• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    真菌抑菌劑在馬鈴薯開放式組織培養(yǎng)中的應(yīng)用

    2016-11-02 10:10:20
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年26期
    關(guān)鍵詞:托布津抑菌劑培苗

    康 俊

    烏蘭察布職業(yè)學(xué)院,內(nèi)蒙古烏蘭察布 012000)

    ?

    真菌抑菌劑在馬鈴薯開放式組織培養(yǎng)中的應(yīng)用

    康 俊

    烏蘭察布職業(yè)學(xué)院,內(nèi)蒙古烏蘭察布 012000)

    [目的]研究馬鈴薯開放式組織培養(yǎng)中的最佳抑菌劑及其濃度。[方法]利用平板生長抑制法對多錳鋅、甲基托布津2種抑菌劑的抗性進行篩選,將篩選出的最佳抑菌劑作為馬鈴薯開放式組織培養(yǎng)抑菌劑,研究其污染控制效果及其對組培苗生長的影響。[結(jié)果]培養(yǎng)基中添加不同濃度的多錳鋅及甲基托布津?qū)φ婢囊种婆c對照相比均差異顯著,多錳鋅抑菌效果優(yōu)于甲基托布津。[結(jié)論]培養(yǎng)基添加0.10 g/L多錳鋅(多菌靈含量16%,代森錳鋅含量34%,可濕性粉劑)抑菌效果好且苗的生長狀況最佳,可作為馬鈴薯開放式組織培養(yǎng)中的抑菌劑。

    抑菌劑;馬鈴薯;組培培養(yǎng);開放式

    隨著馬鈴薯產(chǎn)業(yè)化技術(shù)快速發(fā)展,馬鈴薯脫毒快繁技術(shù)已經(jīng)實現(xiàn)規(guī)?;a(chǎn)。但傳統(tǒng)的組織培養(yǎng)方法對環(huán)境要求嚴格,必須在無菌條件下操作,需要超凈工作臺和高壓滅菌鍋等儀器設(shè)備。且培養(yǎng)基在高壓滅菌時需要耗費大量電能,是組織培養(yǎng)成本較高的主要因素。開放式組織培養(yǎng)是指通過優(yōu)化試驗技術(shù)降低污染率,使植物組織培養(yǎng)操作脫離嚴格無菌環(huán)境,在自然、開放的有菌條件下進行,培養(yǎng)基無須滅菌,最終達到與嚴格無菌環(huán)境組織培養(yǎng)同樣的效果[1-2]。與傳統(tǒng)組織培養(yǎng)方法相比,開放式組織培養(yǎng)技術(shù)特點在于其可以使培養(yǎng)容器的選擇范圍變大,無須耐高溫高壓的材料,同時培養(yǎng)基及接種器具無須高壓滅菌,操作方便,大幅度降低組織培養(yǎng)成本等。但植物開放式組織培養(yǎng)技術(shù)的關(guān)鍵在于找到有效的抑菌劑。研究表明,隨著抑菌劑濃度的增大其對植物生長發(fā)育的抑制作用增大。因此,有效抑菌劑的選擇對開放式組織培養(yǎng)尤為重要。

    若開放式組織培養(yǎng)技術(shù)在馬鈴薯組織培養(yǎng)中能成功應(yīng)用,可有效降低馬鈴薯組織培養(yǎng)成本。目前,利用農(nóng)藥[2-4]、抗生素[4-6]、防腐劑[8]、復(fù)合型抑菌劑[9]、次氯酸鈉[10-11]等作為開放式組織培養(yǎng)的抑菌劑均有報道。筆者通過比較抑菌劑多錳鋅及甲基托布津在馬鈴薯開放式組織培養(yǎng)中的抑菌效果和對擴繁組培苗生長的影響,確定多錳鋅在馬鈴薯開放式組織培養(yǎng)中的最佳抑菌劑及其使用濃度范圍,以期為今后馬鈴薯開放式植物組織培養(yǎng)的進一步研究提供技術(shù)支持。

    1 材料與方法

    1.1材料

    1.1.1殺菌劑。多錳鋅(國光英納,可濕性粉劑,四川國光農(nóng)化股份有限公司);甲基托布津(國光松爾,50%可濕性粉劑,四川國光農(nóng)化股份有限公司)。1.1.2培養(yǎng)基。孟加拉紅培養(yǎng)基(蛋白胨 5 g、葡萄糖 10 g、磷酸二氫鉀 1 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、瓊脂20 g、1/3 000孟加拉紅溶液 100 mL、氯霉素 0.1 g、蒸餾水 1 000 mL);MS培養(yǎng)基[7]。

