酒糟培養(yǎng)靈芝提取物對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制作用觀察

付志朝，唐　坤，陳小友，王　魯

（1.貴州省黎平縣尚重鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，貴州 黎平 557308；2.貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025；3.貴州大學(xué)貴州省生化工程中心，貴州 貴陽 550025）

酒糟培養(yǎng)靈芝提取物對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制作用觀察

付志朝1，唐坤2，陳小友2，王魯3

（1.貴州省黎平縣尚重鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，貴州 黎平 557308；2.貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025；3.貴州大學(xué)貴州省生化工程中心，貴州 貴陽 550025）

為了評價(jià)酒糟培養(yǎng)靈芝提取物的藥理活性，將小鼠隨機(jī)分為提取物125 mg/kg體重組、250 mg/kg體重組、500 mg/kg體重組，安定組和生理鹽水組，觀察酒糟培養(yǎng)靈芝的提取物對小鼠自發(fā)活動、巴比妥鈉閾上劑量致睡眠時間、戊四氮致驚厥的影響。結(jié)果顯示，提取物的各組、安定組與生理鹽水組比較，小鼠的自發(fā)活動能極顯著減少（P＜0.01），睡眠時間能顯著或極顯著延長（P＜0.05，P＜0.01），高、中劑量組小鼠的驚厥率顯著減少（P＜0.05）。結(jié)果提示，酒糟培養(yǎng)靈芝的提取物對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有一定的抑制作用。

酒糟；靈芝；提取物；中樞神經(jīng)系統(tǒng)；小鼠

靈芝（Ganoderma lucidum）為擔(dān)子菌門擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬藥用真菌，藥用價(jià)值極高，具有益氣安神、扶正固本之功效［1］，在現(xiàn)代藥理學(xué)與臨床實(shí)踐證實(shí)，靈芝不僅能抗衰老、增強(qiáng)肌體免疫力，而且具有廣譜的抗病毒、抗腫瘤作用［2］，靈芝對中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要表現(xiàn)為具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、安定等作用［3］。

酒糟是白酒生產(chǎn)過程的主要副產(chǎn)物，因其含有豐富的蛋白質(zhì)、淀粉以及各種氨基酸、酵母、酶類等被作為飼料飼喂家畜，但酒糟本身有毒，只能限量投放在飼料中。為了綜合利用酒糟，已有文獻(xiàn)報(bào)道用酒糟栽培靈芝［4-5］，我們前期也已利用酒糟成功培養(yǎng)了靈芝。為將其更好地應(yīng)用于飼料添加和中藥的開發(fā)，我們設(shè)計(jì)了本次試驗(yàn)，將為酒糟培養(yǎng)靈芝的藥理學(xué)提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗(yàn)材料酒糟培養(yǎng)靈芝由貴州省生化工程中心文庭池博士提供。18～22 g SPF級昆明系小鼠，購自解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心（動物許可證號：SCXK（渝）2012-0003）。

1.1.2主要試劑戊巴比妥鈉（AR），戊四氮均為中國醫(yī)藥（集團(tuán)）上?；瘜W(xué)試劑公司產(chǎn)品；艾司唑侖片（安定）為上海信宜藥廠有限公司產(chǎn)品；其他均為國產(chǎn)化學(xué)純化學(xué)試劑。

1.1.3主要儀器CTXNW-20B超聲循環(huán)提取機(jī)（北京弘祥隆生物技術(shù)服務(wù)有限公司）；RE-5298旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；HZT-A100型電子秤（福州華志科學(xué)儀器有限公司）；立式壓力蒸汽滅菌鍋（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；HH·B11·360電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）。

1.2方法

1.2.1酒糟培養(yǎng)靈芝提取物制劑的制備將酒糟基質(zhì)及培養(yǎng)靈芝進(jìn)行干燥，于超聲循環(huán)提取機(jī)中用50%乙醇按1∶20的料液比提取2 h，取濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮藥液，將濃縮藥液分別用80%，85%，90%乙醇沉淀處理3次，上清抽濾，回收乙醇、濃縮、冷凍干燥得提取物，用蒸餾水配制成0.1 g/mL溶液（相當(dāng)于原藥1 g/mL），滅菌保存。

