鹽度脅迫對(duì)不同發(fā)育時(shí)期菲律賓蛤仔生長(zhǎng)和存活的影響

范超，溫子川，霍忠明，楊鳳，閆喜武

（大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，遼寧省貝類良種繁育工程技術(shù)研究中心，遼寧大連116023）

鹽度脅迫對(duì)不同發(fā)育時(shí)期菲律賓蛤仔生長(zhǎng)和存活的影響

范超，溫子川，霍忠明，楊鳳，閆喜武

（大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，遼寧省貝類良種繁育工程技術(shù)研究中心，遼寧大連116023）

為研究鹽度對(duì)不同發(fā)育時(shí)期菲律賓蛤仔Ruditapes philippinarum（以下稱蛤仔）生長(zhǎng)和存活的影響，在水溫24℃條件下，對(duì)不同鹽度（5、8、11、14、32、38、41、44、47，鹽度32為對(duì)照組）脅迫下蛤仔幼蟲(chóng)、稚貝和幼貝（殼長(zhǎng)10 mm）的生長(zhǎng)和存活情況進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：鹽度脅迫對(duì)蛤仔的生長(zhǎng)和存活具有顯著影響（P＜0.05），鹽度脅迫72 h時(shí)，鹽度38組蛤仔幼蟲(chóng)、稚貝、幼貝的存活率均最高，分別為97.87％±3.69％、100％、100％，且與其他鹽度組有顯著性差異（P＜0.05），而鹽度5組蛤仔幼蟲(chóng)、稚貝、幼貝以及鹽度8組的幼貝全部死亡；鹽度38組蛤仔幼蟲(chóng)及稚貝的生長(zhǎng)速度最快，殼長(zhǎng)平均日生長(zhǎng)分別為（4.83±0.03）μm和（6.81±0.11）μm，僅次于對(duì)照組（鹽度32），并顯著高于其他鹽度組（P＜0.05）；蛤仔幼蟲(chóng)、稚貝和幼貝對(duì)鹽度的耐受范圍隨著蛤仔受鹽度脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸減??；鹽度脅迫21 d時(shí)，鹽度38組幼蟲(chóng)存活率為50.27％±3.76％，顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），其他各鹽度組幼蟲(chóng)全部死亡；鹽度脅迫30 d時(shí)，鹽度38組稚貝存活率為68.75％±5.25％，與對(duì)照組無(wú)顯著性差異（P＞0.05），其他鹽度組稚貝全部死亡；鹽度脅迫30 d時(shí)，鹽度14組幼貝存活率為94.36％±2.03％，與對(duì)照組接近（P＞0.05），而鹽度38組存活率為60.00％±14.53％，較對(duì)照組顯著下降（P＜0.05），其他鹽度組幼貝全部死亡。本試驗(yàn)結(jié)果可為蛤仔的生態(tài)養(yǎng)殖及抗逆品系的選育提供理論依據(jù)。

菲律賓蛤仔；鹽度；生長(zhǎng)；存活

鹽度是影響貝類生長(zhǎng)存活的重要環(huán)境因子之一。海水鹽度變化超過(guò)貝類的耐鹽范圍，會(huì)使貝類自身滲透壓調(diào)節(jié)紊亂，導(dǎo)致圍心腔血壓突增，進(jìn)而表現(xiàn)出內(nèi)臟團(tuán)顫動(dòng)、面盤(pán)與鰓纖毛擺動(dòng)速度下降、心跳減慢、足伸縮緩慢和對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍等現(xiàn)象［1］。鹽度對(duì)貝類攝食率有較為顯著的影響，低鹽能降低貝類的濾水率，導(dǎo)致貝類攝食能力下降［2］。高鹽或低鹽對(duì)貝類產(chǎn)卵質(zhì)量、孵化率、受精率和變態(tài)率均會(huì)造成影響［3］。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于貝類鹽度脅迫的研究已有大量報(bào)道。Malagoli等［4］研究發(fā)現(xiàn)，極鹽會(huì)阻礙紫貽貝Mytilus edulis免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)。何義朝等［5］研究發(fā)現(xiàn)，不同發(fā)育階段的海灣扇貝Argopecten irradias鹽度適宜范圍不同。沈偉良等［6］研究了不同鹽度對(duì)毛蚶Scapharca subcrenata受精、孵化和幼蟲(chóng)生長(zhǎng)的影響，結(jié)果表明，適宜幼蟲(chóng)生長(zhǎng)的鹽度范圍廣于其受精卵孵化期的鹽度范圍。尤仲杰等［7］對(duì)墨西哥灣扇貝Argopecten irradians concentricus幼蟲(chóng)和稚貝的研究發(fā)現(xiàn)，幼蟲(chóng)與稚貝的鹽度耐受范圍相同。張濤等［8］研究了鹽度對(duì)硬殼蛤Mercenaria mercenaria稚貝生長(zhǎng)和存活的影響，結(jié)果表明，硬殼蛤稚貝的最適鹽度范圍為24～36。章啟忠等［9］對(duì)華貴櫛孔扇貝Chlamys nobilis鹽度適應(yīng)范圍的研究表明，當(dāng)鹽度變化超出最適范圍時(shí)，低鹽度變化的影響比高鹽度明顯。關(guān)于鹽度對(duì)菲律賓蛤仔Ruditapes philippinarum（以下稱蛤仔）的影響研究也有報(bào)道：丁鑒鋒等［10］對(duì)不同殼色蛤仔的耐低鹽能力進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，斑馬蛤的鹽度耐受性最強(qiáng)；林筆水等［11］對(duì)蛤仔稚貝鹽度適應(yīng)性的研究表明，蛤仔稚貝的最適鹽度為20.5；王軍等［12］對(duì)蛤仔浮游幼蟲(chóng)的鹽度適應(yīng)性研究表明，蛤仔幼蟲(chóng)生長(zhǎng)和存活最適鹽度均為29；吳桂漢等［13］研究發(fā)現(xiàn)，蛤仔在鹽度為25時(shí)攝食率最高。

