HLA-DQB1等位基因多態(tài)性及Th1/Th2細(xì)胞相關(guān)因子與廣西瑤族肝癌家族聚集性的相關(guān)性①

盧庭婷　梁惠萍　李致忠　黃　蘭　吳繼周　陳婉玲

(廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，南寧530021)

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HLA-DQB1等位基因多態(tài)性及Th1/Th2細(xì)胞相關(guān)因子與廣西瑤族肝癌家族聚集性的相關(guān)性①

盧庭婷梁惠萍李致忠黃蘭吳繼周②陳婉玲②

(廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，南寧530021)

目的：探討HLA-DQB1等位基因多態(tài)性及相應(yīng)位點下Th1/Th2細(xì)胞相關(guān)因子IL-2、IL-4及IL-10對廣西瑤族原發(fā)性肝癌家族聚集性的影響，為尋找廣西瑤族原發(fā)性肝癌的遺傳易感基因或拮抗基因提供線索。方法：在廣西肝癌高發(fā)區(qū)選取民族為瑤族的肝癌高發(fā)家族成員、無癌家族成員各40例作為研究對象(采用相同性別、年齡±5歲配對方法)，采集研究對象外周血并提取全血DNA，應(yīng)用PCR-SSP的方法對HLA-DQB1等位基因進(jìn)行檢測，應(yīng)用ELISA法檢測IL-2、IL-4、IL-10的水平。結(jié)果：(1)廣西瑤族肝癌高發(fā)家族組的HLA-DQB1*02/09等位基因表達(dá)頻率高于無癌家族組，兩組比較差異明顯，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而兩組間的HLA-DQB1*04/05/06/07/08等位基因表達(dá)頻率無顯著性差異(P>0.05)。(2)HLA-DQB1各等位基因在乙型肝炎病毒感染組(HBsAg陽性組)及非乙型肝炎病毒感染組(HBsAg陰性組)間的分布頻率比較無顯著性差異(P值均>0.05)。(3)廣西瑤族肝癌高發(fā)家族成員組中Th2細(xì)胞相關(guān)因子IL-4、IL-10平均表達(dá)水平高于無癌家族成員組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而兩組間的IL-2濃度無顯著性差異(P>0.05)。(4)兩組中HLA-DQB1*02陽性成員的IL-10平均表達(dá)水平高于HLA-DQB1*02陰性成員，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(5)兩組中HLA-DQB1*09陽性成員的IL-4平均表達(dá)水平高于HLA-DQB1*09陰性成員，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：(1)HLA-DQB1*02/09等位基因可能是廣西瑤族居民原發(fā)性肝癌發(fā)生的易感基因。(2)HLA-DQB1各等位基因與廣西瑤族居民的HBV感染可能無顯著相關(guān)性。(3)IL-4、IL-10表達(dá)水平失衡可能是廣西瑤族肝癌家族聚集性的危險因素。(4)IL-10表達(dá)水平失衡可能與HLA-DQB1*02等位基因的攜帶有關(guān)，而IL-4表達(dá)水平失衡可能與HLA-DQB1*09等位基因的攜帶有關(guān)，它們之間共同作用可能與廣西瑤族肝癌家族聚集性的發(fā)生有相關(guān)性。

