野馬追水煎液對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的降壓作用及其機(jī)制研究

遲 棟（南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，河南南陽(yáng) 473061）

野馬追水煎液對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的降壓作用及其機(jī)制研究

遲 棟＊（南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，河南南陽(yáng) 473061）

目的：研究野馬追水煎液對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）的降壓作用及其機(jī)制。方法：將50只SHR隨機(jī)分為模型組、卡托普利片組（陽(yáng)性藥物，10 mg/g）和野馬追水煎液高、中、低劑量組（65.45、32.73、16.36 g/kg），每組10只。模型組大鼠ig生理鹽水，其余各組大鼠ig相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)7周。每周測(cè)定大鼠尾動(dòng)脈收縮壓（SBP）和舒張壓（DBP），記錄大鼠在藥物作用下血壓的動(dòng)態(tài)變化。7周后處死大鼠，測(cè)定血清中內(nèi)皮素（ET）、血管緊張素（AngⅡ）和一氧化氮（NO）含量。結(jié)果：給藥7周后，與模型組比較，各給藥組大鼠尾動(dòng)脈SBP、DBP均明顯降低（P＜0.05），野馬追水煎液降壓效果呈現(xiàn)一定的量效和時(shí)效關(guān)系；各給藥組大鼠血清中NO、AngⅡ含量明顯減少，ET含量明顯增加，且呈量效關(guān)系。結(jié)論：野馬追水煎液對(duì)SHR有明顯的降壓作用，其機(jī)制可能與降低血清中NO、AngⅡ含量及升高血清中ET含量有關(guān)。

野馬追水煎液；自發(fā)性高血壓大鼠；降壓

野馬追為菊科植物輪葉澤蘭Eupatorium lindleyanum DC.的干燥地上部分，性平味苦，歸肺經(jīng)，有化痰、止咳、平喘的功效，臨床上多用于痰濁阻肺、肺失宣降所致的咳嗽氣喘、痰多等癥，為2010年版《中國(guó)藥典》（一部）新增的化痰止咳平喘類(lèi)中藥［1］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，野馬追具有抗病原微生物、鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、降血脂等多種藥理活性［2-5］。在前期實(shí)驗(yàn)中，筆者發(fā)現(xiàn)野馬追水煎液還具有降血壓作用，查閱相關(guān)文獻(xiàn)尚未發(fā)現(xiàn)野馬追降血壓作用的相關(guān)報(bào)道。內(nèi)皮素（ET）、血管緊張素（AngⅡ）和一氧化氮（NO）3個(gè)活性物質(zhì)在高血壓發(fā)生發(fā)展過(guò)程中有非常重要的作用，其中NO對(duì)血管張力有調(diào)節(jié)作用，其含量的異常變化會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的變化；AngⅡ收縮血管與刺激腎上腺皮質(zhì)分泌醛固酮增加血容量，導(dǎo)致血壓升高；ET是目前所知體內(nèi)最強(qiáng)的血管收縮因子，其過(guò)量的釋放可引起血管痙攣，控制ET的含量是保護(hù)血管的重要手段之一［6］。在本實(shí)驗(yàn)中，筆者擬以自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）為動(dòng)物模型，考察野馬追水煎液的降壓作用，并以ET、AngⅡ和NO為指標(biāo)，初步探討其降壓的作用機(jī)制。

1 材料

1.1 儀器

ALC-NIBP多通道無(wú)創(chuàng)傷大鼠尾動(dòng)脈血壓計(jì)（上海奧爾科特生物科技有限公司）；BP-420多通道生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；UV-2010紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）；SN-682γ閃爍計(jì)數(shù)器（上海核福光電儀器有限公司）。

1.2 藥材、藥品與試劑

野馬追飲片（批號(hào)：20131028）購(gòu)自安徽亳州藥材市場(chǎng)，經(jīng)河南大學(xué)藥用植物教研室李昌勤教授鑒定為菊科植物輪葉澤蘭（Eupatorium lindleyanum DC.）的干燥地上部分；卡托普利片（汕頭金石制藥總廠有限公司，批號(hào)：130612，規(guī)格：1.25 mg/片）；ET、AngⅡ、NO酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（浙江伊利康生物有限公司，批號(hào)：130118、130606、140311）；其余試劑均為分析純。

1.3 動(dòng)物

SHR 60只，清潔級(jí)，♀♂各半，體質(zhì)量220～240 g，購(gòu)自河南省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心［許可證號(hào)：SCXK（豫）2013-0129］。大鼠于室溫為22～24 ℃、相對(duì)濕度為50%～60%、光照時(shí)間為12 h （7：00～19：00）的環(huán)境下適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn)。

