水飛薊素保護(hù)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的效應(yīng)與SIRT1及腺苷酸活化蛋白激酶α的作用機(jī)制

郝傳錚　魏　利　趙　旭　陸芳芳　胡　平

(南通大學(xué)附屬醫(yī)院中醫(yī)科，江蘇　南通　226001)

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水飛薊素保護(hù)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的效應(yīng)與SIRT1及腺苷酸活化蛋白激酶α的作用機(jī)制

郝傳錚魏利1趙旭陸芳芳胡平

(南通大學(xué)附屬醫(yī)院中醫(yī)科，江蘇南通226001)

目的研究水飛薊素對(duì)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及SIRT1和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)α在其中的作用機(jī)制。方法使用1×105nmol/L H2O2處理腎小球內(nèi)皮細(xì)胞,構(gòu)建氧化應(yīng)激細(xì)胞模型。MTT實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)水飛薊素對(duì)氧化應(yīng)激造成的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響。實(shí)時(shí)定量RT-PCR法測(cè)定水飛薊素對(duì)氧化應(yīng)激損傷的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞SIRT1和AMPKα mRNA水平的影響。Western 印跡法測(cè)定水飛薊素對(duì)氧化應(yīng)激損傷的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞SIRT1，AMPK和AMPKα磷酸化蛋白水平的影響。結(jié)果1×105nmol/L H2O2處理腎小球內(nèi)皮細(xì)胞后，細(xì)胞存活率顯著降低，而1 μg/ml和5 μg/ml的水飛薊素處理可以顯著提高細(xì)胞存活率。實(shí)時(shí)定量RT-PCR結(jié)果顯示，5 μg/ml的水飛薊素處理顯著提高了腎小球內(nèi)皮細(xì)胞SIRT1 mRNA水平，而對(duì)AMPKα mRNA水平無(wú)顯著影響。Western 印跡結(jié)果顯示，H2O2處理后，細(xì)胞的SIRT1蛋白水平和AMPKα磷酸化蛋白水平未出現(xiàn)顯著變化，但AMPKα蛋白水平顯著降低。1 μg/ml和5 μg/ml的水飛薊素處理顯著提高了細(xì)胞SIRT1蛋白水平和AMPKα磷酸化蛋白水平；H2O2處理后細(xì)胞的AMPKα蛋白水平顯著降低，而1 μg/ml和5 μg/ml的水飛薊素處理顯著提高了AMPKα蛋白水平，和對(duì)照組無(wú)顯著差異。結(jié)論水飛薊素可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)SIRT1及AMPKα蛋白的表達(dá)及AMPKα磷酸化發(fā)揮抗氧化損傷作用而保護(hù)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞。

水飛薊素;腎小球內(nèi)皮細(xì)胞;氧化應(yīng)激;SIRT1;AMPKα

由于Sirtuin具有抑制基因轉(zhuǎn)錄的功能，因此又稱為沉默基因同源蛋白(SIR)〔1〕，其中SIRT1是目前研究的熱點(diǎn)。水飛薊素可以通過(guò)激活SIRT1發(fā)揮其對(duì)紫外線造成的A375-S2 細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用〔2〕。此外，腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)是“細(xì)胞能量調(diào)節(jié)器”，作為一個(gè)重要的信號(hào)通路，參與細(xì)胞蛋白質(zhì)合成、機(jī)體炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激等過(guò)程〔3〕。由于它和SIRT1存在復(fù)雜的調(diào)控關(guān)系，它是否參與SIRT1保護(hù)腎臟的氧化應(yīng)激也值得深入探討。水飛薊素是從菊科植物水飛薊種子中提取的一類黃酮木脂素類成分，主要成分有水飛薊賓、異水飛薊賓、水飛薊寧、水飛薊亭等〔4〕。研究發(fā)現(xiàn)水飛薊素具有抗腫瘤、抗炎、降血脂、治療糖尿病等用途，其機(jī)制可能與抗氧化有關(guān)〔5〕。本研究以水飛薊素為研究對(duì)象，觀察它對(duì)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)效應(yīng)，并探索SIRT1和AMPKα在其中的作用機(jī)制。

