臨床藥師參與拉莫三嗪及奧卡西平代謝物血藥濃度監(jiān)測及個體化給藥分析

趙興輝，陳俊珺，沈艷琳，黃可航，馬灼堂，黃曉會（.徐州市兒童醫(yī)院，江蘇 徐州 006；.上海交通大學(xué)附屬新華

醫(yī)院，上海 200092）

臨床藥師參與拉莫三嗪及奧卡西平代謝物血藥濃度監(jiān)測及個體化給藥分析

趙興輝1，陳俊珺2，沈艷琳2，黃可航2，馬灼堂2，黃曉會2（1.徐州市兒童醫(yī)院，江蘇 徐州 221006；2.上海交通大學(xué)附屬新華

醫(yī)院，上海 200092）

目的：建立快速有效的同時測定拉莫三嗪及奧卡西平血藥濃度方法，通過開展拉莫三嗪與奧卡西平血藥濃度監(jiān)測，以達(dá)到患者個體化給藥。方法：采用HPLC法，色譜柱為Hypersil BDS C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）分離；流動相：甲醇-水（45 ： 55）；流速：1 mL·min-1；檢測波長：225 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；二極管陣列檢測，外標(biāo)法定量。結(jié)果：拉莫三嗪低、中、高3個濃度（0.80、8.00、40.00 mg·L-1）方法回收率分別為95.7%、100.9%、99.6%，10-羥基卡馬西平低、中、高3個濃度（1.12、14.00、56.00 mg·L-1）方法回收率分別為97.1%、101.5%、100.3%，日內(nèi)精密度RSD小于3%，日間精密度RSD小于5%。結(jié)論：HPLC法操作簡單，精密度高，分離度好，適用于拉莫三嗪與奧卡西平的血藥濃度監(jiān)測，可為患者個體化給藥方案作出指導(dǎo)。

奧卡西平；拉莫三嗪；個體化給藥；治療藥物監(jiān)測；高效液相色譜法

拉莫三嗪、奧卡西平是近幾年臨床上常用的抗癲癇新藥。奧卡西平通過胃腸道快速吸收并迅速降解為有藥理活性的代謝產(chǎn)物10-羥基卡馬西平而發(fā)揮作用。有多項研究表明，奧卡西平原型僅占血清中總放射活性的2%，因此臨床上對奧卡西平治療濃度值的評價是通過對10-羥基卡馬西平濃度的檢測來體現(xiàn)的。拉莫三嗪作為單藥治療或輔助治療多種類型癲癇，特別是對于嬰幼兒、青少年和老年患者，療效顯著，不良反應(yīng)輕微［1］，耐受性優(yōu)越，對兒童認(rèn)知功能、睡眠、行為等方面沒有顯著的影響。因此，歐洲專家共識［2］、中國癲癇診療指南［3］均推薦其為治療頑固性部分性癲癇發(fā)作、成人或兒童原發(fā)性全身性癲癇、兒童和青少年失神發(fā)作、青少年肌陣攣性癲癇等首選藥物。兩種藥物的藥動學(xué)個體間差異大、治療窗窄，而藥動學(xué)特征與抗癲癇效果具有相關(guān)性。已有報道［4-6］通過血藥濃度監(jiān)測制定個體化給藥方案的案例，本研究通過臨床藥師參與監(jiān)測拉莫三嗪與奧卡西平在體內(nèi)的藥動學(xué)特征，已期提高藥物療效，降低藥品不良反應(yīng)，達(dá)到合理的個體化用藥目的。

1　材料與方法

1.1儀器、藥品及試劑

1260高效液相色譜儀，包括G1367E自動進(jìn)樣器、G1311B四元泵、G4212B二極管陣列檢測器（美國Agilent公司）；Milli-Q純水器（Millipore公司）；VORTEX KB3型旋渦混懸器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；5424R高速冷凍離心機(jī)（Eppendorf公司）。拉莫三嗪對照品（Sigma公司，純度≥98%，批號025K1484）；10-羥基卡馬西平對照品（中國藥品生物制品檢定所，純度≥98%，批號100143-199708）；甲醇、乙腈（色譜純，美國Fisher公司）。

1.2溶液配制

精密稱取拉莫三嗪對照品和10-羥基卡馬西平對照品各20 mg，用水定容至5 mL的容量瓶中，配成質(zhì)量濃度為4000 mg·L-1的對照品工作液。

1.3實驗方法

1.3.1色譜條件 分析柱：Hypersil BDS C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；檢測波長：225 nm；流動相：甲醇-水（45∶55）；流速：1 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：25 ℃。

