（1，3）-β-D葡聚糖和半乳甘露聚糖聯(lián)合檢測(cè)在侵襲性真菌感染診斷中的應(yīng)用

甄拴平，王 華，雷利強(qiáng)，黨麗君，趙雪蓮

（寶雞市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西寶雞721001）

（1，3）-β-D葡聚糖和半乳甘露聚糖聯(lián)合檢測(cè)在侵襲性真菌感染診斷中的應(yīng)用

甄拴平，王 華，雷利強(qiáng)，黨麗君，趙雪蓮

（寶雞市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西寶雞721001）

目的 評(píng)價(jià)（1，3）-β-D葡聚糖檢測(cè)（G試驗(yàn)）聯(lián)合半乳甘露聚糖檢測(cè)（GM試驗(yàn)）在侵襲性真菌?。↖FD）診斷中的價(jià)值。方法 回顧性分析我院2013年12月至2016年2月門診及住院疑似IFD的患者，根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)分為臨床診斷IFD 145例，非IFD 476例，檢測(cè)分析G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)及聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度（Sen）、特異性（Spe）、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（PPV）、陰性預(yù)測(cè)值（NPV）及Youden指數(shù)。結(jié)果 以臨床診斷為IFD的為真陽(yáng)性組，以非IFD為真陰性組。G試驗(yàn)的Sen、Spe、PPV、NPV、Youden指數(shù)分別為89.66%、86.76%、67.36%、96.50%、0.7642；GM試驗(yàn)的Sen、Spe、PPV、NPV、Youden指數(shù)分別為60.00%、88.45%、61.27%、88.45%、0.485；G試驗(yàn)的Sen顯著高于GM試驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；G試驗(yàn)與GM試驗(yàn)并聯(lián)檢測(cè)Sen、Spe、PPV、NPV、Youden指數(shù)分別為98.62%、79.83%、65.30%、99.50%、0.7845，其Sen、NPV均高于G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)單獨(dú)檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)，能提高IFD的診斷敏感性，減少假陰性的發(fā)生，對(duì)IFD的早期快速診斷比單獨(dú)檢測(cè)更有價(jià)值。

（1，3）-β-D-葡聚糖； 半乳甘露聚糖； 侵襲性真菌病早期診斷； 診斷效能

侵襲性真菌?。╥nvasive fungal disease，IFD）系指侵襲性真菌引起的嚴(yán)重感染，即侵襲性真菌侵入人體，在組織、器官或血液中生長(zhǎng)繁殖，并導(dǎo)致組織損傷及炎癥反應(yīng)的疾病。由于IFD臨床診斷困難，缺乏早期診斷手段，其發(fā)病率及死亡率呈逐年上升趨勢(shì)［1-2］。因此，早期快速準(zhǔn)確地診斷和治療IFD，越來(lái)越受到臨床醫(yī)生的重視，也是目前急需解決的關(guān)鍵問(wèn)題。本研究通過(guò)G試驗(yàn)與GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)，評(píng)價(jià)兩者對(duì)IFD的診斷價(jià)值。

材料與方法

1 標(biāo)本來(lái)源

收集2013年12月至2016年2月寶雞市中醫(yī)醫(yī)院門診及住院病人，根據(jù)歐洲癌癥研究治療組織和真菌病研究組（EORTC/MSG）的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］將患者分為臨床診斷IFD組145例及非IFD組476例。G試驗(yàn)使用無(wú)熱源肝素鋰抗凝血漿，GM使用促凝血清。

2 試驗(yàn)方法

2.1 G試驗(yàn) 用無(wú)熱原抗凝采血管（肝素鈉）采取靜脈血2 mL，3 000 r/min離心60 s，取0.1 mL血漿加入0.9 mL的樣品處理液中，混合后置于 T01智能恒溫儀70℃恒溫10min，取出后立即放入冷水浴中，冷卻至30℃以下，即為待測(cè)樣品。取待測(cè)樣品0.2 mL直接加入酶反應(yīng)主劑中，溶解后移液至標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)管中，插入MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)中進(jìn)行反應(yīng)，1 h反應(yīng)結(jié)束后由標(biāo)準(zhǔn)曲線自動(dòng)計(jì)算出待測(cè)血漿中1-3-β-D葡聚糖含量。判斷標(biāo)準(zhǔn)：1-3-β-D葡聚糖含量≥20 pg/mL為陽(yáng)性；10～＜20 pg/mL為可疑；＜10 pg/mL為陰性。