1　材料與方法

1.1細(xì)胞株藥物及試劑小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞株。DMEM培養(yǎng)基及胎牛血清購(gòu)自Gibco公司。水飛薊素、MTT試劑盒購(gòu)自上海生工，總RNA快速提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和定量PCR SYBR Green Master Mix均購(gòu)自TAKARA公司。蛋白裂解RIPA裂解液、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒和蛋白上樣緩沖液均購(gòu)自生工生物，SDS-PAGE配膠溶液購(gòu)自碧云天公司。PVDF膜和ECL化學(xué)發(fā)光液購(gòu)自Mippore公司。SIRT1一抗：β-actin購(gòu)自Proteintech公司，SIRT1抗體，AMPKα和p-AMPKα(T172)購(gòu)自CST公司。二抗：羊抗鼠IgG(H+L)和羊抗兔IgG(H+L)購(gòu)自Jackson公司。

1.2儀器及耗材定量PCR儀為AB公司ViiA7 Real-Time PCR System。相關(guān)耗材(Tip頭、EP管等)購(gòu)自Thermal Scientific Fisher公司，均為無(wú)RNase、DNase和無(wú)熱源的分子生物學(xué)耗材。蛋白電泳儀購(gòu)自Bio-Rad公司，酶標(biāo)儀(SPECTRA max Plus 384)購(gòu)自Molecular Devices公司。CCD成像系統(tǒng)：Bio-Rad公司。臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)：H1650R，上海盧湘儀。臺(tái)式低速離心機(jī)：TDZ6B-WS，上海盧湘儀。

1.3細(xì)胞培養(yǎng)及水飛薊素處理將胎牛血清和DMEM按1∶9的比例配制成完全培養(yǎng)基用于培養(yǎng)小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞，將小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞置于37°C，5%CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。3 d傳代一次，在顯微鏡下觀察，細(xì)胞呈多角形或長(zhǎng)梭形，核淡，胞膜明顯，細(xì)胞呈單層。取第3代細(xì)胞供實(shí)驗(yàn)用。水飛薊素處理方法：①細(xì)胞傳至三代，接6孔板，每孔種相同數(shù)量的細(xì)胞，每孔細(xì)胞數(shù)量是1×106個(gè)。②培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞貼壁。③構(gòu)建氧化應(yīng)激細(xì)胞模型，1×105nmol/L過(guò)氧化氫溶液處理腎小球細(xì)胞，設(shè)置對(duì)照組，處理12 h。④移去培養(yǎng)基，PBS洗兩遍。⑤加入新鮮培養(yǎng)基。⑥水飛薊素溶于DMSO，分別用1 μg/ml和5 μg/ml濃度的水飛薊素處理細(xì)胞，同時(shí)對(duì)照組和過(guò)氧化氫模型組添加等量的DMSO，控制DMSO終濃度為0.1%。⑦細(xì)胞培養(yǎng)24 h。⑧PBS洗兩遍，胰酶消化下細(xì)胞，收取細(xì)胞，PBS洗3遍。

1.4MTT比色法檢測(cè)水飛薊素對(duì)氧化應(yīng)激造成的腎小球損傷的影響將細(xì)胞傳至三代，接板，每孔細(xì)胞數(shù)量是8×104個(gè)。繼續(xù)將細(xì)胞培養(yǎng)24 h，用1×105nmol/L H2O2刺激12 h,PBS洗兩次，換成給藥完全培養(yǎng)基。培養(yǎng)24 h后，進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)。向各孔細(xì)胞加入20 μl MTT(5 g/L)，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄去培養(yǎng)液，加入150 μl DMSO溶液，室溫下?lián)u床震蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解后，用酶標(biāo)儀測(cè)定490 nm波長(zhǎng)吸光度A490。計(jì)算細(xì)胞存活率。

