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    靳三針療法干預(yù)對T2DM大鼠模型胰島素抵抗的影響

    2016-11-11 09:52:09翁瑜君唐梁廣州市第一人民醫(yī)院南沙醫(yī)院511457廣州市豐澤東路105號何海明廣州市藥品檢驗(yàn)所510160
    廣西中醫(yī)藥 2016年5期
    關(guān)鍵詞:靳三針抵抗療法

    翁瑜君唐梁廣州市第一人民醫(yī)院南沙醫(yī)院511457廣州市豐澤東路105號何海明廣州市藥品檢驗(yàn)所510160

    靳三針療法干預(yù)對T2DM大鼠模型胰島素抵抗的影響

    翁瑜君唐梁廣州市第一人民醫(yī)院南沙醫(yī)院511457廣州市豐澤東路105號
    何海明廣州市藥品檢驗(yàn)所510160

    目的:通過觀察靳三針療法干預(yù)2型糖尿?。═2DM)大鼠模型,探討靳三針療法對T2DM大鼠IR的影響機(jī)制。方法:Wistar大鼠隨機(jī)分為靳三針療法組(A組)、模型對照組(B組)、健康對照組(C組)三組,觀察各組大鼠治療干預(yù)前后血FPG、2hPG、HbA1c、FINS、TNF-α、ADPN,HOMA-IR及HOMA-β等指標(biāo)變化。結(jié)果:A組的針灸干預(yù)對降低FPG、2hPG、HbA1c、TNF-α、HOMA-IR及改善FINS、ADPN、HOMA-β均有效(均P<0.05)。干預(yù)前A組、B組與C組比較,血清FPG、2hPG、HbA1c、TNF-α、HOMA-IR水平較高,而ADPN、HOMA-β水平較低(均P<0.05)。結(jié)論:實(shí)驗(yàn)證明糖尿病模型組大鼠出現(xiàn)胰島素抵抗;細(xì)胞因子TNF-α、ADPN與T2DM大鼠的胰島素抵抗密切相關(guān),胰島素抵抗程度與TNF-α水平呈正相關(guān),與ADPN水平呈負(fù)相關(guān);靳三針療法對改善T2DM大鼠模型IR具有較好的療效。

    糖尿??;靳三針;胰島素抵抗;腫瘤壞死因子;脂聯(lián)素

    2型糖尿病是一種常見的慢性代謝性疾病,致殘率及死亡率位居世界第三[1]。胰島素抵抗(IR)是2型糖尿病(T2DM)發(fā)病機(jī)制的主要環(huán)節(jié)之一,并貫穿于T2DM全過程。目前,強(qiáng)化生活方式干預(yù)對于預(yù)防和延緩T2DM進(jìn)展效果雖好,但在短期內(nèi)完全糾正生活習(xí)慣并且需要醫(yī)療保健專家長期指導(dǎo)使得大多數(shù)患者難以堅持;藥物治療的不足則表現(xiàn)在療效及副作用方面,所以尋求一種能夠針對T2DM病理機(jī)制、有效改善IR、保護(hù)胰島細(xì)胞且不增加低血糖風(fēng)險、簡便經(jīng)濟(jì)的治療方法是迫切需要解決的問題。本研究通過對T2DM大鼠模型的干預(yù),觀察靳三針療法對改善T2DM大鼠IR的療效,進(jìn)一步探討T2DM大鼠IR的病理機(jī)制,現(xiàn)報道如下。

    1 材料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)材料

    1.1.1動物雄性Wistar大鼠(南京君科生物工程有限公司,合格證號SCXK 2010007)60只,8周齡,體重150~210 g,在通風(fēng)、室溫20~22℃、相對濕度50%~60%的動物室內(nèi)喂養(yǎng),光照每天12 h。清潔級飼養(yǎng),自由攝水、攝食?;A(chǔ)飼料為普通飼料;高糖高脂肪飼料比例:豬油20%,蔗糖20%,蛋黃粉10%,膽酸鈉0.5%,普通飼料49.5%。

