帕金森病患者血清活化T細(xì)胞趨化因子和炎癥因子水平及其臨床意義

時(shí)　鵬，屈洪黨，李　強(qiáng)，陳育華，李倩倩，謝　靜

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·臨床醫(yī)學(xué)·

帕金森病患者血清活化T細(xì)胞趨化因子和炎癥因子水平及其臨床意義

時(shí)鵬，屈洪黨，李強(qiáng)，陳育華，李倩倩，謝靜

目的：檢測(cè)帕金森病(PD)患者血清活化T細(xì)胞趨化因子(RANTES)水平及炎癥因子白細(xì)胞介素(IL)-1β、IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α的變化，探討其在PD免疫異常發(fā)病機(jī)制中的作用。方法：采用ELISA法檢測(cè)60例PD患者(PD組)和35名健康體檢者(對(duì)照組)血清RANTES、IL-1β、IL-6、TNF-α水平，采用Hoehn-Yahr、UPDRS量表分別對(duì)PD患者進(jìn)行病情評(píng)估，同時(shí)對(duì)2組年齡、性別、吸煙、飲酒、血糖、血壓、血脂差異一般狀況進(jìn)行檢查。結(jié)果：PD組患者血清RANTES、IL-1β、IL-6和TNF-α水平均顯著高于對(duì)照組(P<0.01)；PD 1～5期患者血清RANTES水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～P<0.01)，而1～5期患者血清IL-1β、IL-6 和TNF-α水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；PD患者UPDR評(píng)分組間血清RANTES水平輕、中和重度組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而IL-1β、IL-6 和TNF-α水平輕、中和重度各組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),且PD組血清RANTES水平與UPDRS評(píng)分呈顯著正相關(guān)關(guān)系(P<0.01)。結(jié)論：PD患者血清RANTES、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均較對(duì)照組有顯著升高，提示炎癥因子可能發(fā)動(dòng)并維持了PD的發(fā)病進(jìn)程，可為PD患者早期發(fā)現(xiàn)、防治提供優(yōu)先依據(jù)。

帕金森病；活化T細(xì)胞趨化因子；白細(xì)胞介素-1β；白細(xì)胞介素-6；腫瘤壞死因子-α

帕金森病(Parkinson′s disease,PD)是一種常見的進(jìn)行性神經(jīng)退行性疾病，發(fā)病率高，病因不明，可能的發(fā)病機(jī)制有氧化應(yīng)激、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子缺乏、多巴胺(dopamine,DA)能神經(jīng)元凋亡等,并可能與細(xì)胞免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的免疫異常有一定的關(guān)系。NEHER等[1-2]發(fā)現(xiàn)PD患者黑質(zhì)紋狀體區(qū)存在T淋巴細(xì)胞、激活的小膠質(zhì)細(xì)胞及炎細(xì)胞的浸潤(rùn)?；罨疶細(xì)胞趨化因子(RANTES)是趨化因子家族成員，主要由激活的T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等分泌。活化的小膠質(zhì)細(xì)胞通過分泌一系列前炎性因子及趨化因子，一方面直接作用于外周T淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致外周免疫失調(diào)；另一方面誘導(dǎo)外周T淋巴細(xì)胞進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nerve system,CNS)，直接或通過激活小膠質(zhì)細(xì)胞間接造成DA能神經(jīng)元損傷。本研究通過檢測(cè)PD患者和正常健康對(duì)照者血清RANTES、白細(xì)胞介素(IL)-1β、IL-6、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的水平差異，探討其在PD免疫異常發(fā)病機(jī)制中的作用。

1　資料與方法

1.1一般資料收集2014年2月至2015年8月在我科住院的PD患者60例;其中男39例，女21例；年齡42～80歲；病程1.1～11年。均符合英國(guó)帕金森病協(xié)會(huì)腦庫臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)且均征得患者及其家屬同意，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)道德規(guī)范。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)嚴(yán)重肝腎功能不全者及心肺疾病者；(2)血管炎、風(fēng)濕性心臟病患者及有感染并發(fā)癥者；(3)血液系統(tǒng)疾病者；(4)腫瘤患者；(5)近6個(gè)月內(nèi)急性創(chuàng)傷出血、感染及心腦血管疾病者。對(duì)照組為35名健康體檢合格者;其中男17名，女18名；年齡45～75歲。