    1.1.3植物材料。供試材料為馬鈴薯普通栽培種“Atlantic”,由烏蘭察布職業(yè)學(xué)院馬鈴薯研究所提供。

    1.2抑菌劑的篩選

    1.2.1污染菌種的分離純化。從被真菌污染的馬鈴薯組培苗中分離到污染霉菌,進行劃線分離純化。挑取單菌落,接種至斜面孟加拉紅培養(yǎng)基上,于28 ℃下恒溫培養(yǎng)7 d左右,接種至平面培養(yǎng)基上培養(yǎng),長滿平皿后備用。

    1.2.2污染真菌的鑒定。在孟加拉紅培養(yǎng)基上28 ℃下培養(yǎng)3 d,比較菌株的群體形態(tài)特征,進行初步鑒定[12],繼續(xù)培養(yǎng)15 d后再鑒定。

    1.2.3孟加拉紅抗性培養(yǎng)基制備。分別配制0.01、0.05、0.10、0.15、0.20 g/L多錳鋅及甲基托布津孟加拉紅抗性培養(yǎng)基。將2種抑菌劑配制成1 000 mg/L的母液備用,按常規(guī)方法配制孟加拉紅培養(yǎng)基,高壓滅菌后趁培養(yǎng)基冷卻凝固前在超凈工作臺上按試驗設(shè)計濃度分別加入多錳鋅及甲基托布津母液,振蕩搖勻,并做好標記,每個濃度3次重復(fù),空白對照不加藥液。

    1.2.4接菌。在無菌條件下,用高壓滅菌的直徑0.60 cm不銹鋼打孔器在已培養(yǎng)好的菌落外緣切下帶菌培養(yǎng)基柱——菌餅,將菌餅移至抗性培養(yǎng)基的中央(將有菌絲的一面緊貼培養(yǎng)基),每個培養(yǎng)皿接一個菌餅,每個濃度3次重復(fù),置于28 ℃溫箱內(nèi),6、10 d后檢查菌落生長情況。

    1.3馬鈴薯開放式組織培養(yǎng)試驗

    1.3.1培養(yǎng)瓶及接種器具處理。 將培養(yǎng)瓶及蓋子在0.1%的次氯酸鈉水溶液中浸泡25 min,撈出濾干待用;接種器接種前用95%乙醇徹底灼燒滅菌,接種臺用75%乙醇噴霧。

    1.3.2MS抗性培養(yǎng)基的制備。將多錳鋅可濕性粉劑分別加至MS培養(yǎng)基后攪拌均勻,配制成濃度梯度為0.01、0.05、0.10、0.15、0.20 g/L的MS培養(yǎng)基,以不加藥劑不滅菌的MS培養(yǎng)基和不加藥劑滅菌的MS培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基,每瓶裝20 mL(表1)。

    1.3.3轉(zhuǎn)接試管苗。將馬鈴薯苗分別擴繁至標記好的培養(yǎng)基中,每瓶10個莖段,每個濃度接10瓶,每個處理重復(fù)3次。放入組培室培養(yǎng),培養(yǎng)條件:溫度(25士2)℃,空氣相對濕度70%,光照強度2 500 lx,光照時間14 h/d。20 d后統(tǒng)計污染率和植株成活率。

    1.4數(shù)據(jù)處理試驗數(shù)據(jù)用SAS 13.0進行分析。根據(jù)菌落直徑計算相對抑菌率,計算公式:

    生長直徑=菌落平均直徑-菌餅直徑

    相對抑菌率=(對照生長直徑-處理生長直徑)/對照生長直徑×100%

    表1不同濃度多錳鋅加入MS培養(yǎng)基試驗處理

    Table 1Treatments composed of different concentrations of MnZn added to MS medium

    處理Treatment培養(yǎng)基Compositionofamedium高壓滅菌AutoclavedsterilizationCK1MS+30g/L蔗糖+35g/L瓊脂否AMS+0.01g/L多錳鋅+30g/L蔗糖+35g/L瓊脂否BMS+0.05g/L多錳鋅+35g/L瓊脂否CMS+0.10g/L多錳鋅+35g/L瓊脂否DMS+0.15g/L多錳鋅+35g/L瓊脂否EMS+0.20g/L多錳鋅+35g/L瓊脂否CK2MS+30g/L蔗糖+48g/L瓊脂是