    1.1.2試劑和儀器主要試劑:①鏈脲霉素(STZ)(上??畦b生物科技有限公司),②血糖測定試紙(美國羅氏公司),③大鼠胰島素ELISA試劑盒(瑞典Mercodia公司),④大鼠TNF-αELISA試劑盒(日本IBL公司),⑤大鼠脂聯(lián)素ELISA試劑盒(上海常斤生物科技有限公司),⑥大鼠糖化血紅蛋白ELISA測定試劑盒(上海常斤生物科技有限公司)。主要儀器設(shè)備:①血糖試紙及快速血糖儀(美國雅培安妥超越型),②電子分析天平(上海卓精電子1204型),③全自動生化分析儀(奧林巴斯AU5811),④高速低溫離心機(jī)(德國哈默Z323K),⑤電子恒溫水浴鍋(力辰科技HH-2)。

    1.2.實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1動物模型構(gòu)建及分組雄性Wistar大鼠60只按隨機(jī)數(shù)字表法分成3組:靳三針療法組(A組),模型對照組(B組),健康對照組(C組)。3組大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,A組、B組給予高糖高脂肪飼料喂養(yǎng)3周,第3周末禁食12 h后行鏈脲霉素(STZ)腹腔內(nèi)注射,將STZ溶解于PH4.5枸櫞酸緩沖液中,按20 mg/kg體重腹腔內(nèi)注射,1次/天,連續(xù)3天,繼續(xù)高糖高脂肪飼料喂養(yǎng)4周。行口服糖耐量試驗(yàn)(OGTT試驗(yàn)):大鼠禁食12 h后,按2 g/kg的劑量給予50%葡萄糖溶液灌胃,采用血糖儀分別在0、30、60、90和120 min時采集鼠尾靜脈血進(jìn)行血糖測定,糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)參照日本大冢制藥株式會社德島研究所關(guān)于OLETF大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[2],OGTT測定0、30、60、90和120min的血糖,血糖峰值>16.7 mmol/L,且120min血糖>11.1mmol/L,診斷為糖尿病。健康對照組(C組)單純給予普通飼料喂養(yǎng)。造模和分組后,各組大鼠均在通風(fēng)、室溫20~22℃、相對濕度50%~60%的動物室內(nèi)喂養(yǎng),光照每天12 h。各組大鼠自由攝食和飲水,給予普通飼料喂養(yǎng)。

    1.2.2治療干預(yù)造模成功后,各組給予相應(yīng)的干預(yù)。A組:將T2DM大鼠捆綁于自制的固定器中,用0.25 mm×13mm毫針,取靳三針中脂三針穴組治療;足三里、三陰交捻轉(zhuǎn)補(bǔ)法,內(nèi)關(guān)捻轉(zhuǎn)瀉法。取穴方法參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[3]:足三里(后三里):大鼠膝關(guān)節(jié)后外側(cè),在腓骨小頭下約5 mm處,左右各一穴直刺7mm;三陰交:大鼠后肢內(nèi)踝尖上直上10 mm,左右側(cè)各一穴,直刺4~5mm;內(nèi)關(guān):前肢內(nèi)側(cè),腕關(guān)節(jié)上3 mm,尺橈骨間,左右側(cè)各一穴,直刺1 mm。療程:1周內(nèi)連續(xù)治療5天,共治療4周。