1.2Hoehn-Yahr分級(jí)據(jù)Hoehn-Yahr分級(jí)表標(biāo)準(zhǔn)對(duì)PD患者進(jìn)行評(píng)分。Ⅰ期：?jiǎn)蝹?cè)身體受影響，功能減退很??；Ⅱ期：身體雙側(cè)或中線明顯受影響，沒有平衡功能障礙；Ⅲ期：平衡受影響，輕度到中度疾病，但患者可以獨(dú)立生活；Ⅳ期：嚴(yán)重的無活動(dòng)能力，但患者可以自行走動(dòng)和站立；Ⅴ期：在沒有他人幫助的情況下，只能臥床或坐輪椅。

1.3帕金森UPDRS評(píng)分參考LANGSTON等[3]從精神、行為和情感、日常生活、運(yùn)動(dòng)檢查和藥物治療的并發(fā)癥4大項(xiàng)進(jìn)行評(píng)分，總分199分，分輕、中、重3組。輕度 0～50分，13例；中度 >50～100分，24例；重度>100～199分，23例。評(píng)分均由經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)的神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)生完全按照測(cè)評(píng)標(biāo)準(zhǔn)完成。

1.4樣本采集及測(cè)定PD組及對(duì)照組抽取空腹靜脈血4 mL，1 h內(nèi)離心，收集血清，放置-80 ℃冰箱內(nèi)貯存。采用ELISA法測(cè)定RANTES、IL-1β、IL-6、TNF-α，試劑盒由晶美生物工程有限公司提供，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用方差分析及、q檢驗(yàn)、t(或t′)檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)和直線相關(guān)分析。

2　結(jié)果

2.12組一般資料比較2組年齡、性別、吸煙、飲酒、高血糖、高血壓和高血脂差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有良好的均衡性(見表1)。

2.22組血清 RANTES、IL-1β、IL-6 和TNF-α水平比較結(jié)果顯示，PD組血清RANTES、IL-1β、IL-6 和TNF-α水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.01)(見表2)。

表1　2組一般情況比較

Δ示t值

*示t′值

2.3PD患者Hoehn-Yahr分期間血清RANTES、IL-1β、IL-6 和TNF-α水平比較PD 3、4和5期患者血清RANTES水平均高于1期與2期患者(P<0.05～P<0.01)，4期和5期患者血清RANTES水平亦均高于2期與3期患者(P<0.05～P<0.01)，5期患者血清RANTES水平明顯高于4期患者(P<0.01)；而1～5期患者血清IL-1β、IL-6 和TNF-α水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見表3)。

q檢驗(yàn)：與1期比較*P<0.05，**P<0.01；與2期比較▲▲P<0.01；與3期比較##P<0.01；與4期比較++P<0.01

2.4PD患者UPDRS評(píng)分組間RANTES、IL-1β、IL-6 和TNF-α水平比較UPDR評(píng)分組間血清RANTES水平中、重度組均明顯高于輕度組(P<0.01)，重度組也明顯高于中度組(P<0.01)；而IL-1β、IL-6 和TNF-α水平輕、中和重度各組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見表4)。

q檢驗(yàn)：與輕度組比較★★P<0.01；與中度組比較▲▲P<0.01

2.5PD組血清RANTES水平與UPDRS評(píng)分的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，2者呈顯著相關(guān)關(guān)系(r=0.708，P<0.01)。

