利用JIVET技術(shù)快速繁育薩?？搜虻难芯?/h1>
2016-11-01 20:49:22劉宗正李和剛楊培培趙金山
畜牧與飼料科學(xué) 2016年3期
劉宗正 ，李和剛 ，程 明 ，楊培培 ，趙金山
（1.山東省青島市畜牧獸醫(yī)研究所，山東 青島 266041；2.青島奧特種羊場，山東 青島 266041）
利用JIVET技術(shù)快速繁育薩?？搜虻难芯?/p>
劉宗正1，2，李和剛1，程 明1，2，楊培培1，趙金山1
（1.山東省青島市畜牧獸醫(yī)研究所，山東 青島 266041；2.青島奧特種羊場，山東 青島 266041）
JIVET技術(shù)是一項(xiàng)利用生殖激素刺激幼畜卵巢，從而使其快速、高效生產(chǎn)卵母細(xì)胞的技術(shù)。對(duì)4只1月齡薩?？擞赘嶙⑸銯SH和PMSG激素，48 h后采用手術(shù)法抽取幼羔卵母細(xì)胞，并在體外成熟；將成熟的卵母細(xì)胞與精子進(jìn)行體外受精，將正常分裂的2～8細(xì)胞胚胎移植到6只同期發(fā)情的受體小尾寒羊子宮內(nèi)。結(jié)果顯示，采用激素法處理薩?？擞赘岷蠊膊杉娇捎寐涯讣?xì)胞109枚，體外成熟培養(yǎng)后得到成熟卵母細(xì)胞79枚，成熟率為72.48%；體外受精后得到正常卵裂胚胎34枚，卵裂率為43.04%；胚胎移植后有3只受體母羊懷孕，受胎率為50%，并分娩得到3只薩福克幼羔。綜上提示，利用JIVET技術(shù)可以縮短薩?？搜虻姆庇芷?，從而加快其繁育速度。
薩?？搜?；JIVET技術(shù)；幼羔；生殖激素；胚胎移植
幼畜超排技術(shù) （juvenile superovulation technology，JIVET）是利用幼齡母羔（1～2 月齡）性成熟前的卵巢對(duì)生殖激素敏感，且卵泡很少發(fā)生閉鎖的特殊生理特點(diǎn)而發(fā)明的一項(xiàng)高效生產(chǎn)羊卵母細(xì)胞的新技術(shù)［1］。20世紀(jì)90年代的研究發(fā)現(xiàn)，利用激素誘導(dǎo)法獲得的羔羊卵母細(xì)胞完全可以生產(chǎn)出早期胚胎，其卵裂率和囊胚率可分別達(dá)到63%和20%。Armstrong［2］將利用該項(xiàng)技術(shù)獲得的卵裂胚胎移植到受體母羊子宮后發(fā)現(xiàn)，妊娠率可達(dá)30%～45%，并培育出了后代。在生產(chǎn)過程中，超數(shù)排卵（multiple ovulation，MO） 與活體 采 卵 技 術(shù) （ovum pick-up，OPU）的結(jié)合在一定程度上提高了獲取較高質(zhì)量卵母細(xì)胞的能力，從而可以生產(chǎn)出更優(yōu)質(zhì)的胚胎。近年來的研究結(jié)果表明，羔羊處在4～8周齡時(shí)，激素誘導(dǎo)后的卵母細(xì)胞生產(chǎn)體外胚胎的效率最高［3-5］。
隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和生活水平的不斷提高，人們對(duì)動(dòng)物性產(chǎn)品的需求量也越來越大。因此，加快對(duì)優(yōu)質(zhì)綿羊等家畜繁育技術(shù)的研究與應(yīng)用也成為重要的研究課題。筆者以薩福克綿羊?yàn)閷?duì)象，利用JIVET技術(shù)開展薩福克綿羊的快速繁育研究，以期為該項(xiàng)技術(shù)的應(yīng)用和推廣提供依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 4周齡左右的薩?？烁嵫?只，繁殖功能正常的24～36月齡小尾寒羊6只（受體羊）。實(shí)驗(yàn)羊只均由青島奧特種羊場提供。冷凍精子采自成年健康薩?？斯颍⑦M(jìn)行顆粒冷凍。