蛤仔為廣溫、廣鹽性灘涂貝類，其幼蟲(chóng)適宜生長(zhǎng)的鹽度范圍為23～35［12］，稚貝為14.5～33.5［11］，幼貝為9.36～34.16［14］。夏季暴雨會(huì)引起灘涂鹽度急劇下降，另外，在高溫干旱季節(jié)，池塘海水由于自然蒸發(fā)等原因，鹽度又會(huì)持續(xù)升高。鹽度變化超過(guò)蛤仔的耐受范圍會(huì)導(dǎo)致蛤仔大規(guī)模死亡，引起臭灘、爛灘等現(xiàn)象，對(duì)生態(tài)環(huán)境造成不良影響。本試驗(yàn)中研究了鹽度脅迫對(duì)不同發(fā)育階段蛤仔的影響，以期為降低養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)及抗逆品種的培育提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)于2015年6月在獐子島集團(tuán)原良種場(chǎng)進(jìn)行。獐子島海域海水鹽度為32，水溫為24℃。親貝于2015年5月初采自大連獐子島海區(qū)，先將性腺成熟的親貝采集后帶回室內(nèi)，清洗干凈后放在預(yù)先加入新鮮海水的60 L白色塑料桶中（以下簡(jiǎn)稱大白桶）暫養(yǎng)，排出泥沙待產(chǎn)。用海水晶、沙濾海水和淡水配制試驗(yàn)用不同鹽度的海水，使用WYY-Ⅱ手持鹽度折光儀進(jìn)行鹽度校對(duì)。

1.2 方法

3個(gè)發(fā)育時(shí)期蛤仔用相同的鹽度進(jìn)行脅迫，設(shè)置鹽度分別為5、8、11、14、32（對(duì)照組）、38、41、44、47，每個(gè)鹽度組設(shè)置3個(gè)平行。

1.2.1 蛤仔幼蟲(chóng)鹽度脅迫試驗(yàn) 挑選健康、殼型規(guī)整的蛤仔進(jìn)行室內(nèi)促熟，經(jīng)陰干刺激后在大白桶中產(chǎn)卵、排精，受精24 h后進(jìn)行選育。受精卵孵化為D形幼蟲(chóng)后，用自制的300目篩絹網(wǎng)收集等量D形幼蟲(chóng)，將其直接轉(zhuǎn)入各鹽度的試驗(yàn)用水中，在顯微鏡下用目微尺（100×）隨機(jī)測(cè)量30個(gè)幼蟲(chóng)的殼長(zhǎng)。繼續(xù)培養(yǎng)，每天根據(jù)攝食量的情況適量投餌3次，餌料為叉鞭金藻Dicrateria sp.，每天全量換水一次。為防止投餌或其他原因造成的鹽度變化，不定期對(duì)鹽度進(jìn)行調(diào)整，使鹽度保持穩(wěn)定。分析24、48、72 h時(shí)各鹽度組幼蟲(chóng)的存活情況；每3 d記錄幼蟲(chóng)生長(zhǎng)、存活情況。幼蟲(chóng)試驗(yàn)共進(jìn)行21 d。1.2.2 蛤仔稚貝鹽度脅迫試驗(yàn) 待未經(jīng)鹽度脅迫的幼蟲(chóng)完全變態(tài)后，用篩絹收集等量且規(guī)格一致的稚貝（平均殼長(zhǎng)為450μm），直接轉(zhuǎn)入各鹽度的試驗(yàn)海水中，在顯微鏡下用目微尺（25×）隨機(jī)測(cè)量30個(gè)稚貝的殼長(zhǎng)。繼續(xù)培養(yǎng)，每天根據(jù)攝食量的情況適量投餌3次，餌料為叉鞭金藻和小球藻Chlorella sp.，每天全量換水一次。不定期調(diào)整鹽度，使鹽度保持穩(wěn)定。連續(xù)監(jiān)測(cè)72 h稚貝的存活情況，分析24、48、72 h時(shí)各鹽度組中稚貝的存活情況；每5 d記錄稚貝的生長(zhǎng)、存活情況。稚貝試驗(yàn)周期為30 d。

1.2.3 蛤仔幼貝鹽度脅迫試驗(yàn) 試驗(yàn)用蛤仔幼貝為2014年8月繁育在海區(qū)吊養(yǎng)的一齡幼貝。篩選等量且規(guī)格一致的幼貝（殼長(zhǎng)10 mm），直接轉(zhuǎn)入各鹽度的試驗(yàn)海水中。試驗(yàn)所用海水是用海水稀釋的餌料與海水晶、淡水配制而成。每天適量投餌3次，餌料為叉鞭金藻，每天全量換水一次。試驗(yàn)過(guò)程中隨時(shí)對(duì)鹽度進(jìn)行檢測(cè)和調(diào)整。隨時(shí)挑出死亡蛤仔，避免對(duì)其他蛤仔產(chǎn)生影響，蛤仔死亡的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)為殼完全張開(kāi)并對(duì)外界刺激沒(méi)有反應(yīng)。每5 d記錄幼貝的存活情況，幼貝試驗(yàn)共進(jìn)行30 d。