1.5實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測(cè)水飛薊素對(duì)氧化應(yīng)激損傷的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞SIRT1和AMPKα mRNA水平定量PCR引物，均合成于生工生物(上海)股份有限公司。Trizol法提取細(xì)胞總RNA，核酸蛋白定量檢測(cè)儀測(cè)定RNA濃度，94℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s，55℃ 退火30 s，72℃延伸45 s，30個(gè)循環(huán)后，72℃延伸10 min引物，降至4℃ 反應(yīng)結(jié)束，同時(shí)獲取熒光，共40個(gè)循環(huán)，每組重復(fù)6次，反應(yīng)結(jié)束后行產(chǎn)物的熔解曲線分析，以GAPDH為內(nèi)參行結(jié)果分析。引物序列：SIRT1反義鏈5′-ATG GAC TCC TCA CTA ATG GCT TTC-3′，正義鏈5′-GGTGGAGGAATTGTTTCTGGTAA-3′；AMPK反義鏈5′-GGCACCCTCACATCATCAAA-3′，正義鏈5′-TTC GTCCAACCTTCCATTTT-3′；β-actin反義鏈5′- CCA CAG CTG AGA GGG AAA TC-3′，正義鏈5′- AAGGAAGGCTGGAAAAGAGC-3′。

1.6Western 印跡法測(cè)定各組細(xì)胞SIRT1及AMPKα磷酸化蛋白水平的表達(dá)藥物處理同上。每瓶細(xì)胞加2 ml 4℃預(yù)冷的PBS，平放輕輕搖動(dòng)1 min洗滌細(xì)胞，然后棄去洗液。用胰酶消化貼壁細(xì)胞，并收集至備用的細(xì)胞培養(yǎng)液中。4℃離心5 min收集細(xì)胞。PBS洗滌一次，吸除上清后加1 ml PBS重懸，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到1.5 ml離心管中，4℃離心5 min收集細(xì)胞，吸除上清。按1 ml裂解液加10 μl PMSF(100 mmol/L)，混合均勻。每瓶細(xì)胞加100 μl含PMSF的裂解液，4℃裂解30 min。裂解完后，于4℃下12 000 r/min離心10 min,吸取上清，BCA法測(cè)定蛋白濃度。凝膠電泳分離蛋白，電壓110 V，加入5×上樣緩沖液混勻，沸水中煮沸5 min，迅速冰浴中冷卻，上樣量為每泳道30 μg；25 mA恒流電泳至溴酚藍(lán)跑完濃縮膠層，時(shí)間大約為30 min。分離膠電泳電流為30 mA。200 mA穩(wěn)流電轉(zhuǎn)移，根據(jù)所轉(zhuǎn)蛋白分子量，約1 min/kD。取出PVDF膜，去離子水洗滌。將PVDF膜浸入含5%脫脂奶粉或牛血清白蛋白的封閉液中，置搖床上緩慢搖動(dòng)，室溫封閉1 h。取出已封閉的PVDF膜，浸于1× TBST緩沖液中，于搖床上緩慢洗滌5 min。然后移入含有一抗〔β-actin購(gòu)自Proteintech公司，SIRT1抗體自備，AMPKα和p-AMPKα(T172)購(gòu)自CST公司〕的小袋中，4℃孵育過(guò)夜。取出PVDF膜，浸于1×TBST緩沖液中，于搖床上緩慢洗滌3次，每次10 min。將PVDF膜轉(zhuǎn)移到含二抗(購(gòu)自Jackson公司，稀釋1 000倍)的玻璃平皿中，于室溫?fù)u床上孵育1 h。然后將PVDF膜浸于1×TBST緩沖液中，于搖床上緩慢洗滌3次，每次10 min。用ECL化學(xué)發(fā)光顯影法進(jìn)行曝光顯影，并用Bin軟件進(jìn)行圖像灰度分析。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。

