下降，跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)和水迷宮實(shí)驗(yàn)是經(jīng)典的評價(jià)學(xué)習(xí)記憶能力的兩種行為學(xué)實(shí)驗(yàn)。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)是英國心理學(xué)家Morris設(shè)計(jì)的用于研究空間學(xué)習(xí)記憶的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)，近年來廣泛用于學(xué)習(xí)記憶方面的研究［10］。跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Hyp能夠縮短腦缺血再灌注后CSE+/+小鼠的學(xué)習(xí)潛伏期，延長記憶潛伏期，并減少學(xué)習(xí)和記憶的錯(cuò)誤次數(shù)，即Hyp對腦缺血再灌注所致的學(xué)習(xí)記憶障礙有一定改善作用，但Hyp對腦缺血再灌所致的CSE-/-小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙無改善作用，且與CSE+/+Model組小鼠比較，CSE-/-Model組由于腦缺血再灌注所致的學(xué)習(xí)記憶障礙更為嚴(yán)重，提示內(nèi)源性H2S的缺失會(huì)加重腦缺血再灌注損傷，且Hyp抗小鼠腦缺血再灌注損傷作用與CSE-H2S通路有關(guān)。

在水迷宮實(shí)驗(yàn)中，Hyp能夠縮短腦缺血再灌注后CSE+/+小鼠的逃避潛伏期，提高穿過原平臺(tái)次數(shù)、原平臺(tái)象限游程比率及原平臺(tái)象限時(shí)間比率，即Hyp對腦缺血再灌注所致的學(xué)習(xí)記憶障礙有改善作用。與小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)一致，Hyp對腦缺血再灌注所致的CSE-/-小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙無改善作用，且與CSE+/+Model組小鼠比較，CSE-/-Model組由于腦缺血再灌注所致的學(xué)習(xí)記憶障礙更為嚴(yán)重，水迷宮實(shí)驗(yàn)同樣提示內(nèi)源性H2S的缺失會(huì)加重腦缺血再灌注損傷，且Hyp抗小鼠腦缺血再灌注損傷作用與CSE-H2S通路有關(guān)。

腦缺血再灌注損傷由多種復(fù)雜因素相互作用導(dǎo)致，其中氧自由基脂質(zhì)過氧化是腦缺血再灌注損傷的重要原因［11］。腦缺血后，由于腦細(xì)胞通透性增加，LDH向外釋放，使得腦組織LDH活性下降，同時(shí)腦缺血后會(huì)激活一系列酶促反應(yīng)，促進(jìn)自由基生成，發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，導(dǎo)致腦組織中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量升高［1］，因此，腦組織LDH活性和MDA含量可以作為評價(jià)腦組織損傷的指標(biāo)［12］。本研究顯示Hyp能夠抑制CSE+/+小鼠由于腦缺血再灌注導(dǎo)致的腦組織 LDH活性的降低，同時(shí)抑制MDA含量的升高，但對腦缺血再灌注后的CSE-/-小鼠無此作用，且與CSE+/+Model組小鼠比較，CSE-/-Model組由于腦缺血再灌注所致的腦組織LDH活性的降低、MDA含量的升高更為明顯，提示內(nèi)源性H2S的缺失會(huì)加重腦缺血再灌注損傷，且Hyp抗小鼠腦缺血再灌注損傷作用與CSE-H2S通路有關(guān)。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)表明內(nèi)源性H2S的缺失會(huì)加重小鼠腦缺血再灌注損傷，且Hyp抗小鼠腦缺血再灌注損傷作用與CSE-H2S通路有關(guān)。

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The H2S mechanism of Hyp against cerebral ischemia reperfusion injury in mice

Gao Shanshan1，Chen Shuo2，Chen Zhiwu1
（1Dept of Pharmacology，2Dept of Physiology，Anhui Medical University，Hefei 230032）

Objective To observe the effect of hydrogen sulfide（H2S）in the protective action of hyperin（Hyp）on cerebral ischemia/reperfusion injury in mice.Methods Cerebral ischemia/reperfusion models were established in cystathionine γ-lyase（CSE，a generating enzyme of H2S）-knockout（CSE-/-）and wide-type（CSE+/+）mice.The abilities of learning and memory in mice were detected by the step down test and Morris water maze test.The activities of lactate dehydrogenase（LDH）and the contents of malondialdehyde（MDA）in brain tissue were measured.Results After cerebral ischemia/reperfusion，the impairments of learning and memory abilities in mice，reductions of LDH activities and elevations of MDA contents in brain tissue were more obvious in CSE-/-mice than that in CSE+/+mice.Impairments of learning and memory abilities，reductions of LDH activities and elevations of MDA contents were markedly inhibited by Hyp（50，100 mg/kg）in CSE+/+mice rather than that in CSE-/-mice.Conclusion Cerebral ischemia/reperfusion injury is aggravated in the absence of endogenous H2S.CSE-H2S pathway is involved in the protective effect of Hyp on cerebral ischemia/reperfusion injuries in mice.

hyperin；hydrogen sulfide；knockout；cerebral ischemia/reperfusion injuries

R 965

A

1000-1492（2016）09-1292-05

時(shí)間：2016-8-1 14：07

http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160801.1407.026.html

2016-05-04接收

國家自然科學(xué)基金（編號(hào)：81173596、81374002）

安徽醫(yī)科大學(xué)1藥理學(xué)教研室、2生理學(xué)教研室，合肥230032

高珊珊，女，碩士研究生；陳志武，男，教授，博士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：chpharmzw@163.com