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用Excel和SPSS 19.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，使用單因素方差分析法對(duì)不同鹽度脅迫組測(cè)得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析比較，顯著性水平設(shè)為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同發(fā)育時(shí)期蛤仔24、48、72 h的存活情況2.1.1 幼蟲(chóng) 從表1可見(jiàn)：24 h時(shí)，鹽度5組蛤仔幼蟲(chóng)存活率為78.05％，顯著低于其他各組（P＜0.05）；48 h時(shí)，對(duì)照組（鹽度32）和鹽度38、41組幼蟲(chóng)存活率均為100％，鹽度5組幼蟲(chóng)存活率最低，僅為41.05％，鹽度8組幼蟲(chóng)存活率為73.01％，顯著低于鹽度11～47組（P＜0.05）；72 h時(shí)，蛤仔幼蟲(chóng)存活率隨脅迫鹽度的降低或升高而降低，鹽度5組幼蟲(chóng)的存活率為0，鹽度8組的存活率為52.16％，顯著低于11～47組（P＜0.05），鹽度38組幼蟲(chóng)的存活率為97.87％，與對(duì)照組接近（P＞0.05），但顯著高于其他各組（P＜0.05）。2.1.2 稚貝 從表2可見(jiàn)：24 h時(shí)，鹽度5組稚貝的存活率為65.94％，而其他鹽度組的存活率均為100％；48 h時(shí)，蛤仔稚貝存活率隨脅迫鹽度的降低或升高呈降低趨勢(shì)，鹽度14、32、38組的存活率均為100％，其次為鹽度41組，存活率為96.75％，鹽度5組存活率最低（50.20％），顯著低于鹽度8～47組（P＜0.05）；72 h時(shí)，鹽度5組中稚貝全部死亡，鹽度8組存活率僅為30.50％，顯著低于鹽度11～47組（P＜0.05），鹽度32和38組的存活率最高，均為100％。

2.1.3 幼貝 從表3可見(jiàn)：24 h時(shí)，除鹽度5組（存活率為97.81％）外，其他各組中幼貝均沒(méi)有死亡；48 h時(shí)，各鹽度組幼貝的存活率為71.54％～100％，鹽度5組存活率最低；72 h時(shí)，鹽度5和8組幼貝存活率為0，鹽度11組為45.02％，顯著低于鹽度14～47組（P＜0.05），鹽度32、38、41組的存活率仍為100％。

表1 不同鹽度下蛤仔幼蟲(chóng)24、48、72 h的存活率Tab.1 Survival rates of larvae M anila clam Ruditapes philippinarum at different salinities in 24，48 and 72 h％

表2 不同鹽度下蛤仔稚貝24、48、72 h的存活率Tab.2 Survival rates of juvenile M anila clam Ruditapes philippinarum at different salinities in 24，48 and 72 h％

2.2 不同發(fā)育時(shí)期蛤仔3～30 d時(shí)的存活情況

2.2.1 3～21 d幼蟲(chóng)的存活率 從表4可見(jiàn)：鹽度脅迫6 d時(shí)，鹽度5和8組幼蟲(chóng)全部死亡，鹽度47組存活率最低，為59.65％，除對(duì)照組外，存活率最高組為鹽度38和41組，分別為85.71％和85.35％，二者顯著高于鹽度11、14、47組（P＜0.05）；鹽度脅迫9 d時(shí)，鹽度47組幼蟲(chóng)全部死亡，鹽度11和14組幼蟲(chóng)存活率最低，分別為68.85％和70.36％，顯著低于鹽度32～44組（P＜0.05）；鹽度脅迫15 d時(shí)，蛤仔幼蟲(chóng)出現(xiàn)大量死亡，鹽度8以下脅迫組，鹽度41以上脅迫組幼蟲(chóng)全部死亡，對(duì)照組存活率最高（74.51％），顯著高于其他鹽度組（P＜0.05）；鹽度脅迫21 d時(shí)，僅剩鹽度38組和對(duì)照組，幼蟲(chóng)存活率分別為50.27％和65.67％。

表3 不同鹽度下蛤仔幼貝24、48、72 h的存活率Tab.3 Survival rates of youth M anila clam Ruditapes philippinarum at different salinities in 24，48 and 72 h ％

2.2.2 5～30 d稚貝的存活率 從表5可見(jiàn)：鹽度脅迫5 d時(shí)，除對(duì)照組存活率為100％外，其他鹽度組均有死亡，其中鹽度5、8組稚貝全部死亡；鹽度脅迫10 d時(shí)，鹽度11組稚貝全部死亡，鹽度脅迫出現(xiàn)不同程度的死亡，鹽度47組的存活率最低（50.15％），顯著低于鹽度14～44組（P＜0.05）；鹽度脅迫20 d時(shí)，鹽度41和47組全部死亡，對(duì)照組稚貝的存活率最高（91.35％），其次為鹽度38組（80.39％），鹽度41組存活率最低（53.26％），顯著低于鹽度14～38組（P＜0.05）；鹽度脅迫30 d時(shí)，僅剩對(duì)照組和鹽度38組，稚貝存活率分別為78.96％和68.75％。

