聚異丁烯骨通貼膏經(jīng)皮膚給藥的安全性研究

杜婕瑩，曾 森，王 璐，舒 磊，張首亞，袁 捷#（1.廣州市婦女兒童醫(yī)療中心，廣州 51062；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣州 5105；.桂林華潤天和藥業(yè)有限公司，廣西桂林 51001；.廣州中醫(yī)藥大學(xué)科技產(chǎn)業(yè)園，廣州 5105）

聚異丁烯骨通貼膏經(jīng)皮膚給藥的安全性研究

杜婕瑩1，2＊，曾 森3，王 璐3，舒 磊4，張首亞4，袁 捷4#（1.廣州市婦女兒童醫(yī)療中心，廣州 510623；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣州 510445；3.桂林華潤天和藥業(yè)有限公司，廣西桂林 541001；4.廣州中醫(yī)藥大學(xué)科技產(chǎn)業(yè)園，廣州 510445）

目的：研究聚異丁烯（PIB）骨通貼膏經(jīng)皮膚給藥的安全性。方法：取66只家兔隨機(jī)分為正常組、完整皮膚組、破損皮膚組，后2組再分為PIB組，PIB骨通貼膏低、中、高劑量組，骨通貼膏組，經(jīng)皮膚給藥24 h后連續(xù)觀察14 d進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)；另取家兔60只，除不設(shè)置正常組外分組方法同上，采用同體自身左右側(cè)對(duì)比法單次給藥6 h后，記錄皮膚刺激反應(yīng)，進(jìn)行單次皮膚原發(fā)性刺激實(shí)驗(yàn)。取70只豚鼠隨機(jī)分為陰性對(duì)照組（凡士林）、PIB組、陽性對(duì)照組（2，4-二硝基氯苯）、骨通貼膏組、PIB骨通貼膏低、中、高劑量組致敏給藥后，進(jìn)行皮膚致敏實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：PIB骨通貼膏給藥后家兔未見明顯中毒表現(xiàn)；PIB、PIB骨通貼膏低、中劑量對(duì)完整皮膚和破損皮膚兔均未見刺激性反應(yīng)，PIB骨通貼膏高劑量對(duì)完整皮膚兔未見刺激性反應(yīng)，破損皮膚兔給藥1 h后有輕度刺激性；除陽性對(duì)照組豚鼠過敏反應(yīng)發(fā)生率為100%外，其他各組過敏反應(yīng)發(fā)生率均為0。結(jié)論：PIB骨通貼膏經(jīng)皮膚給藥安全性較好。關(guān)鍵詞 聚異丁烯；骨通貼膏；急性毒性實(shí)驗(yàn)；皮膚原發(fā)性刺激實(shí)驗(yàn)；皮膚致敏實(shí)驗(yàn)；安全性

骨通貼膏由丁公藤、麻黃、當(dāng)歸、干姜、白芷、海風(fēng)藤、乳香、三七、姜黃、辣椒、樟腦、肉桂、薄荷等十余味藥材制備而成［1］，對(duì)寒濕阻絡(luò)兼血瘀證之局部關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、麻木著重、屈伸不利或活動(dòng)受限等有良好的療效，主要治療骨質(zhì)增生、肩周炎、頸（腰）椎病、風(fēng)濕、關(guān)節(jié)炎、腰間盤突出等各種慢性骨病［2］。聚異丁烯（Polyisobutylene，PIB）是一種低過敏性合成高分子材料，性質(zhì)穩(wěn)定、安全無毒。PIB骨通貼膏是將傳統(tǒng)骨通貼膏的基質(zhì)換成PIB，是傳統(tǒng)骨通貼膏的技術(shù)升級(jí)產(chǎn)品（批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字Z10980134），是國內(nèi)獨(dú)創(chuàng)采用新型高分子材料PIB作為中藥貼膏基質(zhì)的膏藥［3］，臨床用藥表明其對(duì)各種原因?qū)е碌奶弁从辛己玫闹委熜Ч?］。為了確保PIB骨通貼膏臨床經(jīng)皮膚給藥的安全性，在本研究中筆者設(shè)計(jì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)，為骨通貼膏臨床應(yīng)用的安全性和進(jìn)一步開發(fā)推廣提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

TCS-30電子臺(tái)秤（常熟市雙杰測試儀器廠）；TP-2101電子天平（常熟市雙杰測試儀器廠）。

1.2 藥物與試劑

PIB骨通貼膏（批號(hào)：201505，規(guī)格：7 cm×10 cm、1.188 g/貼）、骨通貼膏（批號(hào)：20150517，規(guī)格：7 cm×10 cm、1.188 g/貼）均購自桂林華潤天和藥業(yè)有限公司；2，4-二硝基氯苯（DNCB，批號(hào)：613808，純度：98%）購自上海研拓生物科技有限公司；凡士林（批號(hào)：150401，規(guī)格：500 g/瓶）購自南昌華鑫醫(yī)藥化工有限公司；丙酮（廣州化學(xué)試劑廠）。本實(shí)驗(yàn)以PIB骨通貼膏的劑量為PIB中劑量，分別以PIB骨通貼膏中藥物含量的0.5倍、2倍作為PIB低、高劑量，各劑量組PIB基質(zhì)的量不變。各組PIB骨通貼膏均由藥物生產(chǎn)企業(yè)桂林華潤天和藥業(yè)有限公司提供。

