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    應(yīng)用細(xì)針穿刺制作細(xì)胞塊技術(shù)診斷腮腺區(qū)腫塊的臨床意義

    2016-11-04 01:03:59陳宏方慶全涂金花蔡巧玲張素花
    華西口腔醫(yī)學(xué)雜志 2016年5期
    關(guān)鍵詞:細(xì)針腮腺病理學(xué)

    陳宏方慶全涂金花蔡巧玲張素花

    1.廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部;2.病理科;3.口腔科;4.超聲影像科,廈門 361003

    應(yīng)用細(xì)針穿刺制作細(xì)胞塊技術(shù)診斷腮腺區(qū)腫塊的臨床意義

    陳宏1方慶全2涂金花2蔡巧玲3張素花4

    1.廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部;2.病理科;3.口腔科;4.超聲影像科,廈門 361003

    目的 探討超聲引導(dǎo)下細(xì)針穿刺制作細(xì)胞塊在診斷腮腺區(qū)腫塊方面的應(yīng)用價值。方法 在彩色超聲儀引導(dǎo)下,對285個腮腺區(qū)腫塊進(jìn)行細(xì)針穿刺,將穿刺標(biāo)本制成細(xì)胞塊,以進(jìn)行病理學(xué)診斷。對非腫瘤性腫塊采取保守治療,囊腫與腫瘤性腫塊采取手術(shù)治療。對術(shù)后病理確診為腺樣囊性癌(ACC)與多形性腺瘤(PA)對應(yīng)的細(xì)胞塊行干細(xì)胞因子受體CD117免疫組織化學(xué)檢測。結(jié)果 標(biāo)本制作滿意率為 95.1%(271/285),診斷準(zhǔn)確率為 94.5% (256/271);診斷敏感度為87.0%(67/77),特異度為98.1%(157/160)。CD117在ACC中的陽性表達(dá)率為95.2% (20/21),在PA中為20.3%(25/123),ACC中陽性表達(dá)率明顯高于PA,二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論超聲引導(dǎo)下腮腺區(qū)腫塊細(xì)針穿刺制作細(xì)胞塊結(jié)合分子標(biāo)志物檢測,對腮腺區(qū)腫塊的診斷具有重要意義。

    腮腺; 腫塊; 細(xì)針穿刺; 細(xì)胞塊; 分子標(biāo)志物

    腮腺腫瘤的自身特點(diǎn)、腮腺的生理功能以及腮腺區(qū)復(fù)雜的解剖結(jié)構(gòu)使腮腺腫瘤的切取活檢成為禁忌[1]。如果術(shù)前能精確診斷腫塊性質(zhì),一些腮腺區(qū)非腫瘤性腫塊就可以避免手術(shù)治療,腫瘤性腫塊也可為手術(shù)方式的選擇提供依據(jù)。細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查(fine needle aspiration cytology,F(xiàn)NAC)是近20年來發(fā)展起來的一種簡便、快速、準(zhǔn)確的新診斷方法[2-3]。有學(xué)者[4]認(rèn)為,F(xiàn)NAC所取得的細(xì)胞標(biāo)本量不足,且缺乏組織學(xué)結(jié)構(gòu),其結(jié)果有一定的局限性。為克服這種局限性,筆者在超聲引導(dǎo)下,行腮腺區(qū)腫塊細(xì)針穿刺并制作成細(xì)胞塊,結(jié)合分子標(biāo)志物檢測,研究FNAC在診斷腮腺區(qū)腫塊方面的價值。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    選擇2011年1月—2014年12月廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院收治的腮腺區(qū)腫塊并有隨訪資料的患者783例,對其中曾行超聲引導(dǎo)下FNAC并制作成細(xì)胞塊的患者276例(腫塊285個)進(jìn)行回顧分析。276例患者中男性174例,女性102例,年齡17~61歲,平均年齡(38.4±10.3)歲。

