小檗堿對PM2.5誘導的血管內(nèi)皮細胞損傷的抑制作用及其p38 MAPK通路機制研究Δ

萬 強，楊玉萍，劉中勇（1.江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院心血管病科，南昌 0006；2.廣州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院心血管疾病研究所，廣州 510260；.江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院肺病科，南昌 0006）

小檗堿對PM2.5誘導的血管內(nèi)皮細胞損傷的抑制作用及其p38 MAPK通路機制研究Δ

萬 強1，2＊，楊玉萍3，劉中勇1#（1.江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院心血管病科，南昌 330006；2.廣州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院心血管疾病研究所，廣州 510260；3.江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院肺病科，南昌 330006）

目的：研究小檗堿對大氣中空氣動力學直徑≤2.5 μm的細顆粒物（PM2.5）誘導的EA.hy926型人臍靜脈內(nèi)皮細胞（簡稱EA.hy926細胞）損傷的抑制作用，以及其p38分裂原激活蛋白激酶（p38 MAPK）信號通路機制。方法：采集大氣PM2.5并以0（空白對照）、20、200、400 mg/L孵育EA.hy926細胞24 h，測定細胞存活率、凋亡率、細胞中白細胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脫氫酶（LDH）活性，以及磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）、B淋巴細胞癌2 （Bcl-2）、Bcl-2相關X蛋白（Bax）的蛋白水平。同法測定空白對照組、PM2.5組（200 mg/L PM2.5）、p38 MAPK通路特異性阻滯劑SB203580組（20 μmol/L SB203580+200 mg/L PM2.5）和小檗堿低、中、高濃度組（5、10、20 μmol/L小檗堿+200 mg/L PM2.5）EA.hy926細胞的上述指標。結果：與空白對照比較，200、400 mg/L PM2.5孵育細胞后細胞存活率、SOD活性、Bcl-2蛋白表達均明顯降低；細胞凋亡率，IL-6、TNF-α、MDA含量，LDH活性以及p-p38 MAPK、Bax蛋白水平均明顯升高（P＜0.05），效果呈濃度依賴性。與PM2.5組比較，小檗堿中、高濃度組和SB203580組細胞存活率、SOD活性、Bcl-2蛋白表達明顯升高；細胞凋亡率，IL-6、TNF-α、MDA含量，LDH活性以及p-p38 MAPK、Bax蛋白水平均明顯降低（P＜0.05）。結論：小檗堿可通過抑制p38 MAPK通路，減輕PM2.5對EA.hy926細胞的損傷。

小檗堿；PM2.5；EA.hy926型人臍靜脈內(nèi)皮細胞；p38分裂原激活蛋白激酶

動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）是心腦血管疾病的重要病理基礎，血管內(nèi)皮細胞損傷是AS的起始病理環(huán)節(jié)［1］。有研究表明，吸入大氣中空氣動力學直徑≤2.5 μm的細顆粒物（PM2.5）與AS的形成直接相關［2］。小檗堿（Berberine）又稱黃連素，為小檗科植物中提取的異喹啉生物堿，可通過抑制炎癥反應、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抗氧化應激損傷、抑制血小板活性抗血栓形成等多途徑發(fā)揮抗AS效應［3-5］，但其機制尚未完全闡明。本研究觀察PM2.5對EA.hy926型人臍靜脈內(nèi)皮細胞（簡稱EA.hy926細胞）損傷的影響，加用小檗堿和p38分裂原激活蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38 MAPK）通路特異性阻滯劑SB203580干預，探討小檗堿對PM2.5誘導的EA.hy926細胞損傷的干預作用及其可能機制。

1 材料

1.1 儀器

IX71型熒光倒置顯微鏡（日本奧林巴斯公司）；165-1801型電泳儀（美國Bio-Rad公司）；FACSCalibur型流式細胞儀（美國Becton Dickinson公司）；MK3型酶標儀、ST16R型低溫高速離心機（美國Thermo公司）；MiniVol型便攜式PM2.5采樣器（美國Airmetrics公司）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸小檗堿原料藥（美國Sigma公司，批號：3251，純度：≥98.0%）；SB203580（英國Tocris Bioscience公司，批號：1502，純度：≥98.0%）；二甲基亞砜（DMSO）、MTT（美國Sigma公司）；胎牛血清DMEM培養(yǎng)基（美國Gibco公司）；兔抗磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）抗體、兔抗B淋巴細胞癌2（Bcl-2）抗體、兔抗Bcl-2相關X蛋白（Bax）抗體、兔抗β-actin多克隆抗體、人抗兔二抗（美國Cell Signal Technology公司）；AnnexinⅤ-異硫氰酸熒光素（FITC）試劑盒（美國BioVision公司）；白細胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（美國eBioscience公司）；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.3 細胞

