AR在ER（-）/HER2（+）乳腺癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征、Ki-67相關(guān)性分析

展瑞，鄒國楨，季成棟，陸夏良

（南通大學(xué)附屬吳江醫(yī)院病理科，江蘇蘇州215002）

AR在ER（-）/HER2（+）乳腺癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征、Ki-67相關(guān)性分析

展瑞，鄒國楨，季成棟，陸夏良

（南通大學(xué)附屬吳江醫(yī)院病理科，江蘇蘇州215002）

目的觀察雄激素受體（AR）及Ki-67在雌激素受體（ER）（-）/人表皮生長因子受體2（HER2）（+）的乳腺癌組織中的表達(dá)及AR與臨床病理特征、Ki-67強(qiáng)度的相關(guān)性。方法收集該科2007年1月至2015年12月經(jīng)病理學(xué)確診為乳腺癌的62例患者的組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)EnVision兩步法檢測ER（-）/HER2（+）乳腺癌組織中AR和Ki-67的表達(dá)，統(tǒng)計(jì)分析AR與臨床病理特征、Ki-67表達(dá)強(qiáng)度的相關(guān)性。結(jié)果AR表達(dá)率為69.57%，Ki-67表達(dá)率為5%～8%。AR表達(dá)與腫瘤組織學(xué)分級、Ki-67表達(dá)強(qiáng)度及淋巴脈管侵犯相關(guān)（P＜0.01或0.05），且與Ki-67高強(qiáng)度表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），而與年齡、腫瘤大小、絕經(jīng)與否、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。結(jié)論ER（-）/HER2（+）乳腺癌組織中AR表達(dá)率較高，與腫瘤分級、Ki-67高強(qiáng)度及淋巴脈管侵犯相關(guān)，提示AR高表達(dá)者預(yù)后較好。

受體，雌激素；乳腺腫瘤/病理學(xué)；Ki-67抗原；相關(guān)性

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。近年來，乳腺癌患病率呈上升趨勢，且呈年輕化趨勢，已成為女性惡性腫瘤的死亡原因之首。據(jù)報(bào)道，僅2012年全球新發(fā)乳腺癌病例約為1 670萬例，2008年近46萬人死于乳腺癌［1］。因此，對乳腺癌早期而準(zhǔn)確的診斷和治療迫在眉睫。研究表明，有10%～15%的乳腺癌患者為人表皮生長因子受體2（HER2）（+），對此類患者應(yīng)用曲妥單抗聯(lián)合輔助化療可顯著提高無瘤生存率和總生存率［2］。但盡管如此，仍有相當(dāng)一部分患者治療效果欠佳。75%～80%乳腺癌是激素依賴性的，雄激素受體（AR）在60%～70%乳腺癌組織中呈高表達(dá)［3］，表明AR在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。目前，關(guān)于AR和HER2關(guān)系的報(bào)道較少，故本研究探討雌激素受體（ER）（-）/HER2（+）乳腺癌組織中AR和Ki-67的表達(dá)情況及AR與臨床病理特征、Ki-67強(qiáng)度的相關(guān)性。

1　資料與方法

1.1一般資料收集本科2007年1月至2015年12月經(jīng)病理學(xué)確診為乳腺癌的62例患者的組織標(biāo)本，其中ER（-）/HER2（+）者46例，均為女性，年齡29～65歲，平均42歲?；颊呔唇?jīng)過放、化療等治療。其中組織學(xué)分級1級6例，2、3級40例，伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟/美國癌癥聯(lián)合委員會（AJCC/UICC）TNM臨床分期第6版標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期12例，Ⅱ期25例，Ⅲ期9例。

1.2方法

1.2.1檢測方法采用免疫組織化學(xué)（IHC）EnVision兩步法進(jìn)行檢測。AR、Ki-67、HER2試劑均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。將乳腺癌組織標(biāo)本以10%甲醛固定24 h，常規(guī)石蠟包埋，制作成厚度為4 μm的切片。用已知所有IHC指標(biāo)（ER、HER2、AR、Ki-67）的陽性標(biāo)本作陽性對照，以磷酸緩沖鹽溶液（PBS）代替一抗作陰性對照。