1.2 主要試劑 透明質(zhì)酸酶：Sigma，H3506；DMEM/F12（1∶1）：HYCLONE，SH30004；胎牛血清：Sigma，10099； 垂 體 促 卵 泡 素 （FSH）：Sigma，DIN00867357；孕馬血清（PMSG）：寧波第二激素廠；L -Glutamine：Sigma，G3126；Medium 199：Gibco，12350；LH：Sigma，L5269；6-DMAP：Sigma，D2629；離子霉素：Sigma，10634。
1.3 幼羔超數(shù)排卵及受體羊的同期發(fā)情 薩?？擞赘岬某瑪?shù)排卵：幼羔手術(shù)采卵前48 h注射FSH 40 mg，注射PMSG 400單位，以后每隔12 h注射FSH 40 mg，直至最后一次注射FSH后12 h進(jìn)行手術(shù)采卵。受體羊的同期發(fā)情：試驗(yàn)開始前14 d，將CIDR栓放入受體母羊陰道中，胚胎移植前2 d時(shí)撤栓，并注射PMSG 400單位，第2天試情，將發(fā)情母羊做好標(biāo)記，用于胚胎移植。
1.4 卵母細(xì)胞的采集及體外成熟 采用手術(shù)法抽取羔羊卵巢上的卵泡，清洗卵巢2次后，用預(yù)裝有2～3 mL 采卵液 （M199+NaHCO3+1 μg/mL 肝素+2 mg/mL BSA）的注射器進(jìn)行抽卵，收集卵泡液，并在體視顯微鏡下挑選卵丘細(xì)胞包裹的卵母細(xì)胞用于成熟。按未成熟卵母細(xì)胞20～25枚揀入100μL成熟液微滴中的比例進(jìn)行卵母細(xì)胞體外成熟，在38.5℃、5%CO2濃度、飽和濕度的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)18 h后去除卵丘細(xì)胞，挑選第一極體排出的裸卵用于下一步的體外受精。
1.5 體外受精 將冷凍的薩?？斯蚓宇w粒從液氮罐中取出，直接投入帶有2 mL獲能液的試管中進(jìn)行體外獲能，利用TALP液上游法，上游15～20 min，取上清液2 000 r/min離心3 min，去除上清液，調(diào)整精子密度為（6×106）～（9×106）個(gè)/mL，加入到裝有成熟卵母細(xì)胞的成熟液微滴中，在4孔板內(nèi)精卵共孵育（在38.5℃、5%CO2濃度、飽和濕度的培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)）。18～24 h后挑選卵裂的胚胎進(jìn)行體外培養(yǎng)。
1.6 胚胎移植 將同期發(fā)情的受體羊保定，刮凈綿羊右下腹被毛，碘酒消毒，脫碘。手術(shù)刀切開腹部，暴露子宮和卵巢，根據(jù)卵巢黃體的狀況和發(fā)情時(shí)間確定移植胚胎的胚齡和數(shù)目。2～4細(xì)胞期胚胎移入輸卵管壺腹部，桑葚胚和囊胚移入子宮角。
2 結(jié)果與分析
2.1 激素對(duì)幼羔超數(shù)排卵的影響 薩?？擞赘嶙⑸銯SH+PMSG激素后，利用手術(shù)法抽取幼羔的卵母細(xì)胞，4只幼羔經(jīng)激素處理48 h后，卵泡的發(fā)育情況差異較大，共獲得可用卵母細(xì)胞109枚（見表1）。
表1 幼畜超數(shù)排卵試驗(yàn)結(jié)果
2.2 體外受精 卵母細(xì)胞在體外成熟培養(yǎng)18 h后（見圖1A）去除卵丘細(xì)胞，挑選排出第一極體的卵母細(xì)胞（見圖1B），統(tǒng)計(jì)成熟率。將成熟的卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精，精卵共孵育18 h后，挑選卵裂胚胎（見圖2），統(tǒng)計(jì)卵裂率。卵母細(xì)胞的成熟率及其體外受精后的卵裂率統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表2。由表2可知，體外成熟培養(yǎng)后得到成熟卵母細(xì)胞79枚，成熟率為72.48%；體外受精后得到正常卵裂胚胎34枚，卵裂率為43.04%。
圖1 卵母細(xì)胞的體外成熟
表2 卵母細(xì)胞體外成熟率及其體外受精后的卵裂率統(tǒng)計(jì)結(jié)果