EA.hy926細胞株購自美國ATCC細胞庫（批號：2922），增殖周期約為31 h。

2 方法

2.1 PM2.5的采集與制備

根據(jù)空氣質(zhì)量指數(shù)和PM2.5監(jiān)測數(shù)據(jù)，于空氣質(zhì)量指數(shù)5級及以上的PM2.5嚴重超標的霧霾天氣當天，在南昌市區(qū)中心距離地面約50 m高建筑樓頂用PM2.5采樣器以流量5 L/min進行24 h/d采樣，連續(xù)采樣3 d。將采樣器中石英纖維濾膜剪成1 cm×3 cm大小置于去離子水中，超聲振蕩30 min×3次，再用6層無菌紗布過濾，4 ℃ 下10 000 r/min（離心半徑為4 cm）離心20 min，收集提取物真空冷凍干燥成干粉，稱質(zhì)量，于－20℃避光保存；臨用時用滅菌磷酸鹽緩沖液（PBS）配制成質(zhì)量濃度分別為0、20、200、400 mg/L的PM2.5混懸液。

2.2 細胞分組與處理

EA.hy926細胞置于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)。取EA.hy926細胞分為PM2.5不同質(zhì)量濃度組，分別以0（空白對照）、20、200、400 mg/L的PM2.5混懸液孵育EA.hy926細胞24 h［6］。藥物干預試驗設6組，即空白對照組、PM2.5組（200 mg/L PM2.5孵育24 h）、SB203580組（20 μmol/L SB203580孵育30 min［7］+200 mg/L PM2.5孵育24 h）和小檗堿低、中、高濃度組（5、10、20 μmol/L小檗堿孵育1 h［8］+200 mg/L PM2.5孵育24 h）。小檗堿和SB203580均用DMSO溶解。

2.3 MTT法檢測細胞存活率

呂溫認為“道”是根本，“文”是用來修飾“道”才存在的。 可見“文”與“道”之間，呂溫更強調(diào)注重“道”，對“文”有些許的輕視。雖然呂溫提出“文為道之飾，道為文之本”的文道觀點，與古文運動中韓柳的“文以明道”的文道觀緊密相連，但側重點不同。在《送薛大信歸臨晉序》一文中有：

將“2.2”項下處理后的EA.hy926細胞調(diào)至每孔1×104個，接種至96孔培養(yǎng)板，每組設6個復孔，培養(yǎng)24 h后撤去血清。PM2.5混懸液毒染后加入20 μl MTT溶液（PBS溶解，質(zhì)量濃度為5 g/L）室溫培養(yǎng)4 h，每孔加150 μl DMSO使還原產(chǎn)物完全溶解，低速振蕩10 min。酶標儀測定570 nm波長處吸光度（A），計算細胞存活率［（A試驗孔－A空白孔）/（A空白對照孔－A空白孔）×100%］。其中空白對照孔加EA.hy926細胞和培養(yǎng)基，不加藥物；空白孔只加培養(yǎng)基，不加細胞和藥物。

2.4 流式細胞術檢測細胞凋亡率

將“2.2”項下處理后的EA.hy926細胞調(diào)至每孔2×105個，接種至12孔培養(yǎng)板24 h，每組設6個復孔，加不含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h。收集細胞，PBS洗滌5 min×2次，加AnnexinⅤ-FITC及碘化丙啶（PI）雙染，流式細胞術檢測細胞凋亡率。以AnnexinⅤ+/PI－為早期凋亡，以AnnexinⅤ+/PI+為晚期凋亡，計算凋亡率（早期凋亡率+晚期凋亡率）。