2.2 GM試驗(yàn) 采用ELISA方法檢測(cè)患者血清GM抗原濃度。試劑為美國(guó)RIORAD公司產(chǎn)品，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書操作。每批次血清學(xué)檢測(cè)均設(shè)置臨界值對(duì)照及陰/陽(yáng)性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過(guò)血清學(xué)指數(shù)（I）表示：I=樣本OD值/Cot-off臨界值血清OD值。實(shí)驗(yàn)血清指數(shù)I＞0.5為陽(yáng)性，＜0.5為陰性。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0數(shù)據(jù)包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。率的比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 兩組G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)結(jié)果

621例患者中臨床診斷IFD 145例，為真陽(yáng)性組，排除IFD 476例，為真陰性組；依據(jù)試劑盒提供的參考范圍為依據(jù)，G試驗(yàn)以≥20pg/mL為陽(yáng)性，GM試驗(yàn)以血清學(xué)指數(shù)I＞0.5為陽(yáng)性。G試驗(yàn)及/或GM試驗(yàn)為陽(yáng)性即判斷為陽(yáng)性。結(jié)果見表1。

表1 兩組G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)結(jié)果（例）

2 G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)單獨(dú)和聯(lián)合應(yīng)用診IFD的效能分析

G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)、G+GM實(shí)驗(yàn)（并聯(lián)及串聯(lián)）的Sen、Spe、PPV、NPV、Youden指數(shù)見表2。與G試驗(yàn)相比，GM試驗(yàn)的Sen、NPV、Youden指數(shù)較低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；G試驗(yàn)與GM試驗(yàn)并聯(lián)檢測(cè)的Sen顯著高于G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)的單獨(dú)檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；G+GM試驗(yàn)并聯(lián)檢測(cè)的NPV、Youden指數(shù)均高于GM試驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），G+GM試驗(yàn)串聯(lián)檢測(cè)Spe、PPV高于G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)的單獨(dú)檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），串聯(lián)試驗(yàn)的Youden指數(shù)與GM試驗(yàn)接近，低于G試驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)單獨(dú)和聯(lián)合應(yīng)用診IFD的效能

討 論

近年來(lái)由于廣譜抗生素、糖皮質(zhì)激素、細(xì)胞毒藥物及免疫抑制劑的廣泛使用，器官移植的開展，以及艾滋病等免疫缺陷的增多等，IFD患者在臨床上越來(lái)越多，我院以ICU、呼吸內(nèi)科、腫瘤血液科為主。目前，IFD的傳統(tǒng)檢測(cè)方法主要為真菌培養(yǎng)和組織活檢，但由于真菌培養(yǎng)歷時(shí)太長(zhǎng)，且陽(yáng)性率低，而組織病理學(xué)檢查及深部組織培養(yǎng)具有創(chuàng)傷性，故限制了臨床的早期診斷。近年來(lái)，外周血標(biāo)本、G試驗(yàn)及GM試驗(yàn)頗受關(guān)注。

（1，3）-β-D葡聚糖是酵母菌和絲狀真菌，占真菌細(xì)胞壁成分50%以上。研究表明，除接合菌外，所有真菌細(xì)胞壁上都含有（1，3）-β-D葡聚糖，當(dāng)真菌進(jìn)入人體血液或深部組織后，經(jīng)吞噬細(xì)胞的吞噬、消化等處理后，（1，3）-β-D葡聚糖可從細(xì)胞壁中釋放出來(lái)，從而使血液及其它體液（尿、腦脊液、腹水、胸水等）中（1，3）-β-D葡聚糖含量增高［4］。目前，（1，3）-β-D葡聚糖已成為真菌感染的有效標(biāo)志物［5］，通過(guò)G試驗(yàn)的檢測(cè)可及時(shí)反映真菌的感染情況。

半乳甘露聚糖（GM）是曲霉菌屬細(xì)胞壁的重要組成成分之一，發(fā)生曲霉菌感染時(shí)，菌絲生長(zhǎng)時(shí)GM可以從菌絲頂端釋放入血，GM釋放量與菌量成正比，可以反映感染程度，在血清中存在時(shí)間較短，所以可以作為療效評(píng)價(jià)的指標(biāo)［6］。

本研究發(fā)現(xiàn)：

（1）G試驗(yàn)的靈敏度、特異性、陰性預(yù)測(cè)值均較高，提示G試驗(yàn)用于診斷IFD具有較高的臨床價(jià)值。而其陽(yáng)性預(yù)測(cè)值較低，主要是由于假陽(yáng)性結(jié)果的影響所致，本研究中63例非IFD患者出現(xiàn)G試驗(yàn)假陽(yáng)性，其中30例患者有血液制品（血小板、紅細(xì)胞等）輸注史，21例患者曾使用纖維素膜進(jìn)行血液透析，6例患者有過(guò)鏈球菌感染史，另外6例患者病史中未查明相關(guān)因素的存在。