2.3 胚胎移植及分娩 將卵裂的胚胎進(jìn)行胚胎移植，通過判斷受體母羊的黃體發(fā)育情況確定胚胎移植的部位和數(shù)量。共移植卵裂胚胎34枚，移植受體羊6只。胚胎移植后1個(gè)月，通過人工試情的方法，發(fā)現(xiàn)在孕后期共有3只受體羊正常妊娠，妊娠率為50%。順產(chǎn)生下薩?？搜蚋峁灿?jì)3只。
圖2 卵裂胚胎
3 討論
超數(shù)排卵技術(shù)是一種利用外源促性腺激素誘發(fā)動(dòng)物卵巢卵泡發(fā)育，并排出卵子的技術(shù)。在該研究中，筆者采用的JIVET技術(shù)主要利用了1～2月齡的母羔卵巢對(duì)生殖激素的敏感性較強(qiáng)、卵泡很少閉鎖、在注射促性腺激素后可激發(fā)產(chǎn)生大量卵泡的特殊生理特點(diǎn)［6］。目前，該項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)成為家畜繁殖技術(shù)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，不僅能夠加快家畜的繁育和改良速度，而且還為家畜胚胎的商業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用提供了廣闊的發(fā)展前景。
在該研究中，筆者對(duì)4只1月齡薩?？司d羊幼羔進(jìn)行超數(shù)排卵處理，結(jié)果表明，在相同的激素處理?xiàng)l件下，不同羊只對(duì)激素的敏感程度存在差異，其中，只有1只羊反應(yīng)相對(duì)較好，產(chǎn)生了較多的卵泡，2只幼羔對(duì)激素的反應(yīng)一般，而另外1只只產(chǎn)生了較少的卵泡。該試驗(yàn)共獲得可用卵母細(xì)胞109枚，采卵水平較低。此外，卵母細(xì)胞在體外成熟后，共得到成熟卵母細(xì)胞79枚，成熟率為72.48%；體外受精后，共有34枚胚胎卵裂，卵裂率為43.04%；共移植34枚胚胎，胚胎移植妊娠率為50%。此前，參與該研究的中國農(nóng)業(yè)大學(xué)在其他地區(qū)采用相同處理方法得到的卵裂率和妊娠率分別為31.8%～73.5%、41.2%～66%，表明該研究結(jié)果較為理想。受體羊順利分娩后得到3只薩福克羔羊，證明利用JIVET技術(shù)快速繁育薩?？司d羊是可行的。
目前的研究認(rèn)為，羔羊在4～6周齡時(shí)的超數(shù)排卵效果最佳，此外，最新的研究結(jié)果也認(rèn)為不同的品種以及基因等遺傳背景對(duì)幼畜超數(shù)排卵效果也有一定的影響［7-8］。 李運(yùn)生等［9］研究發(fā)現(xiàn)，幼畜超數(shù)排卵的季節(jié)和母畜懷孕期間的營養(yǎng)水平也對(duì)超數(shù)排卵的效果有影響。該研究中，筆者僅選取4只幼羔進(jìn)行了超數(shù)排卵處理，并未進(jìn)行大量的重復(fù)性試驗(yàn)，且獲得的卵母細(xì)胞數(shù)量較少，這可能與進(jìn)行超數(shù)排卵處理的季節(jié)有關(guān)［10-11］。該研究在2月進(jìn)行，正處于冬季，對(duì)幼羔產(chǎn)生了一定影響；此外，卵母細(xì)胞的體外成熟率和卵裂率等數(shù)據(jù)都處于正常水平，表明前期建立的相關(guān)技術(shù)體系相對(duì)成熟。
4 小結(jié)
該研究系統(tǒng)地掌握了幼畜超排技術(shù)（JIVET）的激素超數(shù)排卵、卵母細(xì)胞的體外成熟、體外受精、胚胎移植等技術(shù)方法。利用JIVET技術(shù)可以縮短薩?？搜虻姆庇芷冢瑥亩鵀樵擁?xiàng)技術(shù)的進(jìn)一步研究和推廣應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
［1］李文娟，字向東.羔羊超數(shù)排卵及體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)的研究與應(yīng)用進(jìn)展［J］.畜牧與獸醫(yī)，2014，46（7）：35.
