HSF2基因在肺癌中的表達(dá)意義

鐘云華+范敏娟

【摘 要】 目的：檢測(cè)肺癌組織中HSF2基因的表達(dá)和意義。方法：分別采用Western blot和RT-qPCR技術(shù)，檢測(cè)50例肺癌組織及其對(duì)應(yīng)癌旁組織中HSF2基因蛋白質(zhì)和mRNA變化。結(jié)果：50例肺癌患者組織及其正常癌旁組織對(duì)比，38例的蛋白質(zhì)水平明顯升高（P<0.05），而正常肺組織中HSF2基因的mRNA缺失率達(dá)80%，正常組織中HSF2基因表達(dá)明顯低于肺癌組織（P<0.05）。不同年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、組織類型中HSF2基因表達(dá)無顯著差異。結(jié)論：肺癌中HSF2基因表達(dá)水平的升高，暗示HSF2基因在肺癌的發(fā)生發(fā)展中起一定作用。

【關(guān)鍵詞】 HSF2；肺癌；蛋白質(zhì)；mRNA

【中圖分類號(hào)】R734.2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）12-0177-02

Abstract：Objective In order to investigate the significance and expressioon of heat shock factor 2 （HSF2） gene in lung cancer.Methods We collected 50lung cancer tissue and adjacent cancer normal tissue samples. Meanwhile， the expression of HSF2 was investigated by Western blotting and RT-qPCR.ResultsWhen compared the lung cancer tissue and adjacent cancer normal tissue samples， we found that 76% （38 of 50） of the HSF2 protein in cancer tissues were upregulated compared to the normal lung tissues （P<0.05）. However， in normal tissue， the rare of mRNA down-regulation was 80%. In normal control， expression of HSF2 gene was lower than lung cancer tissue. In addition， there was no significant difference in age status， gender status， tumor size status， histological differentiation status and histologic type of lung cancer. Conclusion The result of HSF2 gene upregulation， which indicate HSF2 may participate information and development of lung cancer.

Keywords：HSF2； Lung Cancer； Protein； mRNA

熱休克蛋白（heat shock protein，HSP）作為一種分子伴侶，主要功能在于穩(wěn)定細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞維持正常的生理功能。真核生物中已發(fā)現(xiàn)的HSFs有四種亞型： HSF1、HSF2、HSF3和HSF4[1]，具有的共同結(jié)構(gòu)為一個(gè)保守的DNA結(jié)合區(qū)域 （DNA binding domain，DBD）和一個(gè)三聚區(qū)域（Trimerization domain，TD），以及存在于N-端和C-端的非保守的轉(zhuǎn)錄激活功能域及調(diào)控區(qū)域。目前認(rèn)為HSF2對(duì)熱刺激耐受， 對(duì)生長(zhǎng)、發(fā)育和分化的信號(hào)更敏感，可以調(diào)控胚胎發(fā)育[2]。研究發(fā)現(xiàn)，在睪丸中，HSF2表達(dá)上升且在精子形成中具有重要的作用通過敲除HSF2的小鼠在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和生殖上出現(xiàn)異常，暗示HSF2在發(fā)育中起重要作用[1； 3-11]。國(guó)內(nèi)亦有相關(guān)報(bào)道，HSF2 mRNA水平在生精細(xì)胞凋亡早期略有降低，而在凋亡高峰期之后其表達(dá)急劇下降。HSF2蛋白可能調(diào)控Hsp70基因的表達(dá)，而且可能通過多種方式影響精子的形成并抑制生精細(xì)胞的凋亡。目前HSF2的作用機(jī)制國(guó)內(nèi)外均無統(tǒng)一定論。有研究認(rèn)為HSP2作為細(xì)胞內(nèi)的保護(hù)蛋白，對(duì)肺組織上皮細(xì)胞的修復(fù)具有重要的作用[12]。因此本研究用Western blot和RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)肺癌組織和癌旁組織HSF2基因的蛋白質(zhì)和mRNA的變化，分析HSF2表達(dá)水平和肺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月至2015年12月本院收治的肺癌患者50例（取距離腫塊 5 cm 以上作為正常對(duì)照組織，50 例），男30例，女20例；年齡36～70歲，平均年齡（56±0.4）歲；其中高分化23例，中分化15例，低分化12例；小細(xì)胞肺癌18例，非小細(xì)胞肺癌32例。所有患者術(shù)前均未經(jīng)過任何治療。取材時(shí)將所取組織用預(yù)冷的 DEPC 處理后的雙蒸水沖洗組織兩遍后，置于液氮中冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 HSF2基因蛋白質(zhì)的檢測(cè) 將肺癌組織及正常癌旁組織加入組織裂解液后，于漿器冰上研磨及超聲破碎，離心后收集上清，吸取上清用烤藍(lán)法定量。然后，以各泳道 50μg總蛋白，用 12%SDS 不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳分離，轉(zhuǎn)膜，經(jīng)封閉，標(biāo)一抗和二抗，洗膜和顯影后，即可進(jìn)行結(jié)果分析。

