中性粒細(xì)胞CD64百分比在重癥細(xì)菌感染性疾病中的診斷意義*

李觀華，梅　錦，郝　猛，陳雪禮

(江西省九江市第一人民醫(yī)院/南昌大學(xué)附屬九江醫(yī)院檢驗(yàn)科　332000)

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·論著·

中性粒細(xì)胞CD64百分比在重癥細(xì)菌感染性疾病中的診斷意義*

李觀華，梅錦，郝猛，陳雪禮

(江西省九江市第一人民醫(yī)院/南昌大學(xué)附屬九江醫(yī)院檢驗(yàn)科332000)

目的探討中性粒細(xì)胞CD64在重癥細(xì)菌感染疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法選取該院82例患者，分為感染組和健康對(duì)照組，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)中性粒細(xì)胞CD64表達(dá)水平[以CD64(MFI)和CD64(%)表示]，同時(shí)行外周靜脈血白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞比率(Neu%)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)檢測(cè)。結(jié)果CD64(MFI)與PCT、CRP水平密切相關(guān)(r=0.201 8，P<0.01;r=0.113 5，P<0.05)，CD64(%)也與PCT、CRP顯著相關(guān)(r=0.181 1，P<0.01;r=0.135 9，P<0.05)；CD64(MFI)診斷細(xì)菌感染的敏感度85.42%，特異度79.36%，CD64(%)的敏感度89.96%，特異度82.20%，受試者工作特征(ROC)曲線表明CD64(%)診斷感染時(shí)與CD64(MFI)優(yōu)勢(shì)相當(dāng)；在重癥感染組中，CD64(%)診斷曲線下面積高于CD64(MFI)。結(jié)論中性粒細(xì)胞CD64 表達(dá)可作為細(xì)菌感染性疾病的診斷及判斷病情的可靠指標(biāo)，且中性粒細(xì)胞CD64(%)在重癥感染的診斷效能優(yōu)于CD64(MFI)。

CD64；中性粒細(xì)胞；C反應(yīng)蛋白；流式細(xì)胞術(shù)；細(xì)菌感染

重癥細(xì)菌感染(毒血癥、膿毒血癥)是導(dǎo)致人類感染病死的原因之一。臨床治療細(xì)菌感染通常依靠外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)等判斷是否感染及感染程度，其都屬于非特異性指標(biāo)，而病原微生物培養(yǎng)通常需至少24 h才有結(jié)果，且陽(yáng)性率較低，故細(xì)菌感染早期診斷極其困難但臨床意義重大。有學(xué)者研究中性粒細(xì)胞CD64的定量分析在兒童重癥細(xì)菌感染中的作用，現(xiàn)已開(kāi)始將CD64的定量分析應(yīng)用于成人重癥細(xì)菌感染[1]。本研究通過(guò)檢測(cè)82例標(biāo)本的中性粒細(xì)胞CD64表達(dá)水平，探討其在重癥細(xì)菌感染疾病中的診斷價(jià)值。

1　資料與方法

1.1一般資料選取該院2015年1～10月收治住院的82例患者，男52例，女30例。重癥感染組32例，局部感染組28例，選擇健康體檢者22例(健康對(duì)照組)。

1.2儀器與試劑Beckman Coulter FC-500流式細(xì)胞儀及配套試劑和Beckman Coulter IMMAGE800全自動(dòng)特定蛋白儀及配套試劑，均由美國(guó)Beckman Coulter公司提供。Combas601化學(xué)發(fā)光儀由羅氏公司提供。邁瑞5800五分類血細(xì)胞分析儀及配套試劑由深圳邁瑞公司提供。PhoenixTM-100全自動(dòng)細(xì)菌鑒定/藥敏系統(tǒng)及配套試劑由美國(guó)BD公司提供。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集所有研究對(duì)象均于24～48 h內(nèi)及用藥前靜脈采血。(1)抽取8～10 mL 全血以無(wú)菌技術(shù)床邊接種，進(jìn)行血培養(yǎng)檢測(cè)。(2)使用2.0 mL EDTA-K2抗凝血，依次進(jìn)行CD64、血常規(guī)檢測(cè)。(3)采用4.0 mL靜脈血進(jìn)行CRP、PCT檢測(cè)。(4)視需要取相應(yīng)體液與分泌物進(jìn)行病原微生物培養(yǎng)。

