HPLC法測(cè)定麥冬及環(huán)境中多效唑的殘留量*

楊言琛，張興國(guó)，郝安輝，李 銅，羅 霄

西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川 成都 610031

HPLC法測(cè)定麥冬及環(huán)境中多效唑的殘留量*

楊言琛，張興國(guó)△，郝安輝，李 銅，羅 霄

西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川 成都 610031

目的：確立麥冬及其生長(zhǎng)環(huán)境中多效唑殘留的快速檢測(cè)方法。方法：采用無(wú)水甲醇，超聲30分鐘提取麥冬樣品及其生長(zhǎng)環(huán)境中多效唑。采用A gi l ent-C18色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.1%甲酸（50：15：35），流速1.0 m L/m i n；檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm，柱溫30℃。結(jié)果：在0.000 2～0.015 μg之間線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 6，回收率在98.6%～105.6%之間，RSD值為2.9149%，精密度實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性考察和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)的RSD分別為0.998 5%、1.368 9%、1.008 3%。結(jié)論：本方法可快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確地測(cè)定麥冬植株樣品及其生長(zhǎng)環(huán)境中的多效唑殘留量。

麥冬；生長(zhǎng)環(huán)境；多效唑；高效液相色譜法；殘留量測(cè)定

多效唑是英國(guó)ICI公司于20世紀(jì)70年代末研制開發(fā)的一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，并具有一定的殺菌作用，其作用機(jī)理是抑制赤霉素的生物合成［1］。現(xiàn)廣泛用于多種農(nóng)作物種植，有報(bào)道稱多效唑在一些中藥材種植中也被廣泛應(yīng)用［2-3］。

麥冬為百合科植物麥冬［Ophiopogon japonicus (Li nn.f)Ker-Gaw l.］的干燥塊根，具有養(yǎng)陰生津，潤(rùn)肺清心的功效［4］。近年來(lái)，部分麥冬種植戶為追求產(chǎn)量而盲目施用多效唑，雖然報(bào)道稱其毒性較低，但因其在環(huán)境中性質(zhì)穩(wěn)定，殘留期較長(zhǎng)［5］，長(zhǎng)期不合理的施用將嚴(yán)重影響麥冬產(chǎn)業(yè)的健康及可持續(xù)發(fā)展。多效唑主要能促進(jìn)麥冬塊根膨大。目前常見(jiàn)其他農(nóng)作物及環(huán)境中多效唑殘留的檢測(cè)多利用氣相色譜法或氣質(zhì)聯(lián)用法等，前處理較為復(fù)雜［6-7］，麥冬中多效唑的殘留檢測(cè)迄今未見(jiàn)有H PLC法的研究報(bào)道。本研究首次將H PLC法應(yīng)用于麥冬及其種植環(huán)境中多效唑殘留的檢測(cè)，為麥冬的GAP規(guī)范化種植及質(zhì)量控制和資源的可持續(xù)開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器 高效液相色譜儀(島津LC-20AT型)，紫外檢測(cè)器(島津SPD-20A)等。

1.2 試劑 無(wú)水甲醇(AR、H PLC)、乙腈(H PLC)、活性炭(AR)、多效唑?qū)φ掌?純度≥95%，如吉生物科技)等。

1.3 色譜條件 色譜柱：Agi l ent 5 TC-C18，250m m× 4.6m m；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.1%甲酸(50∶15∶35)，流速1.0 m L/m i n；檢測(cè)波長(zhǎng)220nm，柱溫30℃。

1.4 樣品制備

1.4.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取多效唑?qū)φ掌?.025 9 g，加甲醇定容至50 m L制成對(duì)照品溶液母液，再分別取1、10、100μL用甲醇定至10m L，制成對(duì)照品溶液-1、對(duì)照品溶液-2、對(duì)照品溶液-3。

1.4.2 樣品溶液制備 干燥樣品粉碎后過(guò)2號(hào)篩，新鮮植株樣品搗碎并研磨混勻，水樣避光低溫保存待用。

1.4.2.1 干燥塊根與須根、土壤樣品 精密稱取樣品約1 g，并精密加入甲醇10 m L，超聲提取30分鐘，過(guò)0.45μm濾膜，上機(jī)測(cè)定。