    2 結(jié)果與分析

    2.1抑菌劑的種類及濃度篩選

    2.1.1鏡檢鑒定結(jié)果。對分離純化的2種菌株鏡檢,初步鑒定為青霉菌(Penicillium)和曲霉菌(Aspergillus)。青霉菌主要形態(tài)特征:有隔菌絲,有分身孢子梗,分生孢子成串,帚狀(圖1);曲霉菌主要形態(tài)特征:有隔菌絲,有“孢子穗”,孢子成黃綠色(圖2)。

    圖1 青霉菌菌落形態(tài)Fig.1 Colonies and spore spikes of penicillium

    圖2 曲霉菌菌落形態(tài)及孢子穗Fig.2 Colonies and spore spikes of aspergillus

    2.1.2抑菌劑的抑菌效果。由表2和3可知,培養(yǎng)基中添加不同濃度的多錳鋅及甲基托布津?qū)η嗝辜扒咕幸种谱饔茫c對照差異顯著。 10 d后0.05 g/L以上濃度的多錳鋅抑菌效果與甲基托布津差異極顯著,且濃度與抑菌效果呈正相關(guān)。0.10 g/L以上濃度的多錳鋅在6 d時對曲霉的抑菌率可達100%,明顯高于甲基托布津。2種抑菌劑相比,多錳鋅的抑菌效果明顯優(yōu)于各濃度甲基托布津,可作為有效的馬鈴薯開放式組織培養(yǎng)抑菌劑。

    2.2多錳鋅在馬鈴薯開放式組織培養(yǎng)中的污染控制效果及其對組培苗生長的影響由表4可知,0.10 g/L以上濃度的多錳鋅對組培苗的污染均有較好的抑制作用。但高濃度的多錳鋅,不僅對組培苗污染有抑制作用,還會影響苗的高度及根的形成。0.20 g/L多錳鋅處理后,苗的生根數(shù)明顯減少,且苗高較對照CK2減少46.03%。根系是主要的營養(yǎng)吸收和合成器官,與地上部分生長密切相關(guān),因此,高濃度多錳鋅處理后生根數(shù)的減少勢必造成植株生長受阻。由此可知,既有抑菌效果又對組培苗生長影響較小的最佳多錳鋅濃度為0.10 g/L。

    表2 抑菌劑對青霉生長的影響

    注:同列多錳鋅各組與0.20 g/L甲基托布津組相比,a表示差異極顯著(P<0.01),b表示差異顯著(P<0.05),未標表示差異不顯著。

    Note: When various concentrations of MnZn in the same column were compared with 0.20 g/L thiophanate-methyl, a and b stand for extremely significant (P<0.01) and significant differences (P<0.05) respectively. Data without a or b stand for no significant difference.

    表3 抑菌劑對曲霉生長的影響

    注:同列多錳鋅各組與0.20 g/L甲基托布津組相比,a表示差異極顯著(P<0.01),b表示差異顯著(P<0.05),未標表示差異不顯著。

    Note: When various concentrations of MnZn in the same column were compared with 0.20 g/L thiophanate-methyl, a and b stand for extremely significant (P<0.01) and significant differences (P<0.05) respectively.Data without a or b stand for no significant difference.

    表4 多錳鋅的抑菌效果及其對馬鈴薯組培苗生長的影響

    3 結(jié)論與討論

    該試驗以馬鈴薯脫毒組培苗為材料,通過在培養(yǎng)基中添加不同濃度的多錳鋅及甲基托布津抑菌劑,確定了多錳鋅可作為有效的開放式組織培養(yǎng)抑菌劑。在無超凈工作臺的情況下,0.10 g/L多錳鋅的抑菌率可達100%。雖然開放式組織培養(yǎng)法培養(yǎng)苗的生長高度及生根數(shù)與高壓滅菌法相比稍有差異,但在規(guī)?;a(chǎn)中,開放式組織培養(yǎng)法可以節(jié)約設(shè)備,減少高壓滅菌的電力消耗,節(jié)省培養(yǎng)基制作過程中的瓊脂等凝固劑,還可以節(jié)約高壓滅菌及試驗開展前接種室紫外滅菌的時間,能較大程度地降低組織培養(yǎng)成本并提高效率。