2 方法

2.1 野馬追水煎液的制備

稱(chēng)取1 kg野馬追飲片，加15倍量水浸泡30 min后，煎煮2次，每次1.5 h。合并2次水煎液，減壓濃縮至質(zhì)量濃度為2.56 g（生藥）/ml的溶液，備用。

2.2 分組與給藥

分組前測(cè)量大鼠血壓，將符合實(shí)驗(yàn)條件的50只SHR隨機(jī)分為5組，分別為模型組、卡托普利片（陽(yáng)性藥物）組和野馬追水煎液高、中、低劑量組，每組10只。模型組大鼠ig生理鹽水；卡托普利片組大鼠ig 10 mg/kg卡托普利溶液（按照臨床常用劑量折算成大鼠給藥劑量）；野馬追水煎液組大鼠分別ig生藥量為65.45、32.73、16.36 g/kg的野馬追水煎液（分別為半數(shù)致死濃度的1/5、1/10、1/20倍劑量）。每天給藥1次，連續(xù)7周；每周稱(chēng)體質(zhì)量1次，并依據(jù)體質(zhì)量調(diào)整大鼠的給藥劑量。實(shí)驗(yàn)期間大鼠均給予普通飼料、自由飲水。

2.3 指標(biāo)檢測(cè)

使用ALC-NIBP多通道無(wú)創(chuàng)傷大鼠尾動(dòng)脈血壓計(jì)測(cè)量大鼠尾動(dòng)脈收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）。給藥期間每周測(cè)定1次，每只大鼠平行測(cè)量3次，取平均值。末次給藥后禁食12 h，烏拉坦麻醉，腹主動(dòng)脈取血，制備血清。采用ELISA法，分別按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作測(cè)定各組大鼠血清中ET、AngⅡ、NO含量。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠尾動(dòng)脈SBP、DBP測(cè)定結(jié)果

給藥前，各組大鼠尾動(dòng)脈SBP、DBP差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。給藥1周后，卡托普利片組和野馬追水煎液各劑量組大鼠尾動(dòng)脈SBP、DBP明顯降低，并在此后的6周內(nèi)維持在較低的水平，與模型組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。給藥1周后，野馬追水煎液高、中劑量組大鼠尾動(dòng)脈SBP、DBP與卡托普利片組接近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表現(xiàn)出較好的降壓趨勢(shì)；野馬追水煎液低劑量組大鼠血壓降低相對(duì)不明顯。給藥2周后，野馬追水煎液高劑量組大鼠尾動(dòng)脈SBP、DBP降低較卡托普利片組更為明顯，其中SBP差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示在給藥2周后高劑量野馬追水煎液作用優(yōu)于卡托普利片。隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)和給藥劑量的增加，野馬追水煎液降壓作用更為明顯。在給藥6周后，野馬追水煎液中、高劑量組大鼠SBP降低均較卡托普利片組明顯（P＜0.05），DBP差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果提示，野馬追水煎液具有較好的降壓作用，在實(shí)驗(yàn)劑量下，長(zhǎng)期給藥的降壓作用和卡托普利片接近。各組SHR大鼠尾動(dòng)脈SBP、DBP測(cè)定結(jié)果分別見(jiàn)表1、表2（1 mm Hg=0.133 kPa）。

表1 各組大鼠尾動(dòng)脈SBP測(cè)定結(jié)果（±s，n=10，mm Hg）Tab 1 The SBPof the caudal arteries of rats in all groups（±s，n=10，mm Hg）

表1 各組大鼠尾動(dòng)脈SBP測(cè)定結(jié)果（±s，n=10，mm Hg）Tab 1 The SBPof the caudal arteries of rats in all groups（±s，n=10，mm Hg）

注：與模型組比較，＊P＜0.05；與卡托普利片組比較，#P＜0.05Note：vs.model group，＊P＜0.05；vs.captopril tablets group，#P＜0.05

組別模型組卡托普利片組野馬追水煎液高劑量組野馬追水煎液中劑量組野馬追水煎液低劑量組劑量，g/kg給藥后給藥前184.0±2.1 184.7±3.8 185.4±4.2 185.3±3.4 185.6±1.5 1周183.9±2.4 154.9±3.4＊153.5±1.0＊157.3±1.4＊169.7±4.1＊#2周3周4周5周6周7周10×10－365.45 32.73 16.36 185.8±2.3 147.8±1.6＊144.2±3.0＊#152.8±1.3＊#167.8±2.4＊#185.5±3.6 142.2±2.4＊143.4±1.0＊146.3±3.5＊161.6±4.0＊#186.1±1.1 138.8±1.3＊141.9±0.9＊146.4±2.3＊#159.6±4.5＊#186.1±1.2 141.6±4.2＊134.9±3.0＊#145.5±1.9＊150.1±3.9＊#186.2±2.4 140.8±4.0＊133.7±2.4＊#136.6±2.4＊#136.6±3.3＊186.8±3.1 137.5±2.8＊131.4±2.7＊#133.6±2.9＊#143.9±1.1＊#