1.3.2樣品預(yù)處理 取血清180 μL于1.5 mL離心管中，加入甲醇420 μL，渦旋混勻1 min，13 000 r·min-1離心10 min，取上清液10 μL進(jìn)樣。

2　結(jié)果

2.1色譜圖

在“1.3.1”項下色譜條件，拉莫三嗪與10-羥基卡馬西平分離完全，血中內(nèi)源性物質(zhì)對測定結(jié)果無干擾，見圖1。

2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

取血清180 μL，添加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，配制成終濃度為拉莫三嗪0.80、1.60、4.00、8.00、20.00、40.00 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，10-羥基卡馬西平1.12、2.80、5.60、14.00、28.00、56.00 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣。結(jié)果顯示：拉莫三嗪在0.80 ～40.00 μg·mL-1，10-羥基卡馬西平在1.12 ～ 56.00 μg·mL-1呈良好的線性關(guān)系。拉莫三嗪的線性方程為：Y = 13.466 X - 4.477 8，r = 0.999 2；10-羥基卡馬西平的線性方程為：Y = 6.65 X - 0.565 5，r = 0.999 7。

圖1　HPLC色譜圖A - 樣品血清， B -空白血清， C - 標(biāo)準(zhǔn)品；1 - 拉莫三嗪，2 - 10-羥基卡馬西平Fig 1　HPLC chromatogramsA - samples in serum， B - blank serum， C - standard substance； 1 -lamotrigine， 2 - 10-hydroxy carbamazepine

2.3準(zhǔn)確度與精密度

分別測定拉莫三嗪0.80、8.00、40.00 μg·mL-1；10-羥基卡馬西平1.12、14.00、56.00 μg·mL-1；各添加3個濃度水平的血清標(biāo)本，5個平行樣本按照“1.3”項下方法處理進(jìn)樣，計算平均加樣回收率及日內(nèi)精密度（RSD）；每個樣本重復(fù)進(jìn)6針，計算RSD；樣本連續(xù)測定5 d，計算日間精密度。結(jié)果顯示，本方法測定血清拉莫三嗪與10-羥基卡馬西平的準(zhǔn)確度均符合血藥濃度檢測條件；日內(nèi)精密度均＜ 3%，日間精密度＜ 5%，詳見表1。

表1　血清中拉莫三嗪與10-羥基卡馬西平的準(zhǔn)確度、精密度. n = 5Tab 1　The recoveries and precision of lamotrigine and 10-hydroxy carbamazepine. n = 5

2.4穩(wěn)定性實驗

取低、中、高濃度各3個平行樣品，處理后將上清液在室溫分別放置4、24、48 h后重復(fù)測定，計算變異系數(shù)（CV%）；將配置好的血清質(zhì)控標(biāo)本置于- 4 ℃冰箱分裝保存，每隔1周復(fù)測1次，3個水平分別測3組平行樣品，計算CV%。結(jié)果顯示，拉莫三嗪和10-羥基卡馬西平的血清標(biāo)本在上述情況下穩(wěn)定性良好，測定值CV%均＜ 10%。

2.5臨床應(yīng)用

采用HPLC法為本院數(shù)例服用拉莫三嗪和奧卡西平的癲癇患兒進(jìn)行血藥濃度監(jiān)測，共計150例。拉莫三嗪的治療濃度范圍為3 ～ 15 μg·mL-1，奧卡西平單羥基代謝產(chǎn)物治療濃度范圍為12 ～ 36 μg·mL-1。其中服用拉莫三嗪患者57例，血藥濃度在治療范圍內(nèi)的為49例；低于治療范圍的5例，超出治療范圍的3例（未出現(xiàn)中毒反應(yīng)）。服用奧卡西平患者91例，其中血藥濃度在治療范圍內(nèi)的85例，超出治療范圍能夠控制病情的6例（未出現(xiàn)中毒反應(yīng)）。兩藥聯(lián)用的患者有2例。根據(jù)檢測結(jié)果，詢問患兒病史，記錄服用當(dāng)前劑量后是否有癲癇發(fā)作，結(jié)合患兒實際情況，對28例服用拉莫三嗪，71例服用奧卡西平的患者用藥劑量做了適當(dāng)調(diào)整。血藥濃度監(jiān)測結(jié)果表明抗癲癇藥物在不同患者中具有較大的個體差異，對其進(jìn)行血藥濃度監(jiān)測非常重要。

