1 350例新生兒溶血三項(xiàng)試驗(yàn)的血清學(xué)檢測分析

郭瑩瑩　霍姿含　王　震　劉　冰

(吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院,長春130021)

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1 350例新生兒溶血三項(xiàng)試驗(yàn)的血清學(xué)檢測分析

郭瑩瑩霍姿含王震①劉冰

(吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院,長春130021)

目的：探討由母嬰血型不合引起的新生兒溶血病(HDN)的血型分布及其溶血三項(xiàng)試驗(yàn)在HDN診斷中的價(jià)值。方法：對2014年1月到2016年1月臨床送檢的O型或Rh陰性的產(chǎn)婦臍帶血標(biāo)本及高膽紅素血癥的新生兒血液標(biāo)本用微柱凝膠檢測卡進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)，并對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：(1)1 350例標(biāo)本中，母嬰血型不合者占918例，確診為HDN的有569例， 陽性率為62.0%。569例HDN三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果為：直抗試驗(yàn)陽性率為27.9%(159/569)，游離抗體試驗(yàn)陽性率為86.5%(492/569)，抗體釋放試驗(yàn)均為陽性。其中直抗陰性+游離陽性+釋放陽性的組合與其他各組合相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。(2)918例血型不合標(biāo)本中，ABO HDN陽性率為73.8%(551/747)，Rh HDN陽性率為10.5%(18/171)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)747例ABO血型不合標(biāo)本中，A型陽性率為80.0%(280/350)，B型陽性率為68.3%(271/397)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(4)171例Rh血型不合標(biāo)本中，Rh D陽性率為17.7%(14/79)，Rh E陽性率為6.8%(4/59)，Rh C陽性率為0(0/33)，三者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：抗體釋放試驗(yàn)敏感度最高，是判定HDN最有力的證據(jù)。母嬰ABO 血型不合引起的HDN發(fā)生概率明顯高于Rh不合，A型血患兒發(fā)生HDN的概率明顯高于B型血患兒，Rh D不合引起的HDN發(fā)生概率明顯高于Rh E和Rh C。

新生兒溶血?。?直接抗人球蛋白試驗(yàn)； 游離抗體試驗(yàn)； 抗體釋放試驗(yàn)

新生兒溶血病(Hemolytic disease of newborn,HDN)是指母嬰血型不合而引起的胎兒或新生兒的免疫性溶血性疾病。胎兒的紅細(xì)胞進(jìn)入母體循環(huán)中，致使母體產(chǎn)生相應(yīng)的IgG抗體，該類抗體通過胎盤作用于胎兒的紅細(xì)胞，使其產(chǎn)生不同程度的溶血現(xiàn)象。臨床表現(xiàn)為胎兒水腫、貧血、早產(chǎn)或死胎，新生兒黃疸、貧血 、 肝脾腫大、水腫、 核黃疸后遺癥等。在人類30多個(gè)血型系統(tǒng)中，多數(shù)血型系統(tǒng)都能引起HDN 。在我國最常見的是母嬰ABO血型系統(tǒng)不合引起，人群中HDN發(fā)病率為15.6%[1]。在國外Rh血型系統(tǒng)不合發(fā)病率較高，其他罕見血型系統(tǒng)不合少有報(bào)道[2]。因此，準(zhǔn)確的圍產(chǎn)期HDN 監(jiān)測可為早期防治提供依據(jù)，對優(yōu)生優(yōu)育、提高嬰兒生存質(zhì)量具有重要的現(xiàn)實(shí)意義 。

對HDN的早期診斷與防治，現(xiàn)已成為臨床研究的熱點(diǎn)。HDN實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測在早期診斷中廣泛應(yīng)用，為臨床預(yù)防和診治HDN的發(fā)病提供重要參考價(jià)值。HDN的血清學(xué)檢測主要采用“三項(xiàng)試驗(yàn)”，即直抗試驗(yàn)(直接抗人球蛋白試驗(yàn))、游離試驗(yàn)(游離抗體試驗(yàn))和釋放試驗(yàn)(抗體釋放試驗(yàn))。近幾年國內(nèi)對于當(dāng)?shù)豀DN血清學(xué)檢測報(bào)道也不少，但可能由于樣本量不夠多，或地區(qū)血型分布不一，所得出結(jié)論不一。針對長春地區(qū)患者量最大的醫(yī)院，本實(shí)驗(yàn)室對近兩年產(chǎn)科和新生兒科送來的1 350例疑似HDN的母嬰血液標(biāo)本進(jìn)行了相關(guān)檢測與統(tǒng)計(jì)，結(jié)果報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1標(biāo)本來源選擇2014年1月到2016年1月，吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院產(chǎn)科和新生兒科的1 350例疑似HDN的標(biāo)本。包括O型和Rh陰性產(chǎn)婦(年齡20～46歲、孕齡36～40周)的臍帶血，以及出生3 d內(nèi)發(fā)生高膽紅素血癥的新生兒的血液標(biāo)本。血樣取自母嬰雙方，用EDTA-K2抗凝全血2～5 ml，抽血后即時(shí)送檢，3 h內(nèi)完成檢驗(yàn)。

