沙棘粉對(duì)高脂膳食大鼠血脂影響及肝臟保護(hù)作用

徐　斌，宋春梅，杜　鵑，葛紅娟

（吉林醫(yī)藥學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，吉林 吉林 132013）

沙棘粉對(duì)高脂膳食大鼠血脂影響及肝臟保護(hù)作用

徐斌，宋春梅，杜鵑，葛紅娟

（吉林醫(yī)藥學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，吉林 吉林 132013）

為了研究沙棘粉對(duì)高脂膳食大鼠血脂水平的影響及對(duì)肝臟的保護(hù)作用，將50只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、高脂模型組、沙棘粉低、中、高劑量組，每組10只。各實(shí)驗(yàn)組分別給予高脂飼料和不同劑量的沙棘粉勻漿液，于灌胃第28天腹主動(dòng)脈取血，分別測(cè)定血脂水平，總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白-膽固醇HDL-C）、氧化應(yīng)激水平超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA），谷胱甘肽（GSH）和肝損傷指標(biāo)（AST、ALT）。結(jié)果是與高脂模型組相比，沙棘粉各劑量組血清中TC、TG、LDL-C濃度下降，而HDL-C濃度升高。中、高劑量組T-SOD活力升高，MDA含量、AST和ALT活力明顯降低，高劑量組GSH含量升高。表明沙棘粉具有調(diào)節(jié)血脂，減輕肝臟氧化損傷，預(yù)防血脂代謝紊亂的作用。

沙棘粉；高脂膳食；血脂；肝臟

沙棘（Hippophae rhamnoids L）是一種含有多種生物活性物質(zhì)的藥用植物，屬我國衛(wèi)生部頒布的藥食兩用食物，為我國古代藏醫(yī)、蒙醫(yī)的傳統(tǒng)藥材。沙棘果實(shí)中含有蛋白質(zhì)、氨基酸、有機(jī)酸、黃酮、甾體類、、萜類、揮發(fā)油、維生素、礦物質(zhì)等多種營養(yǎng)素和生物活性物質(zhì)，具有抗癌、增強(qiáng)免疫力、抗炎、抗菌、調(diào)節(jié)血脂、預(yù)防血栓形成等多種功效［1-4］。本試驗(yàn)通過建立大鼠高脂膳食模型，研究沙棘干粉勻漿液對(duì)大鼠血脂代謝及肝臟氧化損傷的保護(hù)作用，擬為沙棘天然保健品的開發(fā)提供一定的理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1主要儀器EA-500A高速中藥粉碎機(jī)，長沙岳麓中南藥機(jī)械廠；Selectra XL全自動(dòng)血生化分析儀，荷蘭威圖科學(xué)公司；C0036-HK低溫冷凍離心機(jī)，德國赫曼；722型可見分光光度計(jì)，上海欣茂公司；DY89—Ⅱ電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)，寧波新芝生物科技公司；YP601N電子天平，上海精密儀器儀表有限公司。

1.2試劑總膽固醇（醫(yī)藥級(jí)）：北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；蛋黃粉：吉林市金翼蛋品公司；豬油：吉林市歐亞超市；甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）試劑盒，山東3V生物集團(tuán)公司；超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.3試驗(yàn)材料沙棘粉制備：沙棘果干，購自青海康普生物科技公司。蒸餾水清洗，除雜，60℃恒溫干燥，高速中藥粉碎機(jī)粉碎，過40目篩，用蒸餾水分別制成濃度為5%、25%和50%的沙棘粉勻漿液備用。

基礎(chǔ)飼料：面粉25%、大豆粉30%、玉米粉35%、麩皮10%，另添加多種維生素和礦物質(zhì)組成。

高脂飼料：79%基礎(chǔ)飼料、10%蛋黃粉、10%豬油和1%膽固醇組成。

1.4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組雄性Wistar大鼠50只，體重200±20 g，由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK-（吉）2011-0002。將大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只。分別為：空白對(duì)照組（N），高脂模型組（P），沙棘粉低劑量組（L）、沙棘粉中劑量組（M）和沙棘粉高劑量組（H）。試驗(yàn)開始后空白對(duì)照組給予基礎(chǔ)飼料，高脂模型組和沙棘各劑量組給予高脂飼料喂養(yǎng)?？瞻讓?duì)照組和高脂模型組每天灌胃2 mL的生理鹽水，沙棘粉低、中和高劑量組分別灌胃0.5 mg/g體重、2.5 mg/g體重、5 mg/g體重的沙棘粉勻漿液，連續(xù)28 d。試驗(yàn)期間每隔3 d稱1次犬鼠體重，以便及時(shí)調(diào)整灌胃劑量。