    目前尚無多錳鋅作為開放式組織培養(yǎng)抑菌劑的報道。王曉煌等[2]研究表明,多菌靈600 倍液在煙草開放式組培中控制細菌、真菌的污染率均在10%以下。陳亞蘭[13]研究表明,50%多菌靈可濕性粉劑對馬鈴薯組培苗生產(chǎn)中最常見的青霉菌、細菌和酵母菌3種菌具有較好的抑制作用,且對馬鈴薯試管苗的生長以及生根產(chǎn)生的負面影響最小。邵清松等[14]研究發(fā)現(xiàn),1 g/L 多菌靈在金線蓮組織培養(yǎng)中抑菌促生長效果優(yōu)于甲霜靈和甲基托布津及其混合物。該試驗結(jié)果表明,對真菌的抑制多錳鋅優(yōu)于甲基托布津,與邵青松等[14]

    的試驗結(jié)果一致。張健雄等[3]研究表明,當(dāng)代森錳鋅濃度0.2~0.3 g/L 時,其在東北紅豆杉開放式組織培養(yǎng)中的抑菌效果較好,且對植物生長的影響較小,可作為最佳的抑菌劑濃度范圍。該試驗結(jié)果表明,0.1 g/L多錳鋅對組培苗生長的影響較小,這是由于多錳鋅為2種藥劑的混合及馬鈴薯組培苗的耐藥程度較高。同時該試驗在轉(zhuǎn)接前用0.1%的次氯酸鈉浸泡培養(yǎng)瓶也能達到預(yù)期的抑菌效果,彭廣霖等[15]研究發(fā)現(xiàn),5~10 mg/L 次氯酸鈉對馬鈴薯和切花菊組培苗的抑菌效果較好,苗木存活率達80%。解輝等[10]在巴西香蕉組培時發(fā)現(xiàn),0.01%以上的次氯酸鈉可有效抑制培養(yǎng)基的污染,外植體成活率高達81%。該試驗未進行細菌抑菌劑的篩選,抗生素抑菌效果在很多研究中已經(jīng)證實[5-7]。

    該試驗通過對多錳鋅的抑菌效果及其對馬鈴薯組培苗的影響進行研究,結(jié)果表明,多錳鋅可作為馬鈴薯開放式組織培養(yǎng)的抑菌劑,關(guān)于其對組培苗生長速度、后期轉(zhuǎn)接擴繁效果及根的影響,以及與抗生素混合效果有待于進一步研究。

    [1] 崔剛,單文修,秦旭,等.植物開放式組織培養(yǎng)研究初探[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2004,35(4):529-533.

    [2] 王曉煌,黃勝琴,李玲. 4種抑菌劑在煙草開放式組織培養(yǎng)中的應(yīng)用[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2015(5):58-62.

    [3] 張健雄,李俊翔,戶新宇,等.代森錳鋅在東北紅豆杉開放式組培中的應(yīng)用研究[M]//張啟翔.中國觀賞園藝研究進展.北京:中國林業(yè)出版社,2012:233-235.

    [4] 張薪薪,唐金花,王關(guān)林.抑菌劑在開放組培中的使用及效果研究[J].遼寧師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2005,28(4):466-469.

    [5] 李文蘭,李華英,盛小偉.不同抗生素對羅漢果遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的影響[J].分子植物育種,2010(3):529-532.

    [6] 孫占育,曹彬,李紅芳,等.長柄扁桃開放式組培試驗研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2013(20):66-67.

    [7] 王玉英.MS培養(yǎng)基的配制方法[J].植物雜志,1983(5):15.

    [8] 王丹,劉霞.山梨酸鉀在紅豆杉開發(fā)式組織培養(yǎng)中的應(yīng)用[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(2):634-635.

    [9] 盧加舉,張正學(xué),彭仕榮,等.復(fù)合型抑菌劑在甘蔗開放式組培中的應(yīng)用研究[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué),2012(10):68-71.

    [10] 解輝,莫廷輝,曾麗星.次氯酸鈉在香蕉開放式組織培養(yǎng)中的應(yīng)用研究[J].熱帶作物學(xué)報,2011,32(5):886-890.

    [11] 吳桂容,曲芬霞,余炳鋒.賀州荸薺開放式組織培養(yǎng)體系建立[J].北方園藝,2013(6):110-112.

    [12] 魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1979.

