珠母貝稚貝溫度適應(yīng)性初步研究

周銀環(huán)，黃海立

（廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廣東 湛江 524088）

珠母貝稚貝溫度適應(yīng)性初步研究

周銀環(huán)，黃海立

（廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廣東 湛江 524088）

在室內(nèi)條件下，以珠母貝（Pinctada margaritifera）稚貝作為實(shí)驗(yàn)對象，設(shè)置10、12、14、16、18、20、23、26、29、31、33、35、37℃組和常溫組（27.3～30.6℃，CK），研究珠母貝稚貝溫度適應(yīng)性。結(jié)果表明：10、12及37℃條件下，珠母貝稚貝存活12d、15d及48h；稚貝適宜存活溫度為15.3～33.4℃，最適宜存活溫度為23～31℃，低溫和高溫敏感起始點(diǎn)分別為26和31℃；稚貝適宜生長溫度為17.8～33.1℃，最適生長溫度為29～3 1℃；溫度對稚貝水層分布和生理產(chǎn)生影響，35℃時(shí)稚貝在水面以上的分布顯著高于其他組，10～14及35～37℃組稚貝活動(dòng)、攝食能力差，16～33℃稚貝運(yùn)動(dòng)、攝食能力好。

珠母貝稚貝；溫度；存活；生長；水層分布；生理

珠母貝（Pinctada margaritifera）俗稱黑蝶貝，主要分布于南太平洋和印度洋海區(qū)，我國南海亦有分布［1］，是目前唯一能批量生產(chǎn)海水黑珍珠的貝類。目前，對珠母貝的研究主要有種苗培育［2-8］、稚成貝養(yǎng)殖和育珠技術(shù)等［9-14］。我國珠母貝全人工養(yǎng)殖及育珠已取得成功，但未能形成產(chǎn)業(yè)，主要原因是稚貝養(yǎng)殖成活率低，難以獲取批量成貝進(jìn)行植核育珠，因此，提高稚貝養(yǎng)殖成活率是促進(jìn)我國海水黑珍珠養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)化的核心問題。養(yǎng)殖海區(qū)、方式、水層和光度等因素直接影響稚貝養(yǎng)殖成活率［7，10-11］，溫度也是影響貝類生長和存活的關(guān)鍵環(huán)境因子之一，但稚貝對溫度的適應(yīng)性研究尚未見有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行珠母貝稚貝溫度適應(yīng)性的研究，以期為珠母貝養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

珠母貝稚貝取自雷州市海威水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司珍珠貝良種場，在實(shí)驗(yàn)室暫養(yǎng)5 d以適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境。挑選活力好、貝殼完整、大小均勻個(gè)體作實(shí)驗(yàn)稚貝，稚貝殼長為（2.87±0.54）mm，殼高為（2.44±0.46）mm 。

實(shí)驗(yàn)海水取自廣東海洋大學(xué)東海島海洋生物研究基地，為砂濾水，鹽度為25。

餌料取自廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院微藻教研室，為亞心形扁藻和等鞭金藻OA-3011。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)方法水溫設(shè)置10、12、14、16、18、20、23、26、29、31、33、35、37℃組和一個(gè)常溫對照組（CK）（27.3～30.6℃），實(shí)驗(yàn)在1 000 mL燒杯中進(jìn)行，燒杯中加入海水800 mL，每個(gè)杯中放稚貝 30只，燒杯置于可控溫的培養(yǎng)箱中，每個(gè)溫度組設(shè)3個(gè)平行組，按照±1℃/4h變溫速率達(dá)到實(shí)驗(yàn)溫度后再開始計(jì)時(shí)，實(shí)驗(yàn)時(shí)間為18 d。

1.2.2日常管理 每天投餌2次，餌料量為 1 × 104cell·mL-1，實(shí)驗(yàn)期間不換水，以蒸餾水調(diào)整鹽度穩(wěn)定為25，每天觀察和記錄稚貝的攝食、運(yùn)動(dòng)、分布水層及存活情況。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)測量稚貝的殼長和殼高，計(jì)算成活率和生長情況：