2.2.3 5～30 d幼貝的存活率 從表6可見(jiàn)：鹽度脅迫5 d時(shí)，鹽度5、8、11組幼貝全部死亡；鹽度脅迫10 d時(shí)，鹽度47組幼貝全部死亡；鹽度脅迫30 d時(shí)，除對(duì)照組（97.78％）外，僅有鹽度14、38組幼貝存活，存活率分別為94.36％和60.00％。

表4 蛤仔幼蟲(chóng)在不同鹽度中的存活率Tab.4 Survival rates of larvae M anila clam Ruditapes philippinarum at different salinities％

表5 蛤仔稚貝在不同鹽度中的存活率Tab.5 Survival rates of juvenile M anila clam Ruditapes philippinarum at different salinities％

表6 蛤仔幼貝在不同鹽度中的存活率Tab.6 Survival rates of youth M anila clam Ruditapes philippinarum at different salinities％

2.3 不同鹽度中蛤仔幼蟲(chóng)和稚貝的生長(zhǎng)情況

從表7和表8可見(jiàn)：幼蟲(chóng)和稚貝在鹽度5組中均未觀察到生長(zhǎng)；幼蟲(chóng)和稚貝日平均生長(zhǎng)最快均出現(xiàn)在對(duì)照組中，且與各鹽度脅迫組有顯著性差異（P＜0.05）；幼蟲(chóng)和稚貝的日平均生長(zhǎng)量隨鹽度的升高或降低而減小（鹽度44組幼蟲(chóng)除外）。

2.3.1 幼蟲(chóng)生長(zhǎng) 從表7可見(jiàn)：對(duì)照組幼蟲(chóng)生長(zhǎng)速度最快，殼長(zhǎng)日平均生長(zhǎng)量為（5.86±0.04）μm；鹽度38組生長(zhǎng)速度慢于對(duì)照組，但顯著快于其他鹽度組（P＜0.05）；4個(gè)低鹽脅迫組中，幼蟲(chóng)的日生長(zhǎng)量隨鹽度的降低而降低，鹽度5、8組幼蟲(chóng)生長(zhǎng)速度緩慢，兩者無(wú)顯著性差異（P＞0.05），均顯著低于其他各組（P＜0.05）。

2.3.2 稚貝生長(zhǎng) 從表8可見(jiàn)：在低鹽脅迫中，稚貝的日均生長(zhǎng)量隨脅迫鹽度的降低而降低，而在高鹽脅迫組中，稚貝的日均生長(zhǎng)量隨脅迫鹽度的升高而降低；對(duì)照組稚貝生長(zhǎng)速度最快，殼長(zhǎng)日平均生長(zhǎng)量為（8.85±0.30）μm；鹽度38組生長(zhǎng)速度慢于對(duì)照組，但顯著快于其他鹽度組（P＜0.05）；鹽度11組稚貝生長(zhǎng)速度緩慢，顯著低于鹽度14～44組（P＜0.05）。

表7 不同鹽度中蛤仔幼蟲(chóng)的殼長(zhǎng)及日均生長(zhǎng)量Tab.7 Shell length and daily grow th of larvae Manila clam Ruditapes philippinarum at different salinities

表8 不同鹽度中蛤仔稚貝的殼長(zhǎng)及日均生長(zhǎng)量Tab.8 Shell length and daily grow th of juvenile M anila clam Ruditapes philippinarum at different salinities

3 討論

3.1 蛤仔鹽度耐受性分析

鹽度是生態(tài)環(huán)境關(guān)鍵因素之一，會(huì)影響海洋生物的免疫反應(yīng)［15］、生理反應(yīng)［16-17］、胚胎發(fā)育［18-20］，以及幼蟲(chóng)與稚貝的生長(zhǎng)和存活［21-25］。水產(chǎn)動(dòng)物能根據(jù)周圍海水的鹽度變化調(diào)節(jié)其自身的滲透壓，以利于攝食和生長(zhǎng)［8］。但如果這種變化超出貝類的耐受范圍，則會(huì)嚴(yán)重影響其生長(zhǎng)和存活，甚至導(dǎo)致其大量死亡。