    [13] 陳亞蘭.不同抑菌劑對馬鈴薯試管苗生長的影響[J].中國馬鈴薯,2012,26(5):260-263.

    [14] 邵清松,劉洪波,趙曉芳,等.金線蓮莖腐病菌的生物學(xué)特性及5 種殺菌劑對其抑制作用[J].中國中藥雜志,2014,39(8):1386-1390.

    [15] 彭廣霖,李青,衣淑玉,等.次氯酸鈉防治組培苗污染的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(16):8806-8808.

    Application of Fungal Bacteriostat in Open Tissue Culture of Potato

    KANG Jun-

    Ulanqab Vocational College, Ulanqab, Inner Mongolia 012000)

    [Objective] To determine the best fungal bacteriostat and its concentration in open tissue culture of potato. [Method] The resistance of two bacteriostats MnZn and thiophanate-methyl was sifted by using the method of flat growth restraint. In addition, the effects of the best bacteriostat as the bacteriostat in open tissue culture of potato on fungi and seedling growth were studied. [Result] Compared with the control, the inhibitory effects of different concentrations of MnZn and thiophanate-methyl on fungi were significantly better. The inhibitory effect of MnZn was better than that of thiophanate-methyl. [Conclusion] When the concentration of MnZn wettable powder was 0.10 g/L (the content of carbendazim was 16%, and the content of mancozeb was 34%), the antibacterial effect of MnZn and the growing status of seedlings were the best, so it can be used as a fungal bacteriostat in open tissue culture of potato.