2.5 IL-6、TNF-α、MDA含量與SOD、LDH活性的測定

取“2.2”項下處理后的對數(shù)生長期的EA.hy926細胞以1×105ml－1接種于培養(yǎng)皿。收集細胞，以1 000 r/min（離心半徑為8 cm）離心10 min，去除培養(yǎng)液，以2 ml PBS洗1次后加PBS 500 μl混懸，超聲5 s×5次，使細胞破碎，黃嘌呤氧化酶法檢測細胞裂解液中SOD活性。收集細胞上清液，ELISA法檢測細胞中IL-6及TNF-α含量，硫代巴比妥法檢測細胞中MDA含量，比色法檢測細胞中LDH活性，操作步驟參照試劑盒說明書進行。

2.6 Western blot法檢測Bcl-2、Bax、p-p38MAPK蛋白水平

提取“2.2”項下處理后的EA.hy926細胞總蛋白，二喹啉甲酸（BCA）法檢測蛋白濃度。煮沸5 min蛋白變性后進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），半干轉印，5%脫脂牛奶封閉2 h；加一抗（兔抗Bcl-2抗體、兔抗Bax抗體、兔抗p-p38 MAPK抗體、兔抗β-actin多克隆抗體，稀釋比例：1∶1 000）于4 ℃ 反應過夜，TBST緩沖液洗膜3次；加人抗兔二抗（稀釋比例：1∶2 000）于室溫結合，TBST洗膜3次，化學發(fā)光法檢測。以β-actin為內(nèi)參蛋白，采用Quantity One軟件分析Bcl-2、Bax、p-p38 MAPK蛋白的相對表達量。

3 結果

3.1 PM2.5對EA.hy926細胞的影響

3.1.1 細胞存活率與凋亡率 與空白對照比較，200、400 mg/L 的PM2.5孵育EA.hy926細胞后細胞存活率降低、凋亡率升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），結果見表1。

表1 不同質(zhì)量濃度PM2.5對EA.hy926細胞存活率、凋亡率，IL-6、TNF-α、MDA含量及SOD、LDH活性的影響（±s，n=6）Tab 1 Effects of different mass concentration of PM2.5 on survival rate and apoptosis rate of cells，contents of IL-6，TNF-α and MDA，activities of SOD and LDH in the EA.hy926 cells（±s，n=6）

表1 不同質(zhì)量濃度PM2.5對EA.hy926細胞存活率、凋亡率，IL-6、TNF-α、MDA含量及SOD、LDH活性的影響（±s，n=6）Tab 1 Effects of different mass concentration of PM2.5 on survival rate and apoptosis rate of cells，contents of IL-6，TNF-α and MDA，activities of SOD and LDH in the EA.hy926 cells（±s，n=6）

注：與空白對照比較，＊P＜0.05Note：vs.blank control，＊P＜0.05

PM2.5質(zhì)量濃度，mg/L 0（空白對照）20 200 400 LDH，U/L 625.99±43.54 632.68±44.74 1 109.41±62.67＊1 496.52±53.75＊細胞存活率，% 100 97.95±0.24 84.69±1.51＊63.27±1.48＊細胞凋亡率，% 2.25±0.21 2.41±0.17 24.16±1.58＊41.49±1.67＊IL-6，ng/L 338.64±11.72 342.39±13.54 542.59±15.92＊583.42±14.26＊TNF-α，ng/L 158.78±6.73 161.23±7.39 368.29±8.83＊418.48±10.63＊MDA，μmol/L 1.22±0.16 1.25±0.18 4.17±0.20＊5.56±0.23＊SOD，U/ml 18.76±0.35 18.49±0.31 11.29±0.35＊7.85±0.29＊

3.1.2 IL-6、TNF-α、MDA含量和SOD、LDH活性 與空白對照比較，200、400 mg/L的PM2.5孵育EA.hy926細胞后細胞中SOD活性降低，IL-6、TNF-α、MDA含量增加及LDH活性增強，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），結果見表1。

3.1.3 Bcl-2、Bax、p-p38 MAPK蛋白 與空白對照比較，200、400 mg/L的PM2.5孵育EA.hy926細胞后細胞中Bax、p-p38 MAPK蛋白表達增強、Bcl-2蛋白表達減弱，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。電泳圖見圖1，蛋白表達結果見圖2。