1.3.2標(biāo)本檢測(cè)中性粒細(xì)胞CD64[以CD64(MFI)和CD64(%)表示]檢測(cè)。取2支流式專用試管，每支試管分別加入CD64-FITC和同型對(duì)照10 μL，再分別加入100 μL全血(EDTA-K2抗凝)，混勻避光保存15 min后，溶血，洗滌，加入500 μL PBS，靜置10 min后置于流式細(xì)胞儀，檢測(cè)并計(jì)算出中性粒細(xì)胞CD64(%)和CD64(MFI)。所有檢測(cè)項(xiàng)目均按照儀器和配套試劑的操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，且室內(nèi)質(zhì)控在控。

1.3.3計(jì)算方法公式CD64(MFI)=待測(cè)中性粒細(xì)胞CD64平均熒光道數(shù)/淋巴細(xì)胞CD64平均熒光道數(shù)。

2　結(jié)　　果

2.13組研究對(duì)象各檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果比較感染組患者CD64(MFI)與PCT和CRP水平密切相關(guān)，與WBC和 Neu%無(wú)明顯相關(guān)性；CD64(%)也與PCT和CRP顯著相關(guān)，與WBC和 Neu%無(wú)明顯相關(guān)性。見(jiàn)表1、2。

表1　　3組研究對(duì)象各檢測(cè)結(jié)果比較±s)

表2　　感染組與健康對(duì)照組的相關(guān)性

2.2CD64(MFI)和CD64(%)的診斷價(jià)值中性粒細(xì)胞CD64(MFI) 和CD64(%)ROC曲線下面積分別為0.85和0.90；根據(jù)Youden指數(shù)最大時(shí)確定最佳截?cái)帱c(diǎn)：CD64(MFI)為1.0，敏感度85.42%，特異度79.36%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)價(jià)值94.3%，陰性預(yù)測(cè)價(jià)值54.36%；CD64(%)最佳截?cái)帱c(diǎn)為60.32%，敏感度89.96%，特異度82.20%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)價(jià)值92.0%，陰性預(yù)測(cè)價(jià)值76.36%。CD64(%)診斷感染時(shí)與CD64(MFI)優(yōu)勢(shì)相當(dāng)；重癥感染組的CD64(%)曲線下面積高于CD64(MFI)。見(jiàn)表3。

表3　　CD64(MFI)和CD64(%)分別對(duì)感染性疾病的診斷結(jié)果

2.3重癥感染組CD64(MFI)和CD64(%)的檢測(cè)結(jié)果比較診斷重癥細(xì)菌感染性疾病時(shí)，CD64(%)優(yōu)于CD64(MFI)，診斷輕度感染時(shí)優(yōu)勢(shì)相當(dāng)。

3　討　　論

外周血中性粒細(xì)胞CD64的表達(dá)水平在臨床診斷和治療細(xì)菌性感染中應(yīng)用廣泛。CD64是跨膜糖蛋白，屬免疫球蛋白超家族成員，可通過(guò)抗體依賴性細(xì)胞毒性作用、細(xì)胞吞噬作用和免疫復(fù)合物清除作用實(shí)現(xiàn)對(duì)病原微生物的清除[2]。正常情況下，CD64主要分布于巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞及樹(shù)突狀細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞(APC)表面，中性粒細(xì)胞表面CD64呈低水平表達(dá)，甚至幾乎不表達(dá)，且表達(dá)無(wú)性別差異[3]。一般情況下，機(jī)體感染或內(nèi)毒素侵襲時(shí)CD64在刺激后4～6 h即可升高。

細(xì)菌感染時(shí)同時(shí)升高還有WBC、CRP和PCT，而CD64在診斷感染性疾病中具有更高的敏感度和特異度(90%～100%)，且對(duì)診斷敗血癥和全身感染也有很高的敏感度和特異度，在敗血癥的新生兒中升高尤為明顯，聯(lián)合中性粒細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)可將敏感度提高至95%[4]。CD64指數(shù)較客觀，可代替桿狀核計(jì)數(shù)作為診斷敗血癥的血液學(xué)指標(biāo)，CD64結(jié)合中性粒細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)可指導(dǎo)臨床抗菌藥物的應(yīng)用。CD64升高水平與敗血癥的嚴(yán)重程度和器官衰竭程度密切相關(guān)，可作為敗血癥患者病死率的早期預(yù)測(cè)指標(biāo)[5]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)CD64和PCT聯(lián)合檢測(cè)能提高細(xì)菌性感染和病毒性感染的鑒別診斷價(jià)值[6]。CD64聯(lián)合補(bǔ)體受體1(CD35)可有效將病毒性感染和細(xì)菌性感染區(qū)分[7]。CD64(MFI)、CD64陽(yáng)性細(xì)胞百分率、淋巴細(xì)胞百分率和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)4個(gè)變量聯(lián)合可有效區(qū)分DNA病毒感染和RNA病毒感染，敏感度95%，特異性度100%。CD64還可作為外科手術(shù)是否并發(fā)感染的指標(biāo)、監(jiān)測(cè)抗菌藥物的療效。CD64作為一種敏感的監(jiān)測(cè)感染狀態(tài)的指標(biāo)，可用于監(jiān)測(cè)抗菌藥物的療效[8]。馮萍等[9]研究還證實(shí)，CD64指數(shù)可判斷感染的嚴(yán)重程度，具有良好的臨床應(yīng)用前景。