3　討論

PD是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，在我國(guó)65歲人群中患病率高達(dá)1.7%，隨著老齡化的加劇，患病總數(shù)正持續(xù)增長(zhǎng)。其確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚，可能機(jī)制如下：(1)泛素-蛋白酶系統(tǒng)(UPS)降解障礙；(2)蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊和聚集；(3)炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙。自1988年在PD患者腦黑質(zhì)致密部發(fā)現(xiàn)激活的小膠質(zhì)細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞的聚集，越來越多的研究提示神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)在PD的發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用[4-6]。RANTES是一種CC類趨化蛋白，由活化的小膠質(zhì)細(xì)胞分泌，對(duì)外周T淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞有很強(qiáng)的趨化作用，血清中其水平在一定程度上可以反映以小膠質(zhì)細(xì)胞為主的神經(jīng)炎癥反應(yīng)的嚴(yán)重程度。

細(xì)胞因子是由機(jī)體的免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞合成和分泌的多肽類因子，參與機(jī)體的免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)。關(guān)于神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)的研究近年日益受到重視。越來越多的研究[7]表明多種神經(jīng)變性疾病的發(fā)生、發(fā)展均與細(xì)胞因子有關(guān)，如在PD患者腦內(nèi)IL-2等表達(dá)增加。HARMS等[8]實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示TNF在黑質(zhì)DA能神經(jīng)元退行性變過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，lenti-DN-TNF可減緩PD大鼠模型黑質(zhì)DA能神經(jīng)元損傷。KIM等[9]的實(shí)驗(yàn)提示在小膠質(zhì)細(xì)胞激活劑(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的PD小鼠模型中，抑制IL-6的表達(dá)可對(duì)DA能神經(jīng)元起保護(hù)作用。

本研究結(jié)果表明，PD組血清RANTES、IL-1β、IL-6 和TNF-α水平較對(duì)照組均顯著升高(P<0.01)，這與朱瑜齡等[10-11]的研究結(jié)果相同。本研究結(jié)果還顯示，PD患者血清RANTES水平在Hoehn-Yahr分級(jí)間及UPDRS分期間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～P<0.01)，且與UPDRS分期呈明顯正相關(guān)(P<0.01)；血清IL-1β、IL-6 和TNF-α水平與Hoehn-Yahr分級(jí)和UPDRS評(píng)分各組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但許繼平等[12]的研究則提示炎性因子IL-1β等與病程呈正相關(guān)。分析其原因可能是：(1)RANTES細(xì)胞作用于外周T細(xì)胞，引起PD患者免疫損害加重，導(dǎo)致DA能神經(jīng)元細(xì)胞凋亡；(2)同時(shí)誘導(dǎo)外周T淋巴細(xì)胞進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，直接和/或間接引起PD患者DA能神經(jīng)元損害；(3)隨著病情進(jìn)展及癥狀加重，神經(jīng)炎性反應(yīng)的持續(xù)進(jìn)展，血腦屏障破壞、通透性增加，RANTES外漏致外周血中RANTES水平增高，增多的RANTES通過招募更多的淋巴細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞進(jìn)入炎性反應(yīng)區(qū)域發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，從而引起PD患者病情加重；而IL-1β、IL-6、TNF-α均是促炎型細(xì)胞因子，可以引起并維持炎性反應(yīng)，引起神經(jīng)元凋亡。BLOCK等[13]提出PD病理過程中：炎性反應(yīng)引起DA能神經(jīng)元的凋亡，DA能神經(jīng)元的受損導(dǎo)致更進(jìn)一步的炎性反應(yīng)。BANKS等[14]報(bào)道腦內(nèi)增高的炎癥因子可以通過血腦屏障進(jìn)入血循環(huán)，從而引起血清炎癥因子的升高。CICCHETTI等[15]發(fā)現(xiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞富集的黑質(zhì)，對(duì)炎性因子介導(dǎo)的神經(jīng)變性比較敏感。BRASSESCO等[16]的研究發(fā)現(xiàn)缺乏TNF-α受體的小鼠可對(duì)抗MPTP毒性，均進(jìn)一步支持炎性細(xì)胞因子在PD發(fā)病中的作用。理論推測(cè)IL-1β、IL-6、TNF-α與PD患者病情進(jìn)展及臨床癥狀評(píng)分可能呈正相關(guān)性，但本研究未發(fā)現(xiàn)其特征，我們推測(cè)：(1)IL-1β、IL-6 、TNF-α相關(guān)炎性因子作用于PD患者，引起DA能神經(jīng)元凋亡與損害較緩慢和緩和，對(duì)病情加重影響相對(duì)RANTES較??；(2)本實(shí)驗(yàn)2組樣本量相對(duì)仍較小，仍需大樣本、多中心來證實(shí)；綜合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們認(rèn)為，炎癥因子可能發(fā)動(dòng)PD的發(fā)病進(jìn)程，中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥等因素引起小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，激活的小膠質(zhì)細(xì)胞可分泌TNF-α、IL-1β、IL-6等，TNF-α、IL-1β、IL-6又可誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞，使其釋放RANTES，同時(shí)RANTES進(jìn)一步刺激小膠質(zhì)細(xì)胞分泌大量炎癥因子，并通過激活caspases凋亡通路致使神經(jīng)元凋亡；或通過激活神經(jīng)酰胺途徑發(fā)揮神經(jīng)毒性作用，致神經(jīng)元變性、死亡。