1.5方法試驗(yàn)進(jìn)行28 d后，大鼠禁食不禁水，次日將大鼠用3%戊巴比妥鈉按30 mg/kg體重，腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血，3 000 r/min離心15 min，分離血清。采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定TC、TG、LDL-C和HDL的濃度，采用試劑盒法測(cè)定血清SOD、MDA、GSH、AST和ALT的活性及含量，測(cè)定方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.6數(shù)據(jù)處理試驗(yàn)結(jié)果采用Excel和SPSS16.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，單因素方差分析，組間比較采用SNK檢驗(yàn)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示，以P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1沙棘粉對(duì)高脂膳食大鼠血脂的影響由表1可見，與空白對(duì)照組比較，高脂模型組血清中TC、TG、LDL-C濃度顯著升高（P＜0.05）；HDL-C濃度顯著降低（P＜0.05），說明大鼠高脂血癥模型造模成功。與高脂模型組比較，沙棘粉各劑量組血清中TC、TG、LDL-C濃度隨著沙棘劑量的增加而逐漸降低，HDL-C濃度隨著沙棘劑量的增加逐漸升高。其中沙棘粉高劑量組TC、LDL-C濃度較高脂模型組顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；沙棘粉中、高劑量組TG濃度較高脂模型組顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；沙棘粉中、高劑量組HDL-C濃度較高脂模型組明顯升高，差異具有顯著性（P＜0.05或P＜0.01）。說明一定劑量的沙棘粉能夠調(diào)節(jié)高脂膳食大鼠出現(xiàn)的血脂代謝異常。

表1　沙棘粉對(duì)高脂膳食大鼠血脂的影響 （n=10，）

表1　沙棘粉對(duì)高脂膳食大鼠血脂的影響 （n=10，）

#：與空白對(duì)照組比較，P＜0.05；△：與高脂模型組比較，P＜0.05；△△：與高脂模型組比較，P＜0.01，下表同

組別　TC（mmol/L）TG（mmol/L）LDL-C（mmol/L）HDL-C（mmol/L）空白對(duì)照組　2.07±0.23　0.79±0.40　2.39±0.28　1.27±0.13高脂模型組　3.26±0.66#　1.13±0.15#　3.20±0.39#　0.86±0.13#低劑量組　3.08±0.37#　1.04±0.08#　3.12±0.12#　1.02±0.15#△中劑量組　2.97±0.43#　0.97±0.21#△　3.05±0.10#　1.06±0.16#△高劑量組　2.57±0.17#△　0.87±0.07#△△　2.89±0.17#△　1.09±0.08#△△

2.2沙棘粉對(duì)高脂膳食大鼠血清中SOD活性、MDA和GSH含量的影響由表2數(shù)據(jù)可知，與空白對(duì)照組比較，高脂模型組血清中T-SOD活力和GSH含量明顯降低（P＜0.05），而MDA含量明顯升高（P＜0.05），說明高脂膳食可導(dǎo)致大鼠體內(nèi)脂質(zhì)過氧化加速，加重細(xì)胞氧化損傷。與高脂模型組比較，沙棘粉中、高劑量組T-SOD活力明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；沙棘粉中、高劑量組血清MDA含量明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；沙棘粉高劑量組血清GSH含量明顯升高，差異具有顯著性（P＜0.05）。

表2　沙棘粉對(duì)高脂膳食大鼠血清中SOD活性、MDA和GSH含量的影響?。╪=10，）

表2　沙棘粉對(duì)高脂膳食大鼠血清中SOD活性、MDA和GSH含量的影響?。╪=10，）

#：與空白對(duì)照組比較，P＜0.05；△：與高脂模型組比較，P＜0.05

組別　T-SOD（U/mgprot）　MDA（nmol/mgprot）　GSH（mgGSH/gprot）空白對(duì)照組　328.97±21.03　2.76±0.52　2.39±0.19高脂模型組　296.43±12.40#　3.58±0.39#　2.19±0.15#低劑量組　302.06±11.31#　3.19±0.40#　2.20±0.12#中劑量組　312.72±9.99#△　3.11±0.37△　2.22±0.14#高劑量組　315.76±23.72△　3.08±0.38△　2.40±0.25△

