糖脈康干預(yù)Ⅱ型糖尿病氣陰兩虛夾瘀證大鼠對腎臟功能的影響

陳　群　蘇傲蕾　馬加貴

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糖脈康干預(yù)Ⅱ型糖尿病氣陰兩虛夾瘀證大鼠對腎臟功能的影響

陳群1蘇傲蕾2馬加貴3△

目的使用中藥糖脈康顆粒對Ⅱ型糖尿病氣陰兩虛夾瘀證大鼠進行干預(yù)，研究糖脈康顆粒對模型大鼠腎臟功能的影響。方法將30只健康雄性SD大鼠隨機分成兩組，空白組10只，造模組20只，模型組通過高脂喂養(yǎng)配合低劑量鏈脲佐菌素復(fù)制Ⅱ型糖尿病大鼠模型，隨后利用證候演變規(guī)律和低溫誘導(dǎo)的方法，篩選出具有氣陰兩虛夾瘀證特征的Ⅱ型糖尿病大鼠18只，將其中9只模型大鼠使用中藥糖脈康進行干預(yù)，檢測大鼠血清肌酐、尿素氮、尿蛋白等指標(biāo)，判斷糖脈康對大鼠腎臟功能的影響。結(jié)果糖脈康干預(yù)模型大鼠后，大鼠腎功能指標(biāo)肌酐、尿素氮、尿蛋白均有不同程度下降，且糖脈康組尿蛋白較模型組下降明顯，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。結(jié)論糖脈康顆粒對Ⅱ型糖尿病氣陰兩虛夾瘀證大鼠腎功能有改善，其中尿蛋白改善明顯。

Ⅱ型糖尿病；糖脈康；氣陰兩虛證；腎功能

Ⅱ型糖尿病又稱非胰島素依賴糖尿病(noninsulin-dependent diabetes mellitus，NIDDM)，約占糖尿病患者總?cè)藬?shù)的90%以上。文獻回顧發(fā)現(xiàn)氣陰兩虛證型處于Ⅱ型糖尿病中所有證型的首要位置[1～4]，同時血瘀證貫穿糖尿病整個病程在中醫(yī)界也已達(dá)成共識。因此在推進中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究進程中，構(gòu)建一種符合臨床實際的病證結(jié)合動物模型，對于中醫(yī)藥防治糖尿病具有十分重要的意義。本研究通過高脂喂養(yǎng)合并小劑量鏈脲佐菌素(STZ)的方法成功復(fù)制Ⅱ型糖尿病大鼠后，依據(jù)糖尿病大鼠證候演變規(guī)律[5, 6]，利用低溫調(diào)控手段，提前誘導(dǎo)出大鼠血瘀證候，篩選出具有氣陰兩虛夾瘀證的Ⅱ型糖尿病大鼠動物模型。使用臨床常用經(jīng)典方藥糖脈康顆粒，從氣陰兩虛夾瘀證角度對模型大鼠進行藥物干預(yù)。判斷中藥干預(yù)對于模型大鼠早期腎臟功能的影響，為中醫(yī)藥防治糖尿病微血管并發(fā)癥提供理論支持和實踐基礎(chǔ)。

1　材料與儀器

1.1實驗動物健康雄性SPF級SD大鼠30只，體質(zhì)量160～180g，由湖南史萊克實驗動物公司提供。高脂飼料由廣西中醫(yī)研究院代加工(豬油10%，白糖20%，蛋黃粉7%，奶粉3%，膽固醇1%，豬膽鹽0.25%)，普通飼料由上海史萊克實驗動物公司提供。大鼠由廣西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心飼養(yǎng)，室溫16℃～25℃，濕度50%～60%。

1.2試劑及藥物鏈脲佐菌素(Streptozotocin， STZ)(美國sigma公司,101003791) ；血清胰島素ELISA試劑盒(瑞典Mercodia公司,22218)；總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒(長春匯力生物制品有限公司，2013012，2013008，2013009，2013044)；糖脈康顆粒(四川升和藥業(yè)股份有限公司，130107)。

1.3主要儀器電子血糖分析儀，美國羅氏儀器公司；全自動生化儀；全波長酶標(biāo)儀；紫外分光光度計；精密恒溫水浴鍋等。

1.4方法

1.4.1動物分組及處理適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體重隨機分為空白組和造模組。其中空白組10只，造模組20只，空白組基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，造模組高脂飼料喂養(yǎng)，均連續(xù)6周。6周后，禁食、不禁水12 h。造模組參照35 mg/kg腹腔注射1% STZ溶液(冰浴配置，現(xiàn)配現(xiàn)用)；空白組腹腔注射同體積0.1 mol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(PH 4.2)。72 h后大鼠尾靜脈取血，測隨機血糖高于16.7 mmol/L即認(rèn)為糖尿病造模成功，如未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，隔日再參照30 mg/kg標(biāo)準(zhǔn)腹腔注射1% STZ溶液。隨后將飼養(yǎng)溫度調(diào)低到16℃，穩(wěn)定4周。飼養(yǎng)第11周后，參考《中醫(yī)診斷學(xué)》和自制氣陰兩虛夾瘀證Ⅱ型糖尿病積分表，剔除不符合條件的模型老鼠，共篩選得到18只符合氣陰兩虛夾瘀證的Ⅱ型糖尿病大鼠，將造模成功的大鼠隨機分成2組，其中模型組9只、糖脈康組9只。糖脈康組參照人體正常給藥5倍劑量灌胃給藥，空白組和模型組給予換算的同體積生理鹽水，連續(xù)給藥3周。

