間接免疫熒光法檢測抗核抗體的結果分析

劉清銀，涂斌

1.解放軍第一五0中心醫(yī)院檢驗科，河南洛陽471031；2.洛陽出入境檢驗檢疫局，河南洛陽471003

間接免疫熒光法檢測抗核抗體的結果分析

劉清銀1，涂斌2

1.解放軍第一五0中心醫(yī)院檢驗科，河南洛陽471031；2.洛陽出入境檢驗檢疫局，河南洛陽471003

目的探討間接免疫熒光法（IIFA）檢測抗核抗體在自身免疫性疾?。ˋID）患者中的結果應用分析。方法分別采用IIFA和膠乳法檢測50例自身免疫性疾病患者血清樣本抗核抗體（ANA）。結果IIFA法檢測血清ANA的靈敏度為76%，膠乳法檢測血清ANA的靈敏度為58%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。結論IIFA法檢測ANA的敏感度明顯高于膠乳法，提高了臨床的陽性檢出率。IIFA法用于ANA的篩查，陽性標本在進行滴度檢測，有助于臨床診斷。

抗核抗體；間接免疫熒光法；膠乳法

抗核抗體（ANA）包括細胞核的自身抗體和細胞質內的核酸和核蛋白的所有成分的自身抗體，是指哺乳動物的細胞中以細胞核為靶抗原的自身抗體的總稱［1］。ANA在系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、硬皮病、慢性活動性肝炎等自身免疫疾病中均呈不同程度的陽性。因此在自身免疫性疾病的臨床診斷、鑒別以及評價預后中，ANA檢測已成為重要的篩查指標［2］。臨床上ANA檢測方法較多，現階段最常用、最有效的檢測方法是IIFA法。由于不同檢測方法檢測靈敏性、準確性不同，往往影響到檢測結果，使檢測結果存在一定的差異，尤其在ANA呈弱陽性的標本中，不同檢測方法的檢測成為爭議的焦點。為進一步確認IIFA法和乳膠法檢測ANA的效果，進而客觀評價該兩種檢測方法差異性，該文2015年10—12月間選取該院確診或疑似為AID的患者50例作為觀察對象，同時采用IIFA法和乳膠法檢測，報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

所有標本均來自2015年10—12月到該院確診或疑似AID的門診和住院患者50例，男性15例，女性35例，年齡15～65歲。

1.2儀器和試劑

IIFA法采用北京和杰創(chuàng)新公司試劑盒；膠乳法采用Santa Monica U.S.A試劑盒。試劑均在有效期內使用。儀器設備Olympus BX60型熒光顯微鏡，TS-1型轉移脫色搖床。

1.3方法

將HEp-2細胞進行第1次溫育，并固定在載片反應區(qū)上，使用1：100稀釋的血清加入，觀察兩者反應，如果特異性IgA、IgG和IgM抗體與相應抗原結合，則表示標本呈陽性。在繼續(xù)進行第二次溫育時，使用顯微鏡觀察HEp-2細胞的特異性的熒光模型，結合抗體和熒光素標記的抗核抗體反應進行判斷，如果顯微鏡下HEp-2細胞顯示無特異性熒光或極弱且均勻的熒光，則表示標本為陰性；如果顯微鏡下HEp-2細胞顯示顯著特異性熒光，則表示標本為陽性。并根據靶抗原在細胞內所處位置的不同區(qū)分熒光核型，并按1∶100、1∶320、1∶100 0、1∶320 0滴度系統(tǒng)報告抗體最終滴度。熒光較弱型不易區(qū)分者，為弱陽性，即滴度為1：100。膠乳法在黑色反應卡上各滴加50 uL的血清和反應液，攪拌均勻，80～100 rpm旋轉搖勻2 min，立即讀取結果。出現凝集顆粒為陽性，沒有出現凝集顆粒為陰性，對陽性標本，可按1∶2、1∶4…進行倍比稀釋作半定量試驗，抗ANA的滴度為呈陽性反應的血清最高稀釋度。

2　結果

IIFA和膠乳法檢測結果比較以IIFA和膠乳法檢測50例臨床確診或疑似為AID的患者血清ANA，IIFA法檢測陽性、弱陽性及陰性例數分別為34，4及12例，陽性率為76%，乳膠法檢測陽性、弱陽性及陰性例數分別為28，1及21例，陽性率為58%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見表1。

表1　IIFA法和膠乳法檢測ANA結果（n=50）

3　討論

抗核抗體是最常出現于自身免疫性風濕?。ńY締組織?。┗颊哐逯械囊唤M自身抗體的總稱。在各類型的自身免疫性疾病患者的細胞中，ANA均顯示不同程度的陽性。在風濕性疾病中，ANA檢測是臨床鑒別和診斷的重要依據。ANA的檢測在臨床上作為自身免疫疾病的篩查檢測項目早已得到公認。大量文獻報道間接免疫熒光法是檢測總的抗核抗體的經典實驗方法［3-5］，由于ANA的靶分子是細胞內特有的抗原性物質，因目前技術水平所限，這些抗原成分依然難以實現人工復制，因此在人工提純過程中可避免其他核抗原所引起的假陰性。而Hep-2細胞核質豐富，經過提純可以提高ANA檢測的靈敏性［6-7］，此外抗核抗體的熒光模型對AID的臨床分類有密切關系，滴度的高低與臨床癥狀有關，可用于臨床治療的動態(tài)監(jiān)測。但在實際操作中，由于缺乏適合的參考標準物，造成實驗室檢測缺乏參考標準，尤其對臨界滴度標本的檢測最具爭議。另外，且受到閱片人的知識技術的影響，使檢測結果的正確性和精確度產生差異。膠乳法簡便快速，便于觀察，但敏感性差。從表中可以證實，膠乳法與IIFA法在檢測滴度為1∶100ANA時檢測的結果符合率較低。說明IIFA法的敏感性明顯高于膠乳法，很大程度上提高了檢出陽性率，可以作為主要幾種ANA成分的篩查方法，在獲得熒光核型信息同時觀察抗體滴度的變化情況，指導臨床治療。