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［3］EARL C R，IRVINE B J，ROWE J P，et al.Production of in vitro matured oocytes from 6 week old calves［J］.Proc Aust Soc Reprod Biol，1994，26：15.
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Study on Rapid Propagation of Suffolk Sheep by Using JIVET Technology
LIU Zong-zheng1，2，LI He-gang1，CHENG Ming1，2，YANG Pei-pei1，ZHAO Jin-shan1
（1.Qingdao Municipal Institute for Animal Husbandry and Veterinary Medicine of Shandong Province，Qingdao 266041，China；2.Qingdao Aote Sheep Breeding Farm，Qingdao 266041，China）
JIVET is a technique using reproductive hormone to stimulate ovarian of young stock to rapidly and efficiently produce oocytes.In this study,in order to evaluate the application performance of JIVET in rapid propagation of Suffolk Sheep,4 onemonth-old lambs of Suffolk Sheep were selected and intramuscularly administrated with FSH and PMSG.Forty-eight hours after administration of reproductive hormone,the oocytes were collected by surgery and were subsequently matured in vitro.The matured oocytes were fertilized with prepared frozen semen in vitro.When the embryos grew to 2 to 8 cells each,they were transferred into the uterus of 6 receptor female sheep.The results revealed that a total of 109 available oocytes were obtain after the treatment of reproductive hormone and 79 of them were successfully matured in vitro,and the maturation rate was 72.48%.A total of 34 cleaved embryos were obtained after fertilization in vitro and the cleavage rate was 43.04%.Three receptor female sheep was pregnant after receiving embryo transfer and the pregnancy rate was 50%.Finally,3 lambs of Suffolk Sheep were obtained.These results suggest the fact that the application of JIVET can shorten the breeding cycle of Suffolk Sheep and thus speed up the breeding of Suffolk Sheep.
Suffolk Sheep；JIVET；lamb；reproductive hormone；embryo transfer
S826.3；S813.3
A文章順序編號(hào)1672-5190（2016）03-0001-03
2015－12－08
項(xiàng)目來源：青島市民生計(jì)劃項(xiàng)目（13-1-3-88-nsh）。
劉宗正（1985—），男，助理畜牧師，博士，主要從事發(fā)育生物學(xué)研究工作。
趙金山（1975—），男，高級(jí)畜牧師，博士，主要研究方向?yàn)閯?dòng)物遺傳與育種。
（責(zé)任編輯：趙俊利）
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（1.山東省青島市畜牧獸醫(yī)研究所，山東 青島 266041；2.青島奧特種羊場，山東 青島 266041）