式中L1為實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)稚貝平均殼長，L0為實(shí)驗(yàn)開始時(shí)平均殼長；H1為實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)稚貝平均殼高，H0為實(shí)驗(yàn)開始時(shí)平均殼高； T為實(shí)驗(yàn)天數(shù)；S1和S0分別為實(shí)驗(yàn)結(jié)束和開始的存活個(gè)體數(shù)量。稚貝死亡以貝殼張開、肉體腐爛為標(biāo)準(zhǔn)。

珠母貝稚貝低溫或高溫敏感起始點(diǎn)的確定參照劉志剛等［15］方法，適宜存活溫度及最適宜存活溫度：存活率 Rs = 50 %作為珠母貝稚貝生存臨界溫度，高低兩端生存臨界溫度之間的溫度范圍則為該稚貝生存適宜溫度范圍。臨界溫度采用兩點(diǎn)法［16］計(jì)算，公式為：

其中T1、T2分別為存活率接近50 %的低、高端溫度，RS1、RS2為對應(yīng)的存活率。經(jīng)過多重比較無明顯差異（P＞0.05）的存活率最高的幾個(gè)實(shí)驗(yàn)組對應(yīng)的溫度作為生存最適溫度。

采用Duncan法進(jìn)行多重比較，結(jié)果顯示存活率與常溫對照組有顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）差異的低溫端最高溫度作為低溫敏感起點(diǎn)，高溫端最低溫度作為高溫敏感起始點(diǎn)［16］。

采用栗志民等［16］的方法來界定稚貝生長適宜溫度與生長最適溫度：即確定實(shí)驗(yàn)期間殼長和殼高日均生長率最高的組，按照其日均生長率30 %所對應(yīng)的溫度作為殼長和殼高增長臨界溫度，高低兩端生存臨界溫度之間的溫度范圍則為該貝類的生長適宜溫度范圍。臨界溫度的計(jì)算采用二點(diǎn)法，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表明無明顯差異（P＞0.05）的日均生長率最高的實(shí)驗(yàn)組對應(yīng)的溫度作為生長最適溫度，適宜和最適生長溫度范圍是以上兩個(gè)指標(biāo)的溫度重合部分。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，若有顯著差異，再作Duncan多重比較，顯著性水平α = 0.05。

2　結(jié)果與分析

2.1珠母貝稚貝適宜生存溫度及最適生存溫度

珠母貝稚貝在不同溫度下的15 d成活率情況見圖1。經(jīng)過7 d的培養(yǎng)，10℃稚貝死亡率為32 %，12℃死亡率為27 %，10 d時(shí)稚貝的死亡率10℃為73 %，12℃死亡率為69 %，12 d和15 d后兩個(gè)溫度的稚貝全部死亡。在37℃高溫下，24h的死亡率為90 %，48h全部死亡。其他各溫度組以平均存活率為依據(jù)，采用兩點(diǎn)法計(jì)算得到平均存活率為50 %的低端存活臨界溫度為15.3℃，高端為33.4℃，從而得出珠母貝稚貝適宜生存溫度范圍為15.3～33.4℃。對平均存活率進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果表明23℃、26℃、29℃、31℃四個(gè)溫度稚貝的存活率都在70 %以上，多重比較表明，這4個(gè)溫度組稚貝存活率沒有顯著差異，因而珠母貝稚貝最適宜存活的溫度范圍為 23～31℃。與對照組相比，低溫和高溫敏感起始點(diǎn)分別為 26℃和31℃。

圖1　不同溫度下珠母貝稚貝的成活率Fig.1　Survival rate of juveniles of Pinctada margaritifera at different temperatures