3　討論

本研究過程中，為了兼顧拉莫三嗪與10-羥基卡馬西平的檢測靈敏度，選擇225 nm作為檢測波長，避免了內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。有文獻(xiàn)報道，血漿前處理采用固相萃取技術(shù)，費(fèi)用高且操作繁瑣。本方法采用有機(jī)溶劑蛋白沉淀，操作簡單，耗時短，成本低，準(zhǔn)確度高。采用甲醇和水作為流動相，可延長儀器及色譜柱使用壽命，降低成本。

本研究建立了HPLC法快速同時檢測拉莫三嗪與奧卡西平有效代謝物血藥濃度方法，使用該法監(jiān)測本院門診及住院癲癇患兒的血藥濃度，并根據(jù)以上原則對其進(jìn)行藥物調(diào)整，使患兒病情得以控制。在藥物治療過程中，影響因素眾多，由于存在個體差異，臨床上有時難以依據(jù)劑量預(yù)測機(jī)體反應(yīng)。因此，認(rèn)識藥物體內(nèi)過程的規(guī)律性，掌握治療藥物監(jiān)測的原理和適應(yīng)范圍，確定個體化用藥的最適方案，才能真正確保臨床用藥的安全性和有效性。

［1］ 梅昕，童波，郭玲玲，等.拉莫三嗪與丙戊酸鈉先后致皮疹、紅細(xì)胞巨幼化及高敏綜合征［J］.中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測，2014，11（2）：125-127.

［2］ Wheless JW， Clarke DF， Arzimanoglou A， et al. Treatment of pediatric epilepsy： European expert opinion， 2007［J］. Epileptic Disord， 2007， 9（4）： 353-412.

［3］ 李世綽，吳立文.癲癇病分冊［M］/中華醫(yī)學(xué)會.臨床診療指南.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：100-168.

［4］ 黃春燕，郭代紅，朱曼.154例患者664次萬古霉素血藥濃度監(jiān)測分析［J］.中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測，2014，11（2）：68-71.

［5］ 溫愛萍，李哲，李任，等.HPLC法測定人血漿中游離亞胺培南濃度［J］.中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測，2015，12（3）：151-154.

［6］ 黃曉會，劉艷，張健.HPLC法測定人血清中萬古霉素及去甲萬古霉素濃度及臨床應(yīng)用［J］.中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測，2014，11（2）：92-94.

Study on the role of clinical pharmacists for determination of the concentration of lamotrigine and oxcarbazepine metabolite in serum and individual administration

ZHAO Xing-hui1， CHEN Jun-jun2， SHEN Yan-lin2， HUANG Ke-hang2， MA Zhuo-tang2，HUANG Xiao-hui2
（1. Department of Pharmacy， Xuzhou Children's Hospital， Xuzhou221006， China； 2. Department of Pharmacy， Xinhua Hospital， Shanghai Jiao Tong University School of Medicine， Shanghai200092， China）

Objective： To establish the high performance liquid chromatography （HPLC） method for simultaneous determination the concentration of lamotrigine and oxcarbazepine metabolite in serum， in order to provide individualized drug administration by monitoring drug concentration. Methods： Lamotrigine and oxcarbazepine metabolite were used as internal standard for each other. The chromatographic column was Hypersil BDS C18column （250 mm × 4.6 mm， 5 μm）. The mobile phase was consisted of methanol-water （45 ： 55）. The flow rate was 1 mL·min-1. The detecting wavelength was 225 nm using diode array detector. The column temperature was 25 ℃. The injection volume was 10 μL. Results： As for lamotrigine， the average method recovery rates of three concentrations （0.80， 8.00， 40.00 mg·L-1） were 95.7%， 100.9% and 99.6%， respectively. As for oxcarbazepine metabolite， the average method recovery rates of three concentrations （1.12， 14.00， 56.00 mg·L-1） were 97.1%， 101.5% and 100.3%，respectively. The intra-day relative standard deviation （RSD） was less than 3%， and inter-day RSD was less than 5%. Conclusion：The HPLC method was proved to be simple and precise with a good resolution， which was suitable for the therapeutic drug monitoring （TDM） and pharmacokinetic study of lamotrigine and oxcarbazepine metabolite.

Oxcarbazepine； Lamotrigine； Individual administration； Therapeutic drug monitoring （TDM）； High performance liquid chromatography （HPLC）

R917

A

1672 - 8157（2016）05 - 0274 - 03

上海市高校青年教師培養(yǎng)資助基金項目（ZZjdyx13091）

黃曉會，女，藥師，主要從事臨床藥理學(xué)研究。E-mail：huangdi456@126.com

趙興輝，男，主管藥師，主要從事臨床藥學(xué)工作。E-mail：xuexue831005@sina.com

（2016-03-14

2016-06-10）