    1.2 方法

    1.2.1 超聲檢查 采用LOGIQ7彩色超聲儀(美國通用電氣公司)對患者的腮腺區(qū)腫塊進(jìn)行多軸位掃描,仔細(xì)觀察腫塊的部位、數(shù)量、形狀、大小,以及邊界情況,有無囊性變,與血管和神經(jīng)的關(guān)系,結(jié)合患者病史,選定符合行FNAC適應(yīng)證的腫塊。

    1.2.2 穿刺 彩色超聲儀引導(dǎo)下,用6號注射針頭配20 mL注射器,經(jīng)皮刺入預(yù)先選定的腮腺區(qū)腫塊內(nèi),持續(xù)保持約200 kPa負(fù)壓(注射器針?biāo)ㄎ挥?0 mL處),多方向提插針8~10次,所需標(biāo)本進(jìn)入針頭柄及針管后,帶約40 kPa負(fù)壓(注射器針?biāo)ㄎ挥? mL處)拔針。

    1.2.3 制作細(xì)胞塊 1)穿刺組織為碎塊時細(xì)胞塊制作法:用包埋紙將穿刺條形組織或組織碎塊包裹后,置于包埋盒內(nèi),按常規(guī)組織學(xué)脫水處理。2)穿刺組織為液體時細(xì)胞塊制作法:將穿刺的液體標(biāo)本直接打在載玻片上,用穿刺針將載玻片上的標(biāo)本聚集成細(xì)胞團(tuán),吸棄周圍多余的血液,將載玻片略傾斜,浸入95%乙醇中0.5~1.0 min。取出載玻片浸入10%中性甲醛溶液中固定30~60 min。拿出載玻片,用刀片將細(xì)胞團(tuán)刮下,放入包埋盒(如細(xì)胞團(tuán)塊太小,可用包埋紙包好),固定2~4 h,常規(guī)脫水處理。3)穿刺物過少時細(xì)胞塊制作法:15~20 mL生理鹽水反復(fù)抽吸沖洗穿刺針頭與針管,將沖洗液注入50 mL尖底離心管內(nèi),2 000 r·min-1離心10 min,輕輕吸棄上清液,離心沉渣用10%中性甲醛溶液固定1 h,再以2 000 r·min-1離心10 min,吸棄上清液,滴加少許已經(jīng)熔化的瓊脂,搖動離心管使其充分混合,將離心管放入冰箱冷藏20 min,使混合液呈凝膠狀。挑出錐形瓊脂塊,切去多余的瓊脂,將瓊脂塊放入包埋盒,10%甲醛溶液固定2 h后常規(guī)脫水處理。

    1.2.4 標(biāo)本質(zhì)量評估 細(xì)胞塊切片缺乏足夠、保存較好和結(jié)構(gòu)清晰的上皮細(xì)胞為不滿意標(biāo)本,否則為滿意標(biāo)本。

    1.2.5 免疫組織化學(xué)檢測 使用Ventana Benchmark XT全自動免疫組織化學(xué)檢測儀,對經(jīng)術(shù)后病理組織學(xué)確診為腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)與多形性腺瘤(pleomorphic adenoma,PA)的細(xì)胞塊檢測干細(xì)胞因子受體CD117的表達(dá)。CD117試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司,其陽性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜呈棕黃色顆粒,參照文獻(xiàn)[5]判斷結(jié)果。先按照染色強(qiáng)度計分:細(xì)胞未著色為0分,淺黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分;再按陽性細(xì)胞所占百分比計分:無陽性細(xì)胞為0分,陽性細(xì)胞數(shù)≤10%為1分,11%~50%為2分,51%~75%為3分,>75%為4分。將兩項得分結(jié)果相加得出CD117表達(dá)強(qiáng)度:0~1分為陰性(-),2~3分為弱陽性(+),4~5分為中度陽性(++),6~7分為強(qiáng)陽性(+++),+、++、+++均計為陽性。