1.4.2.2 葉片樣品 精密稱取樣品約1 g，并精密加入甲醇10m L，超聲提取30分鐘，提取液加活性炭粉末約2 g，水浴60℃約1小時(shí)至溶液無(wú)色，過(guò)0.45 μm濾膜，上機(jī)測(cè)定。

1.4.2.3 新鮮植株樣品 精密稱取樣品約3 g，制備方法同干燥樣品，過(guò)0.45μm濾膜，上機(jī)測(cè)定。

1.4.2.4 水樣 精密量取10 m L，揮干水分后，殘?jiān)芯芗尤爰状?0 m L溶解，過(guò)0.45 μm濾膜，上機(jī)測(cè)定。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線 分別取對(duì)照品溶液-1、對(duì)照品溶液-2、對(duì)照品溶液-3進(jìn)行測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸曲線方程Y=0.7×10-6X-0.000 2，r=0.999 6，見(jiàn)表1、圖1。

表1 多效唑線性考察結(jié)果

圖1 多效唑標(biāo)準(zhǔn)曲線

2 結(jié)果與分析

2.1 精密度考察 精密取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣為5μL，結(jié)果顯示RSD為0.9985%，說(shuō)明儀器的精密度良好，見(jiàn)表2。

2.2 穩(wěn)定性考察 精密取同一麥冬樣品的待測(cè)溶液，在間隔0、4、8、12、24小時(shí)時(shí)各測(cè)定1次，每次進(jìn)樣10 μL，結(jié)果RSD為1.368 9%，表明樣品中多效唑含量在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，見(jiàn)表3。

表3 穩(wěn)定性考察結(jié)果

2.3 重現(xiàn)性 精密稱取同一麥冬樣品共5份，每份約1g，按前述方法制備，上機(jī)測(cè)定，計(jì)算多效唑含量，結(jié)果顯示RSD值為1.008 3%，說(shuō)明本方法重現(xiàn)性良好，見(jiàn)表4。

表4 重現(xiàn)性考察結(jié)果

2.4 加樣回收率 精密稱取已知多效唑含量的麥冬樣品6份，每份約1g，分別加入20μL或15μL對(duì)照品溶液母液，按樣品溶液制備方法處理，上機(jī)測(cè)定，每次進(jìn)樣10 μL。結(jié)果顯示平均回收率為102.64%，RSD為2.9149%，見(jiàn)表5。

表5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 樣品中多效唑含量的測(cè)定 選取麥冬生長(zhǎng)期的樣品(11月中旬，多效唑施用20天后)和麥冬采收期的樣品(4月前后)，生長(zhǎng)期樣品采用新鮮樣品直接測(cè)定，采收期樣品經(jīng)干燥處理后測(cè)定。樣品來(lái)源主要為麥冬道地產(chǎn)區(qū)農(nóng)戶種植，并選取了同地方新建GAP種植示范園樣品(種苗來(lái)源于當(dāng)?shù)剞r(nóng)戶種植)。樣品類型有麥冬植株樣品和麥冬生長(zhǎng)環(huán)境樣品，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表6、圖2。