綜上所述，炎癥在PD發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，干預(yù)炎癥因子的釋放有助于阻遏PD進(jìn)展?？寡字委熡型蔀橹委烶D的重要手段之一。

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(本文編輯劉璐)

The serum levels of activated T cells chemokines RANTES and inflammatory cytokines in Parkinson′s disease patients and its significance

SHI Peng,QU Hong-dang,LI Qiang,CHEN Yu-hua,LI Qian-qian,XIE Jing

(DepartmentofNeurology,TheFirstAffiliatedHospitalofBengbuMedicalCollege,BengbuAnhui233004,China)

Objective:To detect the levels of serum activated T cells chemokines(RANTES) and inflammatory cytokines[including interleukin(IL)-1β,IL-6 and tumor necrosis factor(TNF)-α] in Parkinson′s disease(PD) patients,and explore its roles in abnormal immune pathogenesis of PD.Methods:The serum levels of RANTES,IL-1β,IL-6 and TNF-α in 60 PD patients(PD group) and 35 healthy people(control group) were examined using the ELISA method.The disease of PD patients was evaluated using the UPDRS and Hoehn-Yahr score.The age,sex,smoking,drinking alcohol,blood glucose,blood pressure and blood lipid in two groups were examined.Results:The serum levels of the RANTES,IL-1β,IL-6 and TNF-α in PD group were significantly higher than those in control group(P<0.01).The differences of the serum RANTES levels in stage 1 to 5 PD patients were statistically significant(P<0.05 toP<0.01),but for the differences of the serum levels of IL-1β,IL-6 and TNF-α were not statistically significant(P>0.05).The differences of the serum RANTES levels between the mild,moderate and severe PD patients identified by the UPDRS were statistically significant(P<0.01),but for the differences of the levels of IL-1β、IL-6 and TNF-α were not statistically significant(P>0.05),and the level of RANTES was significantly positive correlation with the UPDRS score(P<0.01).Conclusions:Compared with control group,the levels of RANTES,IL-1β,IL-6 and TNF-α in PD patients increase,which suggest that the inflammatory cytokines may initiate and sustain the process of pathogenesis of PD,and provide the reference in early finding and treating the PD.

Parkinson′s disease;activated T cells chemokines;interleukin-1β;interleukin-6;tumor necrosis factor-α

2016-03-17

安徽省教育廳自然科學(xué)一般項(xiàng)目(KJ2015B094by)

單位] 蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科，安徽 蚌埠 233004

[作者簡(jiǎn)介] 時(shí)鵬(1981-)，男，博士研究生.

屈洪黨，碩士研究生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，副教授.E-mail:qhd820@sohu.com

1000-2200(2016)09-1132-04

R 742.5

ADOI:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.09.004