    1.2.6 治療 細(xì)胞病理學(xué)診斷為炎癥腫塊的患者給予抗菌藥物治療1~4周,治療無效者行手術(shù)治療;腮腺結(jié)核接受抗結(jié)核治療;嗜酸性肉芽腫和腮腺結(jié)節(jié)病患者行糖皮質(zhì)激素治療;囊腫和腮腺腫瘤行手術(shù)治療。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

    采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,組間比較采用卡方檢驗,檢驗水準(zhǔn)為雙側(cè)α=0.05。

    2 結(jié)果

    2.1 標(biāo)本滿意率

    穿刺285個腮腺區(qū)腫塊, 有271個獲得了滿意的標(biāo)本,滿意率為95.1%,14個(4.9%)標(biāo)本不滿意。

    2.2 診斷準(zhǔn)確性分析

    本組病例診斷的總準(zhǔn)確率為94.5%(256/271)。

    2.2.1 保守治療組 10個經(jīng)FNAC診斷為炎性腫塊的患者有1例抗菌藥物治療無效,后經(jīng)手術(shù)治療證實為誤診。3個經(jīng)FNAC診斷為腮腺結(jié)核的患者經(jīng)規(guī)范抗結(jié)核治療后均痊愈。18個診斷為淋巴結(jié)反應(yīng)性增生者經(jīng)藥物治療15~20 d,17個腫塊縮小,質(zhì)地變軟,治療結(jié)束時,腮腺已基本恢復(fù)正常;1例誤診。2個嗜酸性肉芽腫和1個腮腺結(jié)節(jié)病患者經(jīng)糖皮質(zhì)激素治療后均痊愈。本組誤診2例,診斷準(zhǔn)確性為94.1% (32/34)。

    2.2.2 手術(shù)治療組 以術(shù)后病理結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn),本組病例診斷為腮腺囊腫的準(zhǔn)確性為92.3%(12/13),腮腺腫瘤的準(zhǔn)確性為 94.6%(212/224)。由表1可見,F(xiàn)NAC與術(shù)后病理學(xué)診斷相比,其診斷敏感度為87.0%(67/77)、特異度為98.1%(157/160)。

    2.3 免疫組織化學(xué)檢查結(jié)果

    經(jīng)術(shù)后組織病理學(xué)確診為ACC的細(xì)胞塊共21個,ACC細(xì)胞塊圖像見圖1;確診為PA的細(xì)胞塊共123個,PA細(xì)胞塊圖像見圖2。CD117在ACC和PA中表達(dá)的圖像見圖3、4。CD117在ACC中的陽性表達(dá)率為95.2%(20/21),在PA中為20.3%(25/123),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=43.43,P<0.01)。

    表 1 FNAC與組織病理學(xué)診斷結(jié)果比較Tab 1 FNAC diagnosis compared with histopathology

    圖 1 ACC細(xì)胞塊 蘇木精-伊紅染色 × 100Fig 1 The ACC cell block hematoxylin-eosin staining × 100

    圖 2 PA細(xì)胞塊 蘇木精-伊紅染色 × 100Fig 2 The PA cell block hematoxylin-eosin staining × 100

    圖 3 CD117在ACC中的陽性表達(dá) DAB × 100Fig 3 Positive expression of CD117 in the ACC DAB × 100

    圖 4 CD117在PA中的陰性表達(dá) DAB × 100Fig 4 Negative expression of CD117 in the PA DAB × 100

    3 討論

    腮腺區(qū)腫塊的臨床表現(xiàn)多變,常見的有腫瘤、囊腫、炎癥、結(jié)核、淋巴結(jié)病變等。不同類型腫塊的治療手段和方法各不相同,部分病例不需要手術(shù)治療,因此明確診斷對于治療十分重要。本研究中,34個腫塊通過FNAC診斷為炎性腫塊、腮腺結(jié)核、淋巴結(jié)反應(yīng)性增生等非腫瘤性疾病,均給予對癥治療,32個非腫瘤性腫塊的患者避免了手術(shù),因此具有一定的臨床意義。