蛤仔雖然是廣鹽性貝類，但不同海區(qū)產(chǎn)量并不相同，原因是所處海區(qū)的理化環(huán)境因子不同，其中鹽度是重要因素之一［11］。在自然海區(qū)中，由于海水鹽度的驟然變化導(dǎo)致的蛤仔死亡時(shí)有發(fā)生［26］。目前，研究水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)溫度、鹽度耐受性的方法主要有兩種：（1）將試驗(yàn)動(dòng)物從適宜條件突然轉(zhuǎn)入試驗(yàn)條件，并記錄直到死亡所經(jīng)歷的時(shí)間；（2）以一個(gè)上升率標(biāo)準(zhǔn)增加溫度或鹽度，直至出現(xiàn)死亡［27］。通常情況下，第一種方法常用于貝類對(duì)溫度、鹽度變化的耐受性［28-30］，而國(guó)內(nèi)學(xué)者常用第二種方法研究魚(yú)類對(duì)溫度的耐受性［31-35］，兩種方法均有其實(shí)際意義。本研究中，采用第一種方法，即以鹽度突變的方式來(lái)對(duì)蛤仔進(jìn)行脅迫，所設(shè)置的鹽度脅迫在適宜范圍之外。試驗(yàn)結(jié)果表明，高鹽或低鹽脅迫對(duì)蛤仔的生長(zhǎng)和存活均有顯著的影響。在顯微鏡下觀察幼蟲(chóng)面盤(pán)纖毛擺動(dòng)減慢，聚集在桶底，面盤(pán)畸形或無(wú)法收縮，幾乎不攝食；稚貝腮纖毛擺動(dòng)減慢，足部伸縮速度下降，攝食減少或幾乎不攝食。幼蟲(chóng)在鹽度5組中幾乎不生長(zhǎng)，在鹽度8和11組中日生長(zhǎng)量?jī)H為（1.54±0.37）μm和（1.60± 0.15）μm；稚貝在鹽度5和鹽度8兩個(gè)處理組中幾乎不生長(zhǎng)，而鹽度11組日均生長(zhǎng)量?jī)H為（0.11±1.66）μm，稚貝在鹽度38組中的生長(zhǎng)表現(xiàn)為先慢后快，這可能是由于鹽度突變導(dǎo)致了蛤仔的不適應(yīng)，后期其適應(yīng)鹽度后生長(zhǎng)逐漸加快。林筆水等［11］通過(guò)鹽度脅迫蛤仔生長(zhǎng)的研究表明：在3.5、7.5和14.0鹽度脅迫組中，蛤仔幼蟲(chóng)和稚貝幾乎沒(méi)有生長(zhǎng)，此結(jié)論與本研究結(jié)果相符合。本研究中，高鹽脅迫蛤仔幼蟲(chóng)和稚貝的生長(zhǎng)較低鹽明顯，在林筆水等［11］的研究中也得到了類似的結(jié)論。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，鹽度脅迫72 h時(shí)，幼蟲(chóng)在對(duì)照組中存活率為100％，稚貝在對(duì)照組和鹽度38組中的存活率為100％，而幼貝在對(duì)照組、鹽度38和41組中的存活率為100％，說(shuō)明隨著蛤仔的生長(zhǎng)，蛤仔的抗高鹽能力逐漸增強(qiáng)；幼蟲(chóng)和稚貝均在鹽度38組中的存活時(shí)間最長(zhǎng)，而幼貝在鹽度38組中的存活時(shí)間短于鹽度14組，說(shuō)明隨著蛤仔的生長(zhǎng)發(fā)育，蛤仔對(duì)鹽度的耐受性有向低鹽方向發(fā)展的趨勢(shì)。本試驗(yàn)的鹽度變化方式為突變，試驗(yàn)剛開(kāi)始的幾天蛤仔在低鹽中幾乎沒(méi)有攝食，僅靠自身貯存的能量來(lái)維持新陳代謝，而在高鹽中的攝食量較低鹽中要好些，這也說(shuō)明了雖然在適宜的鹽度中，蛤仔更適合在低鹽中生存，但在不適宜的鹽度中，蛤仔在高鹽中的耐受性要比低鹽中強(qiáng)。王軍等［12］的研究表明，高于或低于適宜鹽度范圍會(huì)使蛤仔生長(zhǎng)停滯或大量死亡，曹伏君等［36］對(duì)文蛤的鹽度耐受性研究中也有相同的結(jié)論。

3.2 鹽度馴化潛能及應(yīng)用前景

目前，關(guān)于鹽度對(duì)海洋雙殼類動(dòng)物影響的機(jī)制尚未完全探明。一些研究報(bào)道表明，海洋雙殼類動(dòng)物滲透壓調(diào)節(jié)中，其對(duì)鹽度的調(diào)節(jié)起主要作用［37-43］。章啟忠等［9］對(duì)華貴櫛孔扇貝稚貝的研究發(fā)現(xiàn)，鹽度變化一旦超出了自身滲透壓調(diào)節(jié)能力，則會(huì)導(dǎo)致其大量死亡。尤仲杰等［7］研究發(fā)現(xiàn)，墨西哥灣扇貝幼蟲(chóng)和稚貝在不適的鹽度下，心跳減慢，代謝緩慢或停止，易死亡。Li等［44］在對(duì)南美白對(duì)蝦Litopenaeus vannamei的研究中發(fā)現(xiàn)，新陳代謝的能量是恒定的，用于維持滲透壓調(diào)節(jié)多，則用于維持免疫系統(tǒng)及機(jī)體生長(zhǎng)的能量就減少。Malagoli等［4］對(duì)紫貽貝的研究發(fā)現(xiàn)，不同應(yīng)激因子（高溫、極鹽等）均可以阻礙其免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)。稅春等［45］對(duì)梭魚(yú)Liza haematocheila幼魚(yú)的研究發(fā)現(xiàn)，不同鹽度中梭魚(yú)幼魚(yú)的攝食率、血清滲透壓不同。郭文學(xué)［46］研究發(fā)現(xiàn)，高鹽環(huán)境中，生物體內(nèi)的滲透壓開(kāi)始升高，當(dāng)達(dá)到一定閾值后，即超過(guò)了自身調(diào)節(jié)能力，則會(huì)出現(xiàn)死亡。貝類對(duì)鹽度的耐受力與遺傳因素及個(gè)體的生理狀態(tài)有關(guān)。在現(xiàn)有的研究中，大部分受試動(dòng)物對(duì)環(huán)境因子漸變的能力均強(qiáng)于突變［47-50］。郭文學(xué)［46］對(duì)中國(guó)蛤蜊Mactra chinensis的研究發(fā)現(xiàn)，幼蟲(chóng)適應(yīng)鹽度漸變的能力較突變強(qiáng)。施剛等［49］對(duì)褐點(diǎn)石斑魚(yú)Epinephelus fuscoguttatus的研究表明，鹽度漸變后魚(yú)苗的鹽度耐受范圍較突變變廣。王沖等［50］對(duì)三疣梭子蟹Portunus trituberculatus的研究發(fā)現(xiàn)，幼蟹適應(yīng)鹽度漸變的能力強(qiáng)于適應(yīng)突變；但突變的意義在于能在鹽度突變中存活下來(lái)的蛤仔是對(duì)環(huán)境突然變化具有高抗逆性的部分，具有進(jìn)一步篩選的必要。Hosoi等［51］報(bào)道了甘氨酸、脯氨酸等氨基酸對(duì)細(xì)胞內(nèi)滲透壓起主要作用。另外，Palacios等［47］在對(duì)蝦后期幼體的鹽度脅迫研究中發(fā)現(xiàn)，通過(guò)鹽度脅迫測(cè)試，可以提高其對(duì)鹽度的耐受范圍。Rupp等［48］對(duì)扇貝的研究表明，通過(guò)溫度和鹽度脅迫馴化可能突破其品種的耐受極限。