2.2珠母貝稚貝適宜生長溫度及最適生長溫度

2.2.1珠母貝稚貝殼長適宜生長溫度和最適溫度實(shí)驗(yàn)溫度下珠母貝殼長的生長隨著溫度的升高而加快，29℃達(dá)到最高，之后隨溫度的升高長速下降，如圖2和表1。稚貝殼長生長臨界溫度的低端溫度范圍為16～18℃，高端為33～35℃，采用兩點(diǎn)法計(jì)算，殼長增長的低端臨界溫度為 17.8℃，高端為33.2℃，從而得出珠母貝稚貝殼長適宜生長溫度范圍為17.8～33.2℃，對殼長日均生長率及凈增長進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果顯示溫度對殼長生長有顯著的影響，多重比較表明，29℃和31℃兩組比其他組及對照組生長顯著快，因而29～31℃為稚貝殼長生長的最適溫度范圍。

2.2.2珠母貝稚貝殼高適宜生長溫度和最適溫度

溫度對稚貝殼高生長影響與殼長相似，殼高生長的情況見圖3和表1。隨著溫度的升高，殼高的增長和日均生長率增大，到29℃達(dá)到最大，殼高增長為1240.98μm，日均增長率為82.73 μm·d-1，之后隨著溫度的升高稚貝的長速下降。稚貝殼高生長臨界低端溫度范圍為16～18℃，高端為33～35℃，采用兩點(diǎn)法計(jì)算，稚貝的殼高生長的臨界溫度低端為17.4℃，高端為33.1℃，因而稚貝殼高適宜增長的溫度范圍為17.4～33.1℃。在臨界溫度范圍內(nèi)，對殼高的生長進(jìn)行單因素方差，結(jié)果表明溫度對殼高的生長存在顯著的影響，29℃和31℃顯著比其他組高，并且彼此間差異不顯著，因而29～31℃為稚貝殼高生長的最適溫度范圍。

圖2　不同溫度下珠母貝殼長日均生長率Fig.2　Daily growth rate of shell length of juveniles of Pinctada margaritifera at different temperatures

圖3　不同溫度下珠母貝稚貝殼高日均生長率Fig.3　Daily growth rate of shell heigth of juveniles of Pinctada margaritifera at different temperatures

2.2.3珠母貝稚貝適宜生長的溫度和最適溫度稚貝殼長適宜生長溫度為17.8～33.2℃，殼高適宜生長溫度為17.4～33.1℃，兩者重疊的溫度范圍為17.8～33.1℃，即稚貝適宜生長溫度范圍為17.8～33.1℃；殼長最適生長的范圍29～31℃，殼高為同樣的范圍，兩者的溫度相同，即稚貝最適生長的溫度范圍為29～31℃。

表1　不同溫度珠母貝稚貝殼長、殼高增長Table 1　Growth of shell height and shell length of juveniles of Pinctada margaritifera at different temperatures

2.3不同溫度下稚貝的行為和生理情況

實(shí)驗(yàn)過程中對不同溫度組稚貝進(jìn)行觀察及鏡檢，10～14℃的稚貝多數(shù)附著在燒杯的底部，顯微鏡下觀察稚貝腹足在殼內(nèi)外不伸縮，胃內(nèi)沒有或有極少的餌料，心臟微弱的跳動(dòng)；16～33℃的稚貝一部分在杯底附著，一部分在杯壁附著，鏡檢發(fā)現(xiàn)稚貝的胃內(nèi)充滿餌料，通過腹足在殼內(nèi)外的伸縮，稚貝可以移動(dòng)，并且外套膜不停收縮，心臟跳動(dòng)有力；但溫度達(dá)到35～37℃時(shí)，稚貝多數(shù)移動(dòng)到水面以上的杯壁，鏡檢發(fā)現(xiàn)稚貝不攝食，心跳微弱，腹足在殼內(nèi)不伸縮，活力很差，37℃條件下經(jīng)48h稚貝全部死亡（表2）。