1.2.2ER（-）/HER2（+）判定HER2經(jīng)IHC染色后從染色范圍和細(xì)胞膜染色強(qiáng)度判定：（-）為組織未表達(dá)；（+）為大于10%的細(xì)胞膜弱陽性；（++）為大于或等于10%細(xì)胞膜中等強(qiáng)度或小于或等于10%的細(xì)胞膜強(qiáng)陽性；（+++）為大于或等于10%的細(xì)胞膜強(qiáng)陽性。HER2（+++）者判為陽性，評定為（++）和（+）的再經(jīng)熒光原位雜交技術(shù)進(jìn)行檢測。ER＜10%瘤細(xì)胞核陽性判為陰性。

1.2.3結(jié)果判斷AR采用大于或等于10%瘤細(xì)胞核陽性作為陽性標(biāo)準(zhǔn)。Ki-67陽性細(xì)胞為核著色，取任意5個高倍鏡視野中陽性細(xì)胞所占細(xì)胞總數(shù)比例的平均值為Ki-67陽性率，Ki-67陽性率小于或等于30%為低度，＞30%為高度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，應(yīng)用Pearson χ2檢驗(yàn)和非參數(shù)統(tǒng)計(jì)中Spearman等級相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1AR及Ki-67的表達(dá)情況IHC結(jié)果顯示，AR及Ki-67主要表達(dá)于細(xì)胞核。46例乳腺癌患者中，AR陽性32例（69.57%）。Ki-67表達(dá)率為5%～80%，其中低強(qiáng)度者19例（41.30%），高強(qiáng)度者27例（58.70%）。

2.2AR表達(dá)與臨床病理特征、Ki-67強(qiáng)度的相關(guān)性分析AR表達(dá)與年齡、腫瘤大小、絕經(jīng)與否、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期無明顯相關(guān)性（P＞0.05），而與腫瘤組織學(xué)分級、Ki-67強(qiáng)度及淋巴脈管侵犯相關(guān)（P＜0.01或0.05），見表1。經(jīng)Spearman等級相關(guān)性分析，AR表達(dá)與Ki-67高強(qiáng)度表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。

表1　AR表達(dá)與臨床病理特征、Ki-67強(qiáng)度的相關(guān)性分析

3　討論

乳腺癌是一組高度異質(zhì)性的惡性腫瘤，無論在組織形態(tài)、免疫表型、生物學(xué)行為還是治療反應(yīng)上都存在著極大的差異。根據(jù)美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)（NCCN）指南，臨床上對于ER和孕激素受體（PR）（+）的乳腺癌患者給予內(nèi)分泌治療，其有效率可達(dá)近70%。因此，目前臨床上多使用IHC染色方法檢測ER、PR和HER2這3種常用的標(biāo)記物，并將乳腺癌分為3種類型，即管腔型：高表達(dá)激素受體腫瘤，預(yù)后良好；HER2型：高表達(dá)HER2，而激素受體（-）；基底細(xì)胞樣型：缺少激素受體和HER-2表達(dá)，預(yù)后較差。

Ki-67是與細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原，位于細(xì)胞核內(nèi)，在有絲分裂中起到維持DNA結(jié)構(gòu)的功能，其表達(dá)隨細(xì)胞周期的變化而變化，可用于判斷細(xì)胞的增殖活性，是目前應(yīng)用最廣泛的增殖細(xì)胞標(biāo)志之一。據(jù)報(bào)道，Ki-67表達(dá)與多種惡性腫瘤如甲狀腺癌、膀胱癌和卵巢癌等的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)［4］，尤其在乳腺癌的診治與預(yù)后判斷等方面具有重要的臨床參考價(jià)值。在不同年齡和不同類型的乳腺癌中，Ki-67表達(dá)也有所不同，可作為乳腺癌無病生存率和無復(fù)發(fā)生存率獨(dú)立和有意義的預(yù)后因素。目前，Ki-67已在臨床上作為乳腺癌病理診斷報(bào)告中不可或缺的重要病理標(biāo)記。在2011年，NCCN指南將Ki-67作為臨床應(yīng)用的病理學(xué)指標(biāo)之一。本研究根據(jù)Jalava等［5］將Ki-67表達(dá)強(qiáng)度分為低度（≤30%）和高度（＞30%），而Jalava等［5］報(bào)道顯示，Ki-67表達(dá)強(qiáng)度為高度者預(yù)后較差。本研究結(jié)果表明，AR表達(dá)與Ki-67高強(qiáng)度表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，說明AR高表達(dá)者其腫瘤細(xì)胞增殖能力較弱，預(yù)后較好。