表2 各組大鼠尾動(dòng)脈DBP測(cè)定結(jié)果（±s，n=10，mm Hg）Tab 2 The DBPof the caudal arteries of rats in all groups（±s，n=10，mm Hg）

表2 各組大鼠尾動(dòng)脈DBP測(cè)定結(jié)果（±s，n=10，mm Hg）Tab 2 The DBPof the caudal arteries of rats in all groups（±s，n=10，mm Hg）

注：與模型組比較，＊P＜0.05；與卡托普利片組比較，#P＜0.05Note：vs.model group，＊P＜0.05；vs.captopril tablets group，#P＜0.05

組別模型組卡托普利片組野馬追水煎液高劑量組野馬追水煎液中劑量組野馬追水煎液低劑量組劑量，g/kg給藥后給藥前132.1±4.6 130.6±5.2 134.7±3.9 127.0±1.8 132.0±6.2 4周2周3周5周6周7周10×10－365.45 32.73 16.36 1周135.2±6.2 122.5±5.5＊125.6±2.9＊122.4±1.8＊121.4±3.5＊133.3±3.7 121.4±3.5＊118.7±2.6＊117.6±3.9＊119.4±4.7＊133.4±4.0 111.7±4.5＊108.1±9.2＊114.0±5.3＊109.1±5.9＊133.9±4.9 106.2±2.9＊92.6±4.7＊#114.6±1.3＊#112.7±2.6＊#132.3±3.4 102.7±4.1＊95.3±6.6＊106.3±7.1＊114.6±4.5＊#130.9±3.6 99.6±4.1＊97.9±6.7＊101.6±4.2＊113.5±2.7＊#128.4±2.9 98.9±2.3＊100.9±7.3＊105.8±2.6＊115.2±7.0＊#

3.2 各組大鼠血清中ET、AngⅡ、NO含量測(cè)定結(jié)果

給藥7周后，與模型組比較，各給藥組大鼠血清中ET、AngⅡ含量顯著減少，NO含量顯著增加（P＜0.05）。與卡托普利片組比較，野馬追水煎液高、中、低劑量組大鼠血清中NO含量顯著增加，AngⅡ含量顯著減少（P＜0.05）；野馬追水煎液高劑量組大鼠血清中ET含量稍有降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。給藥7周后各組大鼠血清中ET、AngⅡ、NO含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 給藥7周后各組大鼠血清中ET、AngⅡ、NO含量測(cè)定（±s，n=10）Tab 3 The contents of ET，AngⅡand NO in serum of rats in all groups after 7 weeks of administration（±s，n=10）

表3 給藥7周后各組大鼠血清中ET、AngⅡ、NO含量測(cè)定（±s，n=10）Tab 3 The contents of ET，AngⅡand NO in serum of rats in all groups after 7 weeks of administration（±s，n=10）

注：與模型組比較，＊P＜0.05；與卡托普利片組比較，#P＜0.05Note：vs.model group，＊P＜0.05；vs.captopril tablets group，#P＜0.05

AngⅡ，pg/ml 621.8±12.4 418.8±12.2＊462.7±12.2＊#516.1±8.1＊#531.3±8.5＊#組別模型組卡托普利片組野馬追水煎液高劑量組野馬追水煎液中劑量組野馬追水煎液低劑量組劑量，g/kg 10×10－365.45 32.73 16.36 ET，pg/ml 85.9±4.3 56.5±4.4＊55.7±4.8＊64.4±5.3＊#76.4±6.0＊#NO，μmol/ml 35.5±3.3 90.4±3.2＊83.4±1.6＊#70.9±4.9＊#54.0±3.9＊#

4 討論

SHR模型是一種慢性高血壓模型，具有與人類(lèi)相似的高血壓變化過(guò)程和高血壓遺傳背景，常用于抗高血壓作用的研究。目前降血壓藥物大都是通過(guò)影響血管外周阻力的各種因素而調(diào)節(jié)血壓［7-8］。NO是由內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）合成并釋放的一種舒血管活性物質(zhì)，當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞NO濃度升高時(shí)，可激活鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，使平滑肌細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷鳥(niǎo)苷水平升高、游離鈣離子濃度降低，引起血管舒張效應(yīng)，繼而發(fā)揮調(diào)節(jié)血管張力的作用。當(dāng)發(fā)生高血壓時(shí)，NO的合成或分泌不足會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生變化。此外NO還可以抑制ET、腎素的生成和釋放，從而產(chǎn)生降壓作用［9］。AngⅡ是腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）的關(guān)鍵性產(chǎn)物，是在RAS和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）的作用下，由血管緊張素原生成，通過(guò)收縮血管與刺激腎上腺皮質(zhì)分泌醛固酮而增加血容量，導(dǎo)致血壓升高。ET是目前所知體內(nèi)最強(qiáng)的血管收縮因子，由內(nèi)皮細(xì)胞分泌，在高血壓的發(fā)生、發(fā)展中有重要作用［8］。