1.1.2主要試劑和儀器戴安娜微柱凝膠檢測卡包括ABO-Rh血型檢測卡和抗人球蛋白卡由北京斑珀斯公司提供，配套的WADiana專用離心機(jī)和專用微柱孵育器也由北京斑珀斯公司提供；ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞和酸放散試劑盒購自長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2方法

1.2.1血型血清學(xué)檢測參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[3]，采用微柱凝膠技術(shù)對血液標(biāo)本進(jìn)行血型血清學(xué)檢測[4]，如下：測定母親及患兒ABO血型和Rh(D、C和E)血型，并對母嬰血型不合的患兒進(jìn)行直接抗球蛋白試驗(yàn)、游離抗體試驗(yàn)和抗體釋放試驗(yàn)。其中，抗體釋放試驗(yàn)采用酸放散試劑盒進(jìn)行檢測。

1.2.2結(jié)果判讀紅細(xì)胞留在微柱上端或分布在凝膠中為試驗(yàn)結(jié)果陽性，紅細(xì)胞沉降至微柱底部為試驗(yàn)結(jié)果陰性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1母嬰血型鑒定結(jié)果1 350例標(biāo)本中，母嬰ABO血型均為O型、Rh血型為母陽性嬰陰性或兩者完全同型的，共計(jì)432例。母嬰血型不合者共計(jì)918例，有母O型、嬰A型或B型，或母Rh某抗原陰性嬰Rh相應(yīng)抗原陽性。

2.2溶血三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)檢測，母嬰血型不合的918例標(biāo)本中，HDN陽性結(jié)果為569例， 陽性率為62.0%。569例HDN三項(xiàng)試驗(yàn)陽性結(jié)果為：直抗試驗(yàn)陽性為159例，陽性率為27.9%；游離抗體試驗(yàn)陽性為492例，陽性率為86.5%；放散抗體試驗(yàn)均為陽性。三項(xiàng)試驗(yàn)各種組合情況如表1。陽性率從高到低依次為游離+釋放陽性、直抗+游離+釋放陽性、單項(xiàng)釋放陽性、直抗+釋放陽性。其中游離+釋放的陽性率與各項(xiàng)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3HDN血型分布結(jié)果母嬰血型不合的918例標(biāo)本中，ABO系統(tǒng)不合者有747例，HDN陽性結(jié)果占551例，陽性率達(dá)73.8%；Rh系統(tǒng)不合者有171例，HDN陽性結(jié)果占18例，陽性率達(dá)10.5%，見表2。ABO HDN與Rh HDN的陽性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。747例ABO系統(tǒng)不合標(biāo)本中，A型有350例， HDN陽性占280例，陽性率達(dá)80.0%；B型有397例， HDN陽性占271例，陽性率達(dá)68.3%，見表3；A型和B型HDN陽性發(fā)生率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。171例Rh系統(tǒng)不合標(biāo)本中，Rh D占79例， HDN陽性占14例，陽性率達(dá)17.7%；Rh E有59例， HDN陽性占4例，陽性率達(dá)6.8%；Rh C有33例，均為HDN陰性，見表4。D、C、E陽性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

表1569例HDN陽性的三項(xiàng)試驗(yàn)組合情況

Tab.1569 cases of HDN positive combination of three trials

Directanti-globulintestFreeanti-bodytestAntibdyrelea-sedtestn(%)--+68(12.0)-++342(60.0)+++150(26.4)+-+9(1.6)

Note：+.Positive；-.Negative.