（2）GM試驗(yàn)結(jié)果中，在476例非IFD患者中，GM試驗(yàn)陽(yáng)性55例，此為假陽(yáng)性結(jié)果，假陽(yáng)性率高達(dá)11.5%，從而導(dǎo)致PPV較低，僅為61.27%，經(jīng)查閱患者病歷資料分析，認(rèn)為主要與患者使用過(guò)半合成青霉素，尤其是哌拉西林/他唑巴坦［7］，部分患者腸道定植曲霉素菌，以及標(biāo)本溶血、黃疸、脂血等因素有關(guān)。在145例IFD患者中，GM試驗(yàn)陰性者達(dá)58例，此為假陰性結(jié)果，分析原因主要為部分患者在檢測(cè)前使用了抗真菌藥物抑制了曲霉菌的生長(zhǎng)，導(dǎo)致向血中釋放GM減少；加之GM釋放入血并不是持續(xù)存在，而是會(huì)很快消除，這也提示臨床，對(duì)疑似 IFD患者應(yīng)重復(fù)GM試驗(yàn)以提高陽(yáng)性檢出率。

（3）G試驗(yàn)與GM試驗(yàn)并聯(lián)分析相比于單獨(dú)檢測(cè)，大大提高了敏感度和陰性預(yù)測(cè)值，有助于真菌感染的早期診斷，可為臨床抗真菌感染搶先治療提供例依據(jù)。串聯(lián)分析時(shí)特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值較高，提示日常檢測(cè)中可以通過(guò)對(duì)G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行并聯(lián)與串聯(lián)分析，以提高IFD患者診斷效能。

（4）在我們的檢測(cè)應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，GM試驗(yàn)在一周內(nèi)連續(xù)兩次結(jié)果陽(yáng)性作為診斷依據(jù)能提供更好的準(zhǔn)確度，同時(shí)對(duì)GM試驗(yàn)單次檢測(cè)陰性而臨床疑似IFD的患者，再次檢測(cè)可提高陽(yáng)性檢出率。這提示臨床，對(duì)曲霉菌感染的高?；颊?，進(jìn)行GM試驗(yàn)的連續(xù)檢測(cè)，有助于提高診斷結(jié)果的可靠性。

總之，G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)的聯(lián)合檢測(cè)，能提高IFD診斷準(zhǔn)確性，減少假陽(yáng)性和假陰性的發(fā)生，可為IFD的早期快速診斷提供有效的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

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（張?jiān)鑫渚庉嫞?/p>

G Test Combined with GM Test in Diagnosis of Invasive Fungal Disease

ZHEN Shuan-ping，WANG Hua，LEILi-qiang，DANG Li-jun，ZHAO Xue-lian
（Clinical Laboratory，Traditional Chinese Medicine Hospital，Baoji city，Baoji721001，China）

Objective To evaluate（1，3）-beta glucan D detection test（G test）combined with galactomannan detection test（GM test）in the diagnosis value of invasive fungal disease（IFD）.M ethods Retrospective analysis of 145 cases of clinical diagnosis IFD and 476 cases of non IFD were included in the study，G test and GM test were performed.and Test sensitivity（Sen），specificity（Spe），positive predictive value（PPV），negative predictive value（NPV）and Youden index were analyzed.Results with G test，Sen，Spe，PPV，NPV，Youden index were 89.66%，86.76%，67.36%，96.50%，0.7642；with GM test Sen，Spe，PPV，NPV，Youden index were 60.00%，88.45%，61.27%，88.45%，0.485；G test Sen is significantly higher than GM test，the difference was statistically significant（P＜0.05）.with combined detection of G test and GM test，Sen，Spe，PPV，NPV，Youden index were 98.62%，79.83%，65.30%，99.50%and 0.7845；of which the Sen，the NPV were higher than G test，GM test performed alone，the difference was statistically significant（P＜0.05）.Conclusion Combine G test with GM test can improve the diagnostic sensitivity of IFD and reduce false negative andearly rapid diagnosis of IFD.The method is worth of recommendation in clinical practice.

（1，3）-beta-D-glucan； Galactomannan； Early diagnosis of invasive fungal disease；Diagnostic performance

10.11748/bjm y.issn.1006-1703.2016.06.029

2016-03-17；

2016-03-30