本研究意義在于，能在鹽度突變中存活下來(lái)的蛤仔是具有鹽度耐受性群體，可以作為耐鹽蛤仔基礎(chǔ)選育群體，但對(duì)其后代進(jìn)行馴化及耐鹽性的遺傳機(jī)理，也需要進(jìn)一步進(jìn)行驗(yàn)證。同時(shí)，各時(shí)期蛤仔在不同鹽度中的存活時(shí)間可以作為后期蛤仔抗逆選育的標(biāo)準(zhǔn)，并為后期蛤仔抗逆品系篩選打下基礎(chǔ)。經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的鹽度馴化和定向選育可以得到耐鹽品系，為鹽堿地、河口區(qū)灘涂的綜合利用提供了新的方向。

［1］ 尤仲杰，陸彤霞，馬斌，等.鹽度對(duì)墨西哥灣扇貝幼蟲(chóng)和稚貝生長(zhǎng)與存活的影響［J］.動(dòng)物學(xué)雜志，2003，38（3）：58-60.

［2］ 劉青，張?jiān)剑饿?，?菲律賓蛤仔的研究進(jìn)展［J］.河北漁業(yè)，2011（1）：56-59.

［3］ 常亞青.貝類增養(yǎng)殖學(xué)［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2007：69.

［4］ MalagoliD，Casarini L，Sacchi S，etal.Stressand immune response in themussel Mytilusgalloprovincialis［J］.Fish＆amp;Shellfish Immunology，2007，23（1）：171-177.

［5］ 何義朝，張福綏.鹽度對(duì)海灣扇貝不同發(fā)育階段的影響［J］.海洋與湖沼，1990，21（3）：197-204.

［6］ 沈偉良，尤仲杰，施祥元.溫度與鹽度對(duì)毛蚶受精卵孵化及幼蟲(chóng)生長(zhǎng)的影響［J］.海洋科學(xué)，2009，33（10）：5-8.

［7］ 尤仲杰，陸彤霞，馬斌，等.幾種環(huán)境因子對(duì)墨西哥灣扇貝幼蟲(chóng)和稚貝生長(zhǎng)與存活的影響［J］.熱帶海洋學(xué)報(bào)，2003，22（3）：22-29.

［8］ 張濤，楊紅生，劉保忠，等.環(huán)境因子對(duì)硬殼蛤Mercenariamercenaria稚貝成活率和生長(zhǎng)率的影響［J］.海洋與湖沼，2003，34（2）：142-149.

［9］ 章啟忠，劉志剛，王輝.華貴櫛孔扇貝稚貝鹽度適應(yīng)性的研究［J］.廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，28（1）：40-43.

［10］ 丁鑒鋒，王銳，閆喜武，等.菲律賓蛤仔3種殼色群體低鹽耐受能力的比較研究［J］.大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，28（3）：264-268.

［11］ 林筆水，吳天明，黃炳章.溫度和鹽度對(duì)菲律賓蛤仔稚貝生長(zhǎng)及發(fā)育的影響［J］.水產(chǎn)學(xué)報(bào)，1983，7（1）：15-23.

［12］ 王軍，王志松，董穎，等.鹽度對(duì)菲律賓蛤仔浮游幼體存活和生長(zhǎng)的影響［J］.水產(chǎn)科學(xué)，2003，22（2）：12-14.

［13］ 吳桂漢，陳品健，江瑞勝，等.鹽度和晝夜節(jié)律對(duì)菲律賓蛤仔攝食率的影響［J］.臺(tái)灣海峽，2002，21（1）：72-77.

［14］ 邱清華.雜色蛤子的形態(tài)習(xí)性和養(yǎng)殖法［J］.動(dòng)物學(xué)雜志，1959，3（11）：511-517.

