高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方魚(yú)腥草合劑中連翹苷的含量

王湘妍，翟雪東

（河南應(yīng)用技術(shù)職業(yè)學(xué)院，河南鄭州 450000）

高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方魚(yú)腥草合劑中連翹苷的含量

王湘妍，翟雪東

（河南應(yīng)用技術(shù)職業(yè)學(xué)院，河南鄭州 450000）

建立高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方魚(yú)腥草合劑中連翹苷的含量。采用Agela Promosil C18（250mm×4mm，5μm）分析柱，流動(dòng)相為乙腈-0.2%冰醋酸（24∶76），流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm。結(jié)果：連翹苷在0.051 2μg～0.512 0μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 4），平均回收率為99.0%（n=6）。本方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確、快速，適用于復(fù)方魚(yú)腥草合劑的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；復(fù)方魚(yú)腥草合劑；連翹苷

復(fù)方魚(yú)腥草合劑是由魚(yú)腥草、連翹、黃芩和板藍(lán)根等5味中藥組成的復(fù)方制劑，用于外感風(fēng)熱引起的咽喉疼痛；急性咽炎、扁桃腺炎有風(fēng)熱證候者。處方中連翹的有效成分連翹苷有具有清熱、解毒、散結(jié)排膿等功效。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于文獻(xiàn)［1］中，但無(wú)連翹苷的含量測(cè)定方法，為了有效控制藥品質(zhì)量，確保該制劑的療效，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定復(fù)方魚(yú)腥草合劑中連翹苷的含量。

1 儀器與試藥

儀器高效液相色譜儀戴安U3000：Sartorias電子天平（CPA-225D）；

連翹苷（110821-200610），中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱

Agela Promosil C18（4.6mm×100mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.2%冰醋酸（24∶76），流速為1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為277 nm，柱溫為30℃；進(jìn)樣量10μl。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在上述條件色譜下，精密吸取上述對(duì)照品溶液5、10、20、30、50μL，注入液相色譜儀，測(cè)得峰面積。以對(duì)照品峰面積為縱座標(biāo)，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并以最小二乘法計(jì)算得回歸方程：Y=12.942 X-3.556 8，R2=0.999 4連翹苷在0.051 2μg～0.512 0μg范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗(yàn)

取同供試品溶液溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果連翹苷RSD為0.75%（n=6）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液分別在2h、4h、8h、12h、16h、20h、24h進(jìn)樣1次，結(jié)果連翹苷RSD為0.95%（n=7）。

2.5 加樣回收試驗(yàn)

精密量取已知含量的復(fù)方魚(yú)腥草合劑6份2mL，精密加入對(duì)照品溶液0.5mL、0.5mL、1mL、1mL、1.5mL、1.5mL，照本法制備供試品溶液，按本法進(jìn)行含量測(cè)定并計(jì)算回收率。

2.6 樣品的測(cè)定

精密量取3個(gè)批號(hào)的樣品各2份，按本法制得供試品溶液，按本法進(jìn)行含量測(cè)定結(jié)果批號(hào)為 20120911，20130108，20130304的樣品連翹苷含量分別為3.24μg/mL，2.98μg/mL，3.62μg/mL。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

使用二極管陣列檢測(cè)器，波長(zhǎng)掃描范圍設(shè)定190～300nm，結(jié)果連翹苷在200nm，227nm，277nm 波長(zhǎng)處有強(qiáng)吸收，考慮200nm，227nm供試品溶液雜質(zhì)峰較多不易分離，且冰醋酸在小于240nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)吸收度較大，故選擇277nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇

本品含有較多蔗糖和蜂蜜，黏度較大，若直接進(jìn)樣，不利于分析；若稀釋后進(jìn)樣，樣品中連翹苷含量較低，信噪比偏小，誤差較大。故采用樣品過(guò)聚酰胺柱，甲醇洗脫的方法進(jìn)行凈化和富集，結(jié)果準(zhǔn)確。曾用甲醇-水，甲醇-1%乙腈-水和乙腈-0.2%冰醋酸溶液比較，乙腈-0.2%冰醋酸溶液分離效果較好，保留時(shí)間適當(dāng)，故本實(shí)驗(yàn)使用乙腈-0.2%冰醋酸（24∶76）作為流動(dòng)相。

3.3 分析方法

連翹苷的含量測(cè)定方法有薄層掃描法［2］，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法，試驗(yàn)結(jié)果表明，所建立的方法簡(jiǎn)單，操作方便，專(zhuān)屬性強(qiáng)、重復(fù)性好、結(jié)果可靠，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

［1］ WS-10821（ZD-0821）—2002.國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編內(nèi)科肺系（一）分冊(cè)［S］，2002.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

［3］ 何紹萍，陳華龍.高效液相色譜法測(cè)定小兒清解沖劑中連翹苷含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2011，（3）：21.

［4］ 姬雪禮，李文烈，鄭曉杰，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定連翹葉中連翹酯苷A和連翹苷含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2014，（7）：33.

［5］ 陸紅柳，譚喜瑩，趙陸華，等.連翹中連翹苷HPLC測(cè)定方法的改進(jìn)［J］.中草藥.2007，38（06）：936-937.

［6］ 楊棣華，黃蘭，鄭顯輝.不同產(chǎn)地連翹葉中連翹苷和連翹酯苷A的含量測(cè)定［J］.臨床醫(yī)學(xué)工程，2013，（3）：288.

［7］ 王昌利.高效液相色譜法測(cè)定連膠素膠囊中連翹苷的含量［J］.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào).2005（05），35.

［8］ 曹曉燕，王東浩，思培峰，等.連翹不同部位連翹苷含量的比較［J］.中成藥，2009，（4）.

［9］ 史大軍，邱海蘊(yùn)，康紅英.HPLC法測(cè)定清喉咽顆粒中連翹苷的含量［J］.中國(guó)藥事，2012，（1）.

［10］ 閔宇航.中藥柴胡、何首烏、連翹、枸杞子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高研究［D］北京中醫(yī)藥大學(xué)，2014.

表1 樣品中連翹苷回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

Determination of Phillyrin in Compound Herba Houttuyniae Mixture by HPLC

Wang Xiang-yan，Zhai Xue-dong

Objective To establish a HPLC method for determination of phillyrin in Compound Herba Houttuyniae mixture.Methods Agela Promosil C18（250mm × 4mm，5μm）column，the mobile phase was Acetonitrile-0.2% glacial acetic acid（24∶76），the fl ow rate was 1.0mL/min，the detection wavelength was 277 nm.Results：phillyrin was 0.051 2～0.512 0μg good linear relationship（r=0.999 4），the average recovery rate was99.0%（n=6）.Conclusion：the method is specific，accurate，rapid，and suitable for quality control of compound Houttuynia cordata Houttuynia mixtur

HPLC；compound Houttuynia cordata mixture；phillyrin

R286.0

A

1003-6490（2016）07-0061-02

2016-07-22

王湘妍（1982—），女，河南開(kāi)封人，講師，主要研究方向?yàn)橹兴幮轮苿┭邪l(fā)。