急性髓細(xì)胞白血病免疫分型及骨髓、血常規(guī)綜合研究

郭　斌，謝　寧，劉　文，李　英，李君安

(川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川南充 637000)

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·論著·

急性髓細(xì)胞白血病免疫分型及骨髓、血常規(guī)綜合研究

郭斌，謝寧△，劉文，李英，李君安

(川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川南充 637000)

目的探討骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、外周血液學(xué)和免疫分型對(duì)急性髓細(xì)胞白血病診療的臨床意義。方法顯微鏡檢查骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)，全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)外周血相關(guān)參數(shù)，流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀分析白血病細(xì)胞免疫標(biāo)志物，并對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果外周血細(xì)胞約85%的患者提示異常或幼稚細(xì)胞的存在，不同類型白血病其白細(xì)胞總數(shù)變化差異明顯(M1～2、M5以增高為主，M3以減低為主)；多數(shù)患者是貧血和血小板減少，但程度不同；白細(xì)胞分類中，儀器無法分類鑒別急性粒細(xì)胞和急性單核細(xì)胞，淋巴系統(tǒng)免疫標(biāo)志物CD7、CD10和CD2可交叉表達(dá)于髓系白血病，對(duì)治療和預(yù)后有臨床作用。結(jié)論外周血相關(guān)參數(shù)的檢測(cè)對(duì)白血病的早期篩查、鑒別診斷、預(yù)后判斷均有臨床意義，而免疫標(biāo)志物檢測(cè)是骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷和分型的補(bǔ)充和支持，且異常敏感標(biāo)志物的差異表達(dá)跟預(yù)后密切相關(guān)，可顯著提高白血病的診治率。

急性髓細(xì)胞白血??；骨髓細(xì)胞形態(tài)；外周血；免疫分型

白血病由于原始細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的相似性，單一的骨髓細(xì)胞顯微鏡檢查的診斷率約為80%，且無法進(jìn)行早期篩查和預(yù)后判斷。全自動(dòng)血液分析儀和流式技術(shù)擴(kuò)大了其對(duì)細(xì)胞所屬種類的識(shí)別能力，特別是對(duì)異常及原幼細(xì)胞的早期篩查具有良好的預(yù)見作用[1]。隨著單克隆抗體技術(shù)及流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展應(yīng)用，能更準(zhǔn)確地鑒別白血病細(xì)胞所屬系別來源并判斷分化程度，對(duì)臨床治療及預(yù)后有重要的臨床意義[2]。為探討綜合分析骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、外周血液學(xué)和免疫標(biāo)志物對(duì)白血病診療的臨床價(jià)值，現(xiàn)對(duì)72例急性白血病進(jìn)行檢測(cè)分析和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料檢測(cè)2014年1月至2015年6月該院初診的72例患者的骨髓及外周血標(biāo)本，男41例，女31例，年齡2～84歲。所有患者均經(jīng)外周血常規(guī)、骨髓形態(tài)學(xué)、細(xì)胞組織化學(xué)染色及免疫分型確診為急性白血病，其中急性粒細(xì)胞白血病(M1～2) 100 例，急性早幼粒細(xì)胞白血病(M3) 55例，急性單細(xì)胞白血病(M5) 105例。

1.2方法

1.2.1骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)抽取患者骨髓涂片，采用瑞氏染色，并于油鏡下分類計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，骨髓涂片必要時(shí)做過氧化物酶染色(POX)、過碘酸-雪夫染色(PAS)、特異性脂酶染色(AS-DCE)和醋酸萘酚酯酶染色(NAE/NaF)等細(xì)胞化學(xué)染色。

1.2.2血液常規(guī)檢驗(yàn)抽取患者外周血液，EDTA-K2抗凝，使用全自動(dòng)血液分析儀XE-5000(配套試劑)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，在綜合分析結(jié)果數(shù)據(jù)、儀器異常細(xì)胞報(bào)警提示和白細(xì)胞散點(diǎn)圖的基礎(chǔ)上，對(duì)外周血推片染色并進(jìn)行顯微鏡復(fù)查異常細(xì)胞。

1.2.3白血病細(xì)胞免疫表型分析應(yīng)用FACS-Calibur流式細(xì)胞儀(488 nm氬離子為激發(fā)光源)對(duì)每一例標(biāo)本進(jìn)行直接免疫熒光法檢測(cè)，設(shè)置對(duì)照管和試驗(yàn)管，分別加入標(biāo)本100 μL，3種熒光標(biāo)記抗體各20 μL，室溫避光孵育約15 min，再加入2 mL紅細(xì)胞溶解液，震蕩后置室溫10 min，離心后棄上清液，采用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌2次，加入15 mL PBS，上機(jī)待檢。以膜表面抗原大于20%為陽(yáng)性。所有檢測(cè)單克隆抗體、透膜劑、PERM、溶血素等試劑均購(gòu)自BD公司。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用Microsoft Excel 2007統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以百分比表示。