    與傳統(tǒng)FNAC相比較,超聲引導(dǎo)下的FNAC的適應(yīng)證更廣:1)傳統(tǒng)FNAC不能成功穿刺的腫塊,如直徑>1 cm但不能觸及的腫塊;2)腫塊可觸及但直徑<1 cm;3)深部腮腺區(qū)腫塊;4)鄰近血管或神經(jīng)的腫塊;5)囊性或混合性腫塊。有報道[1]指出,在頭頸部疾病的診斷中,超聲誘導(dǎo)下的穿刺成功率接近100%。此外,超聲能夠發(fā)現(xiàn)穿刺區(qū)的血管,可以指導(dǎo)醫(yī)師選擇更加合理的進(jìn)針位置及角度,減少損傷血管的風(fēng)險;超聲還能夠及時發(fā)現(xiàn)某些穿刺的并發(fā)癥,如亞臨床出血,有利于醫(yī)師及早處理。通過超聲引導(dǎo)下穿刺而制成的細(xì)胞塊具有如下優(yōu)點(diǎn):1)細(xì)胞塊切片能保持部分原有組織的排列結(jié)構(gòu),細(xì)胞成分豐富,圖像背景清晰,易于作出準(zhǔn)確診斷;2)切片的細(xì)胞集中,克服了傳統(tǒng)穿刺涂片中細(xì)胞重疊堆積、厚薄不均的現(xiàn)象;3)細(xì)胞塊可連續(xù)切片,能有效減少漏診;4)可反復(fù)重切,克服傳統(tǒng)穿刺涂片固定不佳、脫片、染色失敗等難以彌補(bǔ)的缺陷;5)能作多種組織化學(xué)染色、免疫組織化學(xué)染色或分子病理學(xué)檢測。但是通過該方法制作的細(xì)胞塊也有一定的局限性,在穿刺吸出物極少時難以完成。

    細(xì)針穿刺所能取得的標(biāo)本量相對于活檢要少得多,因此細(xì)胞塊制作有一定難度,故熟練掌握細(xì)胞塊制作方法尤為重要。操作技術(shù)關(guān)鍵點(diǎn)有以下幾點(diǎn)。1)在穿刺前需事先做好相關(guān)準(zhǔn)備工作,包括試劑、用品、器械等,如生理鹽水不但要事先備好,且必須處于開啟隨時可用狀態(tài),一旦發(fā)現(xiàn)穿刺吸取物過少,應(yīng)立即取15~20 mL生理鹽水反復(fù)抽吸沖洗穿刺針管及針頭,如果生理鹽水不能在第一時間取用,穿刺物就有可能干涸并/或黏附于穿刺針管及針頭內(nèi),無法沖洗出來。2)拔針時,需帶約40 kPa負(fù)壓拔針,否則穿刺物有可能被重新“拉回”腫塊內(nèi)或遺留在穿刺針道內(nèi)。3)需根據(jù)穿刺物的性狀及穿刺吸取物量的多少,采取不同的方法制作細(xì)胞塊,如果方法選擇錯誤就有可能造成細(xì)胞塊制作失敗。如穿刺液采用穿刺組織碎塊制作法就會制作失敗。4)穿刺液細(xì)胞塊制作過程中,借助空氣壓力將針管內(nèi)的穿刺液推至載玻片上時,推動的力量應(yīng)適宜,推出穿刺液應(yīng)盡量集中,否則穿刺液過于分散后就難于聚集成團(tuán)。5)穿刺物過少的細(xì)胞塊制作中,有兩次離心后棄上清液的步驟,不能簡單粗暴地傾去上清液,而應(yīng)該用吸管輕輕吸棄上清液,否則有可能連同沉淀物一起傾去,導(dǎo)致標(biāo)本遺失和細(xì)胞塊制作失敗。6)用10%中性甲醛溶液固定穿刺標(biāo)本或離心沉淀物時,甲醛溶液的體積必須是標(biāo)本體積的10倍以上,固定要充分,若固定不佳將影響制片質(zhì)量,造成難以制片,診斷困難,誤診或細(xì)胞塊制作失敗。