［15］ Gagnaire B，F(xiàn)rouin H，Moreau K，et al.Effects of temperature and salinity on haemocyte activities of the Pacific oyster，Crassostrea gigas（Thunberg）［J］.Fish＆amp;Shellfish Immunology，2006，20（4）：536-547.

［16］ Hildreth JE，Stickle W B.The effects of temperature and salinity on the osmotic composition of the southern oyster drill，Thais haemastoma［J］.Biological Bulletin，1980，159（1）：148-161.

［17］ Madrones-Ladja J A.Salinity effect on the embryonic development，larval growth and survival atmetamorphosis of Placuna placenta Linnaeus（1758）［J］.Aquaculture，2002，214（1-4）：411-418.

［18］ Dos Santos A E，Nascimento IA.Influence of gamete density，salinity and temperature on the normal embryonic development of themangrove oyster Crassostrea rhizophorae Guilding，1828［J］. Aquaculture，1985，47（4）：335-352.

［19］ Tan SH，Wong TM.Effect of salinity on hatching，larval growth，survival and settling in the tropical oyster Crassostrea belcheri（Sowerby）［J］.Aquaculture，1996，145（1-4）：129-139.

［20］ Huo Zhongming，Wang Zhaoping，Liang Jian，et al.Effects of salinity on embryonic development，survival，and growth of Crassostrea hongkongensis［J］.Journal of Ocean University of China（Oceanic and Coastal Sea Research），2014，13（4）：666-670.

［21］ 劉海濤，董占武，徐志明.鹽度對(duì)大連灣牡蠣胚胎發(fā)育及幼蟲(chóng)生長(zhǎng)的影響［J］.水產(chǎn)學(xué)報(bào)，1992，16（1）：32-39.

［22］ Nell JA，Holliday JE.Effects of salinity on the growth and survival of Sydney rock oyster（Saccostrea commercialis）and Pacific oyster（Crassostrea gigas）larvae and spat［J］.Aquaculture，1988，68（1）：39-44.

［23］ Soria G，Merino G，Uribe E，et al.Effect of increasing salinity on weight-specific filtration rate of juvenile scallop Argopecten purpuratus reared at two temperatures：is any effect related to ammonia buildup？［J］.Journal of Shellfish Research，2011，30（2）：279-286.

［24］ Taylor JJ，Southgate PC，Rose R A.Effects of salinity on growth and survival of silver-lip pearl oyster，Pinctada maxima，spat［J］.Journal of Shellfish Research，2004，23（2）：375-377.

［25］ Xu F，Guo XM，Li L，etal.Effectsof salinity on larvae of the oysters Crassostrea ariakensis，C.sikamea and the hybrid cross［J］. Marine Biology Research，2012，7（8）：796-803.

［26］ 山東省水產(chǎn)學(xué)校.貝類養(yǎng)殖學(xué)［M］.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1980：328-329.

［27］ 嚴(yán)福升.牙鲆（Paralichthys olivaceus）生長(zhǎng)相關(guān)性狀遺傳力估計(jì)和耐熱性狀初步研究［D］.青島：中國(guó)海洋大學(xué)，2009.

［28］ 陳愛(ài)華，姚國(guó)興，張志偉，等.溫度、鹽度和底質(zhì)對(duì)大竹蟶稚貝生長(zhǎng)及存活的影響［J］.熱帶海洋學(xué)報(bào)，2010，29（5）：94-97.

［29］ 陳志，高如承，胡青，等.溫度、鹽度和密度交互作用對(duì)波紋巴非蛤幼貝生長(zhǎng)的影響［J］.海洋科學(xué)，2013，37（8）：55-60.

［30］ 劉志剛，劉建勇，王輝，等.墨西哥灣扇貝稚貝鹽度適應(yīng)性的研究［J］.湛江海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，26（6）：12-16.

［31］ 池信才，王軍，宋思揚(yáng)，等.耐溫牙鲆分子標(biāo)記輔助選育研究［J］.廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2007，46（5）：493-496.

［32］ 劉寶鎖，張?zhí)鞎r(shí)，孔杰，等.大菱鲆生長(zhǎng)和耐高溫性狀的遺傳參數(shù)估計(jì)［J］.水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2011，35（11）：1601-1606.

［33］ 盧鐘磊，池信才，王義權(quán)，等.褐牙鲆耐熱性狀相關(guān)的微衛(wèi)星分子標(biāo)記篩選［J］.廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2007，46（3）：396-402.

［34］ 馬愛(ài)軍，黃智慧，王新安，等.大菱鲆（Scophthalmusmaximus）耐高溫品系選育及耐溫性能評(píng)估［J］.海洋與湖沼，2012，43（4）：797-804.

［35］ 許可.大菱鲆與生長(zhǎng)、耐高溫性狀相關(guān)的微衛(wèi)星標(biāo)記篩選及微衛(wèi)星標(biāo)記的開(kāi)發(fā)研究［D］.上海：上海海洋大學(xué)，2009.

［36］ 曹伏君，劉志剛，羅正杰.文蛤稚貝鹽度適應(yīng)性的研究［J］.海洋通報(bào)，2010，29（2）：156-160.

［37］ Lange R.Isosmotic intracellular regulation and euryhalinity inmarine bivalves［J］.Journal of Experimental Marine Biology and E-cology，1970，5（2）：170-179.

［38］ Strand O，Solberg P T，Andersen K K，et al.Salinity tolerance of juvenile scallops（Pecten maximus L.）at low temperature［J］. Aquaculture，1993，115（1-2）：169-179.