2　結(jié)　　果

2.1外周血細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果

2.1.1血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果急性髓細(xì)胞白血病(AML)M1～2患者外周血以白細(xì)胞增高(75%)、貧血(100%)及血小板減低(75%)為主，少數(shù)患者紅細(xì)胞和血小板正常；M3患者外周血以白細(xì)胞減低(64%)、貧血(100%)及血小板減低(82%)為主，少數(shù)患者白細(xì)胞增高，血小板正常；M5患者外周血以白細(xì)胞增高(66%)、貧血(90%)及血小板減低(95%)為主，少數(shù)患者白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HB)和血小板(PLT)正常。見表1。

2.1.2白細(xì)胞分類儀器可提示急性白血病約85%的患者存在異?；蛴字杉?xì)胞，散點(diǎn)圖也異常，其中M1～2患者有85%粒系比例減低，70%單核比例增高；M3患者中63%粒系比例減低，81%單核比例增高；M5患者中85%粒系比例減低；71%單核比例增高。見表2。

表1　　AML患者血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果(陽(yáng)性例數(shù)/檢測(cè)例數(shù))

表2　　AML患者WBC分類結(jié)果(陽(yáng)性例數(shù)/檢測(cè)例數(shù))

2.1.3貧血程度檢測(cè)結(jié)果M1～2、M3、M5患者中均出現(xiàn)不同程度貧血，且極重度貧血所占比例均較高，其中M1～2極重度貧血為50%，M3為100%,M5為57%。見表3。

2.2免疫分型結(jié)果M1～2 主要表達(dá)的抗原陽(yáng)性為CD117、HLA-DR、CD13，M3為CD33、CD15、CD64，M5 為CD13、CD117、CD33、HLA-DR；髓系抗原在淋巴系白血病中可出現(xiàn)交叉表達(dá)的是CD13、CD33、CD117，淋巴系抗原在髓系白血病的交叉表達(dá)為CD7、CD10、CD2(表達(dá)量大于20%為陽(yáng)性)。見表4。

表3　　AML患者貧血程度檢測(cè)結(jié)果(陽(yáng)性例數(shù)/檢測(cè)例數(shù)，g/L)

表4　　髓系細(xì)胞免疫表型分型結(jié)果(陽(yáng)性例數(shù)/檢測(cè)例數(shù))

3　討　　論

骨髓形態(tài)學(xué)分型在診斷白血病中具有直觀、快捷性，結(jié)合細(xì)胞特殊組織化學(xué)染色對(duì)診斷的準(zhǔn)確率可進(jìn)一步提高，但也存在不足：(1)屬特殊標(biāo)本，需有嚴(yán)格的適應(yīng)證，不利于早期篩檢。(2)受到檢驗(yàn)人員的主觀認(rèn)識(shí)和細(xì)胞異常表達(dá)等影響，約有20%的誤診率。(3)單純的形態(tài)學(xué)檢查對(duì)臨床用藥和預(yù)后評(píng)估無指導(dǎo)作用。因此，將外周血液學(xué)、形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)相結(jié)合成為早期診斷、治療和預(yù)后判斷白血病的必然趨勢(shì)[3-5]。

外周血分析顯示，無論是AML或急性淋巴細(xì)胞白血病，由于細(xì)胞對(duì)骨髓的侵襲而抑制了紅系和巨核系的增殖，導(dǎo)致患者貧血和血小板減少，2項(xiàng)指標(biāo)可作為早期疾病提示，但不同類疾病其貧血和血小板減少程度不盡相同，有利于疾病鑒別，AML均以極重度貧血為主，最嚴(yán)重的是M3[6]。本組患者均為極重度貧血，但M5患者也有約40%不出現(xiàn)貧血情況，須引起重視。本組全部病例血小板均為減少。

本研究血液分析儀對(duì)異常細(xì)胞的提示和分類結(jié)果表明，儀器對(duì)85%的標(biāo)本有異常報(bào)警和提示作用，并可出現(xiàn)散點(diǎn)圖異常。不能提示的病例主要為外周血細(xì)胞減少，無或極少量異常細(xì)胞髓外浸潤(rùn)的情況，有助于復(fù)核[7]。本組儀器研究界面的分類統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，AML的儀器均分類為中性粒細(xì)胞減少和單核細(xì)胞增高，這可能是由于原始或幼稚細(xì)胞核體積較大，側(cè)向熒光強(qiáng)度高，故被分類為單核細(xì)胞，因此這對(duì)鑒別急性粒細(xì)胞和急性單核細(xì)胞無指導(dǎo)意義。

