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    黃芩苷對人肝癌細(xì)胞增殖抑制及放療增敏作用

    2016-10-27 03:47:37鄒航
    生物技術(shù)世界 2016年2期
    關(guān)鍵詞:細(xì)胞株抑制率黃芩

    鄒航

    (廣西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 廣西南寧 530021)

    黃芩苷對人肝癌細(xì)胞增殖抑制及放療增敏作用

    鄒航

    (廣西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 廣西南寧 530021)

    目的:探討黃芩苷對人肝癌細(xì)胞HepG2增殖抑制及放療增敏作用。方法:以人肝癌細(xì)胞株HepG2為研究對象,用CCK-8法和流式細(xì)胞儀檢測黃芩苷對肝癌細(xì)胞增殖的影響和肝癌細(xì)胞放射敏感性的改變。結(jié)果:CCK-8法檢測黃芩苷對HepG2的生長有顯著抑制作用且具有劑量依賴性,與陰性對照組對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0. 05) 。黃芩苷能使處于G0/G1、G2/M期的細(xì)胞減少,S期細(xì)胞增加。同時,黃芩苷對HepG2放療具有增敏作用。結(jié)論:黃芩苷可抑制人肝癌細(xì)胞增殖,可能與影響細(xì)胞周期有關(guān);黃芩苷能增強(qiáng)肝癌細(xì)胞放射敏感性。

    黃芩苷 肝癌 細(xì)胞增殖 放療增敏

    肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一,預(yù)后差、病死率高,尋求可靠的綜合治療方案成為治療肝癌的必經(jīng)之路。黃芩苷是從黃芩中分離出來的黃酮類化合物,具有多種藥理作用[1]。近年來發(fā)現(xiàn)黃芩苷具有抗脂質(zhì)氧化,降低血脂、血壓和抗腫瘤作用[2]。放療是輔助治療肝癌的有效手段之一,而如何更進(jìn)一步增加放療的效果,探索肝癌放療的增敏劑無疑是個新途徑。本研究旨在探討黃芩苷聯(lián)合放療,對人肝癌細(xì)胞株HepG2增殖的抑制作用,以及黃芩苷對HepG2放療敏感性的影響,為提高肝癌的治療效果提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料和方法

    1.1 主要材料及試劑

    HepG2細(xì)胞購于中科院上海細(xì)胞所,DMEM培養(yǎng)基及胎牛血清購于Life公司。黃芩苷(Baicalin)購于上海純優(yōu)生物。CCK-8試劑盒購于博士德生物。細(xì)胞周期檢測試劑盒購于北京碧云天。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

    人肝癌HepG2細(xì)胞培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中, 置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。細(xì)胞分組:①陰性對照組;②黃芩苷組:不同濃度黃芩苷處理的HepG2細(xì)胞(黃岑苷粉末用細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋成工作濃度:0.1、0.25、0.5 mg/ml);③放療組;④黃芩苷與放療聯(lián)合治療組:加入0.5 mg/ml黃芩苷培養(yǎng)12h后進(jìn)行照射(X射線能量為6 MeV/u、靶皮距100 cm、劑量率2 Gy/min,細(xì)胞給予4Gy放療)。

    1.2.2 流式細(xì)胞儀檢測腫瘤細(xì)胞周期分布

    黃芩苷組細(xì)胞按0.1、0.25、0.5mg/ml黃芩苷處理后,于48h后分別進(jìn)行消化計(jì)數(shù)。各個不同濃度組及陰性細(xì)胞組分別收集1×106個細(xì)胞。冷PBS洗滌2次后,按照細(xì)胞周期試劑盒說明書分別加入周期檢測試劑,上流式細(xì)胞儀檢測,并對細(xì)胞周期進(jìn)行分析,實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

    1.2.3 CCK-8法測定腫瘤細(xì)胞增殖抑制率

    按上述細(xì)胞分組,每組設(shè)6個復(fù)孔,在96孔板中相同條件下培養(yǎng)48 h 后,吸去培養(yǎng)液,按CCK-8試劑盒說明書加入試劑,在酶標(biāo)儀上讀取450nm處吸光度值,并計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    2 結(jié)果

    經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn):單獨(dú)黃芩苷處理后,較陰性對照組相比,處于G0/G1、G2/M期細(xì)胞減少,S期細(xì)胞顯著增加;單獨(dú)放療組G0/G1期細(xì)胞增加,S期細(xì)胞減少,G2/M期細(xì)胞變化較少;黃芩苷+放療聯(lián)合組較單獨(dú)放療組G0/G1、G2/M期細(xì)胞減少,S期細(xì)胞顯著增加。CCK-8結(jié)果顯示:隨藥物濃度增高,黃芩苷對HepG2細(xì)胞增殖的抑制率明顯增高,呈濃度依賴性;聯(lián)合組對HepG2細(xì)胞的抑制率較單獨(dú)放療組和黃芩苷組明顯增高,組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(表1)

    表1 黃芩苷及聯(lián)合放療對肝癌細(xì)胞增殖的影響

    3 討論

    放療是常用的肝癌治療手段, 但有效率并不高,主要原因是易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和并發(fā)癥。雖然提高放射劑量可提高局部控制率, 但增加了對周圍正常組織的損害。尋找有效的放療增敏方式進(jìn)行聯(lián)合治療是當(dāng)前腫瘤治療的新出路。黃芩苷是中藥黃芩中的主要活性成分。近年來,研究表明它對多種腫瘤具有抗瘤活性[3][4]。本研究選用人肝癌細(xì)胞株HepG2為研究對象,探討了黃芩苷的抗腫瘤作用。結(jié)果表明,黃芩苷對HepG2細(xì)胞生長具有明顯抑制作用;聯(lián)合治療組抑制率均高于單獨(dú)使用黃芩苷組和單獨(dú)放療組,說明黃芩苷與放療聯(lián)合治療對肝癌細(xì)胞的抑制有協(xié)同作用,黃芩苷能增加肝癌細(xì)胞放射敏感性。細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)的結(jié)果提示,黃芩苷可使HepG2細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯于S期,使進(jìn)入G2 /M期的細(xì)胞比例降低,提示黃芩苷可能通過影響細(xì)胞周期進(jìn)程并抑制HepG2細(xì)胞增殖,具體機(jī)制有待進(jìn)一步探討。隨著對黃芩苷抗腫瘤作用機(jī)制的進(jìn)一步認(rèn)識, 黃芩苷有望成為具有較好療效且價格低廉的一種協(xié)同抗癌藥物,具有潛在的臨床應(yīng)用價值。

    [1]黃志軍.黃芩苷藥理作用研究進(jìn)展.天津藥學(xué),2012, (3) :0061-64.

    [2]蘭真,曾凡駿,曾里,等.生物類黃酮對心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)及作用機(jī)理現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2005,32(6):613.

    [3]郭昱,姚樹坤.黃芩苷對人肝癌SMMC-7721細(xì)胞系生物學(xué)行為的影響.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2006,12(10):732-735.

    [4]湯立建,趙良才,李慶林,等.黃芩黃酮類成分抗腫瘤作用及機(jī)制研究進(jìn)展.中國中藥雜志,2007,32(1):21-26.

    R735

    A

    1674-2060(2016)02-0186-01

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