    Bacteriostat; Potato; Tissue culture; Open

    內(nèi)蒙古自治區(qū)高等學(xué)??茖W(xué)研究項目(NJZC14383)。

    康俊(1982- ),女,內(nèi)蒙古烏蘭察布人,講師,碩士,從事植物病理和種薯繁育研究。

    2016-08-03

    S 188

    A

    0517-6611(2016)26-0108-03

    猜你喜歡
    托布津抑菌劑培苗
    眼用制劑中抑菌劑的使用
    藥品評價(2020年1期)2020-12-17 10:19:15
    眼氨肽滴眼液中抑菌劑的含量測定及活性炭對抑菌劑的吸附性研究
    香蕉枯萎病菌快速檢測技術(shù)
    “增城蜜菊”組培苗有機栽培管理技術(shù)
    甲基托布津SC馬鈴薯使用技術(shù)實驗總結(jié)
    不同組培方法對香蕉組培苗假植階段生理特征的影響
    不同藥劑及其組合防治桑椹菌核病效果試驗
    60Coγ射線輻照降解多菌靈、噻菌靈和甲基托布津的研究
    馬鈴薯組培苗薊馬污染防治試驗
    影響蝴蝶蘭組培苗生長的因子研究
    久久人人爽人人片av| 国产亚洲一区二区精品| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 97在线视频观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲精品日韩av片在线观看| 22中文网久久字幕| 欧美精品一区二区大全| 大香蕉久久网| 99re6热这里在线精品视频| 精品一品国产午夜福利视频| 黄色欧美视频在线观看| 嘟嘟电影网在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 水蜜桃什么品种好| 综合色丁香网| 中文天堂在线官网| 免费少妇av软件| 国产片特级美女逼逼视频| 一级毛片 在线播放| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 另类精品久久| 色哟哟·www| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 久久久久人妻精品一区果冻| 亚洲av国产av综合av卡| 成年女人在线观看亚洲视频| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产精品人妻久久久影院| 最近中文字幕2019免费版| 久久久久久久久久久丰满| 午夜免费鲁丝| 婷婷色综合大香蕉| 女性生殖器流出的白浆| 免费看av在线观看网站| 久久久久久久久久成人| 亚洲欧美精品自产自拍| 草草在线视频免费看| 日韩av免费高清视频| √禁漫天堂资源中文www| 一二三四中文在线观看免费高清| 老司机影院成人| 黄色视频在线播放观看不卡| 欧美 日韩 精品 国产| 久久久精品免费免费高清| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 久久久久久久久久人人人人人人| 欧美变态另类bdsm刘玥| 十八禁网站网址无遮挡| 一个人免费看片子| 97在线视频观看| 97超视频在线观看视频| 亚洲国产欧美在线一区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲av.av天堂| xxx大片免费视频| 精品久久蜜臀av无| 美女国产视频在线观看| 七月丁香在线播放| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 黑人猛操日本美女一级片| 国产综合精华液| 一区二区三区免费毛片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产综合精华液| 日本爱情动作片www.在线观看| 91久久精品国产一区二区成人| 午夜91福利影院| 免费日韩欧美在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 最近的中文字幕免费完整| 婷婷色av中文字幕| 亚洲人成网站在线播| 精品亚洲成a人片在线观看| 黄色欧美视频在线观看| 考比视频在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 高清视频免费观看一区二区| 成年人免费黄色播放视频| 午夜福利,免费看| 午夜激情av网站| 99热全是精品| 中文字幕制服av| 少妇精品久久久久久久| 国产成人精品一,二区| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 成年女人在线观看亚洲视频| 人妻 亚洲 视频| 美女福利国产在线| 男女边摸边吃奶| 女人久久www免费人成看片| 一级爰片在线观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 一区二区三区四区激情视频| 国产一区二区三区av在线| 久久狼人影院| 午夜福利视频精品| 在线观看国产h片| 最新中文字幕久久久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 视频在线观看一区二区三区| 视频区图区小说| 女人精品久久久久毛片| 激情五月婷婷亚洲| 综合色丁香网| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 老司机亚洲免费影院| 欧美日韩av久久| 婷婷色av中文字幕| 一个人免费看片子| 99国产精品免费福利视频| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲天堂av无毛| 精品久久蜜臀av无| 一区二区三区四区激情视频| 国产片特级美女逼逼视频| 美女视频免费永久观看网站| 精品久久久噜噜| 国产精品99久久久久久久久| 在线看a的网站| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲欧美一区二区三区国产| 晚上一个人看的免费电影| 一个人免费看片子| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 免费av中文字幕在线| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产片特级美女逼逼视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 欧美精品高潮呻吟av久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 国产成人av激情在线播放 | 99热6这里只有精品| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 夜夜爽夜夜爽视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 大陆偷拍与自拍| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 丰满迷人的少妇在线观看| 精品国产国语对白av| 国产精品99久久99久久久不卡 | 高清毛片免费看| 夜夜爽夜夜爽视频| 亚洲在久久综合| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲国产精品专区欧美| 中文字幕最新亚洲高清| 我要看黄色一级片免费的| 国产视频内射| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 欧美+日韩+精品| 亚洲av日韩在线播放| 国产一区二区三区av在线| 蜜臀久久99精品久久宅男| 街头女战士在线观看网站| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久精品久久精品一区二区三区| 欧美日韩av久久| 亚洲图色成人| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久精品人人爽人人爽视色| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲伊人久久精品综合| 久久午夜综合久久蜜桃| 毛片一级片免费看久久久久| 国产黄色视频一区二区在线观看| 伊人久久国产一区二区| 日韩成人伦理影院| 人妻夜夜爽99麻豆av| 色吧在线观看| videossex国产| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品人妻久久久久久| 