HLA-DQB1；Th1/Th2細(xì)胞相關(guān)因子；原發(fā)性肝癌；家族聚集性

原發(fā)性肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全世界最常見的惡性腫瘤之一，我國肝癌患者數(shù)量超過全球的一半以上，并有持續(xù)升高的趨勢[1，2]。而廣西地區(qū)是全國原發(fā)性肝癌的高發(fā)區(qū)之一[3]，流行病學(xué)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌的發(fā)生存在有明顯的家族聚集性[4]。原發(fā)性肝癌的發(fā)病機(jī)制目前暫不明確，但既往研究發(fā)現(xiàn)，其發(fā)病原因不僅與HBV的感染有關(guān)，還可能與機(jī)體免疫功能狀態(tài)和遺傳因素有關(guān)[5]。當(dāng)機(jī)體的免疫水平低下或受到抑制時，腫瘤的發(fā)生率就會增高，Th1/Th2細(xì)胞亞群失調(diào)可能是導(dǎo)致HBV慢性感染、腫瘤免疫逃逸的原因之一[6]。而機(jī)體的免疫應(yīng)答水平又主要是由遺傳因素決定的，如人類白細(xì)胞抗原(Human leukoyte antigen,HLA)在抗原識別、遞呈、免疫應(yīng)答與調(diào)控等方面發(fā)揮了至關(guān)重要的作用，被認(rèn)為與肝癌的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系。HLA復(fù)合體分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ類基因區(qū)，其中Ⅱ類基因中的HLA-DQB1幾乎所有基因都顯示有免疫相關(guān)功能，且呈現(xiàn)出復(fù)雜的多態(tài)性[7]。而廣西瑤族的遺傳背景有別于我國其他民族，為了明確HLA-DQB1與Th1/Th2對廣西瑤族居民肝癌家族聚集性的影響及相關(guān)性，本實驗采用PCR-SSP和ELISA技術(shù)就HLA-DQB1等位基因多態(tài)性及相應(yīng)位點下Th1/Th2細(xì)胞相關(guān)因子對廣西瑤族居民肝癌家族聚集性的影響及相關(guān)性展開研究，為尋找廣西瑤族居民肝癌高發(fā)區(qū)的遺傳易感基因或拮抗基因提供線索。

1　材料與方法

1.1材料選擇廣西民族為瑤族的肝癌高發(fā)家族成員40例作為實驗組,為了控制混雜因素對研究結(jié)果的影響，采用配對方法選擇與高發(fā)家族成員生活環(huán)境、生活條件、生活水平以及生活習(xí)慣相同的同一村屯、相同性別、年齡±5歲的無癌家族成員40例作為對照組，肝癌高發(fā)家族組及無癌家族組間性別、年齡、肝功能、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染情況比較，兩組間的差異小，均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。所有肝癌病例的診斷均符合第四屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議修訂的肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)。肝癌高發(fā)家族的定義為[8]:有血緣關(guān)系的家族成員中發(fā)生過2例及2例以上的原發(fā)性肝癌(HCC)病例；無癌家族的定義為:直系親屬中未發(fā)生過任何惡性腫瘤病例的家族。其中，肝癌高發(fā)家族成員中男20例,女20例，無癌家族成員中男20例，女20例；HBsAg陽性共26例(其中兩組各為13 例),HBsAg陰性共54例；丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)抗體均為陰性。

1.2.1 標(biāo)本的采集與處理采集受檢者空腹時外周靜脈血10 ml,分別注入有蓋普通無菌干燥管和依地酸二鈉(EDTA)抗凝管各5 ml。其中，普通無菌干燥管自凝血離心后留取血清，用于乙肝兩對半(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)、HBV-DNA、丙肝抗體、肝功能等項目的檢測，剩下的血清分裝到100 μl的離心管中，-80℃冰箱保存，待檢測血清中的細(xì)胞因子濃度?？鼓靹蚝筮M(jìn)行500 μl/管分裝，保存于-80 ℃冰箱中，待提取外周血白細(xì)胞DNA。

1.2.2 血清各細(xì)胞因子濃度的檢測采用ELISA法檢測血清中IL-2、IL-4、IL-10的水平，使用IL-2、IL-4、IL-10試劑盒(武漢華美生物技術(shù)有限公司)檢測血清中IL-2、IL-4、IL-10的水平，采用同批次產(chǎn)品并嚴(yán)格按試劑盒使用說明書操作，使用美國全自動酶標(biāo)儀Multiskan MK3 Labsystems進(jìn)行檢測。