2.3沙棘粉對(duì)高脂膳食大鼠血清中AST和ALT活性的影響由表3數(shù)據(jù)可知，高脂模型組與空白對(duì)照組比較，血清AST和ALT活力有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；沙棘粉高劑量組血清AST和ALT活力與空白對(duì)照組比較明顯降低，具有顯著性差異（P＜0.05）；沙棘粉中、高劑量組血清AST和ALT活力與高脂模型組比較，明顯降低，具有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）。

表3　沙棘粉對(duì)高脂膳食大鼠血清中AST和ALT活性的影響　　（n=10，）

表3　沙棘粉對(duì)高脂膳食大鼠血清中AST和ALT活性的影響　　（n=10，）

組別　AST（U/L）　ALT（U/L）空白對(duì)照組　34.472±7.080　5.244±0.488高脂模型組　38.428±7.951　6.528±0.733低劑量組　32.916±7.122　6.094±0.499中劑量組　31.460±7.980△　5.288±0.690△高劑量組　25.930±4.318#△△　3.864±0.765#△△

3　討論

總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）是臨床血脂檢測(cè)的最常見指標(biāo)，其中TC指血液中脂蛋白所含有的膽固醇之和，它可損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，與動(dòng)脈硬化的形成和發(fā)展關(guān)系密切；TG反應(yīng)體內(nèi)甘油三酯的代謝情況，其濃度的高低與冠心病及某些代謝性疾病發(fā)病相關(guān)聯(lián)；LDL-C與膽固醇和甘油三酯在體內(nèi)的運(yùn)輸有關(guān)，而HDL-C則可將血液中過量的膽固醇運(yùn)輸回肝臟，并通過膽汁排泄，因此，LDLC，HDL-C水平是冠心病發(fā)生的危險(xiǎn)因子［5-8］。本研究結(jié)果顯示，沙棘粉具有明顯的降低高脂膳食大鼠血脂水平的作用，與高脂模型組相比，沙棘粉各劑量組血清中TC、TG、LDL-C濃度下降，而HDL-C濃度升高。這與焦巖［7］等的研究結(jié)果一致，進(jìn)一步驗(yàn)證了沙棘對(duì)血脂的調(diào)節(jié)作用?，F(xiàn)階段，隨著人民生活水平的提高，高脂血癥及脂肪肝的發(fā)病率明顯升高，而大量流行病學(xué)研究表明，高脂膳食和高脂血癥是脂肪肝發(fā)病的主要因素之一。當(dāng)機(jī)體血脂升高時(shí)，血清中游離脂肪酸明顯增多，肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯（TG）合成增加，腫瘤壞死因子（TNF-α）表達(dá)增加，通過加速外周脂肪動(dòng)員，增強(qiáng)了TNF-α等多個(gè)細(xì)胞因子的毒性作用，進(jìn)而引起肝細(xì)胞內(nèi)線粒體功能損害，導(dǎo)致肝臟組織內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)加強(qiáng)，氧自由基等過氧化產(chǎn)物生成增多，破壞了機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)的平衡，引發(fā)肝臟細(xì)胞凋亡、壞死、肝細(xì)胞脂肪變性和脂肪肝的發(fā)生［7-10］。

近年來，隨著藥理學(xué)、營養(yǎng)學(xué)和食品科學(xué)的發(fā)展，人們?cè)絹碓蕉嗟恼J(rèn)識(shí)到天然食物中的植物化學(xué)成分在預(yù)防和治療高脂血癥及保護(hù)肝臟方面發(fā)揮著重要作用。SOD是機(jī)體內(nèi)酶抗氧化系統(tǒng)的重要組成部分，可通過歧化反應(yīng)清除體內(nèi)的氧自由基，阻斷脂質(zhì)過氧化反應(yīng)進(jìn)行。MDA是生物膜脂質(zhì)過氧化最重要的分解產(chǎn)物之一，它的產(chǎn)生可加劇生物膜損傷，其含量反映了脂質(zhì)過氧化程度及細(xì)胞受自由基攻擊的程度［8-11］。AST和ALT是轉(zhuǎn)氨酶中重要的兩種，是臨床上肝功能檢查的主要指標(biāo)，在血清中濃度較低，當(dāng)肝細(xì)胞破裂或肝功能受損時(shí)，AST和ALT活力明顯升高。本試驗(yàn)中，高脂模型組血清中T-SOD活力和GSH含量明顯降低（P＜0.05），而MDA含量明顯升高（P＜0.05），血清AST和ALT活力也有上升趨勢(shì)，說明高脂膳食可導(dǎo)致大鼠體內(nèi)脂質(zhì)過氧化加速，加重肝細(xì)胞氧化損傷。與高脂模型組比較，沙棘粉中、高劑量組T-SOD活力升高，MDA含量、AST和ALT活力明顯降低，高劑量組GSH含量升高，這與本課題此前的研究“沙棘果對(duì)高脂膳食大鼠肝臟保護(hù)作用”結(jié)果一致，提示沙棘可有效清除實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)氧自由基，改善脂質(zhì)代謝水平，抑制肝細(xì)胞脂質(zhì)過氧化，減輕肝細(xì)胞受損程度。這可能與沙棘中含有的大量生物活性物質(zhì)及營養(yǎng)成分如黃酮類化合物、有機(jī)酸、甾體類、脂肪酸、萜類、揮發(fā)油、維生素、礦物質(zhì)等有直接關(guān)系，其機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

