戊二醛苯扎溴銨溶液對(duì)雞新城疫病毒的殺滅效果研究

高富紅，周德剛，高艷艷，李召斌

（國(guó)家獸用藥品工程技術(shù)研究中心，河南 洛陽(yáng) 471003）

戊二醛苯扎溴銨溶液對(duì)雞新城疫病毒的殺滅效果研究

高富紅，周德剛，高艷艷，李召斌

（國(guó)家獸用藥品工程技術(shù)研究中心，河南 洛陽(yáng) 471003）

考察戊二醛苯扎溴銨溶液消毒劑對(duì)新城疫病毒的殺滅效果。參考中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部《獸用消毒劑技術(shù)規(guī)范》（1992年版），采用懸浮殺滅試驗(yàn)，以雞胚感染法，將其通過(guò)不同稀釋倍數(shù)（800、1600、3 200）、在不同時(shí)間段（5、10、15、30、60 min）觀察其對(duì)新城疫病毒的殺滅效果。結(jié)果：戊二醛苯扎溴銨溶液在20℃水浴中，1 600倍稀釋，作用5 min，對(duì)雞新城疫病毒的滅活率在80%以上。結(jié)論：戊二醛苯扎溴銨溶液在20℃水浴中，對(duì)雞新城疫病毒的最低有效濃度為1 600倍稀釋，該濃度對(duì)新城疫病毒的最快有效時(shí)間為5 min。

戊二醛苯扎溴銨溶液；雞新城疫病毒；殺滅效果

新城疫（ND）是由副黏病毒科禽腮腺炎病毒屬新城疫病毒引起的雞高度接觸性、急性傳染病。對(duì)養(yǎng)雞業(yè)有著巨大的威脅。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)本病的控制仍沒(méi)有完全解決，由于對(duì)雞群用藥的限制及其存在的弊端，消毒劑的應(yīng)用已成為養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)新城疫等病毒防控的有效途徑［1］。

戊二醛苯扎溴銨溶液是由洛陽(yáng)惠中獸藥有限公司研制生產(chǎn)的新型復(fù)方消毒液，主要成分為戊二醛、苯扎溴銨。為了科學(xué)評(píng)價(jià)戊二醛苯扎溴銨溶液對(duì)雞新城疫病毒的定性殺滅效果，參考中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部《獸用消毒劑技術(shù)規(guī)范》（1992年版），國(guó)家獸用藥品工程技術(shù)研究中心考察了其對(duì)雞新城疫病毒的定性殺滅效果試驗(yàn)，現(xiàn)將試驗(yàn)報(bào)告總結(jié)如下。

1　試驗(yàn)材料

毒株：雞新城疫（ND）病毒LaSota株，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

主要儀器：電子分析天平，生物安全柜，移液器，水浴鍋，旭升全自動(dòng)電腦孵化機(jī)。

試劑：戊二醛苯扎溴銨溶液，批號(hào)20110901，洛陽(yáng)惠中獸藥有限公司生產(chǎn)。

滅菌生理鹽水：中和劑（甘氨酸0.5%+吐溫-80 4%）；磷酸鹽緩沖液（0.03 mol/L，pH值為7.28）。

SPF雞胚：由普萊柯股份有限公司孵化室提供。

2　試驗(yàn)內(nèi)容及方法

2.1中和劑、消毒劑及中和產(chǎn)物對(duì)雞胚的安全性試驗(yàn)將中和劑原液、800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液、800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液與中和劑作用后的中和產(chǎn)物分別接種5枚雞胚，0.1 mL/胚，以驗(yàn)證中和劑、消毒劑及中和產(chǎn)物對(duì)雞胚是否安全。

2.2中和劑和中和產(chǎn)物對(duì)新城疫病毒的影響

將中和劑與病毒作用液、中和產(chǎn)物與病毒作用液分別用PBS進(jìn)行10倍系列稀釋，分別取10-2、10-3、10-4稀釋度各接種5枚雞胚，0.1 mL/胚。將接種過(guò)的雞胚置37℃培養(yǎng)，24 h以內(nèi)死亡的雞胚去掉，24 h以后死亡的雞胚及時(shí)取出，并記錄死亡情況，至120 h全部取出。取尿囊液進(jìn)行血凝（HA）試驗(yàn)。同時(shí)設(shè)病毒液對(duì)照組。以驗(yàn)證中和劑和中和產(chǎn)物對(duì)雞新城疫病毒有無(wú)影響。

2.3對(duì)新城疫病毒的定性殺滅試驗(yàn)方法［2］分別取800、1 600、3 200倍稀釋戊二醛苯扎溴銨溶液各2.5 mL，分別加入2.5 mL（含2×105EID50）雞新城疫病毒液中，混勻。

在水浴20℃±1℃的條件下，分別于5、10、15、30、60 min時(shí)取上述溶液1 mL，加入9 mL中和劑，混勻，作用10 min。立即分別取各混合液接種9日齡易感雞胚，0.1 mL/胚，各濃度組各作用時(shí)間分別接種5枚雞胚，將接種的雞胚置37℃繼續(xù)孵化120 h。同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組。

每日照蛋，棄去24 h以前死亡的雞胚，取24～120 h的死亡雞胚和活胚，逐個(gè)取尿囊液做紅細(xì)胞凝集（HA）試驗(yàn)［5］，凝集價(jià)≥1∶16（微量法）者判為感染（HA陽(yáng)性）。HA陰性表示雞胚未被感染。根據(jù)感染數(shù)計(jì)算EID50并計(jì)算病毒滅活率。