1.2.2酒糟培養(yǎng)靈芝提取物對小鼠自發(fā)活動的影響［6］選取100只體重18～22 g SPF小鼠，隨機(jī)分成5組，分別為提取物低、中、高劑量組，安定組和生理鹽水組，每組20只。提取物低、中、高劑量組小鼠分別灌胃等容積125 mg/kg·d、250 mg/ kg·d、500 mg/kg·d的提取物，安定組灌胃等容積4 mg/kg·d安定。生理鹽水組灌胃等容積生理鹽水，各組連續(xù)給藥7 d，每天1次，于末次給藥前8 h禁食，前1 h禁水，于末次給藥30 min后開始觀察記錄小鼠2 min內(nèi)舉前肢的次數(shù)和行走時間（秒）。

1.2.3酒糟培養(yǎng)靈芝提取物對延長小鼠睡眠時間的影響［6］分組處理同“1.2.2”，連續(xù)給藥7 d，于末次給藥30 min后給各組小鼠腹腔注射閾上劑量戊巴比妥鈉50 mg/kg體重，并記錄睡眠小鼠只數(shù)和睡眠時間（以小鼠翻正反射消失到恢復(fù)的時間為睡眠時間，翻正反射消失達(dá)1 min以上者即確定為已入睡）。

1.2.4酒糟培養(yǎng)靈芝提取物對小鼠驚厥的影響［6］

分組處理同“1.2.2”，連續(xù)給藥7 d，于末次給藥30 min后給各組小鼠腹腔注射0.1 mL/10 g體重劑量的100 mg/kg戊四氮，以小鼠出現(xiàn)全身性陣攣，進(jìn)而轉(zhuǎn)入強(qiáng)制性驚厥，以后肢伸直為判斷小鼠是否驚厥的指標(biāo)，觀察并記錄小鼠產(chǎn)生驚厥現(xiàn)象的只數(shù)。

1.2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）表示，采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理，組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析（ANOVA），以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1酒糟培養(yǎng)靈芝提取物對小鼠自發(fā)活動的影響與生理鹽水組相比，安定組、提取物低、中、高劑量組小鼠舉前肢的次數(shù)和行走時間極顯著減少（P＜0.01）；與安定組相比，提取物低、中、高劑量組小鼠舉前肢次數(shù)差異不顯著（P＞0.05）；但小鼠行走時間顯著或極顯著減少（P＜0.05，P＜0.01），不同劑量組之間差異不顯著（P＞0.05），結(jié)果見表1。

表1　酒糟培養(yǎng)靈芝提取物對小鼠自主活動的影響

2.2酒糟培養(yǎng)靈芝提取物對延長小鼠睡眠時間的影響與生理鹽水組相比，安定組小鼠在戊巴比妥鈉閾劑量下睡眠時間極顯著延長（P＜0.01），125 mg/kg組、250 mg/kg組、500 mg/kg組睡眠時間顯著或極顯著延長（P＜0.05，P＜0.01）；與安定組相比，125 mg/kg組、250 mg/kg組、500 mg/kg組睡眠時間極顯著延長（P＜0.01）；藥物各劑量組之間相比，125 mg/kg組小鼠睡眠時間顯著或極顯著比250 mg/kg組、500 mg/kg組延長（P＜0.05，P＜0.01），結(jié)果見表2。

2.3酒糟培養(yǎng)靈芝提取物對戊四氮致小鼠驚厥的影響與生理鹽水相比，安定組、250 mg/kg組、500 mg/kg組小鼠的驚厥率差異顯著減少（P＜0.05）；與安定組相比，125 mg/kg組、250 mg/kg組、500 mg/kg組小鼠的驚厥率差異不顯著（P＞0.05）；不同劑量組之間差異也不顯著（P＞0.05），結(jié)果見表3。