    FNAC制作細(xì)胞塊應(yīng)用于診斷腮腺區(qū)腫塊是術(shù)前明確腮腺區(qū)腫物診斷的方法之一,有一定的臨床意義;但是目前國內(nèi)外口腔病理醫(yī)生在日常工作中并沒有廣泛應(yīng)用該方法,其原因有以下幾點(diǎn)。1)許多臨床醫(yī)生對術(shù)前FNAC檢查的重要性及診斷準(zhǔn)確性認(rèn)識不夠[6],許多臨床醫(yī)生與病理醫(yī)生對細(xì)針穿刺制作細(xì)胞塊的臨床意義認(rèn)識不夠。2)受傳統(tǒng)FNAC局限性的影響,醫(yī)生會認(rèn)為通過針吸的組織是腫物的某一點(diǎn),獲得腫物成分少,難以概括腫瘤全貌。筆者穿刺時,在腫物內(nèi)多方向提插針8~10次,克服了此局限性,為制作細(xì)胞塊奠定了基礎(chǔ)。3)FNAC對位置深而小的腫物有可能漏診或誤診[7],且傳統(tǒng)FNAC易抽吸到囊腫液或血液,使穿刺失敗。筆者在超聲引導(dǎo)下進(jìn)行FNAC,克服了傳統(tǒng)FNAC的諸多局限性。4)由于細(xì)針穿刺所能取得的標(biāo)本量相對于活檢要少得多,制作細(xì)胞塊難度很大,如果穿刺操作者沒有熟練掌握細(xì)胞塊制作方法,制作細(xì)胞塊的成功率很低,有可能因此而放棄該方法。筆者所在單位曾于2006~2009年間因制作細(xì)胞塊的成功率低而暫停使用該方法,后因改進(jìn)了細(xì)胞塊的制作方法而得以恢復(fù)。

    腮腺腫瘤穿刺的種植性復(fù)發(fā)也是眾所擔(dān)心的問題之一。鄭蒼尚[7]研究發(fā)現(xiàn),未見由FNAC診斷所致的種植性腫瘤復(fù)發(fā)的病例和文獻(xiàn)報告。王芬等[6]在B超引導(dǎo)下對婦科盆腔腫物進(jìn)行針吸穿刺,未發(fā)現(xiàn)針道種植及感染。筆者穿刺時,在腮腺區(qū)腫物內(nèi)多方向提插針8~10次,尚未發(fā)現(xiàn)對PA等唾液腺腫瘤復(fù)發(fā)率有明顯影響。

    CD117(原癌基因蛋白質(zhì) C-kit)及其配體干細(xì)胞因子是人類多種組織細(xì)胞生長發(fā)育的重要調(diào)控因子,在造血及維持生殖細(xì)胞的存活、 增殖及分化過程中起重要作用[8]。Arbiser等[9]研究表明,CD117陽性表達(dá)的腫瘤易侵犯鄰近組織,易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。有研究[10]顯示,在常見的篩狀或?qū)嶓w型ACC中,CD117主要表達(dá)在細(xì)胞巢的內(nèi)層細(xì)胞;而在具有基底細(xì)胞樣特征的ACC中,CD117在瘤細(xì)胞巢全層均可觀察到。本研究發(fā)現(xiàn),CD117在ACC中的陽性表達(dá)率為95.2%(20/21),顯著高于PA的20.3%(25/123),有助于兩種腫瘤的診斷。CD117在ACC中強(qiáng)陽性表達(dá)對于該腫瘤的鑒別診斷具有一定的意義,而且這種過表達(dá)可能與治療和預(yù)后有一定相關(guān)性。Vila等[11]研究發(fā)現(xiàn),涎腺原發(fā)性ACC存在C-kit基因突變,其中11號外顯子突變率最高,9、13、17號外顯子也有一定的突變率,提示該基因可能與涎腺ACC的發(fā)病有關(guān)。梁軍等[12]研究發(fā)現(xiàn),CD117在上皮性卵巢癌組織血管生成擬態(tài)中的表達(dá)與腫瘤惡性程度有關(guān),是患者預(yù)后的重要指標(biāo)。此外,CD117還有助于鑒別ACC和基底細(xì)胞腺瘤與多形性低度腺癌。徐瑤等[13]研究發(fā)現(xiàn),CD117在ACC和基底細(xì)胞腺瘤間的強(qiáng)陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義;Andreadis等[14]和Penner 等[15]均認(rèn)為,C-kit蛋白有助于ACC和多形性低度腺癌的鑒別診斷。