35℃時(shí)，稚貝在水面以上杯壁的分布高達(dá)83.97 %，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于10～33℃杯壁分布率。多重比較顯示，35℃時(shí)在水面以上的分布與其他組存在顯著差異；16～33℃組在水面之下杯壁分布率最高，其次是10～14℃組，35～37℃組最低，多重比較顯示，35～37℃、10～14℃和16～33℃組間存在顯著差異；杯底稚貝分布率也存在顯著差異，10～14℃顯著高于16～33℃之間的組，16～33℃之間的組顯著高于35℃組（表2）。

表2　不同溫度下珠母貝稚貝在水中分布比率Table 2　Distribution of juveniles of pinctada margaritifera at different temperatures in water-layer　%

3　討論

3.1溫度對珠母貝稚貝生長、存活的影響

溫度是影響貝類存活、生長和繁殖的最重要的因素之一，許多學(xué)者［17-19］認(rèn)為貝類的生理代謝受環(huán)境和生物因素的影響，從而影響其生長和存活。適宜的環(huán)境溫度是保證海洋生物機(jī)體各種代謝順利進(jìn)行的必不可少的條件。從本實(shí)驗(yàn)過程來看，溫度對珠母貝稚貝影響是多方面的，包括運(yùn)動(dòng)、攝食、生理等。低于14℃或高于35℃的環(huán)境中，稚貝基本不活動(dòng)、攝食能力差，心跳微弱，隨后批量死亡。16～33℃稚貝在生活的水環(huán)境中分布均勻，可以在水體上下移動(dòng)，攝食積極，生理活動(dòng)良好，這與其他貝類是相似的［20-23］。

溫度對貝類幼蟲和稚貝生長發(fā)育及存活影響是通過兩方面進(jìn)行：一是通過影響幼蟲或稚貝代謝過程中的能量收支，從而影響其生長和存活，另一方面通過改變貝類生命活動(dòng)過程中酶的活性，影響其代謝率，從而影響幼蟲或稚貝生長發(fā)育［24］，在適宜的溫度范圍內(nèi)，隨著水溫升高，生物體內(nèi)各種生化反應(yīng)加快，耗氧、排泄活動(dòng)相應(yīng)的能力加強(qiáng)，生物存活率高，生長良好，而當(dāng)溫度超過生理極限時(shí)又會相應(yīng)減弱，從而影響生物的存活和生長，這是變溫動(dòng)物的普遍特點(diǎn)［21-23］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與其一致。

3.2珠母貝適宜生長和存活的溫度

珠母貝稚貝適宜生存溫度范圍為15.3～33.4℃，最適宜存活的溫度范圍為23～31℃，低溫和高溫敏感起始點(diǎn)分別為26℃和31℃；稚貝適宜生長溫度范圍為17.8～33.1℃，最適生長的溫度范圍為29～31℃。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，珠母貝稚貝溫度適應(yīng)范圍比較廣，但最適溫度向高溫區(qū)間偏移，即在適宜溫度區(qū)間高溫區(qū)更適宜珠母貝稚貝存活和生長，這和泥蚶［25］、文蛤［26］等耐受高溫性的貝類生理特點(diǎn)相似，也和珠母貝在熱帶海區(qū)分布特點(diǎn)相一致，同屬于熱帶海區(qū)的珍珠貝類如大珠母貝和合浦珠母貝，其最適生長溫度分別為25～30℃［17］和23～25℃［27］，與兩者相比珠母貝稚貝最適溫區(qū)還要高，表明不同種類存在適應(yīng)性差異。廣東和廣西海區(qū)冬季的水溫多在16～17℃左右，遇到寒潮天氣甚至更低，根據(jù)珠母貝稚貝更適應(yīng)高溫的特性，稚貝養(yǎng)成中遇到低溫天氣，應(yīng)采取相應(yīng)防御措施，減少因低溫致使稚貝大量死亡的發(fā)生。

謝仁政等［8］認(rèn)為，珠母貝稚貝適宜存活和最適存活鹽度分別為 20.64～39.10和 27.19～35.02，殼長增長的適宜鹽度和最適鹽度為 19.38～41.30和27.19～31.10，本實(shí)驗(yàn)鹽度 25實(shí)驗(yàn)條件雖不在謝仁政等［8］報(bào)道的珠母貝稚貝最適鹽度范圍內(nèi)，但仍在適宜鹽度范圍內(nèi)。

［1］謝玉坎.珍珠科學(xué)［M］.北京：海洋出版社，1995：31-37，136-137.