2　結(jié)　果

2.1水飛薊素對(duì)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞的活力的影響模型組為經(jīng)過(guò)雙氧水處理的細(xì)胞，其活力顯著下降(60.835%)和正常對(duì)照組相比差異顯著(95.52%，P<0.01)。和模型組相比，5 μg/ml和1 μg/ml的水飛薊素處理皆顯著提高了細(xì)胞活力(78.081%，69.705%，P<0.05)，而0.1 μg/ml的水飛薊素(68.11%)則未能明顯提高細(xì)胞存活率，說(shuō)明水飛薊素對(duì)氧化損傷后細(xì)胞的活力影響呈劑量相關(guān)關(guān)系。

2.2水飛薊素對(duì)氧化應(yīng)激損傷的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞SIRT1 mRNA水平的影響經(jīng)過(guò)雙氧水處理的細(xì)胞，其SIRT1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量出現(xiàn)升高。和模型組(1.139)相比，5 μg/ml的水飛薊素處理顯著提高了SIRT1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量(1.712,P<0.05)，而1 μg/ml(1.052)和 0.1 μg/ml(1.012)的水飛薊素則未能明顯改變SIRT1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

2.3水飛薊素對(duì)氧化應(yīng)激損傷的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞AMPKα mRNA水平的影響經(jīng)過(guò)雙氧水處理的細(xì)胞，其AMPKα mRNA的相對(duì)表達(dá)量未出現(xiàn)顯著變化。和模型組(0.908)相比，各個(gè)劑量的水飛薊素處理皆未能明顯改變AMPKα mRNA的相對(duì)表達(dá)量(1.000,1.050，0.979)。

2.4水飛薊素對(duì)氧化應(yīng)激損傷的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞SIRT1蛋白水平的影響經(jīng)過(guò)雙氧水處理的細(xì)胞，其SIRT1 蛋白的表達(dá)量未出現(xiàn)顯著變化。和模型組相比，5 μg/ml和1 μg/ml的水飛薊素處理顯著提高了SIRT1 蛋白的表達(dá)量(P<0.05)，而1 μg/ml的水飛薊素則未能明顯改變SIRT1 蛋白的表達(dá)量。見(jiàn)圖1。

2.5水飛薊素對(duì)氧化應(yīng)激損傷的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞AMPKα蛋白水平和AMPKα磷酸化水平的影響經(jīng)過(guò)雙氧水處理的細(xì)胞，其AMPKα蛋白和AMPKα磷酸化未出現(xiàn)顯著變化。和模型組相比，5 μg/ml和1 μg/ml的水飛薊素處理顯著提高了AMPKα磷酸化水平(P<0.05)，而0.1 μg/ml的水飛薊素則未能明顯改變AMPKα磷酸化水平。5、1 μg/ml和0.1 μg/ml的水飛薊素處理皆顯著提高了AMPKα蛋白水平(P<0.05)。見(jiàn)圖2。

圖1　SIRT1蛋白的表達(dá)量

圖2　AMPKα蛋白和AMPKα磷酸化的表達(dá)量

3　討　論

年齡老化和能量過(guò)剩常導(dǎo)致氧化應(yīng)激增加和機(jī)體的抗氧化功能下降，是引發(fā)腎臟病等多種慢性疾病的重要原因。腎臟內(nèi)的活性氧(ROS)產(chǎn)生過(guò)多，超過(guò)機(jī)體的抗氧化能力，ROS和細(xì)胞內(nèi)的大分子如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA發(fā)生氧化反應(yīng)，產(chǎn)生氧化損傷〔6〕。ROS是由氧激發(fā)的化學(xué)性質(zhì)十分活潑的分子，是氧化應(yīng)激的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)〔7〕。盡量減少ROS生成和清除過(guò)量的ROS是腎臟抗氧化應(yīng)激的有效策略。然而，對(duì)于腎的氧化損傷目前并沒(méi)有有效的治療方法。因此，如果能找到一種安全、有效的藥物來(lái)防治腎的氧化損傷，對(duì)人類健康具有重大意義。