欧美xxⅹ黑人| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 精品酒店卫生间| 男女边摸边吃奶| 国产精品免费大片| 一级毛片我不卡| 99热全是精品| 18禁观看日本| 久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲第一区二区三区不卡| 日本午夜av视频| av一本久久久久| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 超碰97精品在线观看| 精品视频人人做人人爽| 国产精品99久久久久久久久| 日韩一本色道免费dvd| 人人妻人人澡人人看| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲四区av| 久久精品国产亚洲av天美| 在线精品无人区一区二区三| 日韩av不卡免费在线播放| 日本vs欧美在线观看视频| 青春草亚洲视频在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 自线自在国产av| 亚洲在久久综合| 亚洲av国产av综合av卡| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲五月色婷婷综合| 国产高清三级在线| 国产成人精品在线电影| 最黄视频免费看| 久久综合国产亚洲精品| 下体分泌物呈黄色| 新久久久久国产一级毛片| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产一区亚洲一区在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 国产一级毛片在线| a级片在线免费高清观看视频| 国产成人精品久久久久久| 少妇人妻 视频| av国产精品久久久久影院| 亚洲人与动物交配视频| 日韩精品免费视频一区二区三区 | tube8黄色片| 欧美最新免费一区二区三区| 26uuu在线亚洲综合色| 观看美女的网站| 人妻系列 视频| 国产又色又爽无遮挡免| 免费观看在线日韩| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日韩成人av中文字幕在线观看| 人妻系列 视频| kizo精华| 只有这里有精品99| 国产视频首页在线观看| 美女国产高潮福利片在线看| av线在线观看网站| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 中文字幕制服av| 九草在线视频观看| 最新中文字幕久久久久| 黄色毛片三级朝国网站| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 日日啪夜夜爽| 波野结衣二区三区在线| 成人国产麻豆网| 黄色毛片三级朝国网站| 国产爽快片一区二区三区| 在线精品无人区一区二区三| 精品人妻偷拍中文字幕| 一边亲一边摸免费视频| 午夜福利影视在线免费观看| 在线观看人妻少妇| 99精国产麻豆久久婷婷| 少妇人妻 视频| 一区二区三区免费毛片| 内地一区二区视频在线| 久久精品人人爽人人爽视色| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲,一卡二卡三卡| 三上悠亚av全集在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲av欧美aⅴ国产| 黑人高潮一二区| 成年人午夜在线观看视频| 国产免费又黄又爽又色| 久久人妻熟女aⅴ| 亚州av有码| 国模一区二区三区四区视频| 熟妇人妻不卡中文字幕| 99视频精品全部免费 在线| 色婷婷av一区二区三区视频| 午夜福利视频精品| av在线app专区| 欧美xxⅹ黑人| 国产男女内射视频| 51国产日韩欧美| 亚洲三级黄色毛片| 两个人的视频大全免费| 草草在线视频免费看| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 久久精品国产亚洲av天美| 欧美日韩综合久久久久久| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 人人澡人人妻人| 婷婷成人精品国产| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 草草在线视频免费看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 99久国产av精品国产电影| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产精品人妻久久久久久| 高清黄色对白视频在线免费看| av免费在线看不卡| 久久 成人 亚洲| 国产精品国产三级国产专区5o| 麻豆成人av视频| 日韩精品有码人妻一区| 一级毛片我不卡| 国产色婷婷99| 22中文网久久字幕| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 日韩 亚洲 欧美在线| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 午夜激情福利司机影院| 亚洲无线观看免费| 日韩精品有码人妻一区| 久久午夜福利片| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 交换朋友夫妻互换小说| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 美女cb高潮喷水在线观看| 精品久久久噜噜| 永久网站在线| 欧美另类一区| 999精品在线视频| 亚洲人成77777在线视频| 大码成人一级视频| 亚洲精品第二区| 国产精品99久久久久久久久| 久久精品国产自在天天线| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 精品久久久噜噜| 最新的欧美精品一区二区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 男女边摸边吃奶| 免费观看性生交大片5| 中文字幕亚洲精品专区| 大陆偷拍与自拍| 激情五月婷婷亚洲| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品久久久久久久电影| 精品午夜福利在线看| 日本黄色片子视频| 久久久久久久久久久免费av| 一本色道久久久久久精品综合| 午夜激情福利司机影院| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲国产精品成人久久小说| 成人综合一区亚洲| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 另类精品久久| 国产又色又爽无遮挡免| 制服诱惑二区| 亚洲国产最新在线播放| 成人综合一区亚洲| 久久99精品国语久久久| 久久久久人妻精品一区果冻| 18禁动态无遮挡网站| 日本黄大片高清| 一级片'在线观看视频| 麻豆乱淫一区二区| 99精国产麻豆久久婷婷| 丰满乱子伦码专区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 成人午夜精彩视频在线观看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 日韩强制内射视频| 久久精品国产a三级三级三级| 国产黄色免费在线视频| 一级毛片女人18水好多| 亚洲第一av免费看| 国产黄频视频在线观看| 亚洲成人手机| 在线观看一区二区三区激情| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲情色 制服丝袜| 涩涩av久久男人的天堂| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 视频区欧美日本亚洲| 欧美一级毛片孕妇| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲中文av在线| 国产精品免费大片| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久久久国产一级毛片高清牌| 蜜桃国产av成人99| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产成人欧美在线观看 | 成年版毛片免费区| 18禁国产床啪视频网站| 日韩有码中文字幕| 岛国在线观看网站| 久久久久精品人妻al黑| av又黄又爽大尺度在线免费看| 