1.3 動(dòng)物

普通級(jí)新西蘭家兔126只，♀♂各半，體質(zhì)量2.01～2.42 kg，由廣州市花都區(qū)花東信華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場提供［合格證號(hào)：44007600002565，許可證號(hào)：SCXK（粵）2013-0002］。

普通級(jí)FMMU白化豚鼠70只，♀♂各半，實(shí)驗(yàn)開始時(shí)平均體質(zhì)量為284.3 g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供［合格證號(hào)：44002100006332，許可證號(hào)：SCXK（粵）2011-0015］。

2 方法

2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)[5-7]

取家兔66只，♀♂各半，隨機(jī)分為正常組、完整皮膚組和破損皮膚組；后2組再分為PIB組，PIB骨通貼膏低、中、高劑量組，骨通貼膏組，共計(jì)11組，每組6只。給藥前24 h，用電推剪在家兔背部脫毛，脫毛面積約15 cm×10 cm（約為家兔體表面積的10%），去毛后檢查去毛皮膚是否受傷并剔除受傷家兔。破損皮膚組兔背部脫毛區(qū)用75%乙醇消毒，然后用一次性注射器（5 ml）針頭在脫毛區(qū)劃“井”字切口，以不損傷皮下組織并有滲血為標(biāo)準(zhǔn)。正常組家兔僅脫毛，其他各組家兔貼對(duì)應(yīng)貼劑24 h后，用溫水洗凈殘留藥物，即刻開始觀察家兔皮膚、眼睛、黏膜、呼吸、飲食、大小便、自主活動(dòng)、行為改變等指標(biāo)；當(dāng)出現(xiàn)毒理反應(yīng)，則觀察毒性反應(yīng)的嚴(yán)重程度和消失情況。連續(xù)觀察14 d，每天觀察2次，并于第0、1、7、14 d測量體質(zhì)量。如有死亡或?yàn)l死家兔，或出現(xiàn)肉眼可見的病變時(shí)，則及時(shí)進(jìn)行解剖和病理組織學(xué)檢查。

2.2 單次皮膚原發(fā)性刺激實(shí)驗(yàn)[6-7]

取家兔60只，♀♂各半，除不設(shè)置正常組外，分組方法同“2.1”項(xiàng)，共計(jì)10組，每組6只。各組家兔均采用同體自身左右側(cè)對(duì)比法，右側(cè)給予凡士林（0.5 g/只），左側(cè)給予對(duì)應(yīng)藥物（3 cm×3 cm/只），單次給藥，固定6 h后去除藥物，用溫水洗凈殘留藥物。于實(shí)驗(yàn)開始前和觀察期結(jié)束時(shí)記錄家兔體質(zhì)量和去除藥物第1、24、48、72 h后涂藥部位的紅斑與水腫情況。紅斑評(píng)分：無紅斑計(jì)0分，輕度紅斑（呈淡紅色）計(jì)1分，中度紅斑（呈鮮紅色）計(jì)2分，重度紅斑（呈暗紅色）計(jì)3分，嚴(yán)重紅斑（紫紅色紅斑到輕度焦痂形成）計(jì)4分；水腫評(píng)分：無水腫計(jì)0分，輕度水腫（勉強(qiáng)可見）計(jì)1分，中度水腫（皮膚明顯隆起）計(jì)2分，重度水腫（皮膚隆起1 mm，輪廓清楚）計(jì)3分，嚴(yán)重水腫（皮膚隆起＞1 mm并有擴(kuò)大）計(jì)4分。觀察各組家兔紅斑與水腫積分的平均值，按皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)［8］進(jìn)行刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)，總分為0～8分，其中0～0.49分為無刺激性、0.5～2.99分為輕度刺激性、3.0～5.99分為中度刺激性、6.0～8.0分為強(qiáng)刺激性。

2.3 皮膚致敏實(shí)驗(yàn)[6-7]

