黑木耳硒多糖體外抗氧化作用的研究

岳麗紅 ，王玉俊，李 晶，張躍華 ，王玉偉

（1.佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2.波巴布生物科技有限公司，黑龍江 佳木斯 156007）

黑木耳硒多糖體外抗氧化作用的研究

岳麗紅1，王玉俊1，李 晶1，張躍華1，王玉偉2

（1.佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2.波巴布生物科技有限公司，黑龍江 佳木斯 156007）

旨在評價黑木耳硒多糖與普通黑木耳多糖的抗氧化能力。采用分光光度法測定黑木耳硒多糖與普通木耳多糖對羥自由基（·OH）、氧自由基（·O2）的清除效果。結(jié)果表明，黑木耳硒多糖和普通黑木耳多糖均能夠清除和平衡多種活性羥自由基（·OH）、氧自由基（·O2），黑木耳硒多糖對羥自由基（·OH）、氧自由基（·O2）的清除效果明顯優(yōu)于普通黑木耳多糖，且清除率隨多糖濃度的升高而增大。黑木耳硒多糖和黑木耳多糖均具有體外抗氧化能力，且抗氧化能力的強弱與多糖濃度呈正相關(guān)。與普通黑木耳多糖相比，黑木耳硒多糖抗氧化能力更強，減少自由基引起的機體損傷效果更好。

黑木耳硒多糖；羥自由基（·OH）；氧自由基（·O2）；抗氧化

已有研究表明，多種食用菌具有較強的富硒能力，其子實體中的菌絲體可吸收無機硒，使其轉(zhuǎn)化為有機硒并富集。黑木耳硒多糖是一種富集于黑木耳子實體中的有機硒多糖，兼有多糖與硒的多種生理活性［1］。近年來，有學(xué)者研究了富硒食用菌多糖的體外抗氧化活性、富硒木耳多糖的提取工藝和營養(yǎng)成分、富硒黑木耳各組分中的含硒量等［2-4］，但未見富硒黑木耳多糖抗氧化性能方面的研究，尤其是富硒與普通木耳多糖體外抗氧化性能的比較研究。筆者以提取自波巴布生物科技有限公司生產(chǎn)的黑木耳、富硒黑木耳的多糖為原料，采用分光光度法，對富硒和普通黑木耳多糖的體外抗氧化作用進行比較研究，以期為進一步探索黑木耳硒多糖的抗氧化作用機制提供試驗基礎(chǔ)，同時也為黑木耳硒多糖保健品的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 樣品及來源：黑木耳、富硒黑木耳（含硒量為800μg/kg），由波巴布生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.1.2 主要試劑：FeSO4、水楊酸鈉、鄰苯三酚、Tris-HCl，天津市凱通化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 儀器設(shè)備：JP-010T型超聲波清洗器，深圳市潔盟超聲波清洗機有限公司；TGL-15B型高速臺式離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠；752N型紫外分光光度計，上海儀電分析儀有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 黑木耳硒多糖及普通黑木耳多糖的制備：分別將富硒和普通黑木耳子實體經(jīng)冷凍（-45℃）干燥后研磨粉碎，用100目篩網(wǎng)過濾，用20倍蒸餾水使其復(fù)水，超聲處理30min，加入酶液，加酶量為溶液的1%。在37℃水浴鍋中提取多糖，過濾，濾渣按上述方法重復(fù)提取1次，并將濾液合并。濾液于40℃、5～15 kPa條件下減壓蒸餾濃縮，采用Sevage法分離蛋白質(zhì)，并加入95%乙醇沉淀，凍干上清液，獲得富硒黑木耳粗多糖及普通黑木耳粗多糖。分別稱取2種多糖各1 g，溶解于100mL蒸餾水中，得到富硒及普通黑木耳多糖母液（10 g/L），并將其冷凍保存。

