遼東楤木葉中齊墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯的分離與鑒定*

鄒淑君，李　靖，許樹軍

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) a.藥學(xué)院；b.實驗中心，黑龍江 哈爾濱 150040）

分析測試

遼東楤木葉中齊墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯
的分離與鑒定*

鄒淑君a，李靖a，許樹軍b*

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) a.藥學(xué)院；b.實驗中心，黑龍江 哈爾濱 150040）

經(jīng)過乙醇溶液提取、正丁醇萃取、色譜法分離，從遼東楤木（Aralia elata）的葉中分離并鑒定了1個三萜皂苷化合物。利用化學(xué)顯色法、HPLC譜、核磁共振譜和質(zhì)譜方法鑒定，確定該化合物為齊墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯，是第一次從成熟的遼東楤木葉中分離得到。

遼東楤木葉；三萜皂苷；分離；結(jié)構(gòu)

遼東楤木（Aralia elata）是五加科木屬植物，春季初發(fā)的嫩芽作為優(yōu)良的綠色食品山野菜可供食用［1］，成熟的遼東楤木不同部位在臨床上均有應(yīng)用［2］，因此，遼東楤木屬藥食兩用珍品，該植物在我國東北地區(qū)分布廣泛。多年來，俄羅斯、日本、韓國和我國學(xué)者們在不斷的實驗過程中發(fā)現(xiàn)遼東楤木富含三萜皂苷類成分，且證明從遼東楤木提取出的三萜皂苷類物質(zhì)具有降血糖、抗炎、抗心血管疾病、抗腫瘤及保肝作用等［3-5］。由于早期人們不斷地采伐遼東楤木的根及根皮入藥，導(dǎo)致該天然資源越來越少，而葉資源是可再生的，因此，近年來學(xué)者們開始逐漸對遼東楤木葉資源進行開發(fā)研究，確定葉中的藥效物質(zhì)也是利用該植物資源的重要部分。并且證明了葉的皂苷提取物口服毒性較?。?］。目前，從遼東楤木葉中分離出的化合物有皂苷類物質(zhì)、多糖類物質(zhì)、脂肪類化合物、黃酮類物質(zhì)等。本研究從遼東楤木成熟葉中提取分離出一系列三萜皂苷類成分，目前，經(jīng)化學(xué)法、高效液相色譜法、核磁共振法及質(zhì)譜法鑒定出其中一個相對簡單的化合物的結(jié)構(gòu)。

1　實驗部分

1.1儀器和材料

LC-2010型高效液相色譜儀（日本島津公司）；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科貿(mào)有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申勝生物技術(shù)有限公司）；電子分析天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；AutoSpec質(zhì)譜儀（英國MicroMass公司）；ARX-300型核磁共振光譜儀（德國Bruker公司）；高效薄層板Kieselgel60 F254及反相色譜用RP18薄層板（青島海洋化工廠）；柱色譜用硅膠填料（200～300目，青島海洋化工廠）；柱色譜用ODS填料（120A，德國默克公司）；AB-8型大孔樹脂（河北華眾化工有限公司）。

遼東楤木葉采自黑龍江省尚志市帽兒山下，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥用植物教研室全體教師鑒定；水為二次蒸餾水，其他所用試劑為國產(chǎn)分析純。

1.2實驗方法

陰涼處干燥的遼東楤木葉粉碎（4kg），用70%乙醇加熱回流提取3次，每次2h。合并提取液，減壓回收至無乙醇味后過大孔樹脂，然后依次用石油醚、氯仿、水飽和的正丁醇萃取。收集正丁醇萃取液并低溫真空干燥得淡黃色粉末總皂苷120g。總皂苷經(jīng)高效薄層板GF254及反相色譜RP18薄層板確定硅膠柱色譜條件，氯仿-甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫，洗脫液經(jīng)薄層板及高效液相色譜檢查后相近者合并，得到6個部分。將第2個部分再經(jīng)硅膠分配柱色譜（CHCl3∶MeOH∶H2O=8∶1∶0.1）得到A、B、C、D 4個部分。將C部分（約6.1g）經(jīng)硅膠分配柱色譜，流動相分別經(jīng)歷（CHCl3∶MeOH∶H2O=10∶1∶0.1）及（CHCl3∶MeOH∶H2O=5∶1.2∶0.1）得到a、b、c、d 4個部分。對c部分進行ODS反相柱色譜（CH3OH與H2O梯度洗脫）分離得到多個單體化合物。

化合物鑒定方法：經(jīng)Molish及Liebermann-Burchard顯色反應(yīng)；水解產(chǎn)物經(jīng)HPLC色譜檢測，條件為：DiamonsilC18（2）（250×4.6mm，5μm）柱，流動相為乙腈-水，梯度洗脫80min，流速1.0mL·min-1，柱溫30℃；Alltech ELSD 2000ES型蒸發(fā)光散射檢測器，ELSD參數(shù)：漂移管溫度110℃，載氣（N2）流速3.2mL·min-1；核磁共振譜：以TMS為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，C5D5N為溶劑，1H-NMR譜300 MHz，13C-NMR譜75 MHz。