    B組及C組:用同樣方式每日將大鼠捆綁于自制的固定器中,捆綁時間同A組,以排除應(yīng)激因素引起的實(shí)驗(yàn)偏倚,其余不作處理。

    1.2.3觀察指標(biāo)及檢測方法①檢測各組大鼠前后空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2hPG),血清空腹胰島素(FINS)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、脂聯(lián)素(ADPN)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α),各組大鼠尾靜脈取血,采用血糖儀試紙法測定FPG及2hPG,另尾靜脈取血6 ml,注入非抗凝試管中,室溫靜置30min后,離心15 min(3 000轉(zhuǎn)/分),分離血清,取血清按酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測FINS、HbA1c、ADPN及TNF-α水平。②胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)及β細(xì)胞功能指數(shù)(HOMA-β)。HOMA,又稱HOMA穩(wěn)態(tài)模型,在1985年由英國牛津大學(xué)Turner的科研小組首先提出,目前已成為廣泛應(yīng)用于臨床的評價糖尿患者胰島素敏感性、胰島素抵抗水平與胰島β細(xì)胞功能的常用指標(biāo)。HOMA-IR=FPG(mmol/L)×FINS(m IU/L)/22.5(正常個體的HOMA-IR為1。隨著IR水平升高HOMA-IR將高于1);HOMA-β= 20×FINS(m IU/L)/(FPG mmol/L-3.5)(正常個體的HOMA-β為100%,糖尿患者群中,胰島β細(xì)胞功能降低則其數(shù)值降低,功能增強(qiáng)則其數(shù)值升高)。

    1.2.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,計數(shù)資料以百分比(%)表示,計量資料組內(nèi)比較采用配對設(shè)計資料的t檢驗(yàn),組間比較采用Levene方差齊性檢驗(yàn)及Bonferroni方差分析。取P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

    表1 三組干預(yù)前后各項觀察指標(biāo)比較(±s)

    表1 三組干預(yù)前后各項觀察指標(biāo)比較(±s)

    注:與同組治療前比較,①P<0.05;與B組治療后比較,②P<0.05;與C組治療前比較,③P<0.05

    觀察指標(biāo)A組(n=18)B組(n=16)C組(n=18)干預(yù)前干預(yù)后干預(yù)前干預(yù)后干預(yù)前干預(yù)后FPG(mmol/L)9.72±2.12③5.03±0.56①②11.01±2.70③10.17±2.29 5.20±0.70 4.96±0.16 2hPG(mmol/)L 16.07±2.62③6.87±0.61①②15.18±2.85③15.85±2.69 7.14±0.55 7.09±0.55 FINS(m IU/L)6.54±1.96③10.44±3.38①②6.94±2.30③7.68±1.97 10.65±2.39 9.21±2.81 HbA1c(%)10.89±2.80③4.94±0.93①②10.31±1.80③10.93±2.39 4.85±0.88 4.86±0.84 TNF-α(nmol/L)1.51±0.34③0.47±0.21①②1.44±0.29③1.46±0.38 0.54±0.20 0.49±0.18 ADPN(μg/m l)5.45±2.72③16.75±7.56①②4.97±2.53③6.11±3.05 16.97±8.48 15.96±8.05 HOMA-IR 2.83±1.09③2.35±0.84①②3.32±1.17③3.52±1.29 2.44±0.56 2.02±0.63 HOMA-β23.62±12.13③159.90±88.09①②22.31±17.42③25.60±10.73 159.43±95.57 126.40±67.56

    2 結(jié)果

    60只大鼠在造模及過程中共脫落8只,最終列入結(jié)果觀察的A組18只、B組16只、C組18只。三組干預(yù)前后各項觀察指標(biāo)比較見表1。

    3 討論

    胰島素抵抗是指胰島素作用的靶器官,主要指肝臟、肌肉、脂肪組織對胰島素生物學(xué)效應(yīng)的反應(yīng)性降低或喪失,胰島素維持正常血糖的能力下降,從而產(chǎn)生一系列病理和臨床表現(xiàn)。IR是T2DM的重要特征,被認(rèn)為是引發(fā)T2DM的始動因素,也是貫穿多種代謝異常和心血管疾病的主線[4]。而與IR密切相關(guān)的脂聯(lián)素是由分化成熟的脂肪細(xì)胞合成和分泌的一種內(nèi)源性生物活性多肽或蛋白質(zhì),具有改善IR、抗炎、抗動脈粥樣硬化等作用,是預(yù)測IR綜合征發(fā)生、發(fā)展的重要生物學(xué)標(biāo)志物。近年來發(fā)現(xiàn)TNF-α在IR發(fā)生的病理機(jī)制中起非常重要的作用,并且與血漿胰島素水平、葡萄糖代謝及脂質(zhì)代謝密切相關(guān)[5]。