动漫黄色视频在线观看| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲三区欧美一区| 91精品三级在线观看| 国产成人欧美在线观看 | 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲人成77777在线视频| 伦理电影免费视频| 亚洲 国产 在线| 中亚洲国语对白在线视频| 一区二区三区国产精品乱码| 日韩视频在线欧美| 亚洲人成电影观看| 91老司机精品| 国产不卡一卡二| 免费在线观看黄色视频的| 手机成人av网站| 十八禁网站网址无遮挡| 桃花免费在线播放| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美国产精品一级二级三级| 999精品在线视频| 大型av网站在线播放| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产一区有黄有色的免费视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 热re99久久国产66热| 国产精品久久久av美女十八| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产精品亚洲av一区麻豆| 妹子高潮喷水视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 精品卡一卡二卡四卡免费| 蜜桃在线观看..| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 在线观看66精品国产| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲国产欧美一区二区综合| 精品免费久久久久久久清纯 | 搡老乐熟女国产| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲色图av天堂| 国产男女超爽视频在线观看| 午夜免费鲁丝| 热99久久久久精品小说推荐| 精品久久蜜臀av无| 自线自在国产av| 日本av免费视频播放| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产亚洲欧美在线一区二区| 伦理电影免费视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产极品粉嫩免费观看在线| 日本黄色视频三级网站网址 | 大型av网站在线播放| 大片免费播放器 马上看| 国产精品二区激情视频| 国产成人啪精品午夜网站| 新久久久久国产一级毛片| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产福利在线免费观看视频| 9191精品国产免费久久| 欧美日本中文国产一区发布| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲第一av免费看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 12—13女人毛片做爰片一| 在线观看免费日韩欧美大片| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产亚洲精品久久久久5区| 热re99久久国产66热| 日韩三级视频一区二区三区| 男女高潮啪啪啪动态图| 日韩成人在线观看一区二区三区| 无人区码免费观看不卡 | 一边摸一边抽搐一进一小说 | 亚洲五月色婷婷综合| 99国产精品一区二区蜜桃av | 在线 av 中文字幕| 国产精品一区二区在线观看99| 99精品在免费线老司机午夜| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产精品免费大片| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 男人舔女人的私密视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 激情视频va一区二区三区| 久久久久国内视频| 在线 av 中文字幕| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 色播在线永久视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 国产av一区二区精品久久| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 国产亚洲欧美在线一区二区| 制服人妻中文乱码| 美女午夜性视频免费| 91麻豆av在线| 丝袜喷水一区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲熟女精品中文字幕| 动漫黄色视频在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 9热在线视频观看99| 一夜夜www| 欧美人与性动交α欧美软件| 亚洲九九香蕉| 亚洲国产欧美网| 亚洲人成77777在线视频| 一级毛片精品| 岛国毛片在线播放| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲久久久国产精品| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 精品乱码久久久久久99久播| 两个人看的免费小视频| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| 丁香欧美五月| 成人三级做爰电影| 日本欧美视频一区| av网站在线播放免费| 久久狼人影院| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 精品人妻在线不人妻| 亚洲avbb在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 男女之事视频高清在线观看| 成人永久免费在线观看视频 | 久久精品国产综合久久久| 国产av精品麻豆| 美国免费a级毛片| 亚洲九九香蕉| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲七黄色美女视频| 757午夜福利合集在线观看| 欧美在线一区亚洲| 亚洲色图av天堂| 午夜福利在线观看吧| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久婷婷成人综合色麻豆| 日韩有码中文字幕| 乱人伦中国视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲少妇的诱惑av| 十分钟在线观看高清视频www| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久久久视频综合| 美女午夜性视频免费| 国产精品久久电影中文字幕 | 国产精品亚洲一级av第二区| 在线观看免费日韩欧美大片| 成人av一区二区三区在线看| 欧美日韩一级在线毛片| 丝瓜视频免费看黄片| 国产区一区二久久| 99国产极品粉嫩在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲国产看品久久| 伦理电影免费视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲中文av在线| 丰满少妇做爰视频| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲精品自拍成人| 亚洲精品中文字幕在线视频| 操出白浆在线播放| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美一级毛片孕妇| 午夜精品国产一区二区电影| 99精品久久久久人妻精品| 乱人伦中国视频| 少妇的丰满在线观看| 午夜福利欧美成人| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 精品国内亚洲2022精品成人 | 99久久人妻综合| 大码成人一级视频| 久久天堂一区二区三区四区| 黄片播放在线免费| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 亚洲国产欧美一区二区综合| 日韩中文字幕欧美一区二区| 男人操女人黄网站| 国产日韩欧美亚洲二区| 91麻豆av在线| 亚洲视频免费观看视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 免费高清在线观看日韩|