本研究免疫分型結(jié)果表明，AML的MPO、CD33是主要的普遍表達(dá)標(biāo)志物，在髓系特異性分型中起重要作用，且MPO表達(dá)越高說明細(xì)胞分化越好，預(yù)后較好，當(dāng)然部分MPO和CD33表達(dá)缺失的標(biāo)本須與其他免疫標(biāo)志物綜合分析。CD34、CD13、CD117和HLA-DR在不同類髓系白血病的表達(dá)不同，對(duì)比急性粒細(xì)胞(M1～2)和急性單核細(xì)胞(M5)，CD13、CD117和HLA-DR均高表達(dá)，但M5的CD34表達(dá)率較低，而單核系CD14、15表達(dá)率增高，這可能與細(xì)胞分化較成熟而少表達(dá)干細(xì)胞有關(guān)。M3由于白血病為單一的異常早幼粒細(xì)胞，其CD34、CD117、HLA-DR和CD13的表達(dá)均較低，但特異性地高表達(dá)CD33。約60%的M3標(biāo)本高表達(dá)單核細(xì)胞CD15和中性粒細(xì)胞CD64，對(duì)鑒別診斷疾病起到積極作用，其原因有待于進(jìn)一步研究[8]。本研究對(duì)免疫表型交叉表達(dá)結(jié)果顯示，交叉表達(dá)是細(xì)胞出現(xiàn)的某些抗原缺失、過表達(dá)、系列交叉和跨階段表達(dá)等免疫分子異常表達(dá)現(xiàn)象，除髓系抗原表達(dá)外伴有淋巴細(xì)胞抗原表達(dá)或淋巴細(xì)胞伴髓系抗原表達(dá)[9]。這種異質(zhì)性表現(xiàn)有利于白血病免疫分型的診斷及預(yù)后，在微量殘留白血病檢測(cè)中也有較大的臨床價(jià)值[10]。本組結(jié)果提示，髓系白血病可能出現(xiàn)的淋巴系統(tǒng)表達(dá)為CD7、CD10和CD2，以CD7最為常見?；颊哳A(yù)后觀察說明，CD7表達(dá)的M1～2患者4個(gè)療程后，無1例達(dá)完全緩解，且CD7表達(dá)的 AML 13 例患者中7例發(fā)病時(shí) WBC>50×109/L，完全緩解率較無交叉表達(dá)的患者也明顯減低，提示 CD7+AML 預(yù)后較差。表達(dá)CD7的7例都伴有 CD34表達(dá)，提示CD7+AML 細(xì)胞可能起源于 CD7+/CD34+多能干細(xì)胞或更早期造血階段的多能干細(xì)胞，且對(duì)化療不敏感。

綜上所述，白血病具有高度異質(zhì)性和形態(tài)多樣性，結(jié)合外周血液學(xué)、骨髓形態(tài)學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)免疫分型診斷已成為白血病綜合分析的重要手段，可輔助確診部分特殊類型，提高白血病診斷和分型的準(zhǔn)確性，且對(duì)初發(fā)患者的相關(guān)免疫表型，特別是交叉表達(dá)情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)，對(duì)治療指導(dǎo)和預(yù)后判斷均具重要的臨床價(jià)值。

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Immunophenotyping and bone marrow hematology analysis in acute myelocytic leukemia

GUOBin,XIENing△,LIUWen,LIYing,LIJunan

(DepartmentofClinicalLaboratory,theAffiliatedHospitalofNorthSichuanMedicalCollege,Nanchong，Sichuan637000,China)

ObjectiveTo investigate the clinical significance in diagnosis and prognostic judgments of acute myelocytic leukemia with combined detection of morphology,peripheral blood and immune typing of bone marrow cells.MethodsMicroscopic examination of bone marrow cell morphology,automatic blood cell analyzer detection of peripheral blood parameter and flow cytometry analysis of immune markers of leukemia cells,all these datas were analyzed statistically.ResultsPeripheral blood cell analysis showed that instruments may indicate the presence of abnormal or naive cells in about 85% patients,different kinds of leukemia had significant difference in total leukocyte count (majority higher in M1-2,M5; majority lower in M3); while anemia and thrombocytopenia were observed in most patients,but the degree was different; M1-2 and M5 can not be identified by classification of leukocyte by automatic blood cell analyzer,CD7,CD10 and CD2 can cross express in myeloid leukemia,which have a prompt effect with treatment and prognosis.ConclusionDetection of peripheral blood parameters has an important role in early screening,differential diagnosis and prognosis judgment of leukemia,immunological markers detection is the powerful supplement and support for leukemia diagnosis and typing,sensitive markers have close contact with prognosis,which significantly improves the effect of the diagnosis and treatment of leukemia.

acute myelocytic；bone marrow cell morphology;peripheral blood;immune typing

郭斌，男，主管技師，主要從事實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)研究。

，E-mail:xiening19840820@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.020

A

1673-4130(2016)19-2710-03

2016-02-23

2016-04-18)