人體本身存在強(qiáng)大的抗氧化系統(tǒng)，包括抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)和一些小分子，如維生素C等〔8～11〕。在正常情況下，這些抗氧化酶和小分子可清除體內(nèi)過(guò)剩自由基，保持氧化應(yīng)激/抗氧化系統(tǒng)的平衡，保持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定〔12〕。但是外界進(jìn)入的ROS過(guò)多，或由于機(jī)體自身疾病，產(chǎn)生了過(guò)多的ROS時(shí)，機(jī)體的抗氧化作用被削弱，氧化應(yīng)激/抗氧化系統(tǒng)發(fā)生失衡，就會(huì)引起氧化損傷〔13〕。本文顯示了水飛薊素對(duì)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞的氧化損傷的保護(hù)效應(yīng)。

本文結(jié)果驗(yàn)證了水飛薊素對(duì)SIRT1的影響及后者在水飛薊素的保護(hù)作用中的可能作用。研究發(fā)現(xiàn)，SIRT1減少可加重氧化應(yīng)激導(dǎo)致的腎臟損傷和腎臟的纖維化，而給予SIRT1激動(dòng)劑可減輕由氧化應(yīng)激引起的腎臟損傷，顯示了SIRT1在保護(hù)腎臟氧化損傷方面的重要作用〔14,15〕。

研究發(fā)現(xiàn)，SIRT1可通過(guò)脫乙酰作用使細(xì)胞核中的組蛋白乙?；较陆担瑥亩{(diào)節(jié)有關(guān)基因，如AMPKα的表達(dá)〔16〕。AMPK是細(xì)胞能量調(diào)節(jié)器作為一個(gè)重要的信號(hào)通路，參與細(xì)胞蛋白質(zhì)合成、機(jī)體炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激等過(guò)程，在細(xì)胞保護(hù)機(jī)制中發(fā)揮了重要作用〔17〕。本文結(jié)果說(shuō)明，水飛薊素的保護(hù)效應(yīng)的機(jī)制不是提高了AMPKα mRNA水平，而是激活了AMPKα 的蛋白表達(dá)和磷酸化。水飛薊素提高了腎小球內(nèi)皮細(xì)胞SIRT1 mRNA水平和蛋白水平，后者繼而激活了AMPKα 的蛋白表達(dá)和磷酸化。 Suchankova等〔18〕研究發(fā)現(xiàn)，在高糖條件的作用下，HepG2細(xì)胞可以抑制SIRT1的活性，從而抑制AMPK的激活。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，若給予細(xì)胞SIRT1的激活劑SRT1720，AMPK也得到激活〔19〕。此外，Ajmo等〔20〕發(fā)現(xiàn)，SIRT1的激活劑白黎蘆醇可以同時(shí)激活SIRT1和AMPK，進(jìn)而抑制核轉(zhuǎn)錄因子甾體調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1的活性，有效減輕酒精性肝損傷。 對(duì)于SIRT1激活A(yù)MPK的機(jī)制，研究顯示，SIRT1可通過(guò)使AMPK上游激酶LKB去乙?；瑥亩せ預(yù)MPK〔21〕。本研究證實(shí)水飛薊素可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)SIRT1及AMPKα蛋白的表達(dá)及AMPKα磷酸化發(fā)揮抗氧化損傷的作用，為水飛薊素在腎臟疾病方面的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

1Lee MJ，F(xiàn)eliers D，Mariappan MM.A role for AMP-activated protein kinase in diabetes-induced renal hypertrophy〔J〕.Am J Physiol Renal Physiol，2007;292(2)：617-27.

2Xu D,Chen M,Ren X,etal.Leonurine ameliorates LPS-induced acute kidney injury via suppressing ROS-mediated NF-κB signaling pathway〔J〕.Fitoterapia,2014;97C:148-55.

3Kalyanaraman B.Teaching the basics of redox biology to medical and graduate students:oxidants,antioxidants and disease mechanisms〔J〕.Redox Biol,2013;1(1):244-57.