［1］閆濤，羅麗梅，謝竹田，等.沙棘的化學(xué)成分及生物功能的研究進(jìn)展［J］.吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，31（1）：52-54.

［2］王振宇，劉瑜，周麗萍.大果沙棘黃酮對(duì)糖尿病小鼠血脂與抗氧化水平的影響［J］.食品科學(xué)，2010，31（7）：297-301.

［3］曹少謙，徐曉云，潘思軼.沙棘籽原花青素對(duì)小鼠免疫功能調(diào)節(jié)作用的影響［J］.食品科學(xué)，2005，26（6）：229-232.

［4］楊現(xiàn)艷，瞿偉菁，徐自良，等.沙棘籽渣黃酮對(duì)更年期大鼠血脂及體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)的影響［J］.中國中藥雜志，2006，31（13）：1109-1112.

［5］馬立麗，梁惠陶.植物甾醇對(duì)高脂膳食喂養(yǎng)大鼠血脂及肝臟脂質(zhì)的影響［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014，41（15）：2727-2731.

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［7］黃曉旭，張榮超，張亞偉，等.馬齒莧對(duì)高脂膳食大鼠脂代謝的影響和肝臟保護(hù)作用的研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，23（5）：1166-1167.

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［10］宋春梅，杜鵑，葛紅娟，等.沙棘果對(duì)高脂膳食大鼠肝臟保護(hù)作用研究［J］.食品研究與開發(fā)，2015，36（7）：26-28.

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Research of Hippophaerhamnoides L on serum lipids and protectiveeffect of liver in high-fat diet rats

XU Bin，SONG Chun-mei，DU Juan，GE Hong-juan
（Jilin school of public health，Jilin 132013，China）

To study the effects of Hippophae rhamnoides L on serum lipids and its protective effect on liver in high-fat diet rats.Fifty male Wistar rats were randomly divided into five groups，including the control diet group，the high-fat model group，the low-dose Hippophae rhamnoids group，the middle-dose Hippophae rhamnoids group and the high-dose Hippophae rhamnoids group.The experimental rats were treated with high fat diet and different doses of Hippophae rhamnoides juice.After 28 day treatment，The concentrations of total cholesterol（TC），triglycerides（TG），low density lipoprotein cholesterol（LDL-C）and high density lipoprotein cholesterol（HDL-C）were measured by automatic biochemical analyzer，and SOD，MDA，GSH，AST and ALT were determined by UV Vis spectrophotometry.For each of the Hippophae rhamnoides dose group when compared with high-fat model group，the concentration of TG，TC and LDL-C in the serum of the Hippophae rhamnoides were decreased，and the concentration of HDL-C was increased.In the middle and high dose group，the activity of T-SOD was increased，the content of MDA，AST and ALT were significantly decreased，and the content of GSH in high dose groups was increased.Hippophae rhamnoids have a hypolipidemic effect，which can reduce the oxidative damage of liver and prevent the disturbance of lipid metabolism.

Hippophae rhamnoides L；High-fat diet；Serum lipids；Liver

SONG Chun-mei

R 151.3

A

0529-6005（2016）09-0111-03

2015-11-12

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（201105089）

徐斌（1972-），男，副教授，碩士，研究方向?yàn)槁圆〉臓I養(yǎng)防治及公共衛(wèi)生研究，E-mail：xb-je@163.com

宋春梅，E-mail：scmjilin@163.com