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薩?？搜?；JIVET技術(shù)；幼羔；生殖激素；胚胎移植
幼畜超排技術(shù) （juvenile superovulation technology，JIVET）是利用幼齡母羔（1～2 月齡）性成熟前的卵巢對(duì)生殖激素敏感，且卵泡很少發(fā)生閉鎖的特殊生理特點(diǎn)而發(fā)明的一項(xiàng)高效生產(chǎn)羊卵母細(xì)胞的新技術(shù)［1］。20世紀(jì)90年代的研究發(fā)現(xiàn)，利用激素誘導(dǎo)法獲得的羔羊卵母細(xì)胞完全可以生產(chǎn)出早期胚胎，其卵裂率和囊胚率可分別達(dá)到63%和20%。Armstrong［2］將利用該項(xiàng)技術(shù)獲得的卵裂胚胎移植到受體母羊子宮后發(fā)現(xiàn)，妊娠率可達(dá)30%～45%，并培育出了后代。在生產(chǎn)過程中，超數(shù)排卵（multiple ovulation，MO） 與活體 采 卵 技 術(shù) （ovum pick-up，OPU）的結(jié)合在一定程度上提高了獲取較高質(zhì)量卵母細(xì)胞的能力，從而可以生產(chǎn)出更優(yōu)質(zhì)的胚胎。近年來的研究結(jié)果表明，羔羊處在4～8周齡時(shí)，激素誘導(dǎo)后的卵母細(xì)胞生產(chǎn)體外胚胎的效率最高［3-5］。
隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和生活水平的不斷提高，人們對(duì)動(dòng)物性產(chǎn)品的需求量也越來越大。因此，加快對(duì)優(yōu)質(zhì)綿羊等家畜繁育技術(shù)的研究與應(yīng)用也成為重要的研究課題。筆者以薩福克綿羊?yàn)閷?duì)象，利用JIVET技術(shù)開展薩福克綿羊的快速繁育研究，以期為該項(xiàng)技術(shù)的應(yīng)用和推廣提供依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 4周齡左右的薩?？烁嵫?只，繁殖功能正常的24～36月齡小尾寒羊6只（受體羊）。實(shí)驗(yàn)羊只均由青島奧特種羊場提供。冷凍精子采自成年健康薩?？斯颍⑦M(jìn)行顆粒冷凍。
1.2 主要試劑 透明質(zhì)酸酶：Sigma，H3506；DMEM/F12（1∶1）：HYCLONE，SH30004；胎牛血清：Sigma，10099； 垂 體 促 卵 泡 素 （FSH）：Sigma，DIN00867357；孕馬血清（PMSG）：寧波第二激素廠；L -Glutamine：Sigma，G3126；Medium 199：Gibco，12350；LH：Sigma，L5269；6-DMAP：Sigma，D2629；離子霉素：Sigma，10634。
1.3 幼羔超數(shù)排卵及受體羊的同期發(fā)情 薩?？擞赘岬某瑪?shù)排卵：幼羔手術(shù)采卵前48 h注射FSH 40 mg，注射PMSG 400單位，以后每隔12 h注射FSH 40 mg，直至最后一次注射FSH后12 h進(jìn)行手術(shù)采卵。受體羊的同期發(fā)情：試驗(yàn)開始前14 d，將CIDR栓放入受體母羊陰道中，胚胎移植前2 d時(shí)撤栓，并注射PMSG 400單位，第2天試情，將發(fā)情母羊做好標(biāo)記，用于胚胎移植。
1.4 卵母細(xì)胞的采集及體外成熟 采用手術(shù)法抽取羔羊卵巢上的卵泡，清洗卵巢2次后，用預(yù)裝有2～3 mL 采卵液 （M199+NaHCO3+1 μg/mL 肝素+2 mg/mL BSA）的注射器進(jìn)行抽卵，收集卵泡液，并在體視顯微鏡下挑選卵丘細(xì)胞包裹的卵母細(xì)胞用于成熟。按未成熟卵母細(xì)胞20～25枚揀入100μL成熟液微滴中的比例進(jìn)行卵母細(xì)胞體外成熟，在38.5℃、5%CO2濃度、飽和濕度的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)18 h后去除卵丘細(xì)胞，挑選第一極體排出的裸卵用于下一步的體外受精。
1.5 體外受精 將冷凍的薩?？斯蚓宇w粒從液氮罐中取出，直接投入帶有2 mL獲能液的試管中進(jìn)行體外獲能，利用TALP液上游法，上游15～20 min，取上清液2 000 r/min離心3 min，去除上清液，調(diào)整精子密度為（6×106）～（9×106）個(gè)/mL，加入到裝有成熟卵母細(xì)胞的成熟液微滴中，在4孔板內(nèi)精卵共孵育（在38.5℃、5%CO2濃度、飽和濕度的培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)）。18～24 h后挑選卵裂的胚胎進(jìn)行體外培養(yǎng)。