表2　酒糟培養(yǎng)靈芝提取物對睡眠時間的影響

表3　酒糟培養(yǎng)靈芝提取物對戊四氮致小鼠驚厥的影響

3　討論

文獻(xiàn)報(bào)道靈芝具有鎮(zhèn)靜抗驚厥的作用，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有明顯的鎮(zhèn)靜作用，能使動物的自發(fā)性活動減少，肌肉輕度松弛，并能增強(qiáng)巴比妥類藥物的中樞抑制作用，但本身并無催眠或麻醉作用［2，6］，這也可能是靈芝能改善睡眠原因的一方面。小鼠自發(fā)活動、延長戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時間和對戊四氮致小鼠驚厥的藥理學(xué)方法，是評價(jià)藥物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用常用的方法，本試驗(yàn)的材料是含有靈芝的菌絲體和子實(shí)體，另外還有大量作為培養(yǎng)基質(zhì)的酒糟，是它們的混合材料的提取物，藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證明它們?nèi)匀槐Ａ袅遂`芝的藥理活性，這說明利用這個材料作為鎮(zhèn)靜安神藥添加到飼料中成為可能，對促進(jìn)酒糟開發(fā)利用，提高酒糟的附加值具有科學(xué)的意義。

［1］黃年來.中國食用菌百科［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1993：324-326.

［2］王本祥.現(xiàn)代中藥藥理與臨床［M］.天津：天津科技翻譯出版公司，2004：792.

［3］Lin Z B，Zhang H N.Anti-tumor and immunoregulatory activities of Ganoderma lucidum and its possible mechanisms［J］.Acta Pharmacol Sin，2004，11：1387-95.

［4］徐德華.用酒糟栽培靈芝的研究報(bào)告［J］.懷化師專學(xué)報(bào)，1996，15（5）：71-74.

［5］潘興祥，單之初，韋一馨，等.利用黃酒糟培養(yǎng)藥食兼用菌研究［J］.釀酒科技，2013，15（3）：86-88.

［6］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：667-673.

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Inhibitory effect of extract of Ganoderma lucidum cultured in distiller's grains on thecentral nervous system of mice

FU Zhi-chao1，TANG Kun2，CHEN Xiao-you2，WANG Lu3
（1.Shang Zhong’s Agriculture Service Center of LiPing of Guizhou Province，Liping 557308，China；2.College of Animal Science，Guizhou University，Guiyang 550025，China；3.College of pharmacy，Guizhou University，Guiyang 550025，China）

The present study was performed to investigate pharmacological activity of the extract of Ganoderma lucidum cultured in distiller's grains.The mice were randomly divided into extract 125 mg/kg group，250 mg/kg group，500 mg/kg group，estazolam group and sodium chloride group.Then，we observed the effect of the extract on mice spontaneous activity，hypnotic effects of pentobarbital sodium，and seizure induced by pentetrazole.The results showed that extract in 125 mg/kg group，250 mg/kg group，500 mg/kg group and estazolam significantly inhibited the spontaneous activity of mice（P＜0.01），and prolonged the sleep time induced by pentobarbital sodium in suprathreshold dose in mice（P＜0.05，P＜0.01），respectively.In addition，the high and middle dose groups significantly reduce eclamptic ratio of mice（P＜0.05）.The results suggest that Ganoderma lucidum cultured in distiller's grains has inhibitory effect on the central nervous system of mice.

distiller's grains；Ganoderma lucidum；central nervous system；mice

WANG Lu

R 285.5

A

0529-6005（2016）09-0117-02

2015-08-10

付志朝（1986-），男（侗族），助理獸醫(yī)師，本科，從事動物疾病防治和檢疫工作，E-mail：fzc1213@163.com

王魯，E-mail：wanglu7007@163.com