1.2.3基因組DNA的提取取冷凍的血樣500 μl，按照艾德萊生物科技有限公司的人基因組DNA試劑盒使用說明書提取DNA，提取后的DNA用瓊脂糖凝膠電泳檢測其完整性，用超微量紫外分光光度計NanoDrop 2000檢測其純度和濃度,選取DNA純度(A260/A280值)在1.6～1.8之間，DNA濃度在30～100 ng/μl之間，電泳條帶單一、清晰的樣品，保存于-80 ℃冰箱中待測。

1.2.4基因型檢測采用天津秀鵬公司的HLA-DQ基因分型低分辨檢測試劑盒(PCR-SSP法，經(jīng)過國家食品藥品監(jiān)督管理局天津醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心認(rèn)證)，嚴(yán)格按照試劑盒使用說明書進(jìn)行檢測。

1.2.5PCR反應(yīng)體系及擴(kuò)增條件(1)PCR反應(yīng)體系：先配制dNTP-Buffer工作液：440 μl 濃縮dNTP-Buffer +560 μl 無菌水=1 000 μl dNTP-Buffer工作液；再配制Buffer-酶-樣本混合液：每人份用量80 μl dNTP-Buffer工作液 +0.7 μl Taq酶 +8 μl DNA = 88.7 μl 混合液，漩渦混勻Buffer-酶-樣本混合液，800 r/min瞬時離心5～10 s，使管壁殘留的液體聚于管底，然后向每個引物孔各加入10 μl 上述混合液。最后每孔再加入15 μl 石蠟油，用密封膜封好PCR反應(yīng)板(引物板)。(2)PCR擴(kuò)增條件：將PCR反應(yīng)板放入設(shè)置好循環(huán)參數(shù)的PCR儀內(nèi)，關(guān)上PCR儀，啟動程序直至循環(huán)結(jié)束。PCR循環(huán)參數(shù)見表1。(3)PCR產(chǎn)物鑒定：取出PCR反應(yīng)板，點動離心后，輕輕撕掉密封膜，防止樣品濺出。將PCR反應(yīng)產(chǎn)物7 μl加樣到2.5%瓊脂糖凝膠孔中，145 V電泳15 min，內(nèi)參帶和陽性帶清晰分開即可停止電泳。

1.2.6觀察及判讀結(jié)果在凝膠成像系統(tǒng)下觀察結(jié)果并拍攝成像，根據(jù)試劑盒提供的結(jié)果分型表進(jìn)行結(jié)果判讀(圖1、2)。

參照結(jié)果分型表，標(biāo)本號136在第4和第7泳道出現(xiàn)陽性帶，為HLA-DQB1*07純合子；標(biāo)本號140在第1泳道出現(xiàn)陽性帶，為HLA-DQB1*05純合子；標(biāo)本號143在第1泳道出現(xiàn)陽性帶，為HLA-DQB1*05純合子。

參照結(jié)果分型表，標(biāo)本號114在第1、4和7泳道出現(xiàn)陽性帶，為HLA-DQB1*05和HLA-DQB1*07的雜合體；標(biāo)本號164在第1和第2泳道出現(xiàn)陽性帶，為HLA-DQB1*05和HLA-DQB1*06的雜合體。

表1PCR擴(kuò)增條件

Tab.1PCR amplified condition

PhaseTemperature/TimeCycles196℃/2min1cycle296℃/20s,68℃/60s5cycles396℃/20s,65℃/50s,72℃/45s10cycles496℃/20s,62℃/50s,72℃/45s15cycles572℃/3min1cycle

圖1　HLA-DQB1等位基因的PCR擴(kuò)增電泳圖(純合子)Fig.1　PCR amplification electrophoresis of HLA-DQB1 allele(homozygote)

1.2.7HBV血清學(xué)標(biāo)志物檢測HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的檢測采用ELISA法，試劑盒購自上海勁馬生物有限公司。