2　實驗結(jié)果

上述分離的系列化合物正在進行鑒定與分析，目前確定其中一個最簡單的化合物X的鑒定結(jié)果如下：

化合物為白色無定形粉末狀物質(zhì)，Molish反應(yīng)呈陽性，Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽性。負(fù)性快原子轟擊質(zhì)譜測定其分子量為618。酸水解產(chǎn)物經(jīng)過高效液相色譜與齊墩果酸和標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖對比，檢出葡萄糖、齊墩果酸和化合物X本身。堿水解后微酸化產(chǎn)物也檢測到葡萄糖和齊墩果酸，說明葡萄糖與齊墩果酸可能以酯鍵的形式結(jié)合?；衔锏?HNMR譜在δ5.30給出歸屬于1個葡萄糖的端基質(zhì)子信號，7個特征的甲基質(zhì)子信號：0.91（3H，s，23-CH3）、0.93（3H，s，25-CH3）、0.99（3H，s，24-CH3）、1.02（ 3H，s，29-CH3）、1.09（3H，s，26-CH3）、1.24（3H，s，30-CH3）、1.77（3H，s，27-CH3）；1個烯氫質(zhì)子信號δ5.61（1H，br.s，H-12）。13C-NMR譜在δ95.7處葉出現(xiàn)1個糖的端基碳信號，烯碳信號122.8，144. 1及羰基碳信號176.3，表明苷元為齊墩果酸型。另外的13C-NMR譜信號為：39.1（C-1）、27.9（C-2）、78.1（C-3）、39.4（C-4）、55.8（C-5）、18.6（C-6）、33.4（C-7）、39.9（C-8）、48.2（C-9）、37.2（C-10）、23.7（C-11）、122.7（C-12）、144.3（C-13）、42.1（C-14）、28.3（C-15）、23.6（C-16）、46.9（C-17）、41.7（C-18）、46.4（C-19）、30.9（C-20）、34.1（C-21）、32.7（C-22）、28.4（C-23）、17.0（C-24）、15.7（C-25）、17.4（C-26）、26.2（C-27）、176.3（C-28）、33.3（C-29）、23.6（C-30），為苷元13C-NMR譜的數(shù)據(jù)。及95.7（C-1'）、74.4（C-2'）、79.1（C-3'）、71.3（C-4'）、79.2（C-5'）、62.2（C-6'），為葡萄糖部分13C-NMR譜的數(shù)據(jù)。根據(jù)以上數(shù)據(jù)并結(jié)合文獻［7］推測化合物X的結(jié)構(gòu)如圖1。命名為齊墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯（Oleanolic acid-28-O--β-D-glucopyranosylester）。

圖1　齊墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯的結(jié)構(gòu)式Fig.1　Structural skeleton of Oleanolic acid-28-O--β-D-glucopyranosyl ester

3　結(jié)論

從遼東楤木葉中首次分離出化合物齊墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯。葉中分離的許多成分往往也存在于嫩芽、根或莖中。遼東楤木全身都是寶，其葉每年可以再生，所以充分利用葉資源可以保護該資源的可持續(xù)利用。因此，葉中的成分研究已成為該植物研究的熱點。目前，從遼東楤木全株分離的三萜皂苷成分已經(jīng)有140多種。隨著葉中新化合物的不斷發(fā)現(xiàn)，可以挖掘葉的更多的藥用價值，并且可為從不同角度利用根、莖、葉提供參考。

［1］ 王忠壯，胡晉紅，于占洋，等.楤木屬植物的生物學(xué)研究及應(yīng)用［M］.上海：第二軍醫(yī)大學(xué)出版社，2001.4-7.

［2］ 南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2006.885-886.

［3］ 張家鑫，田瑜，孫桂波，等.龍牙楤木皂苷類成分及藥理活性研究進展［J］.中草藥，2013，44（6）：770-779.

［4］ 張秀萍，孫達辰，肖洪彬.遼東楤木葉總皂苷抗腫瘤作用研究進展［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2015，21（11）：232-234.

［5］ 王麗巖，肖洪彬，王鳴慧.遼東楤木葉總皂苷抗急性肝損傷的實驗研究［J］.中醫(yī)藥信息，2009，26（2）：29-30.

［6］Fengjin Li，Xiaoli He，Wenying Niu，et al.Sub-chronic safety evaluation of the ethanol extract of Aralia elata leaves in Beagle dogs［J］.Regulatory Toxicology and Pharmacology，2016，（79）：1-11.

［7］ 匡海學(xué).中藥化學(xué)［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2003.250-252.

Isolation and identification of oleanolic acid-28-O-β-D-glucopyranosyl ester in leaves of Aralias elate*

ZOU Shu-juna，LI Jinga，XU Shu-junb*
（a.College of Pharmacy；b.Experiment Center，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China）

After extracted by ethanol solution and butanol，chromatographic method were used to extract and separate the saponin.A saponins was isolated from leaves of Aralia elata.Chemical coloration method，HPLC，NMR and MS were used to analyze the purity and the determine structure.This compound was identified as Oleanolic acid-28-O-β-D-glucopyranosyl ester.It was separated from leaves of Aralia elata firstly.

leaves of Aralia elata；triterpenoid saponin；separation；structure

R284.1

A

2016-09-12

中國博士后科學(xué)基金面上項目（2014M551289）

鄒淑君（1974-），女，副教授，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)在站博士后工作人員，研究方向：中醫(yī)藥藥物分析。

許樹軍，男，高級實驗師，研究方向：中藥藥劑及藥物分析。