2.4結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)血凝（HA）陰性表示病毒滅活，HA陽(yáng)性表示病毒未滅活，消毒劑對(duì)照組和消毒劑中和產(chǎn)物對(duì)照組應(yīng)無(wú)雞胚死亡。

以10次結(jié)果中以80%雞胚均為陰性的消毒液最低濃度為滅活NDV有效濃度，以該濃度消毒劑滅活病毒的最短時(shí)間為最快有效時(shí)間。

3　試驗(yàn)結(jié)果

3.1中和劑、消毒劑及中和產(chǎn)物對(duì)雞胚的安全性試驗(yàn)結(jié)果中和劑、消毒劑和中和產(chǎn)物通過(guò)進(jìn)行雞胚尿囊腔接種，觀察120 h均未見(jiàn)雞胚死亡，表明中和劑濃度為0.5%甘氨酸+4%吐溫-80、800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液以及800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液同中和劑的作用產(chǎn)物對(duì)雞胚是安全的。

3.2中和劑及中和產(chǎn)物對(duì)雞新城疫病毒的影響試驗(yàn)結(jié)果中和劑及中和產(chǎn)物與雞新城疫病毒作用后測(cè)得的病毒含量均與病毒對(duì)照組測(cè)得的病毒含量一致，表示中和劑和中和產(chǎn)物對(duì)雞新城疫病毒無(wú)影響。

3.3戊二醛苯扎溴銨溶液對(duì)雞新城疫病毒滅活測(cè)定結(jié)果根據(jù)表1中結(jié)果及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，戊二醛苯扎溴銨溶液在1 600倍稀釋，作用5 min，10次結(jié)果中有6次對(duì)新城疫病毒的滅活率達(dá)80%，其余4次滅活率達(dá)100%。說(shuō)明戊二醛苯扎溴銨溶液對(duì)新城疫病毒的最低有效濃度為1 600倍稀釋，該濃度對(duì)新城疫病毒的最快有效時(shí)間為5 min。

表1　戊二醛苯扎溴銨溶液對(duì)雞新城疫病毒滅活測(cè)定結(jié)果

4　結(jié)論

戊二醛苯扎溴銨溶液在20℃水浴中，對(duì)雞新城疫病毒的最低有效濃度為1 600倍稀釋，該濃度對(duì)新城疫病毒的最快有效時(shí)間為5 min。

5　討論

5.1本試驗(yàn)中濃度為0.5%甘氨酸+4%吐溫-80的中和劑、800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液，經(jīng)雞胚尿囊腔內(nèi)接種0.1 mL，雞胚不發(fā)生死亡，且發(fā)育正常，這與武衛(wèi)平［4］等的研究結(jié)果一致。同時(shí)800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液與中和劑作用后中和產(chǎn)物對(duì)雞胚也是安全的。

5.2在消毒學(xué)研究中，除消毒劑性質(zhì)不同所致滅活差別外，就同一消毒劑而言，其有效使用濃度與接種時(shí)間乃是決定消毒成敗的關(guān)鍵所在［5］。采用懸浮殺滅試驗(yàn)，通過(guò)雞胚感染研究表明，戊二醛苯扎溴銨溶液在同一作用時(shí)間點(diǎn)，隨著作用濃度的升高，殺滅率也隨之增強(qiáng)。在同一濃度條件下，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，殺滅率也隨之提高。這同多數(shù)消毒劑對(duì)細(xì)菌的殺菌效果一樣［6-10］，戊二醛苯扎溴銨溶液對(duì)病毒的殺滅效果也是隨著濃度的增加、作用時(shí)間延長(zhǎng)而增強(qiáng)。

［1］劉艷華，溫芳，王學(xué)偉，等.獸用消毒劑二氧化氯檢測(cè)方法的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)獸藥雜志，2011，45（2）：51-54.

［2］中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.獸用消毒劑鑒定技術(shù)規(guī)范［S］.北京：（1992）農(nóng)（牧藥）字第101號(hào)，1992.

［3］中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，新城疫診斷技術(shù)［M］.GB/T 1 6550-2008.

［4］武衛(wèi)平，禚寶山，李富金，等.復(fù)方戊二醛消毒劑對(duì)雞禽流感病毒（H9N2株）殺滅效果的研究［J］.中國(guó)獸藥雜志，2005；39（12）：25-27.

［5］韓友圻.消毒劑滅活病毒影響因素的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)消毒學(xué)雜志，1993；10（3）：168-169.

［6］趙春蘭，喬玫，宋嘵紅，等.復(fù)方強(qiáng)化戊二醛消毒液對(duì)細(xì)菌芽孢的殺菌效果觀察［J］.中國(guó)消毒學(xué)雜志，2006；23（3）：233.

［7］李綏晶，王莉.復(fù)方戊二醛消毒劑殺菌效果的試驗(yàn)觀察［J］.中國(guó)消毒學(xué)雜志，2003；20（3）：171.

［8］韓艷淑，劉繼敏，董輝，等.戊二醛復(fù)方消毒劑性能的試驗(yàn)觀察［J］.中國(guó)消毒學(xué)雜志，2002；19（3）：184.

［9］張亞尼，宋暉，張福娥，等.5種含氯消毒劑殺菌效果及能量試驗(yàn)研究［J］.中國(guó)消毒學(xué)雜志，2005；22（2）：147.

［10］徐燕，王玲，談智，等.復(fù)方過(guò)氧化氫消毒劑殺滅微生物效果的試驗(yàn)研究［J］.中國(guó)消毒學(xué)雜志，2005；22（2）：361.

S852.65+9.5

B

0529-6005（2016）04-0105-02

2015-03-04

高富紅（1980-），女，獸醫(yī)師，碩士，從事新獸藥研發(fā)工作，E-mail：dkxgfh@sohu.com