2017年建立馬鈴薯種植綜合標(biāo)準(zhǔn)化示范區(qū)135.38 hm2，標(biāo)準(zhǔn)覆蓋率100%，涉及農(nóng)戶852戶，實現(xiàn)總產(chǎn)量444.65×104kg(單產(chǎn)32844kghm-2)，總產(chǎn)值449.24萬元；新增產(chǎn)量68.0×104kg，新增產(chǎn)值97.98萬元，農(nóng)戶年增收入1150.0元。輻射示范1200hm2，涉及農(nóng)戶7800戶；常規(guī)種植區(qū)馬鈴薯單產(chǎn)25308.75kghm-2。通過示范區(qū)建設(shè)及輻射，增加了農(nóng)民標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)意識，激發(fā)了農(nóng)民種植馬鈴薯標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)積極性，提高了馬鈴薯生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化水平。

2　結(jié)果

2.1HLA-DQB1各等位基因在肝癌高發(fā)家族組與無癌家族組中表達(dá)頻率的比較HLA-DQB1*02等位基因在廣西瑤族肝癌高發(fā)家族組及無癌家族組的陽性率分別為25.0%和0.0%，兩組間比較存在顯著差異(P<0.05)；HLA-DQB1*09等位基因在廣西瑤族肝癌高發(fā)家族組及無癌家族組的陽性率分別為32.5%和10.0%，兩組間比較存在顯著差異(P<0.05)；而HLA-DQB1*04/05/06/07/08等位基因在兩組間的頻率分布均無顯著性差異(P>0.05)，見表2。HLA-DQB1*04/08等位基因在兩組成員中均未檢出，而HLA-DQB1*05基因表達(dá)頻率最高，且以純合子多見(52.5%和57.5%)，這可能與瑤族人很少與外族通婚的習(xí)俗有關(guān)。

2.2 HLA-DQB1各等位基因的表達(dá)與HBV感染的相關(guān)性經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，HLA-DQB1各等位基因與HBV感染無顯著相關(guān)性(P>0.05)，見表3。

2.3 肝癌高發(fā)家族組與無癌家族組各細(xì)胞因子表達(dá)水平的分析比較結(jié)果見表4，肝癌高發(fā)家族組成員的IL-4、IL-10濃度明顯高于無癌家族組成員，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而兩組間的IL-2濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

圖2　HLA-DQB1等位基因的PCR擴(kuò)增電泳圖(雜合體)Fig.2　PCR amplification electrophoresis of HLA-DQB1 allele(heterozygote)

表2瑤族肝癌高發(fā)家族及無癌家族成員中HLA-DQB1各等位基因頻率分布比較[n(%)]

Tab.2Gene frequency of HLA-DQB1 alleles in case group was compared with that in controls[n(%)]

GroupsnHLA-DQB1*02HLA-DQB1*04HLA-DQB1*05HLA-DQB1*06HLA-DQB1*07HLA-DQB1*08HLA-DQB1*09Casegroup4025.0(10/40)0.0(0/40)52.5(21/40)10.0(4/40)12.5(5/40)0.0(0/40)32.5(13/40)Controlgroup400.0(0/40)0.0(0/40)57.5(23/40)20.0(8/40)35.0(14/40)0.0(0/40)10.0(4/40)χ29.26-0.201.572.57-6.05P0.002-0.650.210.11-0.01

表3HLA-DQB1等位基因在HBsAg陽性組及HBsAg陰性組間分布頻率比較[n(%)]

Tab.3Gene frequency of HLA-DQB1 alleles in HBsAg positive group was compared with that in HBsAg negative group[n(%)]

GroupsnHLA-DQ2-(%)+(%)HLA-DQ5-(%)+(%)HLA-DQ6-(%)+(%)HLA-DQ7-(%)+(%)HLA-DQ9-(%)+(%)HBsAg(+)group2625(96.15%)1(3.85%)8(30.77%)18(69.23%)24(92.31%)2(7.69%)18(69.23%)8(30.77%)22(84.61%)4(15.38%)HBsAg(-)group5445(83.33%)9(16.67%)28(51.85%)26(48.15%)44(83.33%)10(81.48%)43(79.63%)11(20.37%)41(75.93%)13(24.07%)χ21.5953.1520.8761.0480.792P0.2070.0760.3490.3060.374