［2］鄧陳茂，尹國榮，符韶，等.珠母貝人工促熟培育與催產(chǎn)的研究［J］.湛江海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，25（1）：14-165.

［3］Martínez-Fernández E，Southgate P C.Use of tropicalmicroalgae as food for larvae of the black-lip pearl oyster Pinctada margaritifera ［J］.Aquaculture，2007，263（1/4）：220-226.

［4］黃海立，鄧陳茂，符韶，等.珠母貝浮游幼蟲餌料的研究［J］.水產(chǎn)養(yǎng)殖，2008，29（1）：1-4.

［5］黃海立，符 韶，鄧陳茂，等.珠母貝親貝催熟培育和催產(chǎn)技術(shù)的研究［J］.海洋科學(xué)，2009，33（10）：1-4.

［6］勞贊，黃海立，符韶，等.珠母貝人工繁育優(yōu)化技術(shù)的研究［J］.海洋科學(xué)，2009，33（10）：31-35.

［7］黃海立，符 韶，鄧陳茂，等.培育密度、換水量和倒池培育對珠母貝浮游幼蟲生長發(fā)育和存活的影響［J］.廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，30（1）：50-54.

［8］謝仁政，初慶柱，黃海立，等.鹽度對珠母貝幼蟲和稚貝存活和生長的影響［J］.廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，33（6）：57-61.

［9］Norton J H，Lucas J S，Turner I，et al.Approaches to improveculturedpearlformationinPinctada margaritifera rough use of relaxation，antiseptic application and incision losure during bead insertion ［J］.Aquaculture，2000，184（1/2）：1-17.

［10］鄧陳茂，黃海立，符韶，等.珠母貝人工苗養(yǎng)殖研究［J］.湛江海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，26（4）：26-30.

［11］Yukihira H，Lucas J S，Klumpp D W.The pearl oysters，Pinctada maxima and P.margaritifera，respond in different ays to culture in dissimilar environments ［J］.Aquaculture，2006，252（2/4）：208-224.

［12］黃海立，符 韶，鄧陳茂，等.珠母貝人工苗中間培育的研究［J］.水產(chǎn)科學(xué)，2007，26（5）：267-271.

［13］梁飛龍，鄧陳茂，黃海立，等.幾種大型珍珠貝人工苗網(wǎng)箱式中間培育的研究［J］.海洋湖沼通報(bào)，2008（3）：121-127.

［14］符韶，鄧陳茂，黃海立，等.珠母貝人工培育黑珍珠的影響因素分析［J］.2010，17（6）：1340-1345.

［15］劉志剛，王輝，栗志民，等.高起始致死溫度的研究［J］.中國水產(chǎn)科學(xué)，2007，（5）：778-784.

［16］栗志民，劉志剛，姚 茹，等.對皺肋文蛤幼貝存活與生長的影響［J］.生態(tài)學(xué)報(bào)，2010，30（13）：3406-3413.

［17］白成，劉志剛，李燕，等.大珠母貝稚貝對溫度、鹽度的耐受性研究［C］//2013年環(huán)北部灣高校研究生海洋論壇，湛江：廣東海洋大學(xué)，2013：51-56.

［18］曹伏君，劉志剛，羅正杰.海水鹽度、溫度對文蛤稚貝生長及存活的影響［J］.應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2009，20（10）：2545-2550.