1.6 胚胎移植 將同期發(fā)情的受體羊保定，刮凈綿羊右下腹被毛，碘酒消毒，脫碘。手術(shù)刀切開腹部，暴露子宮和卵巢，根據(jù)卵巢黃體的狀況和發(fā)情時(shí)間確定移植胚胎的胚齡和數(shù)目。2～4細(xì)胞期胚胎移入輸卵管壺腹部，桑葚胚和囊胚移入子宮角。
2 結(jié)果與分析
2.1 激素對(duì)幼羔超數(shù)排卵的影響 薩?？擞赘嶙⑸銯SH+PMSG激素后，利用手術(shù)法抽取幼羔的卵母細(xì)胞，4只幼羔經(jīng)激素處理48 h后，卵泡的發(fā)育情況差異較大，共獲得可用卵母細(xì)胞109枚（見表1）。
表1 幼畜超數(shù)排卵試驗(yàn)結(jié)果
2.2 體外受精 卵母細(xì)胞在體外成熟培養(yǎng)18 h后（見圖1A）去除卵丘細(xì)胞，挑選排出第一極體的卵母細(xì)胞（見圖1B），統(tǒng)計(jì)成熟率。將成熟的卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精，精卵共孵育18 h后，挑選卵裂胚胎（見圖2），統(tǒng)計(jì)卵裂率。卵母細(xì)胞的成熟率及其體外受精后的卵裂率統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表2。由表2可知，體外成熟培養(yǎng)后得到成熟卵母細(xì)胞79枚，成熟率為72.48%；體外受精后得到正常卵裂胚胎34枚，卵裂率為43.04%。
圖1 卵母細(xì)胞的體外成熟
表2 卵母細(xì)胞體外成熟率及其體外受精后的卵裂率統(tǒng)計(jì)結(jié)果
2.3 胚胎移植及分娩 將卵裂的胚胎進(jìn)行胚胎移植，通過判斷受體母羊的黃體發(fā)育情況確定胚胎移植的部位和數(shù)量。共移植卵裂胚胎34枚，移植受體羊6只。胚胎移植后1個(gè)月，通過人工試情的方法，發(fā)現(xiàn)在孕后期共有3只受體羊正常妊娠，妊娠率為50%。順產(chǎn)生下薩?？搜蚋峁灿?jì)3只。
圖2 卵裂胚胎
3 討論
超數(shù)排卵技術(shù)是一種利用外源促性腺激素誘發(fā)動(dòng)物卵巢卵泡發(fā)育，并排出卵子的技術(shù)。在該研究中，筆者采用的JIVET技術(shù)主要利用了1～2月齡的母羔卵巢對(duì)生殖激素的敏感性較強(qiáng)、卵泡很少閉鎖、在注射促性腺激素后可激發(fā)產(chǎn)生大量卵泡的特殊生理特點(diǎn)［6］。目前，該項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)成為家畜繁殖技術(shù)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，不僅能夠加快家畜的繁育和改良速度，而且還為家畜胚胎的商業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用提供了廣闊的發(fā)展前景。
在該研究中，筆者對(duì)4只1月齡薩?？司d羊幼羔進(jìn)行超數(shù)排卵處理，結(jié)果表明，在相同的激素處理?xiàng)l件下，不同羊只對(duì)激素的敏感程度存在差異，其中，只有1只羊反應(yīng)相對(duì)較好，產(chǎn)生了較多的卵泡，2只幼羔對(duì)激素的反應(yīng)一般，而另外1只只產(chǎn)生了較少的卵泡。該試驗(yàn)共獲得可用卵母細(xì)胞109枚，采卵水平較低。此外，卵母細(xì)胞在體外成熟后，共得到成熟卵母細(xì)胞79枚，成熟率為72.48%；體外受精后，共有34枚胚胎卵裂，卵裂率為43.04%；共移植34枚胚胎，胚胎移植妊娠率為50%。此前，參與該研究的中國農(nóng)業(yè)大學(xué)在其他地區(qū)采用相同處理方法得到的卵裂率和妊娠率分別為31.8%～73.5%、41.2%～66%，表明該研究結(jié)果較為理想。受體羊順利分娩后得到3只薩福克羔羊，證明利用JIVET技術(shù)快速繁育薩?？司d羊是可行的。
目前的研究認(rèn)為，羔羊在4～6周齡時(shí)的超數(shù)排卵效果最佳，此外，最新的研究結(jié)果也認(rèn)為不同的品種以及基因等遺傳背景對(duì)幼畜超數(shù)排卵效果也有一定的影響［7-8］。 李運(yùn)生等［9］研究發(fā)現(xiàn)，幼畜超數(shù)排卵的季節(jié)和母畜懷孕期間的營養(yǎng)水平也對(duì)超數(shù)排卵的效果有影響。該研究中，筆者僅選取4只幼羔進(jìn)行了超數(shù)排卵處理，并未進(jìn)行大量的重復(fù)性試驗(yàn)，且獲得的卵母細(xì)胞數(shù)量較少，這可能與進(jìn)行超數(shù)排卵處理的季節(jié)有關(guān)［10-11］。該研究在2月進(jìn)行，正處于冬季，對(duì)幼羔產(chǎn)生了一定影響；此外，卵母細(xì)胞的體外成熟率和卵裂率等數(shù)據(jù)都處于正常水平，表明前期建立的相關(guān)技術(shù)體系相對(duì)成熟。