GroupsnIL-2(pg/ml)IL-4(pg/ml)IL-10(pg/ml)Casegroup4017.680±13.235171.763±126.631329.825±206.257Controlgroup4024.782±20.523115.345±106.130230.312±168.592t1.8392.1602.363P0.0700.0340.021

GroupsnIL-2(pg/ml)IL-4(pg/ml)IL-10(pg/ml)HLA-DQB1*02positivegroup1018.036±13.152168.964±116.562323.182±211.241HLA-DQB1*02negativegroup7020.817±15.439164.132±105.801201.436±170.294t0.5420.1342.052P0.5890.8940.044

GroupsnIL-2(pg/ml)IL-4(pg/ml)IL-10(pg/ml)HLA-DQB1*09positivegroup1718.947±14.532176.378±98.623301.652±171.284HLA-DQB1*09negativegroup6321.132±16.806124.257±83.602251.006±120.293t0.4892.1591.400P0.6260.0340.165

2.4 兩組中HLA-DQB1*02陽性成員及HLA-DQB1*02陰性成員之間各細(xì)胞因子水平的分析比較結(jié)果見表5，兩組中HLA-DQB1*02陽性成員的IL-10平均表達(dá)水平高于HLA-DQB1*02陰性成員，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。而IL-2、IL-4的濃度在兩組間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.5 兩組中HLA-DQB1*09陽性成員及HLA-DQB1*09陰性成員之間各細(xì)胞因子水平的分析比較結(jié)果見表6，兩組中HLA-DQB1*09陽性成員的IL-4平均表達(dá)水平高于HLA-DQB1*09陰性成員，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。而IL-2、IL-10的濃度在兩組間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

3　討論

人類白細(xì)胞抗原系統(tǒng)(HLA) 是目前已知的最為復(fù)雜的遺傳多態(tài)性系統(tǒng)，可能參與了免疫應(yīng)答的遺傳調(diào)控[9，10]。既往研究表明，HLA Ⅱ類抗原在部分腫瘤的表達(dá)中存在差異，不同國家、不同民族及地區(qū)，研究的結(jié)果差異較大[5]。EI-chennawi等[11]對埃及肝癌病人HLA-DQB1等位基因研究表明，DQB1*02在肝癌患者中的基因頻率明顯高于正常對照組，而DQB1*06則相反，明顯低于正常對照組，從而推測DQB1*02可能為埃及人肝癌的易感基因，而DQB1*06可能為其保護(hù)基因。Pradat等[12]對歐洲地區(qū)人群的長期研究結(jié)果表明，HLADQ02等位基因陽性是HCV患者疾病發(fā)展為肝細(xì)胞癌的獨(dú)立的危險因素。Vaughan等[13]發(fā)現(xiàn)波蘭人HBV感染者攜帶HLA-DQB1*0303(血清型DQB1*09)基因頻率高于健康人群。Akcam 等[14]發(fā)現(xiàn)土耳其人HBV持續(xù)感染與DQB1*02和DQB1*05有關(guān)。梁軍等[15]研究發(fā)現(xiàn)，HLA-DQB1*0201(血清型DQB1*02)是新疆維吾爾族HBV抗性基因，DQB1 *0301與HBV的持續(xù)感染有關(guān)，DQB1* 0303 是ASC易感基因，可能與病毒清除效率較低有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示,廣西瑤族肝癌高發(fā)家族組的HLA-DQB1*02/09等位基因表達(dá)頻率顯著高于無癌家族組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。表明HLA-DQB1*02/09基因可能是廣西肝癌高發(fā)區(qū)瑤族居民肝癌發(fā)生的易感基因。而兩組間的HLA-DQB1*04/05/06/07/08等位基因表達(dá)頻率無顯著性差異(P>0.05)，由此推測HLA-DQB1*04/05/06/07/08等位基因可能不是廣西瑤族肝癌家族聚集性的危險因素。本次收集的樣本中，兩組成員的地域及民族是一致的，從而排除了地域、民族這些混雜因素對結(jié)果的影響。此結(jié)果與EI-chennawi、Pradat、Vaughan、Akcam等人的結(jié)果相接近，但卻與梁軍的結(jié)果相矛盾?？紤]可能的原因是HLA-DQB1等位基因多態(tài)性與不同人種、民族、地域差異有關(guān)，也可能是所研究基因與真正的致病基因存在連鎖不平衡的關(guān)系[16]。另外，HLA-DQB1*04/08等位基因的缺省，較多HLA-DQB1*05基因純合子的出現(xiàn)，可能是廣西瑤族人群的遺傳特征之一[17]，而我們的研究結(jié)果顯示HLA-DQB1*05基因與原發(fā)性肝癌的遺傳易感性無明顯關(guān)聯(lián)。以往的研究結(jié)果顯示，廣西肝癌高發(fā)區(qū)的肝癌家族聚集性與HBV感染相關(guān)[18]，但在本研究中HLA-DQB1各等位基因與HBV感染無顯著相關(guān)性(P>0.05)，提示廣西肝癌高發(fā)區(qū)瑤族居民肝癌的家族聚集性可能不是由于HLA-DQB1各等位基因的攜帶造成機(jī)體對HBV感染的遺傳易感性，而是HLA-DQB1*02/09基因本身可能是導(dǎo)致廣西肝癌高發(fā)區(qū)瑤族居民肝癌家族聚集的危險基因。

