重慶地區(qū)不同育齡圍產(chǎn)期女性B族溶血性鏈球菌的研究

何建維，張　燕，陳　敏，袁　寅，范　超，李勤琴，鄧少麗，陳　鳴，唱　凱

(第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所檢驗(yàn)科　400042)

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·臨床研究·

重慶地區(qū)不同育齡圍產(chǎn)期女性B族溶血性鏈球菌的研究

何建維，張燕，陳敏，袁寅，范超，李勤琴，鄧少麗，陳鳴，唱?jiǎng)P△

(第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所檢驗(yàn)科400042)

目的探討該地區(qū)不同育齡女性圍產(chǎn)期B族溶血性鏈球菌(GBS)感染情況。方法采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)技術(shù)，對(duì)該院2015年1月至2016年1月3 206例標(biāo)本進(jìn)行GBS 核酸檢測(cè)。結(jié)果GBS陽性標(biāo)本226例，陰性2 980例，感染率為7.05%，20～25歲組為6.88%，26～30歲組為6.51%，31～35歲組為7.50%，36～40歲組為11.46%，40歲以上組為11.11%，其中30～40歲組感染率最高。不同組別之間兩兩比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。該地區(qū)育齡女性與北京、南京、上海等地區(qū)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論對(duì)該地區(qū)34～37周圍產(chǎn)期女性開展GBS篩查，降低感染率，為圍產(chǎn)期保健提供臨床價(jià)值。

B族鏈球菌；圍產(chǎn)期感染；實(shí)時(shí)熒光定量PCR

B 族溶血性鏈球菌(GBS)是導(dǎo)致圍產(chǎn)期母嬰感染的重要病原菌之一，占16%～61%。孕產(chǎn)婦感染GBS可引起早產(chǎn)、晚期流產(chǎn)、胎膜早破等，而新生兒感染可導(dǎo)致新生兒肺炎、腦膜炎、敗血癥等。為了解重慶地區(qū)不同育齡女性圍產(chǎn)期GBS感染情況，現(xiàn)對(duì)該院3 206例正常孕婦進(jìn)行分析。報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料2015年1月至2016年1月該院定期產(chǎn)檢的孕產(chǎn)婦，年齡20～45歲，孕周34～37周，共計(jì)標(biāo)本3 206例。

1.2儀器與試劑CFX-96實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)BIO-RAD公司)，ND-1000微量核酸蛋白測(cè)定儀(上海在途生物科技公司)，高速離心機(jī)(美國(guó)Beckman公司)。GBS DNA提取試劑和擴(kuò)增試劑購自泰普生物科學(xué)(中國(guó))有限公司。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集拭去外陰過多分泌物，將無菌拭子插入生殖低位1/3，輕輕旋轉(zhuǎn)采取陰道分泌物，再用另一個(gè)拭子插入肛門，在肛門括約肌上2～3 cm處輕輕旋轉(zhuǎn)取得直腸分泌物，將采集的標(biāo)本置入無菌套管，密閉送檢。室溫下保存不應(yīng)超過1 d，4～8 ℃保存不超過6 d。

1.3.2核酸提取向無菌套管加入1 mL清洗液，高速震蕩2 min制成標(biāo)本懸液，取出全部樣品加入1.5 mL無菌離心管中，13 000 r/min離心5 min，棄上清液，加入1 mL清洗液充分震蕩混勻，13 000 r/min離心5 min，棄上清液，加入50 mL清洗液充分震蕩混勻，加入1管提取固形物，強(qiáng)力震蕩5 min，加入10 μL內(nèi)參照，95 ℃干浴2 min，立即冰浴2～5 mim，13 000 r/min離心1 min，留上清液作為模板用于PCR擴(kuò)增。

1.3.3PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系為44.3 μL PCR Mix反應(yīng)液、0.5 μL Taq 酶(Taq DNA Polymerase)、0.2 μL UNG酶(UNG)，多個(gè)標(biāo)本建議統(tǒng)一配制后再分裝至PCR反應(yīng)管。向PCR反應(yīng)管中加入5 μL模板，蓋緊蓋子后瞬時(shí)離心上機(jī)。擴(kuò)增程序：37 ℃ 2 min→94 ℃ 2 min,94 ℃ 20 s→55 ℃ 45 s(40個(gè)循環(huán))。從第11個(gè)循環(huán)開始收集熒光信號(hào)。