表2918例HDN結(jié)果比較

Tab.2Comparison of 918 HDN results

BloodgroupsystemTestcasesPositivecasesPositiverateABO74755173.80%Rh1711810.50%

表3747例ABO HDN結(jié)果比較

Tab.3Comparison of 747 ABO HDN results

BloodgroupTestcasesPositivecasesPositiverateA35028080.00%B39727168.30%

表4171例 Rh HDN結(jié)果比較

Tab.4Comparison of 171 Rh HDN results

BloodgroupTestcasesPositivecasesPositiverateRhD791417.70%RhE5946.80%RhC3300

3　討論

HDN 可由多種原因引起，以母嬰血型不合最為常見。其中ABO血型不合最常見，其次為Rh血型不合。國內(nèi)文章大多報(bào)道ABO HDN，少有Rh HDN的概況。在本研究中，對ABO和Rh 血型系統(tǒng)均做檢測，得出ABO HDN陽性率73.8%遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于Rh HDN陽性率10.5%。

HDN的發(fā)病與母親體內(nèi)IgG血型免疫抗體種類和胎兒紅細(xì)胞表面抗原密切相關(guān)，只有IgG抗體可經(jīng)胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，引發(fā)溶血現(xiàn)象[5]。O型血人體內(nèi)有IgG抗A和IgG抗B兩種抗體，ABO HDN多發(fā)生于懷有A型或B型胎兒的O型母親中，故臨床主要針對O型產(chǎn)婦和A型或B型嬰兒進(jìn)行HDN檢測。自然界廣泛存在類A和類B，故ABO HDN多發(fā)生于第一胎。臨床上由抗-A 引起的HDN要比抗-B 常見[6]，由于胎兒紅細(xì)胞上的A位點(diǎn)(抗原決定簇)比B位點(diǎn)多，故A型HDN發(fā)病率比B型高[7]。本研究也發(fā)現(xiàn)，本地區(qū)A型HDN陽性率80%遠(yuǎn)高于B型陽性率68.3%。與國內(nèi)辛榮傳等[8]報(bào)道一致，在高膽紅素血癥新生兒中，A型血患兒發(fā)生HDN的概率明顯較B型血患兒高。

母嬰Rh血型系統(tǒng)不合是指母親為Rh抗原陰性、胎兒為Rh抗原陽性。Rh抗原存在于胎兒紅細(xì)胞膜上，其抗原數(shù)量隨著妊娠時(shí)間的延長而增加，其患病風(fēng)險(xiǎn)也隨之增高[9]。Rh HDN好發(fā)于多胎、多次輸血后的孕產(chǎn)婦。與ABO HDN相比，Rh HDN較少發(fā)生，但一旦發(fā)病，其溶血程度更為嚴(yán)重。Rh血型系統(tǒng)含有多種抗原，常見的有D、C、c、E和e，其中以D抗原的免疫原性最強(qiáng)，其溶血程度遠(yuǎn)高于其他抗原[10]。在本研究中，對母嬰Rh血型的D、C和E三種抗原進(jìn)行檢測。171例Rh系統(tǒng)不合標(biāo)本中，Rh D引起的HDN陽性率17.7%遠(yuǎn)高于Rh E陽性率6.8%，尚未發(fā)現(xiàn)Rh C不合引起的HDN。這與丁晶等[11]文獻(xiàn)中報(bào)道的Rh血型系統(tǒng)引起的HDN的比例一般為15%～20%，且D抗原在其發(fā)病總數(shù)中占多數(shù)相符。

HDN的確診依賴于溶血三項(xiàng)試驗(yàn)包括直抗試驗(yàn)、游離抗體試驗(yàn)和抗體釋放試驗(yàn)[12]。其中，直抗試驗(yàn)是檢測新生兒的紅細(xì)胞是否已被母體IgG類抗體所致敏，在HDN診斷中有重要作用，陽性結(jié)果提示患兒紅細(xì)胞被抗體致敏， 陽性范圍提示發(fā)生溶血的相關(guān)程度[13]。但由于ABO HDN患兒紅細(xì)胞上抗體往往結(jié)合的很少，使直抗試驗(yàn)常出現(xiàn)陰性的結(jié)果。在本研究中，直抗試驗(yàn)陽性率僅占27.9%(159/569)得以印證。但在Rh HDN中，18例直抗試驗(yàn)均為強(qiáng)陽性，足以說明Rh血型不合所致的HDN，其溶血程度更為嚴(yán)重，僅憑直抗試驗(yàn)即可初步有效診斷Rh HDN。直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性結(jié)果是區(qū)別ABO和Rh溶血病的重要標(biāo)志[14]。