原癌基因HER2屬于表皮生長因子受體，可調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長、分化和增殖，HER2基因擴(kuò)增引起HER2受體蛋白過度表達(dá)，且隨著陽性表達(dá)率的升高，病理分級也增高［6］，但預(yù)后較差。臨床上，ER（-）/HER2（+）亞群患者常表現(xiàn)為腫瘤惡性程度高、生存率低、病情進(jìn)展迅速、易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)，但由于曲妥珠單抗（HER2抗體）的問世，改善了HER2（+）乳腺癌患者的預(yù)后，影響了乳腺癌的診療模式。該藥治療療效明確，可加強(qiáng)HER2陽性轉(zhuǎn)移或早期可手術(shù)切除乳腺癌患者的化療效果。因此，推薦該藥單用或聯(lián)合化療用于早期可手術(shù)切除和轉(zhuǎn)移性HER2（+）乳腺癌的治療。但臨床上仍有相當(dāng)一部分患者對HER2抗體無反應(yīng)，甚至出現(xiàn)了耐藥性。因此，針對這部分乳腺癌患者的遺傳基礎(chǔ)和分子生物學(xué)的深入研究將是醫(yī)學(xué)上的研究熱點(diǎn)之一。本研究結(jié)果顯示，AR在ER（-）/HER2（+）患者中表達(dá)率為69.57%，說明ER（-）/HER2（+）亞群中AR表達(dá)率較高，為部分乳腺癌患者提供了可能的臨床治療方向。

女性體內(nèi)的雄激素包括由卵巢、腎上腺分泌的睪酮及由腎上腺分泌的雄烯二酮和脫氫表雄酮（DHEA）。有研究表明，所有正常乳腺上皮均表達(dá)AR，AR可維持正常乳腺的發(fā)育，并與ER共同保持乳腺內(nèi)分泌的平衡［7］。然而，AR也可以增加乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)，提高惡性腫瘤細(xì)胞增殖率。有研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后婦女血液中AR濃度升高者其乳腺癌危險(xiǎn)性明顯增高，且AR在80%乳腺癌患者中呈高表達(dá)，說明AR在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要作用［8］。目前，關(guān)于AR與乳腺癌生存率的報(bào)道不一。Peters等［9］發(fā)現(xiàn)，AR的高表達(dá)與乳腺癌的10年生存率呈負(fù)相關(guān)，但也有學(xué)者提出了相反的觀點(diǎn)，認(rèn)為AR高表達(dá)患者有更長的生存時間［10］。本研究結(jié)果顯示，AR的表達(dá)與年齡、腫瘤大小、絕經(jīng)與否、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期無明顯相關(guān)性，而與腫瘤組織學(xué)分級、淋巴脈管侵犯、Ki-67高強(qiáng)度表達(dá)相關(guān)，提示AR（-）者具有惡性程度較高、侵襲性強(qiáng)、預(yù)后較差的臨床特征，而AR（+）者具有腫瘤分化和預(yù)后較好的臨床特點(diǎn)。

目前，關(guān)于AR與HER2關(guān)系的研究較少，由于ER和HER2同時表達(dá)者較少。有報(bào)道研究ER（-）患者，結(jié)果顯示AR高表達(dá)與HER2的表達(dá)強(qiáng)度相關(guān)［11］。本研究中，AR的表達(dá)率高達(dá)69.57%，陰性者僅為30.43%，二者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明在ER（-）/HER2（+）亞群中，AR與HER2的表達(dá)相關(guān)。

綜上所述，AR在ER（-）/HER2（+）亞群乳腺癌中表達(dá)較高，其表達(dá)主要與腫瘤組織學(xué)分級、淋巴脈管侵犯、高的Ki-67指數(shù)顯著相關(guān)，提示AR高表達(dá)者具有較好的臨床預(yù)后，但目前關(guān)于AR與乳腺癌的生存率報(bào)道不一致，可能與各研究對象和激素水平不同所致。由于本研究對象數(shù)量的限制，并未進(jìn)行AR表達(dá)與患者總生存率關(guān)系的分析。因此，在今后的工作中，將進(jìn)一步大樣本研究AR與HER2、ER（-）/HER2（+）患者總生存率的關(guān)系。而且，隨著對乳腺癌基礎(chǔ)和分子生物學(xué)的深入研究，期待對乳腺癌進(jìn)行更深、更詳細(xì)的分型，以便對乳腺癌患者進(jìn)行精確治療。

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