表6 多效唑含量測(cè)定結(jié)果（n=5）

圖2 對(duì)照品和各樣品中多效唑含量測(cè)定圖譜

3 結(jié)論

本方法條件下，在0.000 2～0.015 μg之間線性良好，相關(guān)系數(shù)r為0.999 6，回收率在98.6%～105.6%之間，RSD值為2.914 9%，精密度實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性考察和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)的RSD分別為0.998 5%、1.3689%、1.0083%，多效唑保留時(shí)間約為12.2分鐘左右，可以實(shí)現(xiàn)多效唑的分離度均＞1.5，能夠滿足麥冬植株及其生產(chǎn)環(huán)境中多效唑殘留的定量分析。分析檢測(cè)結(jié)果，在多效唑施用20天后，在麥冬植株各部位能檢測(cè)到較高水平的多效唑殘留，并且對(duì)其周圍環(huán)境的影響也較為嚴(yán)重，在土壤中檢測(cè)到大量的殘留，農(nóng)田水體中也有一定水平的殘留；在多效唑施用5個(gè)月后進(jìn)入采收期，土壤中仍有一定水平的多效唑殘留，麥冬植株各部位仍能檢測(cè)到多效唑殘留，但符合國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)(GB2763-2012)0.5μg/g。GAP種植示范園樣品中仍然檢測(cè)到微量的殘留0.076 3 μg/g，遠(yuǎn)低于國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)，種植過(guò)程中沒(méi)有施用多效唑，選擇的農(nóng)田未曾施用過(guò)多效唑，種苗來(lái)源于當(dāng)?shù)剞r(nóng)戶種植的麥冬資源，這可能是多效唑殘留的來(lái)源，這也為麥冬的GAP生產(chǎn)提出一個(gè)要求，從施用過(guò)多效唑的麥冬中選取的種苗，需要在無(wú)多效唑的環(huán)境中經(jīng)過(guò)2～3年的種植，使多效唑殘留降解到標(biāo)準(zhǔn)以下才可用于GAP規(guī)范種植。

本方法的前處理簡(jiǎn)單快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，整體檢測(cè)時(shí)間短，檢測(cè)成本較低，可以很好地應(yīng)用于麥冬GAP生產(chǎn)中多效唑殘留水平的監(jiān)測(cè)，確保麥冬質(zhì)量符合GAP要求，為規(guī)范麥冬的GAP生產(chǎn)和促進(jìn)麥冬產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)。

［1］Steffens GI，Wang SY.Bi ochemical and physiological alterations in appletrees caused by agibberell in biosynt hesisinhibit orpaclobut razol［J］.A ct a Hort icul turae，1986，179（179）：433-442.

［2］佘佳榮，楊仁斌，王海萍，等.多效唑在油菜植株、油菜籽和土壤中的殘留［J］.農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2008，10（1）：113-116.

［3］于聲，程波，袁志華.多效唑15%可濕性粉劑在小白菜和土壤中殘留動(dòng)態(tài)研究［J］.農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，2007，26（5）：1768-1771.

［4］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：144-145.

［5］白樺，邱月明，張青.氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定蘋果中多效唑殘留量［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2005，24（4）：64-66.

［6］胡艷云，徐慧群，姚劍，等.分子印跡固相萃取-液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定果蔬中20種三唑類農(nóng)藥殘留［J］.分析化學(xué)，2014，42（2）：227-232.

［7］王菲，李彤，馬辰.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定中藥材中三唑類殺菌劑及三嗪類除草劑的殘留量［J］.色譜，2013，31（3）：191-199.

Determination of Paclobutrazol Remained in MaiDong and Its Growth Environment by HPLC

YANG Yanchen，ZHANG Xingguo△，HAO Anhui，LI Tong，LUO Xiao
School of Life Science and Engineering of Southwest Jiaotong University，Chengdu 610031，China

Objective:To establish rapid determination method of paclobutrazol remained in MaiDong［Ophiopogon japonicus（Linn.f.）Ker-Gawl.］.Methods:Paclobutrazol remained in MaiDong was extracted by ultrasound for 30 minutes in absolute methanol.Agilent-C18chromatographic column was adopted，mobile phase:methanol-acetonitrile-0.1%methanoic acid（50:15:35），flow rate:1.0mL/min；detection wavelength was 220 nm，column temperature:30℃.Results:It showed better linear relationship between 0.000 2 and 0.015 μg，correlation coefficient was 0.999 6，recoveryrate was between 98.6%and 105.6%，RSD=2.9149%，RSD of precision，stability and reproducibility tests were 0.998 5%，1.368 9%and 1.008 3%.Conclusion:The method could be used to determine residual quantity of paclobutrazol in MaiDong and its growth environment accurately，simply and rapidly.

MaiDong；growth environment；paclobutrazol；HPLC；residual quantity determination

R28

A

1004-6852（2016）09-0037-03

2015-09-22

四川省“十二五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目資助（編號(hào)2011N Z0098）。

楊言?。?986—），男，在讀碩士研究生。研究方向：中藥資源利用與G A P研究。

△通訊作者：張興國(guó)（1958—），男，副教授。研究方向：中藥資源開發(fā)利用與G A P、中藥資源-品種-環(huán)境-品質(zhì)-藥效研究。