1.2.2 濃度梯度硒多糖溶液的配制：取5支試管，分別編號為①、②、③、④、⑤。①號試管中加入20mL硒多糖母液，從①號試管中吸取10mL母液，移入②號試管中，加入10mL蒸餾水混勻，再從②號試管中吸取10mL溶液，移入③號試管，加入10mL蒸餾水混勻。按上述步驟分別配制④、⑤號試管中的溶液， 獲得濃度分別為 10、5、2.5、1.25、0.625 g/L的濃度梯度硒多糖溶液。按上述步驟，配制普通黑木耳濃度梯度多糖溶液。

1.2.3 2種多糖清除羥自由基（·OH）能力的測定：分別取1mL不同濃度的2種多糖于試管中，加入1mL 2mmol/L的FeSO4溶液、1mL 2mmol/L的水楊酸鈉溶液和1mL 0.1%的H2O2，充分混勻，將其置于38℃水浴鍋中恒溫45min，待冷卻至室溫后在510 nm波長處測定混合液的吸光度值［5］，按公式（1）計算不同濃度多糖溶液對羥自由基（·OH）的清除率。

式中：A空白為未加羥自由基（·OH）和多糖體系的吸光度值；A樣品為多糖清除羥自由基（·OH）體系的吸光度值；A對照為未加多糖溶液的吸光度值。

1.2.4 2種多糖清除氧自由基（·O2）能力的測定：用0.01mol/L的鹽酸溶液溶解鄰苯三酚，使鄰苯三酚濃度為0.01mol/L，并將鄰苯三酚溶液和pH值為7.6的0.05mol/L Tris-HCl緩沖液放入26℃的水浴鍋中水浴5min，分別取1mL不同濃度的2種多糖溶液于試管中，加入2.3mL Tris-HCl溶液，然后加入0.7mL配制好的鄰苯三酚溶液，充分混勻，靜置20min，在320 nm波長處測定混合液的吸光度值［6］。按公式（2）計算不同濃度多糖溶液對氧自由基（·O2）的清除率。

式中：A空白為未加氧自由基（·O2）和多糖體系的吸光度值；A樣品為多糖清除氧自由基（·O2）體系的吸光度值；A對照為未加多糖溶液的吸光度值。

2 結(jié)果與分析

2.1 2種多糖對羥自由基（·OH）的清除能力 多糖濃度在0.625～10 g/L范圍內(nèi)時，黑木耳硒多糖比普通黑木耳多糖清除羥自由基（·OH）的能力更強，并且羥自由基（·OH）的清除率隨多糖濃度的升高而增加。黑木耳硒多糖濃度為10 g/L時清除率達到峰值，為 75.3%（見圖 1）。

圖1 2種黑木耳多糖對羥自由基（·OH）的清除率

2.2 2種多糖對氧自由基（·O2）的清除能力 多糖濃度在0.625～10 g/L范圍內(nèi)時，與普通黑木耳多糖相比，黑木耳硒多糖具有更強的清除氧自由基（·O2）的能力，并且氧自由基（·O2）清除率均隨多糖濃度的升高而增加，其中，濃度為10 g/L的黑木耳硒多糖對氧自由基 （·O2）的清除率達到峰值，為72.0%（見圖 2）。

圖2 2種黑木耳多糖對氧自由基（·O2）的清除率

3 討論

人體的衰老與羥自由基 （·OH）和氧自由基（·O2）過量有關(guān)，而羥自由基（·OH）可以直接作用于生物膜引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，因此，其危害更大。有機硒多糖作為一類重要的抗氧化劑，具有天然、安全、富有營養(yǎng)、易被機體吸收的優(yōu)勢。在水溶液及親脂溶液中能與其他抗氧化劑協(xié)同作用，清除和平衡多種活性羥自由基（·OH）、氧自由基（·O2）、螯合金屬離子，減少自由基引起的機體損傷［7］。與傳統(tǒng)多糖相比較，有機硒多糖的抗氧化功能更強，更易于機體吸收和利用。

該研究結(jié)果表明，黑木耳多糖對羥自由基（·OH）和氧自由基（·O2）有較強的清除能力，濃度越高清除能力越強，且黑木耳硒多糖清除自由基能力較普通黑木耳多糖強。提示黑木耳硒多糖有較強的抗氧化能力，并且其抗氧化能力隨硒多糖濃度的升高而增強。因此，開發(fā)富硒黑木耳多糖類新型保健品對人體抗氧化和預(yù)防衰老具有重要意義。

［1］李玲飛.四種食用菌的富硒特性研究［D］.杭州：浙江大學(xué)，2012.