1.4.2組織取材所有動物飼養(yǎng)14周后，處死，腹主動脈取血，分離血清。

1.4.3指標(biāo)檢測血糖、血清胰島素濃度(FINS)、血清肌酐、尿素氮、尿蛋白(24h內(nèi)尿液中蛋白含量)、病理切片等。

1.4.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，數(shù)據(jù)采用方差分析和多重比較，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1血糖及血清胰島素比較藥物干預(yù)后，糖脈康組大鼠血糖與模型組比較有下降，但無顯著性差異；糖脈康組胰島素含量、胰島素抵抗指數(shù)低于模型組，均有顯著性差異(P<0.01)。見表1。

表1　藥物干預(yù)后各組大鼠血糖、胰島素含量　±s)

注： 與空白組比較1)P<0.01;與模型組比較2)P<0.01

2.2血脂四項比較喂養(yǎng)14 W后，模型組大鼠血脂四項指標(biāo)TC、TG、HDL-C、LDL-C均高于空白組，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。糖脈康組TC、HDL-C、LDL-C含量高于空白組，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。糖脈康組TC、HDL-C、LDL-C含量均低于模型組，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。見表2。

表2　中藥干預(yù)后各組大鼠血脂四項變化情況　±s)

注：與空白組比較1)P<0.01；與模型組比較2)P<0.01

2.3肌酐、尿素氮、尿蛋白比較藥物干預(yù)后模型組大鼠肌酐、尿素氮、尿蛋白與空白組比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。糖脈康組尿蛋白與模型組比較有下降，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)，肌酐、尿素氮無統(tǒng)計學(xué)差異。見表3。

表3　藥物干預(yù)后大鼠肌酐、尿素氮、尿蛋白含量變化情況　±s)

注：與空白組比較1)P<0.01；與模型組比較2)P<0.01

3　討論

“消渴”一詞首見于隋末唐初甄立言所著《古今錄驗方》，作為糖尿病的中醫(yī)病名為現(xiàn)代醫(yī)者熟知。近年研究認(rèn)為，消渴病所表現(xiàn)出“三多一少”癥狀與糖尿病極其相似，唐代孫思邈《備急千金要方·消渴第》載論6篇、方53首，以滋陰泄熱、益氣養(yǎng)陰法用之。本實驗在藥物選擇上使用糖脈康顆粒，其主要成分為黃芪、地黃、赤芍、丹參、葛根、桑葉、淫羊藿等，可以養(yǎng)陰清熱，活血化瘀，益氣固腎，臨床主要用于治療氣陰兩虛血瘀所致的Ⅱ型糖尿病癥及并發(fā)癥。

糖尿病腎病(DN)是糖尿病微血管并發(fā)癥之一，已成為終末期腎臟疾病(ESRD)的首位病因，成為糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥和主要死亡原因[7]，糖尿病慢性并發(fā)癥資料顯示，糖尿病腎病位居第二，僅次于糖尿病眼病[8, 9]。中醫(yī)證候?qū)W研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病腎病以氣虛、陽虛、陰虛為主要臨床表現(xiàn)，虛實雜證為主，后期又以陽虛證為主要表現(xiàn)，標(biāo)實證候的痰濕和血瘀貫穿整個疾病發(fā)展過程[10, 11]。而另外一些學(xué)者研究則認(rèn)為，DN發(fā)展的三期階段虛證都主要以氣陰兩虛為主，實證以血瘀為主[3]，氣陰兩虛夾瘀證在糖尿病腎病早、中期證型分布具有廣泛性[8, 12]。因此利用不同中藥對病證結(jié)合動物模型進行干預(yù)來判斷中藥對模型的影響，無論是從對病證的影響還是從藥物的作用機制都具有前瞻性的探索意義 。

臨床研究表明血清肌酐、尿素氮、尿蛋白可從一定程度上反應(yīng)腎小球濾過功能的損害，能早期的發(fā)現(xiàn)腎功能的損害[13]。實驗顯示糖脈康組肌酐、尿素氮有不同程度下降、尿蛋白下降明顯并具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。糖脈康對Ⅱ型糖尿病氣陰兩虛夾瘀證大鼠所導(dǎo)致的腎功能損傷有改善作用。實驗結(jié)果還顯示短期內(nèi)使用中藥并不能使大鼠血糖有明顯的下降。中醫(yī)理論指導(dǎo)下，使用中藥對糖尿病大鼠模型的胰島素、胰島抵抗指數(shù)及腎臟功能有改善作用，從側(cè)面反應(yīng)了模型的可靠性及在中醫(yī)理論指導(dǎo)下使用中藥的合理性。

當(dāng)然實驗本身還存在的一些不足和問題，如給藥時間持續(xù)的長短，腎臟指標(biāo)是否會繼續(xù)改變，模型的穩(wěn)定時間和給藥時間之間的平衡等，這些都需要我們?nèi)ミM一步克服和解決，僅以此為契機對中醫(yī)病證結(jié)合動物模型的研究進行嘗試和探討。

[1]沈秀輝.62例2型糖尿病患者的中醫(yī)辨證分型及相關(guān)分析[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2011，9(4)：166-168.