不同的細(xì)胞因子具有不同的免疫效應(yīng)。IL-2是由Th1細(xì)胞分泌的，在肝癌中，它可能起抑制作用[19]，它可以抑制腫瘤細(xì)胞對細(xì)胞外基質(zhì)成分的親和力，抑制肝癌細(xì)胞的聚集能力。而Th2細(xì)胞分泌IL-4、IL-10，IL-4與組織損傷修復(fù)及細(xì)胞外基質(zhì)沉積密切相關(guān)，并且有膠原誘導(dǎo)活性，具有促纖維化作用[20]。IL-10具有很強(qiáng)的抗炎及免疫抑制活性，可降低巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)、降低單核細(xì)胞的抗原提呈能力、使T細(xì)胞增殖能力下降[21]。Th1和Th2細(xì)胞通過分泌不同的細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫狀態(tài)，使機(jī)體的免疫系統(tǒng)能發(fā)揮抵御病毒感染及清除自身癌變細(xì)胞的作用。一旦出現(xiàn)Th1/Th2失衡，機(jī)體的免疫狀態(tài)被打破，則容易導(dǎo)致HBV感染的慢性化和腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸[22]。早在二十世紀(jì)90年代，Yamamura等[23]和Kharkevitch等[24]就發(fā)現(xiàn)腫瘤患者體內(nèi)Th2型細(xì)胞占優(yōu)勢狀態(tài)。梁陶等[25]用ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌患者外周血IL-2濃度較正常人顯著降低，而IL-4、IL-10濃度顯著高于正常人。而本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果相接近,本研究結(jié)果表明，廣西瑤族肝癌高發(fā)家族組成員外周血中Th2類細(xì)胞因子IL-4、IL-10濃度明顯高于無癌家族組成員，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而兩組間的Th1類細(xì)胞因子IL-2濃度無顯著性差異(P>0.05)。提示廣西瑤族肝癌高發(fā)家族成員由于Th2型細(xì)胞反應(yīng)占優(yōu)勢狀態(tài)，Th1/Th2表達(dá)失衡造成免疫狀態(tài)的失衡，機(jī)體抗腫瘤及清除自身癌變細(xì)胞的能力下降，從而使肝癌細(xì)胞得以生存發(fā)展。