［19］羅明明.幾種環(huán)境因子對馬氏珠母貝幼蟲和稚貝生長、存活和RNA/DNA比值影響［D］.湛江：廣東海洋大學(xué)，2012.

［20］方軍，李磊，陳琛.幾種生態(tài)因子對尖刀蟶幼貝存活率和生長率的影響［J］.臺灣海峽，2011，30（1）86-91.

［21］范德朋，潘魯青，馬生，等.溫度對縊蟶（Sinonovacula constricta）耗氧率和排氨率的影響［J］.青島海洋大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2002，32（1）：56-62.

［22］林小濤，鐘金香，頡曉勇，等.溫度對翡翠貽貝能量收支的影響［J］.海洋科學(xué)，2002，26（4）：13-16.

［23］肖國強(qiáng)，張炯明，柴雪良，等.菲律賓蛤仔稚貝攝食、呼吸和排泄率的研究［J］.臺灣海峽，2006，25（1）：30-35.

［24］Peehenik J A.Environmental influences on larval survival and development［M］//Giese A C，Pearse J S.Reproduction of Marine Invertebrates.New York：Academic Press，1987：551-608.

［25］尤仲杰，徐善良，邊平江，等.海水溫度和鹽度對泥蚶幼蟲和稚貝生長及存活的影響［J］.海洋學(xué)報(bào)，2001，23（6）：108- 112.

［26］曹伏君，劉志剛，羅正杰.海水鹽度、溫度對文蛤稚貝生長及存活的影響［J］.應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2009，20（10）：2545-2550.

［27］王如才.海水貝類養(yǎng)殖學(xué)［M］.青島海洋大學(xué)出版社，1993：212.

（責(zé)任編輯：陳莊）

Study on Adaptability of Juveniles of Pinctada margaritifera to Different Temperatures

ZHOU Yin-huan，HUANG Hai-li
（Fisheries College of Guangdong Ocean University，Zhanjiang 524088，China）

The juvenile Pinctada margaritifera（shell length（2.88 ± 0.54）mm，shell height （2.44 ± 0.46）mm）were selected indoor to examine their temperature adaption.All animals were equally divided into 14 groups under different culture temperatures：10、12、14、16、18、20、23、26、29、31、33、35、37℃ and room temperature as a control group（ CK）.Results showed that juveniles could survive at 10℃ for 12 d，12℃ for 15 d and 37℃ for 48h ，respectively；and the appropriate survival seawater temperature was among 15.3～33.4℃，the optimal survival seawater temperatures was 23～31℃，upper limit and lower limit of sensitive temperatures threshold was 26℃ and 37℃，respectively.And juvenile shellfish's appropriate growth temperature was 17.8～33.1℃，the optimal growth temperatures was 29～31℃.Temperature had an effect on thewater- layer distribution and physiology of juvenile Pinctada margaritifera，the number of shellfish juveniles dwelling in the water surface at 35℃were much more than that of other groups.Numbers of juveniles dwelling on the cup wall increased significantly in sequence：16～33℃groups，10～14℃groups and 35℃group.Numbers of juveniles dwelling on the cup bottom increased significantly in sequence：10～14℃groups ，16～33℃ groups and 35℃ group.At 10～14℃and 35～37℃the shellfish juveniles didn't feed and move ，whereas they moved and fed actively at 16～33℃.

Juveniles of Pinctada margaritifera；temperature；survival；growth；water-layer distribution；physiology

S968.3

A

1673-9159（2016）04-0096-05

10.3969/j.issn.1673-9159.2016.04.016

2016-04-11

廣東省海洋漁業(yè)科技與產(chǎn)業(yè)發(fā)展專項(xiàng)（Z2014013）

周銀環(huán)（1969—），女，高級實(shí)驗(yàn)師，研究方向?yàn)樗a(chǎn)養(yǎng)殖。

黃海立（1970—）男，教授級高工。Tel：13702885446，Email：huanghaili90@163.com