游離抗體試驗(yàn)則檢測患兒血清中是否有IgG類抗體的存在，有助于觀察疾病的發(fā)展趨勢和治療。本研究中，游離試驗(yàn)的陽性率高達(dá)86.5%(492/569)，說明大多檢測結(jié)果均為陽性。但HDN發(fā)病患兒的游離抗體也有部分檢測結(jié)果為陰性。這與母體IgG進(jìn)入胎兒體內(nèi)的量有關(guān)，如果進(jìn)入量少吸附到紅細(xì)胞上，血漿中則無游離抗體，若有游離抗體，則提示病情嚴(yán)重。

在HDN的溶血三項(xiàng)試驗(yàn)中，以抗體釋放試驗(yàn)最為重要，是確診試驗(yàn)[15]?？贵w釋放試驗(yàn)是診斷ABO HDN最有力證據(jù)，陽性結(jié)果表明患兒紅細(xì)胞被母體IgG抗A(B)抗體所致敏[16]。本研究陽性率為100%(569/569)。統(tǒng)計(jì)三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果不同陰陽性組合發(fā)現(xiàn)，確診為ABO HDN的結(jié)果最常見的是直抗陰性、游離陽性和釋放陽性。確診為Rh HDN的結(jié)果為直抗、游離和釋放三項(xiàng)均呈陽性。也充分表明，Rh HDN一旦發(fā)病，其嚴(yán)重程度遠(yuǎn)高于ABO HDN。

實(shí)驗(yàn)室溶血三項(xiàng)試驗(yàn)的血清學(xué)檢測為臨床上診斷新生兒溶血病提供了重要依據(jù)，此項(xiàng)試驗(yàn)的開展和普及具有重要的臨床意義。對產(chǎn)科O型及Rh陰性產(chǎn)婦的臍帶血進(jìn)行三項(xiàng)試驗(yàn)的檢測，實(shí)現(xiàn)了早

期對HDN的篩查和預(yù)防。對高膽紅素血癥的新生兒進(jìn)行三項(xiàng)試驗(yàn)的檢測，可以快速實(shí)現(xiàn)對新生兒溶血病的確診，為患兒的治療爭取時(shí)間，提高治療效率，減少后遺癥的發(fā)生。

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[收稿2016-03-07修回2016-04-25]

(編輯張曉舟)

Analysis of three serological tests results of hemolytic disease of newborn in 1 350 cases

GUO Ying-Ying，HUO Zi-Han，WANG Zhen，LIU Bing.

The First Bethune Hospital of Jilin University,Changchun 130021，China

Objective:To explore blood type distribution of newborns hemolytic disease(HDN) caused by maternal and neonatal blood type incompatibility and analyze the value of hemolysis three trials in the diagnosis of HDN.Methods: Hemolysis three trials of type O or Rh negative maternal cord blood samples and hyperbilirubinemia of the newborn blood samples from January 2014 to 2016 were detected by micro-column gel test cards.Then the results were statistically analyzed.Results: (1) There were 918 cases of maternal and neonatal blood type incompatibility in all 1350 cases.569 cases were detected HDN positive with the rate of 62%(569/918).Among 569 cases,the positive rate of direct anti-globulin test,free antibody test and antibody released test were 27.9%(159/569),86.5%(492/569) and 100% respectively.There was statistical difference of the combination of direct anti-globulin test negative,free antibody test positive and antibody released test positive compared with other combinations(P<0.05).(2)There was statistical difference of HDN positive rate between ABO 73.8%(551/747) and Rh 10.5%(18/171)in 918 cases of blood type incompatibility.(3)There was statistical difference between A positive rate of 80%(280/350) and B positive rate of 68.3%(271/397) in 747 cases of ABO incompatibility.(4)There was statistical difference among RhD positive rate of 17.7%(14/79),RhE positive rate of 6.8%(4/59) and RhC positive rate of 0(0/33).Conclusion: Antibody released test was the most sensitive test in hemolysis three trials to diagnose HDN.The probability of HDN positive caused by maternal and neonatal ABO blood type incompatibility was significantly higher than Rh.The probability of HDN positive with type A newborns was significantly higher than type B.The probability of HDN positive caused by RhD blood type incompatibility was significantly higher than RhE and RhC.

Hemolytic disease of newborns;Direct anti-globulin test;Free antibody test;Antibody released test

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.09.025

郭瑩瑩(1984年-)，女，碩士，技師，主要從事輸血相容性檢測方面的研究。

及指導(dǎo)教師：劉冰(1962年-)，女，主任技師，主任，主要從事疑難血型鑒定及各項(xiàng)輸血相關(guān)檢測方面的研究。

R722.18

A

1000-484X(2016)09-1357-04

①吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院,長春130000。