1.3 HSF2基因mRNA的檢測(cè) 組織總RNA按照RNAprep Pure動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒DP431（TIANGEN，北京）說明書進(jìn)行。引物上海生物公司合成，序列為：

HSF2：擴(kuò)增片段為139bp

Forward：5′- AAGTTCAGGCAGTGATGGCA -3′

Reverse： 5′- TGCACAGAACTAGTGAAAAGATCA -3′

GAPDH：擴(kuò)增片段為185bp

Forward： 5′-GAAGGTCGGAGTCAACGGAT-3′

Reverse： 5′-GAGGGATCTCGCTCCTGGAAG-3′

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析，HSF2基因的表達(dá)用χ2檢驗(yàn)和方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Western blot檢測(cè)HSF2蛋白的表達(dá) 為了了解HSF2蛋白在肺癌組織及癌旁組織中表達(dá)情況，將肺癌組織及癌旁組織的蛋白提取后用western blot檢測(cè)HSF2的表達(dá)。結(jié)果顯示，38例肺癌組織中HSF2蛋白呈現(xiàn)高表達(dá)，而在所有正常癌旁組織中呈現(xiàn)低表達(dá)（圖1A）。兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=61.29，P<0.05）。

2.2 RT-qPCR檢測(cè)HSF2 mRNA 為觀察HSF2基因在肺癌組織及正常癌旁組織的表達(dá)情況，采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)HSF2基因mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，在50例肺癌組織中，80%存在高表達(dá)；而正常癌旁組織中，低表達(dá)率達(dá)100%（圖1B）。兩組對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=66.67，P<0.05）。

2.3 HSF2基因表達(dá)與肺癌患者臨床病理特征的關(guān)系 結(jié)果顯示，HSF2基因表達(dá)和性別、年齡、腫瘤大小、肺癌分化程度以及肺癌組織類型都沒有關(guān)系，見表1。

3 討論

研究表明，HSF2能調(diào)節(jié)HSP25、HSP40、HSP110尤其是HSP70、HSP90的轉(zhuǎn)錄表達(dá)[13]，且其所誘導(dǎo)HSP27、HSP90的表達(dá)在HSF2受RNA干擾后都下降[14]，提示HSF2參與了熱休克反應(yīng)的調(diào)控。研究證實(shí)，G1期細(xì)胞，HSF2可結(jié)合熱休克蛋白基因的啟動(dòng)子上，熱休克蛋白的轉(zhuǎn)錄進(jìn)而誘導(dǎo)下游基因的表達(dá)，有利于基因在G1期快速高效的表達(dá)[15]。然而，HSF2并不是熱休克反應(yīng)獨(dú)立的調(diào)控因子，只有與HSF1結(jié)合形成HSF1-HSF2復(fù)合物后才有激活調(diào)控轉(zhuǎn)錄的作用。以上研究暗示，HSF2可能參與癌癥的發(fā)生發(fā)展。

為研究HSF2基因表達(dá)情況在肺癌發(fā)生發(fā)展中作用，本研究采用western blot和RT-qPCR技術(shù)，檢測(cè)肺癌組織及其對(duì)應(yīng)正常癌旁組織中HSF2蛋白情況和mRNA情況。發(fā)現(xiàn)，與正常癌旁組織對(duì)比，HSF2蛋白在肺癌組織中高表達(dá)率為76%，mRNA為80%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明HSF2參與肺癌的發(fā)生發(fā)展。在肺癌患者的臨床病理特征中，HSF2基因表達(dá)和性別、年齡、腫瘤大小、癌癥分化程度以及病理類型不存在關(guān)系。

綜上所述，HSF2基因在肺癌中為高表達(dá)，而在正常旁組織中為低表達(dá)。本研究結(jié)果表明，HSF2基因表達(dá)參與肺癌的發(fā)生發(fā)展，但和肺癌的臨床病理特征，如性別、年齡、腫瘤大小、癌癥分化程度以及病理類型不相關(guān)。因本研究樣本量少，以及HSF2在細(xì)胞中相關(guān)機(jī)制研究較少，仍需進(jìn)一步的研究。

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（收稿日期：2016.05.21）