    隨著分子診斷技術(shù)的進(jìn)步,有關(guān)涎腺腫塊分子標(biāo)志物檢測的研究[13-17]不斷深入,對于涎腺腫塊的診斷、預(yù)后甚至選擇合適的治療方案均具有重要作用。但是目前分子診斷技術(shù)多應(yīng)用于手術(shù)后涎腺腫塊的診斷,不能進(jìn)行早期診斷。本研究發(fā)現(xiàn),在超聲引導(dǎo)下行腮腺區(qū)FNAC并制作成細(xì)胞塊,結(jié)合分子標(biāo)志物檢測,能早期診斷涎腺腫塊,具有操作簡便,創(chuàng)傷小,并發(fā)癥少的優(yōu)點(diǎn),可以避免不必要的手術(shù),在腮腺區(qū)腫塊診斷方面具有重要意義。

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    (本文編輯 吳愛華)

    Clinical efficacy of the fine needle aspiration of the cell block in the diagnosis of parotid gland masses

    Chen Hong1, Fang Qingquan2, Tu Jinhua2, Cai Qiaoling3, Zhang Suhua4.
    (1. Pharmaceutical Department, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen 361003, China; 2. Dept. of Pathology, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen 361003, China; 3. Dept. of Stomatology, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen 361003, China; 4. Supersonic Phantom Branch, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen 361003, China)

    Correspondence: Fang Qingquan, E-mail: fqq1260@163.com.

    Objective To investigate the clinical significance of cell blocks obtained by ultrasound-guided fine needle aspiration in diagnosing parotid gland masses. Methods Cell blocks were made in 285 parotid gland masses by ultrasoundguided fine needle aspiration. Diagnosis was conducted using the cell blocks. Non-tumor masses were subjected to conservative treatment, and cysts and tumors were treated with surgery. The cell block sections from masses with the diagnosis of adenoid cystic carcinoma (ACC) and pleomorphic adenoma (PA) were applied to the detection of immunocytochemical staining for the stem cell factor receptor CD117. Results The satisfaction rate of the specimen was 95.1% (271/285). The accuracy rate of the diagnosis was 94.5% (256/271), the sensitivity was 87.0% (67/77), and the specificity was 98.1% (157/160). The positive rate of CD117 in ACC was 95.2% (20/21), whereas that in PA was 20.3% (25/123). The positive rate of CD117 in ACC was higher than that in PA (P<0.01). Conclusion The use of cell blocks obtained from ultrasound-guided fine needle aspiration, together with molecular marker detection, has great significance in diagnosing parotid gland masses.

    parotid gland; mass; fine needle aspiration; cell block; molecular marker

    R 780.2

    A [doi] 10.7518/hxkq.2016.05.010

    2016-03-15;

    2016-07-02

    陳宏,主管藥師,學(xué)士,E-mail:fqqch1999@163.com

    方慶全,主任技師,學(xué)士,E-mail:fqq1260@163.com

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