圖1 不同質(zhì)量濃度PM2.5對EA.hy926細胞內(nèi)p-p38 MAPK、Bax、Bcl-2蛋白表達影響的電泳圖Fig 1 Electropherogram of the effects of different mass concentration of PM2.5 on the protein expressions of pp38MAPK，Bax and Bcl-2in the EA.hy926cells

圖2 不同質(zhì)量濃度PM2.5對EA.hy926細胞內(nèi)p-p38 MAPK、Bax、Bcl-2蛋白表達影響的檢測結果Fig 2 Detection results of the effects of different mass concentration of berberine on the protein expressions of p-p38MAPK，Bax and Bcl-2in the EA.hy926cells

3.2 小檗堿對PM2.5誘導EA.hy926細胞損傷的抑制作用

3.2.1 細胞存活率與凋亡率 與PM2.5組比較，小檗堿中、高濃度組和SB203580組EA.hy926細胞存活率升高、凋亡率降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），結果見表2。

表2 各組EA.hy926細胞存活率、凋亡率，IL-6、TNF-α、MDA含量及SOD、LDH活性的測定結果（±s，n=3）Tab 2 Determination results of survival rate and apoptosis rate of cells，contents of IL-6，TNF-α and MDA，activities of SOD and LDH in the EA.hy926 cells in each group（±s，n=3）

表2 各組EA.hy926細胞存活率、凋亡率，IL-6、TNF-α、MDA含量及SOD、LDH活性的測定結果（±s，n=3）Tab 2 Determination results of survival rate and apoptosis rate of cells，contents of IL-6，TNF-α and MDA，activities of SOD and LDH in the EA.hy926 cells in each group（±s，n=3）

注：與空白對照組比較，＊P＜0.05；與PM2.5組比較，#P＜0.05Note：vs.blank control group，＊P＜0.05；vs.PM2.5 group，#P＜0.05

組別 細胞存活率，%細胞凋亡率，%IL-6，ng/L TNF-α，ng/L MDA，μmol/L SOD，U/ml LDH，U/L空白對照組PM2.5組小檗堿低濃度組小檗堿中濃度組小檗堿高濃度組SB203580組88.93±1.4216.58±1.12489.56±17.32326.53±9.403.49±0.2713.93±0.48953.93±55.90 100 84.46±1.58＊85.41±1.49＊89.63±1.38＊#92.64±1.25＊#＊#2.28±0.14 25.31±1.27＊24.82±1.48＊18.27±1.53＊#12.49±1.04＊#＊#335.36±12.49 547.56±14.63＊540.65±13.68＊472.62±14.56＊#432.34±15.86＊#＊#156.73±6.12 364.05±8.62＊358.53±8.94＊310.58±9.22＊#265.85±7.03＊#＊#1.24±0.13 4.12±0.11＊4.09±0.15＊3.37±0.24＊#2.49±0.23＊#＊#18.41±0.25 11.38±0.33＊11.46±0.23＊13.56±0.46＊#15.54±0.31＊#＊#621.53±47.42 1 123.52±55.47＊1 116.54±62.35＊912.36±58.63＊#739.42±61.22＊#＊#

3.2.2 IL-6、TNF-α、MDA含量和SOD、LDH活性 與PM2.5組比較，小檗堿中、高濃度組和SB203580組EA.hy926細胞中SOD活性增強，IL-6、TNF-α、MDA含量減少及LDH活性降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），結果見表2。

3.2.3 Bax、Bcl-2、p-p38 MAPK蛋白 與PM2.5組比較，小檗堿中、高濃度組和SB203580組EA.hy926細胞中Bax、p-p38 MAPK蛋白表達減弱、Bcl-2蛋白表達增強，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。電泳圖見圖3，蛋白表達結果見圖4。

圖3 各組EA.hy926細胞內(nèi)p-p38 MAPK、Bax、Bcl-2蛋白表達的電泳圖Fig 3 Electropherogram of protein expressions of p-p38 MAPK，Bax and Bcl-2 in the EA.hy926 cells in each group