4Kimura H.The physiological role of hydrogen sulfide and beyond〔J〕.Nitric Oxide,2014;41:4-10

5Zachara BA,Gromadzińska J,Wasowicz W,etal.Red blood cell and plasma glutathione peroxidase activities and selenium concentration in patients with chronic kidney disease:a review〔J〕.Acta Biochim Pol,2006;53(4):663-77.

7Li LH,Wu LJ,Tashiro SI,etal.Activation of the SIRT1 pathway and modulation of the cell cycle were involved in silymarin′s protection against UV-induced A375-S2 cell apoptosis〔J〕.J Asian Nat Prod Res,2007;9(3-5):245-52.

8Sung CC,Hsu YC,Chen CC,etal.Oxidative stress and nucleic acid oxidation in patients with chronic kidney disease〔J〕.Oxid Med Cell Longev,2013；(2012):301982.

9Akyol S,Ugurcu V,Altuntas A,etal.Caffeic acid phenethyl ester as a protective agent against nephrotoxicity and/or oxidative kidney damage:a detailed systematic review〔J〕.Scientific World J,2014；(2013):561971.

10Schieber M,Chandel NS.ROS function in redox signaling and oxidative stress〔J〕.Curr Biol,2014;24(10):R453-62.

11He W,Wang Y,Zhang MZ,etal.Sirt1 activation protects the mouse renal medulla from oxidative injury〔J〕.J Clin Invest,2010;120(4):1056-68.

12Huang XZ,Wen D,Zhang M,etal.Sirt1 activation ameliorates renal fibrosis by inhibiting the TGF-β/Smad3 pathway〔J〕.J Cell Biochem,2014;115(5):996-1005.

13Lai CS,Tsai ML,Badmaev V,etal.Xanthigen suppresses preadipocyte differentiation and adipogenesis through down-regulation of PPARγ and C/EBPs and modulation of SIRT-1,AMPK,and FoxO pathways〔J〕.J Agric Food Chem,2012;60(4):1094-101.

14劉洪玲.水飛薊素的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)民族民間醫(yī)藥,2008；17(7)：23-5.

15Palipoch S.A review of oxidative stress in acute kidney injury:protective role of medicinal plants-derived antioxidants〔J〕.Afr J Tradit Complement Altern Med,2013;10(4):88-93.

16石玉生,張艷,馬金龍,等.水飛薊素對(duì)UVB致人角質(zhì)形成細(xì)胞光老化保護(hù)作用的研究 〔J〕.中醫(yī)藥信息,2013；30(6)：36-9.

17陳芳,劉東波.中藥活性成分降血糖作用機(jī)制研究進(jìn)展〔J〕.中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2012;40(4):123-6.

18Suchankova G,Nelson LE,Gerhart-Hines Z,etal.Concurrent regulation of AMP-activated protein kinase and SIRT1 in mammalian cells〔J〕.Biochem Biophys Res Commun,2009;378(4):836-41.

19Feige JN,Lagouge M,Canto C,etal.Specific SIRT1 activation mimics low energy levels and protects against diet-induced metabolic disorders by enhancing fat oxidation〔J〕.Cell Metab,2008;8(5):347-58.

20Ajmo JM,Liang X,Rogers CQ,etal.Resveratrol alleviates alcoholic fatty liver in mice〔J〕.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2008;295(4):G833-42.

21Lan F,Cacicedo JM,Ruderman N,etal.SIRT1 modulation of the acetylation status,cytosolic localization,and activity of LKB1.Possible role in AMP-activated protein kinase activation〔J〕.J Biol Chem,2008;283(41):27628-35.

〔2014-12-11修回〕

(編輯苑云杰/曹夢(mèng)園)

南通市社會(huì)事業(yè)科技創(chuàng)新與示范計(jì)劃(No.HS2012027)

郝傳錚(1960-)，女，碩士，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要從事中醫(yī)腎病、老年病防治研究。

R285.5

A

1005-9202(2016)18-4430-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.18.012

1南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院13級(jí)研究生