FMMU豚鼠70只，♀♂各半，分為陰性對(duì)照組（凡士林，0.5 g/只）、PIB組（3 cm×3 cm/只）、陽性對(duì)照組（DNCB，0.5 g/只）、骨通貼膏組（3 cm×3 cm/只）及PIB骨通貼膏低、中、高劑量組（3 cm×3 cm/只），共計(jì)7組，每組10只。于第0、7、14 d進(jìn)行誘導(dǎo)接觸，給藥部位為豚鼠左側(cè)肋腹部去毛區(qū)皮膚；于第28 d行激發(fā)接觸，給藥部位為豚鼠右側(cè)肋腹部去毛區(qū)皮膚，給藥量和誘導(dǎo)接觸保持一致。觀察第0、24、48、72 h后給藥局部皮膚紅斑、水腫情況，同時(shí)觀察動(dòng)物有無哮喘、站立不穩(wěn)或休克等全身過敏反應(yīng)。紅斑、水腫評(píng)價(jià)同“2.2”項(xiàng)下方法，過敏反應(yīng)發(fā)生率=組內(nèi)出現(xiàn)皮膚紅斑、水腫或全身過敏反應(yīng)的動(dòng)物數(shù)/本組動(dòng)物總數(shù)×100%。過敏反應(yīng)發(fā)生率為0～10%時(shí)評(píng)價(jià)為無致敏性、＞10%～30%時(shí)評(píng)價(jià)為輕度致敏性、＞30%～60%時(shí)評(píng)價(jià)為中度致敏性、＞60%～80%時(shí)評(píng)價(jià)為高度致敏性、＞80%～100%時(shí)評(píng)價(jià)為極度致敏性。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

體質(zhì)量數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，♀♂分別統(tǒng)計(jì)，以±s表示。對(duì)符合正態(tài)分布且方差齊的數(shù)據(jù)，則進(jìn)行單因素方差分析和多重比較（SNK-q檢驗(yàn)）；對(duì)不符合正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)，則進(jìn)行非參數(shù)檢驗(yàn)（Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)）。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

觀察期間，各組家兔飲食飲水正常，均未見豎毛、分泌物及排泄物、眼瞼異常。個(gè)別家兔可見輕微紅痕，疑為貼劑自身黏性和人為撕扯所致，3 d左右即可消退。破損皮膚各組兔結(jié)痂外均未見異常，精神狀態(tài)良好，家兔外觀及行為活動(dòng)正常，破損皮膚在7 d左右均可自行愈合，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)無家兔死亡。第0、1、7、14 d各組家兔體質(zhì)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，數(shù)據(jù)略）。

3.2 單次皮膚原發(fā)性刺激實(shí)驗(yàn)結(jié)果

骨通貼膏破損皮膚組家兔在去除藥物1、24、48 h后表現(xiàn)出輕度刺激性，去除藥物72 h后刺激性消失。骨通貼膏完整皮膚組家兔在去除藥物1、24、48、72 h后均表現(xiàn)出輕度刺激性。PIB骨通貼膏高劑量破損皮膚組家兔在去除藥物1 h后表現(xiàn)出輕度刺激性，去除藥物24、48、72 h后刺激性消失；PIB骨通貼膏低劑量破損皮膚組家兔在去除藥物后24 h，PIB骨通貼膏中劑量完整皮膚組家兔在去除藥物1、24、48 h后，皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)分的平均值分別為0.17、0.33、0.33、0.17，在0～0.49范圍內(nèi)，評(píng)價(jià)為無刺激性。其他各組家兔在去除藥物后1 h、24 h、48 h、72 h的皮膚刺激強(qiáng)度平均值為0分，評(píng)價(jià)為無刺激性，詳見表1。

表1 各組家兔單次皮膚原發(fā)性刺激實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Results of the single primary skin irritation test of each group of rabbits

3.3 皮膚致敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果

陰性對(duì)照組、PIB組、骨通貼膏組及PIB骨通貼膏低、中、高劑量組豚鼠激發(fā)部位皮膚均未出現(xiàn)紅斑、水腫，無哮喘、站立不穩(wěn)或休克等全身過敏反應(yīng)，過敏反應(yīng)發(fā)生率均為0，均評(píng)價(jià)為未見皮膚過敏反應(yīng)。陽性對(duì)照組豚鼠激發(fā)部位皮膚均出現(xiàn)不同程度的紅斑和水腫情況，過敏反應(yīng)發(fā)生率為100%，評(píng)價(jià)為極強(qiáng)致敏。結(jié)果表明，PIB骨痛貼膏對(duì)豚鼠無皮膚致敏作用。

4 討論

骨通貼膏是在“海氏骨刺靈”的基礎(chǔ)上，根據(jù)徐大椿“薄貼論”的理論，針對(duì)骨刺病癥，篩選滲透力強(qiáng)、擴(kuò)張微細(xì)血管、消除炎癥并減輕疼痛的天然藥物，并加入強(qiáng)力透皮吸收促進(jìn)劑，結(jié)合現(xiàn)代制劑技術(shù)精制而成的外用貼劑。骨通貼膏的主要藥材丁公藤可祛風(fēng)除濕、消腫止痛；麻黃可發(fā)汗解表、利水消腫；當(dāng)歸可活血止痛；干姜可溫中散寒、回陽通脈，諸藥調(diào)和配伍、共同作用使組方具有祛風(fēng)散寒、活血通絡(luò)、消腫止痛之功效。