4 討論

血管內(nèi)皮細胞功能損傷被認為是AS的起始改變，受損的內(nèi)皮細胞在氧化應激和炎癥刺激下可吸附單核細胞，吞噬脂質(zhì)成為泡沫細胞，形成脂質(zhì)斑塊，使動脈管腔狹窄、管壁失去彈性而形成AS［1］。大量有毒、有害物質(zhì)吸附于PM2.5表面經(jīng)呼吸從肺泡上皮進入肺組織間隙，擴散至微血管，作用于血管內(nèi)皮，損傷心血管系統(tǒng)結構及功能而形成AS。多中心、多種族臨床對照試驗證實，長期慢性暴露在高濃度PM2.5環(huán)境中可通過炎癥反應、氧化應激、交感神經(jīng)興奮性增加等機制，增加動脈內(nèi)膜中層厚度、降低AS斑塊穩(wěn)定性，促進此人群AS的形成及發(fā)展［9-10］。動物研究亦發(fā)現(xiàn)，接觸高濃度PM2.5可上調(diào)清道夫受體CD-36的表達，誘導粥樣斑塊內(nèi)巨噬細胞中膽固醇堆積；增加內(nèi)臟脂肪素表達，促進炎癥及氧化應激反應，加速易損斑塊的不穩(wěn)定及破裂等而促進AS形成［11-12］。

圖4 各組EA.hy926細胞內(nèi)p-p38 MAPK、Bax、Bcl-2蛋白表達的檢測結果Fig 4 Detection results of protein expressions of p-p38 MAPK，Bax and Bcl-2 in the EA.hy926 cells in each group

氧化和抗氧化系統(tǒng)之間的平衡是維持內(nèi)皮細胞功能的關鍵因素。SOD是細胞內(nèi)的抗氧化酶，通過清除超氧陰離子減輕活性氧（ROS）損害而保護內(nèi)皮細胞，其活性的高低可反映機體抗氧化損傷能力。MDA為脂質(zhì)在自由基作用下發(fā)生過氧化反應的不飽和脂肪酸氧化終產(chǎn)物，可引起核酸及蛋白質(zhì)等生命大分子交聯(lián)聚合而產(chǎn)生細胞毒性，其含量的高低可反映內(nèi)皮細胞氧化損傷的嚴重程度。LDH存在于內(nèi)皮細胞，當細胞受損時細胞膜通透性增加，細胞外液LDH漏出量相應增加，其含量的高低可反映內(nèi)皮細胞損傷程度。IL-6及TNF-α可調(diào)控巨噬、單核細胞的遷移，并能促進血管平滑肌細胞增殖從而參與AS形成［13］。在Bcl-2基因家族蛋白中的促凋亡基因蛋白Bax與抑凋亡基因蛋白Bcl-2，能形成二聚體以促進或抑制細胞凋亡，Bax/Bcl-2比值的高低可直接調(diào)控細胞凋亡［14］。本研究結果顯示，PM2.5孵育EA.hy926細胞后，可顯著降低細胞內(nèi)SOD活性，增加IL-6、TNF-α、MDA含量及增強LDH活性，顯著降低EA.hy926細胞存活率、增加細胞內(nèi)Bax/Bcl-2蛋白比值以促進細胞凋亡，證實PM2.5可通過氧化應激損傷及炎癥反應途徑誘導EA.hy926細胞損傷。

氧化應激及炎癥均可激活細胞內(nèi)的細胞凋亡信號級聯(lián)通路以誘導細胞凋亡。p38 MAPK信號通路是MAPKs超家族分支之一，介導了調(diào)控炎癥、細胞應激、生長、發(fā)育、凋亡等多種生理及病理進程，該通路的激活可通過上調(diào)肌球蛋白輕鏈激酶的表達促進血管平滑肌細胞的異常增殖及內(nèi)皮細胞凋亡、吞噬脂質(zhì)形成泡沫細胞等促進AS形成［15］。本研究結果顯示，PM2.5孵育可顯著增加EA.hy926細胞內(nèi)p-p38 MAPK蛋白水平，證實PM2.5誘導EA.hy926細胞損傷，可能與激活p38 MAPK通路有關。