卡托普利片為ACE抑制劑，對(duì)多種類(lèi)型高血壓均有明顯的降壓作用，其通過(guò)降低血漿AngⅡ水平、減少AngⅡ與其受體的結(jié)合，從而導(dǎo)致動(dòng)、靜脈舒張，外周阻力下降，使動(dòng)脈平均壓、DBP、SBP下降。SHR大鼠是遺傳性高血壓動(dòng)物模型，機(jī)體血管內(nèi)皮細(xì)胞排列紊亂或者脫失是導(dǎo)致其心血管疾病發(fā)生的關(guān)鍵因素［6］，心肌細(xì)胞受損及血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能下降會(huì)導(dǎo)致血壓升高。而卡托普利片對(duì)心肌損傷有較好的修復(fù)作用，且對(duì)多種高血壓有明顯的抑制作用，故在本實(shí)驗(yàn)中以其為陽(yáng)性對(duì)照藥物［10-11］。

本研究結(jié)果顯示，高劑量野馬追水煎液給藥2周后表現(xiàn)出較好的降壓趨勢(shì)，其降壓作用優(yōu)于卡托普利片組（SHR和SBP值均低于卡托普利片組）；野馬追水煎液在給藥4周后，對(duì)SHR大鼠降壓作用穩(wěn)定、強(qiáng)度較大。在給藥7周后，野馬追水煎液各劑量組大鼠血清中ET、AngⅡ水平明顯降低，NO水平明顯升高；且野馬追水煎液高、中劑量組大鼠上述指標(biāo)變化較卡托普利片組更為明顯（P＜0.05）。結(jié)果提示，野馬追水煎液可能通過(guò)升高大鼠血清中NO水平、降低血清中ET和AngⅡ水平而發(fā)揮降壓作用。

綜上，野馬追水煎液具有較好的降壓作用，適合長(zhǎng)期給藥，其降壓機(jī)制可能與調(diào)節(jié)血清中NO、ET、AngⅡ水平相關(guān)。本課題組在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中將深入探討其更多的作用機(jī)制，并采用多指標(biāo)雙向反饋實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證野馬追的降壓作用，為開(kāi)發(fā)野馬追降壓制劑提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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（編輯：林 靜）

Study on the Antihypertensive Effects of Water Decoction of Eupatorium lindleyanum on Spontaneously Hypertensive Rats and Corresponding Mechanism

CHI Dong（Nanyang Medical College，Henan Nanyang 473061，China）

OBJECTIVE：To study the antihypertensive effects of water decoction of Eupatorium lindleyanum on spontaneously hypertensive rats（SHR）and corresponding mechanism.METHODS：50 SHR were randomly divided into model group，captopril tablets group（positive drug，10 mg/g）and the groups of high，medium and low-dose（65.45，32.73，16.36 g/kg）water decoction of E.lindleyanum，with 10 rats in each group.The rats in the model group were given normal saline ig，while those in other groups were given corresponding drugs ig，once a day，for 7 consecutive weeks.The systolic blood pressure（SBP）and diastolic blood pressure（DBP）of the caudal arteries of the rats were measured every week，and the dynamic changes in the blood pressure of the rats as a result of drug intervention were recorded.The rats were sacrificed 7 weeks later，and the levels of endothelin（ET），angiotensin（AngⅡ）and nitric oxide（NO）in serum were determined.RESULTS：After 7 weeks of drug use，compared to the model group，the rats in the drug administration groups had significantly lower SBP and DBP of the caudal artery（P＜0.05），showing obvious dose-effect and time-effect relationships in the antihypertensive effect of water decoction of E.lindleyanum，and had obviously lower levels of NO and AngⅡand markedly higher level of ET in serum，demonstrating a dose-effect relationship.CONCLUSIONS：The water decoction of E.lindleyanum has an obvious antihypertensive effect by a mechanism which may be related to decrease in the levels of NO and AngⅡin serum and increase in the level of ET therein.

Water decoction of Eupatorium lindleyanum；Spontaneously hypertensive rats；Antihypertension

R285

A

1001-0408（2016）25-3502-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.25.14

2016-01-22

2016-05-25）

＊講師，碩士。研究方向：中藥的提取與分離。E-mail：chidong1984@126.com