［2］武蕓.富硒黑木耳營養(yǎng)成分研究［J］.食品科學(xué)，2008，29（8）：87-90.

［3］張連富，王蓮芳，竇春霞，等.富硒食用菌多糖的體外抗氧化研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2007，19（6）：1044-1047.

［4］CHOWDHURY M，KUBRA K，AHMED S.Screening of antimicrobial，antioxidant properties and bioactive compounds of some edible mushrooms cultivated in Bangladesh［J］.Ann Clin Microbiol Antimicrob，2015，14：8.

［5］張?zhí)苽?，楊樂，柳青海，?地木耳多糖的抗氧化性與抑菌作用［J］.食品與生物技術(shù)學(xué)報，2011，30（6）：868-873.

［6］趙鑫.黑木耳分級多糖抗氧化活性及其相關(guān)生理功能研究［D］.哈爾濱：東北林業(yè)大學(xué)，2011：13.

［7］張寧.黑木耳分級多糖制備及抗氧化研究［D］.哈爾濱：東北林業(yè)大學(xué)，2011.

Evaluation of Antioxidant Activity of Selenium-containing Polysaccharides from Selenium-enriched Auricularia auricular

YUE Li-hong1，WANG Yu-jun1，LI Jing1，ZHANG Yue-hua1，WANG Yu-wei2
（1.College of Life Sciences，Jiamusi University，Jiamusi 154007，China；2.Bobabu Biotechnology Co.，Ltd.，Jiamusi 156007，China）

The aim of the present study was to evaluate the antioxidant activity of selenium-containing polysaccharides from selenium-enriched Auricularia auricular and common polysaccharides from Auricularia auricular.Spectrophotometry assay was used to determine the scavenging capacity of selenium-containing polysaccharides and common polysaccharides against·OH radical and·O2radical.The results revealed that both of the selenium-containing polysaccharides and common polysaccharides exhibited the activity to scavenge and balance a variety of active·OH radical and·O2radical;the selenium-containing polysaccharides had better scavenging capacity against·OH radical and·O2radical than common polysaccharides;the scavenging rate against the radicals of both of the polysaccharides was increased with the increasement of their concentrations;both of the selenium-containing polysaccharides and common polysaccharides had antioxidant activity in vitro,and their antioxidant activity was positively related with their concentrations.It is indicated that compared with the common polysaccharides from Auricularia auricular,the selenium-enriched Auricularia auricular has stronger antioxidant activity,and it performs better in alleviating the injuries caused by radicals.

selenium-containing polysaccharides from selenium-enriched Auricularia auricular；·OH radical；·O2radical；antioxidation

S646.6；Q53；R285

A文章順序編號：1672-5190（2016）08-0018-02

2016－07－25

項目來源：佳木斯大學(xué)科學(xué)技術(shù)重點項目（12Z1201513）；佳木斯大學(xué)科技創(chuàng)新團隊建設(shè)計劃項目 （Cxtd-2016-02）；黑龍江省教育科學(xué)“十二五”規(guī)劃2015年度重點課題——大學(xué)生專業(yè)引領(lǐng)下創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項目（GJB1215080）。

岳麗紅（1964—），女，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要研究方向為免疫學(xué)與微生物學(xué)。

王玉偉（1978—），男，工程師，主要從事食用菌產(chǎn)業(yè)化工程、食用菌深加工技術(shù)研究工作。

（責(zé)任編輯：趙俊利）