綜上所述，在廣西瑤族肝癌高發(fā)家族中，HLA-DQB1*02/09等位基因的攜帶及Th1/Th2濃度水平的失衡可能是肝癌家族聚集性的危險因素。IL-10表達(dá)水平失衡可能與HLA-DQB1*02等位基因的攜帶有關(guān)，而IL-4表達(dá)水平失衡可能與HLA-DQB1*09等位基因的攜帶有關(guān)，它們之間可能通過某種通路共同作用，從而導(dǎo)致廣西瑤族肝癌家族聚集現(xiàn)象的發(fā)生。由于實驗組和對照組數(shù)量有限，本實驗研究還存在一定的局限性，未能充分揭示HLA-DQB1基因多態(tài)性及相應(yīng)位點下Th1/Th2細(xì)胞相關(guān)因子與廣西瑤族肝癌家族聚集性的相關(guān)性，有必要在今后的研究中再進(jìn)一步擴(kuò)大標(biāo)本量，以期在基因水平上進(jìn)一步了解原發(fā)性肝癌的家族聚集性。

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[收稿2015-11-24修回2015-12-22]

(編輯張曉舟)

Relationship between HLA-DQB1 allele as well as expression level of Th1/Th2 cytokines with familial clustering of hepatocellular carcinoma in Guangxi yao

LU Ting-Ting,LIANG Hui-Ping,LI Zhi-Zhong,HUANG Lan,WU Ji-Zhou,CHEN Wan-Ling.

Guangxi Medical College,Nanning 530021,China

Objective:To elucidate the relationship between HLA-DQB1 allele polymorphism as well as the expression level of Th1/Th2 cytokines with familial clustering of hepatocellular carcinoma (HCC) to provide some evidence for the seeking susceptibility gene or resistant gene of HCC in Guangxi yao,China.Methods: With the same sexuality,age ±5 year,40 members whose families have had two or more HCC patients(high-occurrence families) were selected as the case group,and 40 members whose families have no any cancer patient were selected as the controls.Peripheral blood samples were collected to extract DNA,PCR-SSP was used to detect HLA-DQB1 alleles and ELISA was used to detect IL-2，IL-4 and IL-10.Results: (1)The gene frequency of the HLA-DQB1*02/09 alleles in the case group was higher than that in the controls(P<0.05);but the gene frequency of the HLA-DQB1*04/05/06/07/08 alleles were never significant difference between two groups (P> 0.05).(2)The gene frequency of alleles HLA-DQB1 in HBsAg positive group and HBsAg negative group were never significant difference (P> 0.05).(3)The expression levels of IL-4,IL-10 in the case group was higher than that in the control(P<0.05).(4)The expression level of IL-10 in the positive group of the HLA-DQB1*02 allele was higher than that in the negative group of the HLA-DQB1*02 allele(P<0.05).(5)The expression level of IL-4 in the positive group of the HLA-DQB1*09 allele was higher than that in the negative group of the HLA-DQB1*09 allele(P<0.05).Conclusion: (1)HLA-DQB1*02/09 seem to be susceptibility genes of hepatocellular carcinoma in high HCC incidence areas of Guangxi yao.(2) There may be not significant correlation bewteen HLA-DQB1 alleles and the susceptibility of HBV infection in high HCC incidence areas of Guangxi yao.(3)The imbalance of IL-4,IL-10 might be associated with familial clustering of hepatocellular carcinoma in Guangxi yao.(4)The imbalance of IL-10 might be due to the carrying of HLA-DQB1*02;the imbalance of IL-4 might be due to the carrying of HLA-DQB1*09.Through the same approaches,these might lead to the phenomenon of familial aggregation of HCC in Guangxiyao.

HLA-DQB1;Th1/Th2 cytokines;Hepatocellular carcinoma;Familial clustering

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.09.004

盧庭婷(1979年-),女，碩士,講師,主要從事生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究。

及指導(dǎo)教師：梁惠萍(1978年-),女，副教授,主要從事肝臟疾病的發(fā)病機(jī)理及診療方面的研究。

R392.11

A

1000-484X(2016)09-1262-06

①本文受國家自然科學(xué)基金項目(30960170)、廣西高校科學(xué)技術(shù)研究項目(YB2014546)和廣西教育廳課題(KY2016YB740)資助。

②廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染性疾病科，南寧530021。