4 小結(jié)
該研究系統(tǒng)地掌握了幼畜超排技術(shù)（JIVET）的激素超數(shù)排卵、卵母細(xì)胞的體外成熟、體外受精、胚胎移植等技術(shù)方法。利用JIVET技術(shù)可以縮短薩?？搜虻姆庇芷冢瑥亩鵀樵擁?xiàng)技術(shù)的進(jìn)一步研究和推廣應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
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Study on Rapid Propagation of Suffolk Sheep by Using JIVET Technology
LIU Zong-zheng1，2，LI He-gang1，CHENG Ming1，2，YANG Pei-pei1，ZHAO Jin-shan1
（1.Qingdao Municipal Institute for Animal Husbandry and Veterinary Medicine of Shandong Province，Qingdao 266041，China；2.Qingdao Aote Sheep Breeding Farm，Qingdao 266041，China）
JIVET is a technique using reproductive hormone to stimulate ovarian of young stock to rapidly and efficiently produce oocytes.In this study,in order to evaluate the application performance of JIVET in rapid propagation of Suffolk Sheep,4 onemonth-old lambs of Suffolk Sheep were selected and intramuscularly administrated with FSH and PMSG.Forty-eight hours after administration of reproductive hormone,the oocytes were collected by surgery and were subsequently matured in vitro.The matured oocytes were fertilized with prepared frozen semen in vitro.When the embryos grew to 2 to 8 cells each,they were transferred into the uterus of 6 receptor female sheep.The results revealed that a total of 109 available oocytes were obtain after the treatment of reproductive hormone and 79 of them were successfully matured in vitro,and the maturation rate was 72.48%.A total of 34 cleaved embryos were obtained after fertilization in vitro and the cleavage rate was 43.04%.Three receptor female sheep was pregnant after receiving embryo transfer and the pregnancy rate was 50%.Finally,3 lambs of Suffolk Sheep were obtained.These results suggest the fact that the application of JIVET can shorten the breeding cycle of Suffolk Sheep and thus speed up the breeding of Suffolk Sheep.
Suffolk Sheep；JIVET；lamb；reproductive hormone；embryo transfer
S826.3；S813.3
A文章順序編號(hào)1672-5190（2016）03-0001-03
2015－12－08
項(xiàng)目來源：青島市民生計(jì)劃項(xiàng)目（13-1-3-88-nsh）。
劉宗正（1985—），男，助理畜牧師，博士，主要從事發(fā)育生物學(xué)研究工作。
趙金山（1975—），男，高級(jí)畜牧師，博士，主要研究方向?yàn)閯?dòng)物遺傳與育種。
（責(zé)任編輯：趙俊利）
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