小檗堿可通過抑制核轉錄因子（NF-κB）信號通路活化，減少炎癥因子細胞間黏附分子1（ICAM-1）及C反應蛋白（CRP）的釋放而抑制炎癥反應；上調(diào)低密度脂蛋白受體（LDLR）的mRNA表達，促進肝細胞對LDL的吸收而調(diào)節(jié)血脂；減少富含血小板的凝塊收縮，抑制血小板的活化和聚集而抗血栓形成等途徑發(fā)揮抗AS作用［3-5］。SB203580是應用最廣泛的p38 MAPK通路抑制劑，其占據(jù)催化位點但不阻礙上游激酶，不抑制p38 MAPK自身磷酸化作用，僅抑制p38 MAPK下游磷酸化過程，可特異性阻斷p38 MAPK信號通路。本研究結果顯示，與PM2.5組比較，小檗堿及SB203580均可不同程度拮抗PM2.5，升高EA.hy926細胞存活率，降低Bax/Bcl-2蛋白比值以抑制EA.hy926細胞凋亡，降低EA.hy926細胞內(nèi)p-p38 MAPK蛋白水平，增強EA.hy926細胞內(nèi)SOD活性，降低細胞上清液中IL-6、TNF-α、MDA含量及LDH活性。這提示小檗堿抗AS機制之一可能是通過抑制p38 MAPK通路，減輕PM2.5誘導的氧化應激損傷及炎癥反應，從而保護血管內(nèi)皮細胞。這一發(fā)現(xiàn)有望為小檗堿在AS防治中的臨床應用提供新的理論依據(jù)。

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Study on Inhibitory Effects of Berberine on Vascular Endothelial Cells Injury Induced by PM2.5 and Its p38 MAPK Signal Pathway Mechanism

WAN Qiang1，2，YANG Yuping3，LIU Zhongyong1（1.Dept.of Medical Cardiology，the Affiliated Hospital of Jiangxi University of TCM，Nanchang 330006，China；2.Institute of Cardiovascular Disease，the Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou 510260，China；3.Dept.of Respiratory Medicine，the Affiliated Hospital of Jiangxi University of TCM，Nanchang 330006，China）

OBJECTIVE：To study the inhibitory effects of berberine on EA.hy926 human umbilical vein endothelial cells（EA.hy926 cells）injury induced by particulates with no more than 2.5 μm air aerodynamic diameter in atmospheric（PM2.5），and its p38 mitogen-activated protein kinase（MAPK）signal pathway mechanism.METHODS：PM2.5 samples were collected and hatched EA.hy926 cells with concentrations of 0（blank control），20，200 and 400 mg/L for 24 h.The survival rate and apoptosis rate of cells，contents of IL-6，TNF-α and MDA，activities of SOD and LDH，protein levels of p-p38 MAPK，Bcl-2 and Bcl-2 associated X protein（Bax）were detected.The above indexes of EA.hy926 cells in blank control group，PM2.5 group（200 mg/L PM2.5），p38 MAPK pathway-specific blocker SB203580 group（20 μmol/L SB203580+200 mg/L PM2.5），berberine low-，medium-and high-concentrations groups（5，10，20 μmol/L berberine+200 mg/L PM2.5）were also determined.RESULTS：Compared with blank control，survival rate of cells，SOD activity and Bcl protein decreased after 200，400 mg/L PM2.5 hatched；apoptosis rate of cells，contents of IL-6，TNF-α and MDA，LDH activity，protein levels of p-p38 MAPK and Bax increased（P＜0.05），in concentrationdependent manner.Compared with PM2.5 group，survival rate of cells，SOD activity and Bcl-2 protein increased in berberine medium-，high-concentrations groups and SB203580 group；apoptosis rate of cells，contents of IL-6，TNF-α and MDA，LDH activity，protein levels of p-p38 MAPK and Bax decreased（P＜0.05）.CONCLUSIONS：Berberine attenuates PM2.5-induced EA.hy926 cells injury via the inhibition of p38 MAPK pathway.

Berberine；PM2.5；EA.hy926 human umbilical vein endothelial cells；p38 mitogen-activated protein kinase

R965

A

1001-0408（2016）25-3464-04

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.25.03

2016-03-15

2016-04-11）

（編輯：鄒麗娟）

國家自然科學基金資助項目（No.81660770）；江西省科技計劃項目（No.20135BBG70002，20161BAB215256）；中國博士后科學基金項目（No.2016M592476）

＊醫(yī)師，博士。研究方向：心血管疾病的臨床及實驗研究。電話：0791-86360490。E-mail：wanqiang109559140@163.com

主任醫(yī)師，教授，碩士。研究方向：心血管疾病的臨床及實驗研究。電話：0791-86360490。E-mail：liuzhongyong2014@ 163.com