本研究通過(guò)對(duì)不同感染情況進(jìn)行分組，結(jié)果表明，細(xì)菌感染組CD64表達(dá)水平明顯高于非細(xì)菌感染組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與以往研究結(jié)果一致。細(xì)菌感染組CD64表達(dá)水平與WBC計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比無(wú)明顯相關(guān)性，而與CRP、PCT呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。提示中性粒細(xì)胞CD64表達(dá)水平能夠較為準(zhǔn)確地反映感染程度，尤其在細(xì)菌性與非細(xì)菌性感染的鑒別上具有較高的特異度，與其他報(bào)道相同[10]。本組結(jié)果顯示，重癥感染時(shí)WBC升高到一定水平，CD64(%)的診斷優(yōu)于CD64(MFI)，原因可能是升高的中性粒細(xì)胞絕對(duì)數(shù)陽(yáng)性計(jì)數(shù)時(shí)較為準(zhǔn)確，而CD64(MFI)受淋巴細(xì)胞多少的影響，計(jì)算得到的結(jié)果有一定差異。

綜上所述，中性粒細(xì)胞CD64在感染性疾病的診斷和治療中具有重要的臨床價(jià)值，且CD64(%)診斷重癥感染時(shí)更具顯著優(yōu)勢(shì)。

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[6]Yang AP,Liu J,Yue LH,et al.Neutrophil CD64 combined with PCT,CRP and WBC improves the sensitivity for the early diagnosis of neonatal sepsis[J].Clinical Chemistry and Laboratory Medicine,2016,54(2):345-351.

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[9]馮萍，虞培娟，朱雪明．細(xì)菌感染患者外周血中性粒細(xì)胞表面CD64指數(shù)的變化[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，25(2)：96-99．

[10]陳雪禮，李觀華，湯金萍，等．流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)中性粒細(xì)胞CD64在感染性疾病中的診斷價(jià)值[J]．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(22)：2999-3000．

The diagnostic value of percentage of neutrophil CD64+ in severe bacterial infectious diseases*

LIGuanhua,MEIJing,HAOMeng,CHENXueli

(FirstPeople′sHospitalofJiujiangCity/JiujiangHospitalAffiliatedofNanchangUniversity，Jiujiang,Jiangxi332000,China)

ObjectiveTo investigate the value of CD64 in severe bacterial infection diseases diagnosing.MethodsTotally 82 patients were chosen and divided into two groups,infected group (n=60) and healthy control (n=22).Flow cytometry was used to detect the expression of CD64[CD64 (MFI) and CD64 (%)],peripheral blood leukocyte (WBC),neutrophil percentage (Neu%),C-reactive protein (CRP) and procalcitonin(PCT).Then the sensitivity and specificity of these indexes were evaluated.ResultsCD64(MFI)was positively correlated with PCT and CRP (r=0.201 8,P<0.01;r=0.113 5,P<0.05),and CD64(%) was also positively correlated with PCT and CRP (r=0.181 1,P<0.01;r=0.135 9,P<0.05).The sensitivity and specificity of CD64(MFI) in diagnosing bacterial infection diseases were 85.42% and 79.36%,and the sensitivity and specificity of CD64(%) were 89.96% and 82.20%.ROC results showed the diagnostic value of CD64 (MFI) and CD64 (%) was generally similar in infected diseases,while in severe infection groups,the area under the curve of CD64 (%) was higher than that of CD64 (MFI).ConclusionThe expression of CD64 on neutrophil cell can serve as markers for diagnosing bacterial infection diseases,and neutrophil CD64 (%) in the diagnosis of severe infection efficiency is better than that of CD64 (MFI).

CD64;neutrophil;C-reactive protein;flow cytometry;bacterial infection

江西省衛(wèi)生計(jì)生委科技計(jì)劃課題(20154017)。

李觀華，男，主管技師，主要從事臨床檢驗(yàn)診斷研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.018

A

1673-4130(2016)19-2705-03

2016-02-20

2016-04-15)