現已證實抗核抗體（ANA）的檢測在自身免疫性疾病的臨床診斷中具有一定的價值。但由于自身免疫性疾病類型不同，因此ANA的靈敏度和特異度存在差異，因此在臨床中也具有不同的應用價值。在不同自身免疫性疾病中，特別是風濕性疾病，其抗體譜有一定的特征性。幾乎所有的SLE患者抗核抗體呈陽性［8］，故ANA常作為SLE診斷的一項實驗室指標；藥物性SLE、混合性結締組織病（MCTD）ANA陽性率為95%～100%；干燥綜合癥（SS）陽性率為70%～80%；進行性全身性硬化癥（PSS）陽性率為85%～95%；其他如類風濕性關節(jié)炎、皮肌炎及多發(fā)性肌炎、慢性活動性肝炎、潰瘍性結腸炎等也有20%～50%的檢出率，常在其他的如兒童慢性關節(jié)炎、抗心磷脂抗體綜合征等自身免疫性疾病中，臨床上病情監(jiān)測以及預后判斷均將ANA檢測作為重要指標［9］。但需注意的是，在這些疾病中，ANA檢測并非作為臨床診斷依據，ANA陽性僅提示預后較差，對于病情監(jiān)測和預后具有重要價值。而甲狀腺疾病、盤狀紅斑狼瘡、RA、多發(fā)性硬化癥、ITP及部分感染性疾病、惡性腫瘤等疾病以及乳房硅膠填充術者中，ANA也呈較高的陽性率，明顯高于普通人群。

［1］Clinical and Laboratory Standsrds Institute.EP15-A2 Verification of performance for precision and trueness［S］.Wayne，PA，USA：CLIS，2006.

［2］劉淑梅.抗核抗體的檢測間接免疫熒光法和酶聯(lián)免疫吸附試驗法的比較［J］.醫(yī)學檢驗與臨床，2007，18（4）：43-45.

［3］CharkED，Orloff MI，Nishiuchi E，et al.Somatic hypcrmutations confer rheumatoid factor activity in hepatitis C virus-associated mixed（ryoglohulincmia［J］.Arthritis Rhcum，2013，65（9）：2430-2440.

［4］萬本愿，李勝遠，姜青龍.自身抗體檢測的臨床應用與質量控制［J］.實驗與檢驗醫(yī)學，2013，31（1）：52-55.

［5］張萍，李曉軍.自身抗體檢測在臨床診斷中的應用特點［J］.中國實驗診斷學，2014，26（6）：1036-1039.

［6］Gxrxzzino S，Calitri C，Vcrsace A，et al.Natural history of vertically acquired HCV info（lion and associated autoimmunc phenomena［J］.Eur J Pcdiatr，2014，173（8）：1025-1031.

［7］Marconcini ML，Fayad L，Shiozawa MB，et al.Autoantihody profile in individuals with chronic hepatitis C［J］.Rev Soc Bras Med Tr-op，2013，46（2）：147-153.

［8］Suare-Almazor ME，Gonzales-Lopez L，Gamez-Nava J I，et al.Utilization and predictive value of laboratory tests in panents reterred torheumatologists by primary care physiciams［J］. J Rheumatol，1998，25（10）：1980-1985.

［9］葉應嫵，王毓三，申子瑜，等.全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.3版.南京：東南大學出版社，2006.

Analysis of Results of Indirect Immunofluorescence in Detecting the Antinuclear Antibodies

LIU Qing-yin1，TU Bing2
1.Department of Clinical Laboratory，PLA 150th Central Hospital，Luoyang，Henan Province，471031 China；2.Luoyang Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau，Luoyang，Henan Province，471031 China

Objective To discuss the results of indirect immunofluorescence in detecting the antinuclear antibodies in patients with autoimmune diseases.Methods The antinuclear antibodies of serum samples of 50 cases of patients with autoimmune diseases were detected respectively by the IIFA and emulsion method.Results The difference in the sensitivity degree of ANA detected by IIFA method and emulsion method had statistical significance（76%vs 58%）（P＜0.01）.Conclusion The sensitivity degree of ANA detected by IIFA method is obviously higher than that detected by the emulsion method，which improves the positive detection rate in clinic，the application of IIFA method for ANA screening and the application of positive specimens for titer detection contribute to clinical diagnosis.

Antinuclear antibodies；Indirect immunofluorescence；Emulsion method

R446.61

A

1672-5654（2016）09（c）-0090-02

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.27.090

劉清銀（1979.9-），女，河南駐馬店人，本科，主管技師，主要從事免疫診斷學研究。

涂斌（1978.1-），男，江西宜春人，本科，主管技師，主要從事免疫診斷學研究，E-mail：438061016@qq.com。

（2016-06-26）