PIB骨通貼膏采用超純PIB為基質(zhì)，分子中只有碳元素和氫元素，不含橡膠基質(zhì)中的特異性毒蛋白、松香、防腐劑等致敏物質(zhì)，安全無毒，與皮膚相容性好，無刺激，故其過敏率顯著低于傳統(tǒng)橡膠膏藥［4］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明骨通貼膏對(duì)完整皮膚給藥具有輕度刺激性，而PIB骨通貼膏對(duì)皮膚的刺激性較低，只有高劑量去除藥物1 h后對(duì)破損皮膚表現(xiàn)出輕度刺激性，其余各劑量組均未見刺激性反應(yīng)。PIB為聚合物，其內(nèi)聚力強(qiáng)、黏度可控，有“強(qiáng)粘易撕”的優(yōu)點(diǎn)，可以避免對(duì)皮膚產(chǎn)生物理性傷害，不損傷皮膚，且由其所制貼膏膏體不會(huì)殘留在皮膚上。而其長鏈結(jié)構(gòu)僅端基含不飽和鍵，雙鍵少，可以產(chǎn)生反應(yīng)的位置少，因而化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，耐寒、耐熱、抗老化性良好，可在不改變藥物性質(zhì)的情況下使藥物充分發(fā)揮作用［9］。以PIB制成的基質(zhì)包容性大，利用中藥芳香開竅并與國際先進(jìn)透釋技術(shù)相結(jié)合，可使藥物釋放性能和療效得到顯著提高。

急性毒性實(shí)驗(yàn)、皮膚原發(fā)性刺激實(shí)驗(yàn)、皮膚致敏實(shí)驗(yàn)是新藥臨床前安全性評(píng)價(jià)的重要組成部分［10］。在本實(shí)驗(yàn)所用的劑量范圍內(nèi)，應(yīng)用PIB為基質(zhì)成分制成的骨通貼膏對(duì)皮膚無毒性、無刺激性、無致敏性，表明其使用安全、無毒副作用。綜上所述，PIB骨通貼膏經(jīng)皮膚給藥安全性較好。

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Safety Study of Polyisobutylene Gutong Plaster by Transdermal Administration

DU Jieying1，2，ZENG Sen3，WANG Lu3，SHU Lei4，ZHANG Shouya4，YUAN Jie4（1.Guangzhou Women and Children’s Medical Center，Guangzhou 510623，China；2.School of Chinese Meterla Medica，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510445，China；3.Guilin Huarun Tianhe Pharmaceutical Co.，Ltd.，Guangxi Guilin 541001，China；4.Sci-tech Industrial Park，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510445，China）

OBJECTIVE：To investigate the safety of Polyisobutylene（PIB）Gutong plaster by transdermal administration.METHODS：66 rabbits were randomly divided into a normal group，a group with intact skin and a group with damaged skin.The latter two groups were respectively re-divided into PIB group，the groups of low，medium and high-dose PIB Gutong plaster and Gutong plaster group.An acute toxicity test was conducted on the rabbits，which 14 d of continuous observation was made 24 h after transdermal administration.Another 60 rabbits were divided into several groups as above except for a normal group.A single primary skin irritation test was conducted on them，where skin irritation reactions were recorded 6 h after a single administration based on intra-individual left/right self comparison method.70 guinea pigs were randomized into a negative control group（vaseline），a PIB group，a positive control group（2，4-dinitrochlorobenzene），a Gutong plaster group and the groups of low，medium and high-dose PIB Gutong plaster，which were dosed for sensitization，followed by a skin sensitization test.RESULTS：No obvious toxicity symptoms could be seen after administration of PIB Gutong plaster.The rabbits’intact or damaged skin had no irritation response to PIB and low and medium-dose PIB Gutong plaster.PIB Gutong plaster caused no irritation response in the rabbits’intact skin，but slight irritation in damaged skin 1 h after administration.The allergic reaction incidence of the positive control group of guinea pigs was 100%while that of any other groups was 0.CONCLUSIONS：The PIB Gutong plaster is safe for transdermal administration.

Polyisobutylene；Gutong plaster；Acute toxicity test；Primary skin irritation test；Skin sensitization test；Safety

R965.3

A

1001-0408（2016）25-3512-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.25.17

2016-01-15

2016-07-08）（編輯：劉明偉）

＊中藥師，碩士研究生。研究方向：中藥新藥開發(fā)。E-mail：fannyto@163.com

研究員。研究方向：中藥新藥開發(fā)。E-mail：466754442@qq.com