[2]徐成興，葉偉成，胡蘊剛.120例2型糖尿病患者的中醫(yī)辨證分型及相關(guān)分析[J].上海中醫(yī)藥雜志，2007，41(6)： 34-36.

[3]王亞林，嚴(yán)惠芳，張雪然.351例糖尿病腎病中醫(yī)臨床證型調(diào)查分析[A].福州：中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會診斷專業(yè)委員會會，2009.

[4]譚倩.1565例2型糖尿病患者中醫(yī)病證分布規(guī)律研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)， 2010.

[5]吳晏，韓靜，黃黎明，等.2型糖尿病病證結(jié)合大鼠模型的證候演變與實驗室指標(biāo)變化的相關(guān)性[J].中華中醫(yī)藥雜志，2013，28(9)：2726-2729.

[6]唐年亞，姚斌.實驗性2型糖尿病大鼠病證結(jié)合模型的建立[J]. 醫(yī)學(xué)理論與實踐，2012，25(13)：1539-1540.

[7]Ritz E， Keller C K， Bergis K H，etal. Renal involvement in type II diabetes[J]. Current opinion in nephrology and hypertension，1994，3(2)：137-144.

[8]曲曉璐，陳大舜，姚欣艷，等.1718例2型糖尿病患者糖尿病腎病發(fā)病率及其中醫(yī)證型分布特點[J].中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2003，4(12)：713-715.

[9]劉寶恩.糖尿病陰陽兩虛證、氣陰兩虛證與其慢性并發(fā)癥的關(guān)系[J].河南中醫(yī)，2014，34(6)：1129-1130.

[10]牟新，周旦陽，趙進喜. 265例糖尿病腎病腎功能不全患者中醫(yī)證候?qū)W研究[J].新中醫(yī)，2007，39(5)：84-85，88.

[11]曲波.中醫(yī)辨治糖尿病腎病[J].中醫(yī)學(xué)報，2012，27(8)：1002-1003.

[12]彭國平，胡錫元，張鵬，等. 糖尿病腎病生化指標(biāo)與中醫(yī)辨證分型的相關(guān)性研究[J].遼寧中醫(yī)雜志，2013，40(3)： 406-408.

[13]王福黨，張宇，張弢.四項生化指標(biāo)在2型糖尿病腎病早期診斷中的應(yīng)用價值[J].中國誤診學(xué)雜志，2008，8(18)： 4352-4353.

Effect of Tangmaikang on the Kidney Function in TypeⅡDiabetic Rats of the Deficiency of both Qi and Yin with Blood Stasis Syndrome

CHEN Qun1SU Aolei2MA Jiagui1△

(1. Department of Pharmacy, Beijing Aviation General Hospital, Beijing 100012, China；2. Basic Medical School, Guangxi Medical College, Guangxi, Nanning 530021, China；3. ICU, Beijing Aviation General Hospital, Beijing 100012, China)

ObjectiveTo investigate the changes in the characteristics of the renal function in type Ⅱ diabetic rats with the deficiency of both qi and yin with blood stasis syndrome based on taking the Tangmaikang. Methods30 male SD rats were randomly divided into two blank control group of 10 rats and model group of 20 rats. The rates in the model group were fed with high fat diet and intraperitoneal injected of low-dose streptozotocin. 18 rats with type Ⅱ diabetic rats model with the deficiency of both qi and yin and with blood stasis syndrome were selected, and Tangmaikang was used to treat the 9 rats to find out whether the syndrome has improved, in order to determine the changes in the characteristics (including creatinine, urea nitrogen, urinary protein) of the renal function in type Ⅱ diabetic rats with the deficiency of both qi and yin with blood stasis syndrome. ResultsAfter drug intervention, renal function indexes including creatinine, urea nitrogen and urinary protein had been improved in model group. There was statistically difference between the two groups on urinary protein (P<0.01). ConclusionTangmaikang can improve the renal function in type Ⅱ diabetic rats with the deficiency of both qi and yin with blood stasis syndrome, and urinary protein was significantly improved

Type Ⅱ diabetes; Tangmaikang; Deficiency of both qi and yin; Renal function

1.航空總醫(yī)院藥學(xué)部(北京100012)；2.廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)部實訓(xùn)中心(南寧530023)；3.航空總醫(yī)院重癥監(jiān)護室(ICU)(北京100012)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.20.020

1003-8914(2016)-20-2951-03

?艷婷

2016-07-05)