［39］ Singnoret-Brailovsky G，Maeda-Martinez A N，Reynoso-Granados T，et al.Salinity tolerance of the catarina scallop Argopecten ventricosus-circularis（Sowerby II，1842）［J］.Journal of Shellfish Research，1996，15（3）：623-626.

［40］ Damrongphol P，Jaroensastraraks P，Poolsanguan B.Effect of variousmedium compositions on survivaland hatching rates ofembryos of the giant freshwater prawn Macrobrachium rosenbergii cultured in vitro［J］.Fisheries Science，2001，67（1）：64-70.

［41］ Laing I.Effect of salinity on growth and survival of king scallop spat（Pecten maximus）［J］.Aquaculture，2002，205（1-2）：171-181.

［42］ Wang Y J，Hu M H，Wong W H，et al.The combined effects of oxygen availability and salinity on physiological responses and scope for growth in the green-lipped mussel Perna viridis［J］. Marine Pollution Bulletin，2011，63（5-12）：255-261.

［43］ Wang Y J，Hu M H，Wong W H，et al.Combined effects of dissolved oxygen and salinity on growth and body composition of juvenile green-lipped mussel Perna viridis［J］.Journal of Shellfish Research，2011，30（3）：851-857.

［44］ Li E C，Chen LQ，Zeng C，etal.Growth，body composition，respiration and ambient ammonia nitrogen tolerance of the juvenile white shrimp，Litopenaeus vannamei，at different salinities［J］. Aquaculture，2007，265（1-4）：385-390.

［45］ 稅春，張海明，施永海，等.鹽度對(duì)梭魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)、滲透生理和體成分組成的影響［J］.大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，30（6）：634-640.

［46］ 郭文學(xué).四角蛤蜊和中國(guó)蛤蜊繁殖生物學(xué)、養(yǎng)殖生態(tài)學(xué)與品種選育研究［D］.大連：大連海洋大學(xué)，2012.

［47］ Palacios E，Racotta IS.Salinity stress test and its relation to future performance and different physiological responses in shrimp postlarvae［J］.Aquaculture，2007，268（1-4）：123-135.

［48］ Rupp G S，Parsons G J.Effects of salinity and temperature on the survival and byssal attachmentof the lion's paw scallop Nodipecten nodosus at its southern distribution limit［J］.Journal of Experimental Marine Biology and Ecology，2004，309（2）：173-198.

［49］ 施鋼，張健東，潘傳豪，等.鹽度漸變和驟變對(duì)褐點(diǎn)石斑魚(yú)存活和攝餌的影響［J］.廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，31（1）：45-51.

［50］ 王沖，姜令緒，王仁杰，等.鹽度驟變和漸變對(duì)三疣梭子蟹幼蟹發(fā)育和攝食的影響［J］.水產(chǎn)科學(xué)，2010，29（9）：510-514.

［51］ HosoiM，Kubota S，Toyohara M，etal.Effectof salinity change on free amino acid content in Pacific oyster［J］.Fisheries Science，2003，69（2）：395-400.

Influence of salinity stress on grow th and survival of M anila clam Ruditapes philippinarum at various developmental stages

FAN Chao，WEN Zi-chuan，HUO Zhong-ming，YANG Feng，YAN Xi-wu

（College of Fisheries and Life Science，Engineering Research Center of Shellfish Culture and Breeding in Liaoning Province，Dalian Ocean University，Dalian 116023，China）

The growth and survival of larvae，juvenile，and 1-year old youth（shell length 10 mm）of Manila clam Ruditapes philippinarum were studied ata salinity of5，8，11，14，32（control），38，41，44，and 47 atwater temperature of 20℃.The results showed that there were significant effects of salinity stress on growth and survival of the clam，with themaximal survival rates（97.87％±3.69％，100％，and 100％）in 72 h in the three stages at salinity of 38（P＜0.05）and mortality at salinity of 5.The best daily growth was observed in larvae（4.83μm±0.03 μm）and juveniles（6.81μm±0.11μm）at a salinity of38，poorer than that in the control group and significantly better than that in the other groups（P＜0.05）.Itwas found that the range of salinity tolerancewas decreased as the clam developed，with survival rate of（50.27±3.76）％in 21 day old larvae at a salinity of38，significantly lower than that in the other groups（P＜0.05），even mortality in the other groups.In 30 days salinity stress，however，the juveniles had survival rate of（68.75±5.25）％in a salinity of38，without significantly different from that in the control group（P＞0.05），evenmortality in the other groups.Therewas survival rate of（94.36±2.03）％ata salinity of 14，without significant difference compared to that in the control group（P＞0.05），and survival rate of（60.00±14.53）％at a salinity of 38，significantly lower than that in the control group（P＜0.05），in the youth clam exposed to salinity stress for 30 days.The findings provided a theoretical basis for eco-breeding of resistant clam strains.

Ruditapes philippinarum；salinity；growth；survival

Q954.4

A

10.16535/j.cnki.dlhyxb.2016.05.005

2095-1388（2016）05-0497-08

2016-01-14

國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)（CARS-48）；國(guó)家“863”計(jì)劃項(xiàng)目（2012AA10AA400）

范超（1989—），男，碩士研究生。E-mail：616621402@qq.com

霍忠明（1983—），男，博士，講師。E-mail：houzm@dlou.edu.cn