    中醫(yī)認(rèn)為糖尿病屬于中醫(yī)學(xué)的“消渴病”范疇。病因包括稟賦虛弱、飲食失節(jié)、情志失調(diào)、勞欲過度及外感六淫;主要以陰虛為本、燥熱為標(biāo)為基本病機(jī);痰濕、瘀血為病理產(chǎn)物。易京紅等[6]通過臨床觀察,認(rèn)為痰、濕、熱、瘀即是消渴病的重要原因,又是日后發(fā)展變化的病理基礎(chǔ),可加重病情。臨床研究表明,T2DM合并IR患者發(fā)病時多見身體肥胖,多伴有高血壓、高血脂癥、高粘血癥,臨床表現(xiàn)為乏力、痰多、脘痞胸悶、口中粘膩、身體困重、舌苔厚膩等癥,其特點(diǎn)與中醫(yī)學(xué)的“脾虛痰濕證”相符。

    長期以來,中醫(yī)陰陽平衡理論及辨證論治法在代謝性疾病治療中運(yùn)用有其獨(dú)到之處。而針灸作為中醫(yī)特色療法,以其簡便廉驗(yàn)的優(yōu)勢而得到認(rèn)可。靳三針是靳瑞教授經(jīng)過近20年臨床總結(jié)及科學(xué)研究創(chuàng)立的具有嶺南特色的針灸療法,其特色主要體現(xiàn)在“三穴為主,辨證配穴”的處方原則。根據(jù)實(shí)驗(yàn)大鼠模型的痰瘀阻遏型的辨證特點(diǎn),以健脾化痰祛瘀為法,選取靳三針療法中脂三針穴組干預(yù),其中內(nèi)關(guān)為手厥陰心包經(jīng)的絡(luò)穴,八脈交會穴之一,通于陰維脈,并與之合于心、胸、胃,有寬胸理氣和胃的作用,且心主血脈,有疏通經(jīng)脈、行氣活血之功;足三里為足陽明胃經(jīng)之下合穴,“合治內(nèi)腑”,足陽明胃經(jīng)為多氣多血之經(jīng),善治氣血、血脈方面的疾病,又脾胃二經(jīng)相為表里,故足三里有和胃健脾、去濕化痰之效。二穴合用可達(dá)理氣活血、化痰除濕的作用。三陰交為足三陰經(jīng)之交會穴,三臟氣調(diào),則氣機(jī)調(diào)達(dá),津液運(yùn)化正常,血行通暢,痰瘀無以內(nèi)存。

    本研究采用高糖高脂肪飼料喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量STZ腹腔注射的方法復(fù)制胰島素抵抗大鼠模型,結(jié)果顯示,該模型基本符合臨床特征,即高血糖、高胰島素血癥和糖耐量減低。本實(shí)驗(yàn)同時以穩(wěn)態(tài)模型(HOMA)公式計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)和β細(xì)胞功能指數(shù)評價胰島素抵抗的造模效果。結(jié)果表明,糖尿病模型大鼠出現(xiàn)胰島素抵抗;細(xì)胞因子TNF-α、ADPN與T2DM大鼠的胰島素抵抗密切相關(guān)。胰島素抵抗程度與TNF-α水平呈正相關(guān),與ADPN水平呈負(fù)相關(guān);靳三針療法對改善T2DM大鼠模型IR具有較好的療效。

    [1]中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會.糖尿病防治中的三級預(yù)防[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:6.

    [2]Kawano K,Hirashima T,Mori S,et al. Spontaneous long-term hyperglycemic ratwith diabetic complications Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty(OLETF)strain[J].Diabetes,1992(11):1422-1428.

    [3]李忠仁.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2007:1.

    [4]Zimmet P,Alberti K G,Shaw J.Global and societal imp lications of the diabetes epidemic[J].Nature,2001,6865(414):782-787.

    [5]劉洪鳳.黃芪多糖對2-DM大鼠胰島素抵抗的早期干預(yù)作用[D].佳木斯:佳木斯大學(xué),2007.

    [6]易京紅,陳靜.糖尿病前期的干預(yù)[J].中外醫(yī)療,2009,28(5):153.

    (2016-08-30收稿/編輯熊瑜)

    R246.1

    A

    1003-0719(2016)05-0069-03

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