1.4結(jié)果判讀按照GBS核酸檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行，GBS陰性：FAM CT值等于30或“No CT”，Texas Red(內(nèi)參)CT值小于30，且有較好的對(duì)數(shù)增長(zhǎng)曲線。GBS陽性：FAM CT值小于或等于23，且有較好的對(duì)數(shù)增長(zhǎng)曲線，Texas Red(內(nèi)參)CT值小于30，且有較好的對(duì)數(shù)增長(zhǎng)曲線。見圖1、2。

圖1　　GBS陰性PCR擴(kuò)增曲線

圖2　　GBS陽性PCR擴(kuò)增曲線

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間比較使用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.1各組 GBS檢測(cè)結(jié)果比較3 206例標(biāo)本檢出陰性2 980例，陽性226例，感染率為7.05%。20～25歲組567例檢出陽性39例，感染率為6.88%；26～30歲組1 797例檢出陽性117例，感染率為6.51%；31～35歲組667例檢出陽性50例，感染率為7.50%；36～40歲組157例檢出陽性18例，感染率為11.46%；40～45歲組18例檢出陽性2例，感染率為11.11%。其中36～40歲組感染率最高，為11.46%。各組之間兩兩比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2不同地區(qū)GBS感染率結(jié)果比較選取北京[1]、上海[2]、南京[3]、中山[4]、桂林[5]等5個(gè)地區(qū)進(jìn)行比較，重慶地區(qū)女性與中山、桂林地區(qū)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與北京、上海、南京等地區(qū)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　　各地區(qū)圍產(chǎn)期女性GBS感染率結(jié)果比較

3　討　　論

GBS在健康者的感染率可達(dá) 15%～35%，妊娠女性感染率大約為 10%～30% ，被西方國(guó)家列為圍產(chǎn)期感染的首要病原菌之一[6]。以往認(rèn)為 GBS 感染情況遠(yuǎn)不如西方國(guó)家嚴(yán)重，病死率低于國(guó)外報(bào)道[7]。但近年來寄生于陰道的GBS上行感染至宮腔造成孕產(chǎn)婦嚴(yán)重感染及胎兒、新生兒病死。因此，明確重慶地區(qū)不同育齡圍產(chǎn)期女性GBS感染情況對(duì)圍產(chǎn)期保健指導(dǎo)和優(yōu)生優(yōu)育具有重要意義。

GBS為兼性厭氧的革蘭陽性B溶血性鏈球菌，屬于條件致病菌，是圍產(chǎn)期母嬰感染的主要病原菌之一，可引起胎膜早破、羊膜腔感染、早產(chǎn)、產(chǎn)褥感染、新生兒肺炎、腦膜炎、敗血癥等[8]。目前我國(guó)還未將GBS作為圍產(chǎn)期女性常規(guī)檢查，但美國(guó)約90%的妊娠35～37 周的孕婦已開展GBS 篩查[9]。GBS檢測(cè)方法主要是傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)和熒光PCR方法，細(xì)菌培養(yǎng)一般24～48 h才能報(bào)告，并受多種因素影響，陽性檢出率不高。熒光PCR是一種快速檢測(cè)方法(2～4 h)，且具有較高的敏感性和特異性[10]。

我國(guó)對(duì)圍產(chǎn)期GBS的篩檢尚未建立統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，且面臨著陽性檢出率偏低和耐藥菌株增加的問題。抗菌藥物濫用，導(dǎo)致GBS耐藥菌株增多，給GBS感染的預(yù)防性治療帶來新的挑戰(zhàn)。廣州地區(qū)1999年分離的GBS菌株對(duì)紅霉素和林可霉素耐藥率分別達(dá)到45%和26%。

GBS感染率隨人種、地區(qū)、年齡不同而有差異[11]。重慶地區(qū)20～25歲組感染率為6.88%，26～30歲組感染率為6.51%，31～35歲組感染率為7.50%，36～40歲組感染率為11.46%，40～45歲組感染率為11.11%。不同育齡圍產(chǎn)期女性GBS感染率均大于5%，所以應(yīng)對(duì)重慶地區(qū)妊娠晚期女性開展GBS篩查，對(duì)陽性結(jié)果給予預(yù)防性治療，降低GBS感染率。GBS檢出率受多種因素影響，如地區(qū)差異、人群構(gòu)成、采樣時(shí)間和部位、個(gè)人衛(wèi)生條件等。采樣時(shí)同時(shí)采取陰道拭子和肛門拭子，可提高GBS的陽性檢出率。

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，E-mail:changaki0203@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.058

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1673-4130(2016)19-2784-03

2016-02-22

2016-06-17)